《野生稻優(yōu)異基因資源挖掘利用技術(shù)規(guī)程》（征求意見稿）

1T/FJAASSXXXX-2024 T/JAASSXXXX-2024T/AHAASSXXXX-2024野生稻優(yōu)異基因資源挖掘利用技術(shù)規(guī)程本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了野生稻（Oryzaspp.）優(yōu)異基因資源挖掘與利用的術(shù)語和定義、技術(shù)要求與方法。本標(biāo)準(zhǔn)適用于野生稻（Oryzaspp.）優(yōu)異基因資源挖掘與利用。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB/T19557.7植物品種特異性（可區(qū)別性）、一致性和穩(wěn)定性測試指南水稻GB/T15792水稻二化螟測報調(diào)查規(guī)范NY/T83米質(zhì)測定方法NY/T2175-2012農(nóng)作物優(yōu)異種質(zhì)資源評價規(guī)范野生稻NY/T2646-2014水稻品種試驗(yàn)稻瘟病抗性鑒定與評價技術(shù)規(guī)程N(yùn)Y/T3625-2020稻曲病抗性鑒定技術(shù)規(guī)程N(yùn)Y/T1433水稻品種鑒定技術(shù)規(guī)程SSR分子標(biāo)記法DB23/T26832020水稻回交轉(zhuǎn)育技術(shù)操作規(guī)程3術(shù)語和定義NY/T2175-2012中界定的以及下列術(shù)語和定義適用于本文件。3.1野生稻wildrice生長在自然環(huán)境下的稻屬植物，與栽培稻相比，其形態(tài)特征和生物學(xué)特性較為原始，具有較高的遺傳多樣性和進(jìn)化潛力。3.2優(yōu)異基因superiorgene對水稻的某些性狀產(chǎn)生有利影響的基因，如產(chǎn)量、米質(zhì)、抽穗期、抗病、抗蟲、耐冷和耐鹽堿等相關(guān)基因。2T/FJAASSXXXX-2024 T/JAASSXXXX-2024T/AHAASSXXXX-20243.3分子標(biāo)記molecularmarker以個體間遺傳物質(zhì)內(nèi)核苷酸序列變異為基礎(chǔ)的遺傳標(biāo)記，是DNA水平遺傳多態(tài)性的直接反映。3.4分子標(biāo)記輔助育種技術(shù)molecularmarker-assistedbreedingtechniques利用分子標(biāo)記與決定目標(biāo)性狀基因緊密連鎖的特點(diǎn)，通過檢測分子標(biāo)記，即可檢測到目的基因的存在，達(dá)到選擇目標(biāo)性狀的目的，具有快速、準(zhǔn)確、不受環(huán)境條件干擾的優(yōu)點(diǎn)。3.5輪回親本recurrentparent在回交時選擇的親本，一般選擇當(dāng)前生產(chǎn)應(yīng)用范圍較廣，但仍存在單一不良性狀的親本。3.6近等基因系near-isogenicline除了某個單一片段外，其他遺傳背景均與輪回親本相同的，通常是經(jīng)過雜交和回交方法，形成的除了目標(biāo)性狀有差異，其他遺傳背景完全相同的遺傳材料（品系）。3.7生物育種biologicalbreeding利用遺傳學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、現(xiàn)代生物工程技術(shù)等方法原理培育植物新品種的過程。4技術(shù)要求4.1樣本采集按照NY/T2175-2012的規(guī)定執(zhí)行4.2鑒定數(shù)據(jù)每份水稻種質(zhì)資源（包括野生稻、地方品種等）均為穩(wěn)定純合株系，且每個性狀應(yīng)在同一地點(diǎn)有連續(xù)3年以上重復(fù)鑒定結(jié)果，鑒定結(jié)果的有效數(shù)據(jù)按NY/T2175-2012的規(guī)定執(zhí)行。4.3鑒定指標(biāo)按照NY/T2175-2012的規(guī)定要求進(jìn)行執(zhí)行。4.4鑒定方法4.4.1產(chǎn)量、生育期及稻米品質(zhì)指標(biāo)3T/FJAASSXXXX-2024 T/JAASSXXXX-2024T/AHAASSXXXX-2024按照GB/T19557.7和NY/T83的規(guī)定要求進(jìn)行執(zhí)行。4.4.2抗病性4.4.2.1稻瘟病抗性水稻稻瘟病抗性鑒定指標(biāo)按照NY/T2646-2014的規(guī)定要求進(jìn)行執(zhí)行。4.4.2.2白葉枯病抗性選擇晴天傍晚，利用人工剪葉接種法，對生長8周左右的水稻苗進(jìn)行接種，每株剪3片全展葉片，每個葉片剪去劍葉2-3cm。根據(jù)病斑長度將抗性分為6個水平（表1）：4.4.2.3稻曲病抗性水稻稻曲病抗性鑒定指標(biāo)按照NY/T3625-2020的規(guī)定要求進(jìn)行執(zhí)行。4.4.3抗蟲性4.4.3.1褐飛虱抗性將裝有約6cm厚稻田泥的塑料托盤（53cm×36cm×8cm）均分為16個面積相等的小長方形，以感病品種為對照，每個水稻品種播2列，隨機(jī)排列。幼苗3葉期時拔除弱苗，每列留下10株長勢一致且良好的壯苗。用紗網(wǎng)籠罩住植株，按平均每株10頭接入2-3齡褐飛虱若蟲。每處理3個重復(fù)。當(dāng)對照死苗率高于90.0%時觀察各品種稻苗的生長狀況，參考表2根據(jù)稻苗存活率評價稻苗的抗性等級。0134T/FJAASSXXXX-2024 T/JAASSXXXX-2024T/AHAASSXXXX-20245794.4.3.2二化螟抗性測定方法應(yīng)按GB/T15792的規(guī)定執(zhí)行。4.4.4抗倒性測定方法應(yīng)按GB/T19557.7的規(guī)定執(zhí)行。4.4.5耐冷性建立耐冷鑒定圃，進(jìn)行耐冷鑒定，在劍葉和倒二葉葉枕距-4cm-+2cm時，用17℃-18℃的20cm深冷水處理10天。經(jīng)抗冷害鑒定，調(diào)查空殼率。4.4.6耐鹽堿性耐鹽堿性等級測定方法見表3。表3鹽(堿)害癥狀鑒定標(biāo)準(zhǔn)與按照鹽(堿)害指數(shù)評定的01強(qiáng)234弱54.5實(shí)驗(yàn)方法雜交、回交育種方法，按照標(biāo)準(zhǔn)DB23/T26832020的規(guī)定要求進(jìn)行執(zhí)行，并結(jié)合分子標(biāo)記輔助選擇技術(shù)跟蹤選擇。5基因挖掘與利用5T/FJAASSXXXX-2024 T/JAASSXXXX-2024T/AHAASSXXXX-20245.1親本選擇以具有某一或某些優(yōu)良性狀（產(chǎn)量、米質(zhì)、抽穗期、抗病、抗蟲、耐冷和耐鹽堿等）的野生稻材料為供體親本，以性狀突出且可以與之形成性狀互補(bǔ)的材料為受體親本。5.2標(biāo)記選擇用均勻覆蓋水稻全基因組分子標(biāo)記檢測供體親本野生稻與受體親本之間的多態(tài)性，獲得盡可能多的多態(tài)性分子標(biāo)記。DNA提取、擴(kuò)增和產(chǎn)物檢測按照NY/T1433提供的方法進(jìn)行。5.3回交選擇回交技術(shù)流程可參考附錄A。5.4近等基因系構(gòu)建利用篩選的多態(tài)性分子標(biāo)記對獲得BC3F1單株進(jìn)行檢測分析，對含有單個目標(biāo)基因的單株保留并繼續(xù)自交，直到性狀穩(wěn)定；對含有兩個以上目標(biāo)基因的單株繼續(xù)與輪回親本回交，并跟蹤分子標(biāo)記，直至獲得含有單個基因的單株，并連續(xù)自交，直到性狀穩(wěn)定，最終獲得攜帶不同優(yōu)異基因性狀的近等基因系。近等基因系構(gòu)建技術(shù)流程可參考附錄A1。5.5性狀鑒定對獲得的每個近等基因系進(jìn)行性狀鑒定，主要包括產(chǎn)量、米質(zhì)、抽穗期、抗病、抗蟲、耐冷和耐鹽堿等性狀進(jìn)行系統(tǒng)的調(diào)查與分析，篩選并獲得與受體親本有差異的近等基因系。性狀鑒定方法參照4.4的規(guī)定進(jìn)行。5.6基因挖掘利用獲得與受體親本有差異的近等基因系，通過再次與受體親本雜交，構(gòu)建次級分離群體，并在目標(biāo)基因區(qū)域內(nèi)設(shè)計(jì)多態(tài)性引物（因?yàn)槊總€近等基因系與受體親本僅僅存在一個目標(biāo)片段的差異利用圖位克隆技術(shù)，對目標(biāo)性狀基因進(jìn)行鑒定與分離，圖位克隆技術(shù)可參考附錄A2。5.7標(biāo)記開發(fā)6T/FJAASSXXXX-2024T/JAASSXXXX-2024T/AHAASSXXXX-2024根據(jù)鑒定優(yōu)異基因的特異序列，開發(fā)功能性標(biāo)記或者與目標(biāo)基因緊密連鎖的分子標(biāo)記。5.8生物育種利用對獲得部分穩(wěn)定優(yōu)異的近等基因系材料，對鑒定符合目標(biāo)要求的材料，可直接作為常規(guī)稻進(jìn)行審定并推廣種植，或者作為恢復(fù)系配制雜交稻品種，再進(jìn)行審定推廣。以含有目標(biāo)性狀（如產(chǎn)量、抽穗期和抗性等）的近等基因系為供體材料，與生產(chǎn)上需要改良的親本進(jìn)行雜交或回交，借助于開發(fā)的功能性標(biāo)記或連鎖分子標(biāo)記跟蹤檢測，并對目標(biāo)性狀進(jìn)行跟蹤鑒定，創(chuàng)制含有目標(biāo)性狀的新材料，進(jìn)而培育含有目標(biāo)性狀的水稻新品種。7T/FJAASSXXXX-2024 T/JAASSXXXX-2024T/AHAASSXXXX-2024附錄A（資料性附錄）A.1近等基因系構(gòu)建的技術(shù)流程見圖A.1_________________________________8T/FJAASSXXXX-2024 T/JAASSXXXX-2024T/AHAASSXXXX