《蝦蟹類飼料中β-蛻皮甾酮的測定 高效液相色譜法（征求意見稿）》

1T/GAIAXXX—2025蝦蟹類飼料中β-蛻皮甾酮的測定高效液相色譜法本文件規(guī)定了蝦蟹類飼料（包括單一飼料、配合飼料和預混合飼料）中β-蛻皮甾酮的高效液相色譜測定方法。本文件適用于蝦蟹類飼料（包括單一飼料、配合飼料和預混合飼料）中β-蛻皮甾酮的測定。本文件適用于檢測濃度范圍為0.200mg/L~10.0mg/L，對于超出檢測濃度范圍內(nèi)的樣品，可進行適當稀釋進行檢測。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T683化學試劑甲醇GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法GB/T16631高效液相色譜法通則GB/T20195動物飼料試樣的制備3術語和定義本文件沒有需要界定的術語和定義。4原理試樣中β-蛻皮甾酮，經(jīng)40%甲醇溶液提取后，反相C18液相色譜柱分離，紫外-可見光檢測器檢測，外標法定量。5試劑與材料5.1甲醇：優(yōu)級純。5.2水：GB/T6682規(guī)定的一級水。5.3β-蛻皮甾酮標準品（CAS：5289-74-7≥99%。5.4標準溶液配制5.4.1β-蛻皮甾酮標準儲備液（200mg/L準確稱取10.00mg（精確至0.1mg）β-蛻皮甾酮標準品，用40%甲醇溶解，并定容至50.0mL容量瓶中，搖勻，于4℃下避光保存，有效期6個月。5.4.2β-蛻皮甾酮標準系列工作液：用移液管分別準確吸取標準儲備液（200mg/L）適量，用40%甲醇稀釋，配制成濃度分別為10.0mg/L，5.00mg/L，2.00mg/L，0.500mg/L和0.200mg/L的標準工作溶液。2T/GAIAXXX—20256儀器與設備6.1高效液相色譜儀：配紫外檢測器。6.2分析天平：感量0.1mg。6.3超聲波發(fā)生器（功率≥1800W)。7分析步驟7.1試樣制備按照GB/T20195制備試樣，至少200g，粉碎使其通過0.60mm孔徑的分析篩，充分混勻，裝入密閉容器中，備用。7.2樣品前處理稱取試樣約1.0g（精確至0.1mg）于50mL具塞離心管內(nèi)，以40%甲醇為提取劑，加入30mL40%甲醇超聲提取20min，4000r/min離心5min，上清液轉(zhuǎn)移至50mL容量瓶，殘渣再加入15mL的40%甲醇，重復超聲提取一次，合并上清液并定容至50mL，用0.45μm微膜過濾，上機測試。注：根據(jù)供試品溶液中β-蛻皮甾酮的濃度高低，可進行適當?shù)南♂專_保上機濃度在標準溶液的線性范圍內(nèi)。7.3空白試驗除不加試樣外，按7.2與試樣同時處理。7.4儀器參考條件a)色譜柱：C18色譜柱(250mm×4.6mm,5μm)或具同等性能的色譜柱。b)流動相A：一級水；流動相B：甲醇。梯度洗脫，見表1。表1梯度程序055c)流速：1.0mL/min。d)波長：246nm。e)柱溫：35℃。f)進樣體積：10μL。7.5試樣溶液的測定將試樣溶液注入高效液相色譜儀中，得到峰面積，根據(jù)標準曲線得到試樣中β-蛻皮甾酮的濃度。3T/GAIAXXX—20258分析結果的表述試樣中β-蛻皮甾酮的含量按照公式（1）計算。式中：X——試樣中被測組分的含量，單位為毫克每千克(mg/kg)；ρ——試樣溶液中被測組分的質(zhì)量濃度，單位為毫克每升(mg/L)；V——提取溶液的體積，單位為毫升(mL)；m——試樣質(zhì)量，單位為克（gk——稀釋倍數(shù)。計算結果以重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的算術平均值表示，結果保留3位有效數(shù)字。9精密度在重復性條件下獲得的2次獨立測定結果的絕對差值不得超過算術平均值的10%。10檢出限和定