《羊結(jié)膜乳支原體防治技術(shù)規(guī)程》

ICS01.040.65

CCSB04TB

團(tuán)體標(biāo)準(zhǔn)

T/NAIA×××-××××

羊結(jié)膜乳支原體防治技術(shù)規(guī)程

Technicalregulationsforthepreventionandtreatmentof

Mycoplasmaconjunctivae

(征求意見稿)

××××-××-××發(fā)布××××-××-××實(shí)施

寧夏化學(xué)分析測(cè)試協(xié)會(huì)發(fā)布

發(fā)布

羊結(jié)膜乳支原體防治技術(shù)規(guī)程

1范圍

本文件規(guī)定了羊結(jié)膜乳支原體防治技術(shù)的術(shù)語和定義、診斷、預(yù)防和治療。

本文件適用于羊結(jié)膜乳支原體防治。

2規(guī)范性引用文件

下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用

文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）

適用于本文件。

GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法。

3術(shù)語和定義

下列術(shù)語和定義適用于本文件。

3.1羊結(jié)膜乳支原體病Mycoplasmaconjunctivae

是指由羊結(jié)膜乳支原體引發(fā)羊的一種呈現(xiàn)多種臨床表現(xiàn)的傳染病。

3.2胸膜肺炎樣微生物培養(yǎng)基pleuropnenmonia-likeorganismmediumPPLO

即支原體培養(yǎng)基，主要用于多種支原體的分離和培養(yǎng)

44診斷

4.1流行病學(xué)

羊結(jié)膜乳支原體主要感染綿羊和山羊。長途運(yùn)輸、飼養(yǎng)環(huán)境變化、氣候變化等因素可誘發(fā)羊結(jié)

膜乳支原體病的發(fā)生。病畜的眼、鼻分泌物發(fā)生直接接觸傳播，也可通過蚊蠅、被污染的器具和飼

料發(fā)生間接接觸傳播

4.2臨床癥狀

初期階段：病畜單側(cè)眼睛被感染，患眼羞明流淚、眼瞼半閉、眼屎增多并伴有膿性分泌物

晚期階段：雙眼受到感染，角膜紅腫充血、凸起且渾濁、逐漸變厚呈乳白色，凸起物呈云翳狀

遮蓋整個(gè)眼球

4.3樣本采集

采集眼拭子，冷藏保存。如果24h內(nèi)不能送達(dá)實(shí)驗(yàn)室，-20℃保存。樣品解凍時(shí)，置于38℃～

2

40℃水浴解凍。

4.4分離培養(yǎng)

羊結(jié)膜乳支原體液體培養(yǎng)基配制見附錄A.1，羊結(jié)膜乳支原體固體培養(yǎng)基配制見附錄A.2，實(shí)

驗(yàn)用水應(yīng)符合GB/T6682規(guī)定。

在無菌操作條件下將采集的眼拭子接種至支原體固體培養(yǎng)基上，每份樣品分別接種3個(gè)固體培

養(yǎng)基。固體培養(yǎng)基放置于含有5%CO2培養(yǎng)箱中37℃培養(yǎng)24h后，觀察菌落形態(tài)，在低倍光學(xué)顯

微鏡下呈現(xiàn)出典型的“油煎蛋”樣。將其轉(zhuǎn)入操凈臺(tái)中，無菌條件下切取含有多個(gè)單菌落的瓊脂培

養(yǎng)基，接種于新的1mL支原體液體培養(yǎng)基中，置于37℃恒溫?fù)u床中培養(yǎng)24h。

4.5PCR鑒別診斷

取液體培養(yǎng)物2mL，12000r/min，離心2min，使用細(xì)菌基因組DNA提取試劑盒對(duì)細(xì)菌體沉

淀進(jìn)行基因組DNA的提取。使用16SrRNA通用引物：MOLIGEN1-LACTCCTACGGGAGGCAGCA，

16SUNI-RGTGTGACGGGCGGTGTGTAC和結(jié)膜乳支原體特異性引物（McoF1

GTATCTTTAGAGTCCTCGTCTTTCACMcoR1CAGCGTGCAGGATGAAATCCCTC，）對(duì)細(xì)菌分

離菌株進(jìn)行基因序列擴(kuò)增，預(yù)計(jì)擴(kuò)增片段大小分別為1063bp，748bp左右。

PCR反應(yīng)體系為50μL體系，模板2μL，上下游引物各1μL,2×TapMasterMix25μL，

ddH2O21μL。反應(yīng)條件：94℃2min；94℃30s，分別以51℃，54℃退火30s，72℃1

min，35個(gè)循環(huán)；72℃延伸8min。PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳分析，用膠回收試劑盒，

純化回收PCR產(chǎn)物，將PCR純化產(chǎn)物送生工生物工程（上海）上海股份有限公司測(cè)序。

結(jié)果判定

符合4.1、4.2和4.3的特征判斷為疑似病例。

同時(shí)符合4.5、4.6或4.7的特征判斷為確診病例。

5預(yù)防和治療

5.1預(yù)防

加強(qiáng)飼養(yǎng)及環(huán)境衛(wèi)生管理，定期消毒，定期監(jiān)測(cè)。不從疫區(qū)或發(fā)病區(qū)引進(jìn)羊。羊群引進(jìn)后應(yīng)隔

離觀察并采取應(yīng)激預(yù)防措施，確保無病后方可混群。育肥牛群采用全進(jìn)全出制度，在空欄期要對(duì)牛

舍進(jìn)行徹底消毒。引種前應(yīng)加強(qiáng)疫病檢測(cè)，引種后應(yīng)按照《獸醫(yī)法律法規(guī)》的相關(guān)要求進(jìn)行隔離，

大中型動(dòng)物的隔離檢疫期為45天，小型動(dòng)物的隔離檢疫期為30天。在隔離檢疫期時(shí)應(yīng)提供干燥、

清潔和通風(fēng)良好等適宜的環(huán)境，

5.2治療

5.2.1單一藥物治療

泰拉霉素注射液或加米霉素注射液，使用劑量參照說明書。

5.2.2西藥組合藥物治療

酒石酸泰樂菌素注射液或鹽酸多西環(huán)素注射液，聯(lián)合硫酸卡那霉素注射液或氟苯尼考注射液，

使用劑量參照說明書。

5.2.3中西藥聯(lián)合用藥治療

可使用5.2.1配合麻杏石干散飲水或拌料，使用劑量參照說明書。

4

附錄A

（規(guī)范性附錄）

支原體培養(yǎng)基配制

A.1羊結(jié)膜乳支原體液體培養(yǎng)基

PPLO肉湯粉21g，酵母粉2.5g，丙酮酸鈉1g，葡萄糖0.2g溶于800mL雙蒸水中，121℃高壓

滅菌20min后，添加馬血清200mL，8萬單位青霉素0.1g，0.05%酚紅1mL，4℃保存。

A.2羊結(jié)膜乳支原體固體培養(yǎng)基

PPLO瓊脂粉30g，酵母粉2.5g，丙酮酸鈉1g，葡萄糖0.2g溶于800mL雙蒸水中，121℃高壓

滅菌20min后，添加馬血清200mL，8萬單位青霉素0.1g，0.05%酚紅1mL，4℃保存。