凝膠類產(chǎn)品檢驗前處理技術(shù)規(guī)范

凝膠類產(chǎn)品檢驗前處理技術(shù)規(guī)范范圍本文件規(guī)定了凝膠類產(chǎn)品檢驗前的處理辦法。本文件適用于不同類型的凝膠類產(chǎn)品，包括水溶性凝膠、油溶性凝膠、混懸型凝膠和乳膠型凝膠等，進(jìn)行相關(guān)檢測和試驗前的處理過程。規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。中華人民共和國藥典《2020年版》四部術(shù)語和定義下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1酸沉acidprecipitation酸沉法是利用某些成分在酸中沉淀的性質(zhì)而達(dá)到分離的方法。3.2鹽析saltingout鹽析（saltingout）是指在蛋白質(zhì)水溶液中加入中性鹽，隨著鹽濃度增大而使蛋白質(zhì)沉淀出來的現(xiàn)象。3.3萃取extraction萃取，又稱溶劑萃取或液液萃取，亦稱抽提，是利用系統(tǒng)中組分在溶劑中有不同的溶解度來分離混合物的方法?；疽?.1基本流程凝膠劑前處理基本流程示意圖參見圖1。注：凝膠劑前處理方法選擇可根據(jù)實際檢測項目進(jìn)行組合調(diào)整，具體組合調(diào)整方式舉例見附錄A。4.2儀器設(shè)備超聲波清洗器、通風(fēng)櫥、分液漏斗、低溫冷凍離心機、超濾管、真空干燥箱、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀等。強酸沉淀法5.1概述為解決卡波姆體系凝膠劑黏度大的問題，同時沉淀收集蛋白類核心成分，需對凝膠劑進(jìn)行強酸沉淀處理。5.2處理方法10%三氯乙酸處理取待檢測凝膠劑適量，加入10%三氯乙酸溶液后，超聲5min，將超聲后的凝膠/三氯乙酸混合體系在6000～12000r/min下低溫離心10min，取離心后沉淀物，用于后續(xù)檢測。6%高氯酸處理取待檢測凝膠劑適量，加入6%高氯酸溶液后，超聲5min，將超聲后的凝膠/高氯酸混合體系在6000～12000r/min下低溫離心10min，取離心后沉淀，用于后續(xù)檢測。5%偏磷酸處理取待檢測凝膠劑適量，加入5%偏磷酸溶液后，超聲5min，將超聲后的凝膠/偏磷酸混合體系在6000～12000r/min下低溫離心10min，取離心后沉淀，用于后續(xù)檢測。5.3注意事項考慮到強酸沉淀過程中所使用的強酸試劑具有高腐蝕性和強刺激性，因此實驗人員應(yīng)做好防護(hù)，實驗過程需在通風(fēng)櫥中進(jìn)行。鹽析超濾法6.1概述為解決凝膠體系中核心成分的含量檢測問題，需對凝膠劑進(jìn)行鹽析超濾處理。6.2硫酸銨鹽析法取待檢測凝膠劑適量，加入質(zhì)量濃度為50%～70%的硫酸銨溶液，攪拌，攪拌結(jié)束后利用PBS緩沖溶液透析。6.3超濾法將透析后的樣品利用不同孔徑的超濾膜進(jìn)行超濾，分別收取截留液和超濾液待用。6.4注意事項依據(jù)待檢測成分的分子量大小，選擇截留液或超濾液進(jìn)行濃縮后處理。有機溶劑萃取法7.1概述為解決油溶性凝膠劑（如硅酮體系）中核心成分不溶于水的問題，需對凝膠劑進(jìn)行有機溶劑萃取處理。7.2有機溶劑萃取取待檢測凝膠劑，加入適量有機溶劑（如甲苯、乙酸乙酯、乙醚等），采用分液漏斗萃取，靜置，收集有機相。7.3有機溶劑去除收集后的有機溶劑采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)（如甲苯）、真空干燥（如乙酸乙酯）或冷凍干燥（如乙醚等低沸點溶劑）等方法去除溶劑，收集去除溶劑后的樣品待測。7.4注意事項需根據(jù)所需萃取的油性物質(zhì)特性，選擇有機溶劑；甲苯、乙醚等有機溶劑具有一定毒性，實驗全程需在通風(fēng)櫥內(nèi)進(jìn)行。

附錄A（資料性）前處理組合調(diào)整方式舉例在實際凝膠劑檢測前處理過程中，通常單一的前處理方式無法滿足產(chǎn)品多技術(shù)要求的檢測，因此需要將本技術(shù)規(guī)范中所呈現(xiàn)的前處理方式進(jìn)行調(diào)整組合。本附錄以有機溶劑萃取法、強酸沉淀法、超濾法組合為例，呈現(xiàn)凝膠劑前處理組合方案，組合方案流程圖如圖A.1所示。圖A.1有機溶劑萃取法、強酸沉淀法、超濾法組合方案流程圖具體前處理組合過程為：（1）將待測凝膠劑與所選擇的有機溶劑混合，利用萃取裝置萃取，靜置。（2）取萃取后的有機相，通過旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去有機溶劑，收集樣品用于后續(xù)檢測。（3）取萃取后的水相，加入10%三氯乙酸或6%高氯酸處理，收集沉淀物。（4）將強酸沉淀后收集的沉淀物用適量水復(fù)溶，選擇合適孔徑的超濾膜超濾，收集截留液，用于后續(xù)檢測。本組合方案的分離裝置圖如圖A.2所示。圖A.2有機溶劑萃取、強酸沉淀、超濾組合分離裝置圖本附錄以硅酮體系卡波姆凝膠（含膠原蛋白）前處理為例，結(jié)合圖A.2分離裝置流程圖，詳細(xì)介紹硅酮體系卡波姆凝膠（含膠原蛋白）的前處理過程，具體前處理過程如下：（1）將硅酮體系卡波姆凝膠加入萃取裝置，并加入凝膠劑5～10倍質(zhì)量的甲苯，以60～100r/min的轉(zhuǎn)速攪拌5min，排氣后靜置5min；（2）靜置后將下層液體（水相）通過管道傳送至酸沉裝置，分離出萃取裝置的上層液體（甲苯溶液），利用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀除去甲苯溶液中的甲苯，收集旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)后得到的樣品用于后續(xù)檢測；（3）在酸沉裝置中加入10%三氯乙酸溶液，靜置，待有沉淀物析出（膠原蛋白及其他雜蛋白）后，收集沉淀物；（4）將沉淀物以5～10倍質(zhì)量的水復(fù)溶，將復(fù)溶后的溶液加入超濾裝置，超濾裝置中搭配合適孔徑的超濾膜，利用壓縮空氣進(jìn)行超濾，收取截留液（目標(biāo)檢測蛋白于截留液中），用于后續(xù)檢測。

參考文獻(xiàn)[1]中華人民共和國藥典（2020年版）四部[2]李雪琴，苗笑亮，裘愛泳.酸沉法和超濾法制備蠶豆分離蛋白的功能性比較[J].XX工程學(xué)院學(xué)報，2003，24（3）:62-65.[3]劉順湖，李桂菊，王曉強，等.大豆蛋白質(zhì)提取工藝中酸沉pH值的簡單效應(yīng)分析[J].XX學(xué)院學(xué)報，2010，31（6）:5.[4]劉鑫陽，郜晉楠，段開紅，等.2步鹽析法純化螺旋藻中藻藍(lán)蛋白[J].XX農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報：自然科學(xué)版，2019（1）:7.[5]袁青松.硫酸銨鹽析——冷沉淀分離人血白蛋白的初探[J].中國生化藥物雜志，1989（3）:2.[6]Korant，BruceD.Methodforextractingproteinwithorganicacid[J].EP，1987.[7]GuoN，JiangST，Xing-JiangLI，etal.Extractionofwheatbranproteinandaminoacidcompositionanalysis[J].JournalofHe