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綜合性的CAR-T細(xì)胞療法開發(fā)解決方案前

言目前全球已有8款CAR-T藥物相繼獲批上市,其中6款獲得美國FDA批準(zhǔn),2款獲得中國NMPA批準(zhǔn)。CAR-T療法在B細(xì)胞白血病或淋巴瘤患者中的治療效果,改變了抗癌療法,為難治性患者提供了潛在的治療選擇。但是,CAR-T療法的一些瓶頸限制其廣泛應(yīng)用,如毒副作用嚴(yán)重、抗原逃逸、治療持續(xù)性、異質(zhì)性等,特別是在實體瘤中治療效果有限。因此,全球的科研人員還在通過不斷的研究,以使其能夠得到更廣泛的應(yīng)用。1CAR-T療法的局限性CAR-T療法實現(xiàn)持久緩解的主要有四種限制:CAR-T細(xì)胞衰竭。比如有的患者自身T細(xì)胞無法成功生產(chǎn)CAR-T細(xì)胞,或者生成的CAR-T細(xì)胞擴增不充分。有些患者有限的持久性是疾病復(fù)發(fā)的潛在因素。第二,抗原調(diào)節(jié)。如惡性B細(xì)胞上CD19或CD22的丟失或下調(diào),造成抗原逃逸,對CAR-T療法產(chǎn)生抗藥性。第三,CAR-T療法毒性,主要是嚴(yán)重的細(xì)胞因子釋放綜合征(CRS)和神經(jīng)毒性。關(guān)于CRS的治療是否干預(yù)CAR緩解的持久性影響還在研究中。第四,未知的疾病機制,這是正在進行的研究工作的重點,以優(yōu)化CAR-T細(xì)胞療法的臨床應(yīng)用。CAR-T治療持久性的限制因素[1]2CAR設(shè)計的優(yōu)化CAR主要由組成部分:抗原結(jié)合域、鉸鏈、跨膜域和細(xì)胞內(nèi)信號域。每部分有不同的功能,組成部件的多樣化組合,可以實現(xiàn)CAR分子的優(yōu)化設(shè)計??乖Y(jié)合域常為單鏈抗體(scFv),負(fù)責(zé)識別并結(jié)合靶抗原。鉸鏈和跨膜域可將scFv錨定于細(xì)胞膜上。胞內(nèi)信號域由共刺激因子和CD3信號域組成。當(dāng)抗原被識別和結(jié)合后,產(chǎn)生刺激信號傳至胞內(nèi)信號域,T細(xì)胞被激活并發(fā)揮效應(yīng)功能。CAR分子結(jié)構(gòu)[2]scFv序列通常來源于鼠或人的單克隆抗體。scFv可對CAR功能產(chǎn)生影響,影響CAR對靶抗原的特異性和親和力。鉸鏈區(qū)提供足夠的靈活性來克服空間位阻,影響抗原結(jié)合和CAR信號。來自CD8、CD28、IgG1或IgG4的氨基酸序列已被用于CAR鉸鏈結(jié)構(gòu)域??缒そY(jié)構(gòu)域?qū)AR錨定在T細(xì)胞膜上,通常來源于I型蛋白,如CD3ζ、CD28、CD4或CD8α,影響CAR的穩(wěn)定性和功能。胞內(nèi)信號結(jié)構(gòu)域通常包括激活區(qū)、一個或多個共刺激域。絕大多數(shù)CAR通過CD3ζ衍生的相關(guān)的免疫受體激活CAR-T細(xì)胞。共刺激信號對獲得更佳功能及持久性的T細(xì)胞是必要的,研究最廣泛的共刺激結(jié)構(gòu)域來自CD28或4-1BB(CD137)。有研究人員設(shè)計了一種可互換靶點的通用CAR分子:SupraCAR,由T細(xì)胞上表達的通用受體(zipCAR)和腫瘤靶向單鏈抗體適配器(zipFv)組成。zipFv的單鏈抗體與腫瘤抗原結(jié)合,通過亮氨酸拉鏈激活T細(xì)胞上的zipCAR。具有多種特征有助于對抗復(fù)發(fā)、緩解過度激活和增強特異性。可互換靶點的通用CAR分子[3]3更多解決方案對于CAR-T治療過程中出現(xiàn)的細(xì)胞因子風(fēng)暴和神經(jīng)毒性,主要是干預(yù)細(xì)胞因子的分泌或控制T細(xì)胞的過度激活,如通過抗體阻斷IL-1、IL-6和GM-CSF,進而阻斷過度的炎癥反應(yīng)。面對治療過程中產(chǎn)生抗性的問題,可以通過設(shè)計多靶向的CAR分子或增加靶抗原的表達來改善,或是提高scFv與靶抗原的親和力,也可能有助于CAR-T細(xì)胞識別低密度的靶抗原。目前CAR-T的制造多使用患者的異質(zhì)性T細(xì)胞。某些特定T細(xì)胞亞群修飾的CAR-T細(xì)胞可能會產(chǎn)生更好的效果。制造通用型細(xì)胞是未來發(fā)展的方向。有一種形式是抗體帶上生物素等標(biāo)簽,與抗原結(jié)合后標(biāo)記腫瘤細(xì)胞,然后針對這個標(biāo)簽開發(fā)的CAR-T細(xì)胞就會被激活,發(fā)揮細(xì)胞殺傷功能。CAR-T細(xì)胞研究試驗圍繞療效、毒性和耐藥性展開,以尋找新型靶點、闡明信號機制為基礎(chǔ),結(jié)合新型技術(shù)的應(yīng)用,通過CAR設(shè)計、轉(zhuǎn)導(dǎo)方法和最佳細(xì)胞類型的不斷研究,必將提高CAR-T治療效果,并適用于更多類型癌癥患者的治療。義翹神州CAR-T開發(fā)解決方案作為一家專注于為全球生物醫(yī)藥領(lǐng)域提供關(guān)鍵試劑和技術(shù)服務(wù)的高新技術(shù)企業(yè),義翹神州特地推出了綜合性的CAR-T細(xì)胞療法開發(fā)解決方案,全方位地支持客戶更方便、更快速地完成從早期靶點發(fā)現(xiàn)到臨床前研究的每一個階段。CAR開發(fā)scFv候選分子開發(fā):scFv抗體庫構(gòu)建平臺、Beacon?單B細(xì)胞發(fā)現(xiàn)平臺、流式單B細(xì)胞發(fā)現(xiàn)平臺、雜交瘤開發(fā)平臺scFv候選分子篩選:scFv抗體親和力檢測(SPR/BLI)、檢測用過表達細(xì)胞株構(gòu)建靶點蛋白:250+CAR-T熱門靶點蛋白,涵蓋熒光標(biāo)記、生物素標(biāo)記和無標(biāo)記形式,高活性,高批間一致性,更接近于天然蛋白結(jié)構(gòu)。蛋白表達:哺乳動物瞬時表達、桿狀病毒-昆蟲表達、大腸桿菌蛋白表達、無細(xì)胞表達T細(xì)胞激活CD3單克隆抗體:GMP-10977-H001EffectofhumanCD3(humanizedOKT3)antibodyontheproliferationandIFN-gammasecretionofCD4+Tcells.CD28單克隆抗體:GMP-11524-H001EffectofhumanCD28antibodyonstimulatingIL-2secretionofCD4+Tcellsco-activatedwithCD3antibody.慢病毒包裝無血清細(xì)胞培養(yǎng)基及補料液SMM293-CD1培養(yǎng)基(貨號:M293CD1)相同條件下,使用SMM293-CD1培養(yǎng)基,HEK293F細(xì)胞密度更好。多款現(xiàn)貨無血清、無動物源的HEK293培養(yǎng)基貨號名稱應(yīng)用M293TIISMM293-TII培養(yǎng)基新一代產(chǎn)品,HEK293細(xì)胞懸浮培養(yǎng)、蛋白瞬時表達、慢病毒包裝M293TISMM293-TI培養(yǎng)基原代產(chǎn)品,HEK293細(xì)胞懸浮培養(yǎng)、蛋白瞬時表達、慢病毒包裝M293-SUPISMS293-SUPI加料液支持懸浮類型細(xì)胞生長細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑義翹神州擁有高品質(zhì)的轉(zhuǎn)染試劑Sinofection?TransfectionReagent(Cat#:STF02),細(xì)胞毒性小、重復(fù)性高,可用于慢病毒載體的高效轉(zhuǎn)染,轉(zhuǎn)染效率基本可以達到95%以上。GMP級核酸酶義翹神州提供GMP級條件下生產(chǎn)的全能核酸酶SuperNuclease(Cat#:GMP-SSNP01),無動物源性,可高效降解單鏈、雙鏈、線性、環(huán)狀、超螺旋等任何形式的DNA及RNA。超高活性,應(yīng)用場景廣泛且使用量低不易殘留,質(zhì)量、性能、供貨能力可靠,并已完成在FDA的藥物主文件申報備案(DMFNumber#:35978),滿足藥物申報的需求。相同條件下,不同用量的GMP級全能核酸酶和其他品牌核酸酶對鮭魚精DNA的降解效率相當(dāng)細(xì)胞庫檢測義翹神州遵循NMPA、FDA、EMA、ICH等多個國內(nèi)外法規(guī)和指導(dǎo)原則,建立了全面的細(xì)胞庫測定方法,助力于CAR-T細(xì)胞治療的安全性,主要包括以下幾個檢測方面:無菌檢查、支原體檢查、內(nèi)外源病毒污染檢查、成瘤性檢查等。慢病毒包裝質(zhì)粒生產(chǎn)義翹神州升級改造后的慢病毒質(zhì)粒制備平臺,采用GMP級別的生產(chǎn)線,對過程和最終產(chǎn)品的嚴(yán)格管控,確保了最終產(chǎn)品質(zhì)量符合客戶需求。義翹神州可以提供從μg級別,mg級別至g級別不同規(guī)模的科研級質(zhì)粒生產(chǎn)服務(wù),滿足不同的需求。CAR-T細(xì)胞擴增更規(guī)范的GMP級質(zhì)量管理體系、文件齊全的質(zhì)量保證管理體系、更穩(wěn)定質(zhì)量控制體系、更安全的產(chǎn)品安全性檢測體系:四大體系造就高品質(zhì)GMP級細(xì)胞因子,保障CAR-T開發(fā)!以GMP-IL21產(chǎn)品為例高純度:SDS和SEC-HPLC高于95%高批間一致性高穩(wěn)定性CAR-T細(xì)胞質(zhì)量控制CAR-T細(xì)胞純度檢測檢測項目檢測目的義翹神州解決方案活細(xì)胞比例檢測活細(xì)胞比例AnnexinV/7-AAD凋亡檢測試劑盒(Cat#:APK10448-F;Cat#:APK10448-P)細(xì)胞群或亞群比例監(jiān)測CAR-T細(xì)胞的分化、耗竭、凋亡等豐富的流式抗體產(chǎn)品目的細(xì)胞比例了解CAR-T細(xì)胞產(chǎn)品活性的關(guān)鍵特征靶點蛋白、ProteinL、抗獨特型抗體制備服務(wù)非目的細(xì)胞比例檢測殘留的腫瘤細(xì)胞比例涵蓋CD19、CD20、CD22、EGFR、CD3等血液腫瘤和實體瘤熱門靶點雜質(zhì)檢測細(xì)胞因子殘留IL-2ELISA試劑盒(Cat#:KIT11848)、IL-7ELISA試劑盒(Cat#:KIT11821)CAR-T細(xì)胞活性及功能性檢測ELISA檢測試劑盒過表達細(xì)胞株構(gòu)建服務(wù)CAR-T細(xì)胞安全性檢測無菌檢查支原體檢查細(xì)胞內(nèi)源病毒因子檢查外源病毒因子檢查【參考資料】[1]NiraliandTerry,

MechanismsofresistancetoCARTcelltherapy.

Naturereviews|ClinicalOncology[2]Sarwish,etal.

Engineeringstrategiestoovercomethecurrentroa

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