RNA檢測(cè)技術(shù)在生殖道病原體診療中的應(yīng)用檢驗(yàn)科培訓(xùn)課件

常見生殖道病原體及危害生殖支原體(MG)沙眼衣原體(CT)解脲脲原體(UU)淋病奈瑟菌（NG）不孕不育泌尿生殖道炎癥眼科炎癥類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎不良妊娠/母嬰感染1RNA檢測(cè)技術(shù)在生殖道病原體診療中的應(yīng)用檢驗(yàn)科1/22/2025沙眼衣原體(CT)

80%的女性和50%男性感染人群無臨床癥狀感染人群中無臨床癥狀

淋病奈瑟菌(NG)

50%的女性和10%的男性無臨床癥狀

解脲脲原體(UU)75%的成人無臨床癥狀，

在孕婦中無癥狀比例達(dá)到80%

生殖支原體（MG）

50%以上感染人群無明顯臨床癥狀

ClinicalEffectivenessGuidelinefortheManagementofChlamydiatrachomatisGenitalTractInfection.2001葉順章.性傳播疾病的實(shí)驗(yàn)室診斷.第二版.102沉默的殺手European(IUSTI/WHO)GuidelineontheDiagnosisandTreatmentofGonorrhoeainAdults.20092RNA檢測(cè)技術(shù)在生殖道病原體診療中的應(yīng)用檢驗(yàn)科1/22/2025歐美國(guó)家指南中建議篩查CT/NGCT/NG所有妊娠女性在第一次產(chǎn)檢時(shí)都要進(jìn)行CT/NG檢查，并需在孕晚期進(jìn)行復(fù)查。CDCGrandRounds:TheGrowingThreatofMultidrug-ResistantGonorrhea。USACDC2013GuidelinesfortheLaboratoryDiagnosisofMycoplasmagenitaliumInfectionsinEastEuropeanCountries,2010ScreeningforChlamydiaandGonorrhea:U.S.PreventiveServicesTaskForceRecommendationStatement.2014美國(guó)2014年預(yù)防服務(wù)工作組(USPSTF)美國(guó)疾控(USCDC)2010版《性病診療指南》CT/NG建議所有育齡人群中進(jìn)行CT/NG檢查。英國(guó)2013版國(guó)家臨床最優(yōu)化研究所(NICE)指南建議所有育齡人群中進(jìn)行CT檢查。CT3RNA檢測(cè)技術(shù)在生殖道病原體診療中的應(yīng)用檢驗(yàn)科1/22/2025Preventionofinfectionafterinducedabortion.ReleasedateOctober2010.SFPGuideline20102美國(guó)計(jì)劃生育學(xué)會(huì)（SFP）《人工流產(chǎn)后預(yù)防感染指南》

人工流產(chǎn)手術(shù)患者應(yīng)在術(shù)前接受預(yù)防性抗生素治療，從而降低其術(shù)后生殖道感染的風(fēng)險(xiǎn)。

對(duì)擬行人工流產(chǎn)手術(shù)患者，推薦術(shù)前進(jìn)行沙眼衣原體和淋病奈瑟菌的篩查，對(duì)于檢測(cè)陽(yáng)性患者依照規(guī)范治療后再施行手術(shù)。歐美國(guó)家指南中建議篩查CT/NGCT/NG4RNA檢測(cè)技術(shù)在生殖道病原體診療中的應(yīng)用檢驗(yàn)科1/22/2025孕前和孕期保健指南2011.中華醫(yī)學(xué)會(huì)婦產(chǎn)科分會(huì)產(chǎn)科學(xué)組孕前和孕期保健指南

-孕前3個(gè)月：CT/NG為備查項(xiàng)目-懷孕6-13周：高危孕婦、有癥狀者CT/NG為備查項(xiàng)目國(guó)家免費(fèi)孕前優(yōu)生健康檢查項(xiàng)目試點(diǎn)技術(shù)服務(wù)規(guī)范-陰道分泌物進(jìn)行CT/NG檢測(cè)黏液膿性宮頸炎的診斷和治療

-對(duì)疑似患者，在確定臨床體征后，

應(yīng)進(jìn)一步做衣原體及淋病奈瑟菌的檢測(cè)CT/NGCT/NGCT/NG黏液膿性宮頸炎的診斷和治療.2012.中華醫(yī)學(xué)會(huì)婦產(chǎn)科分會(huì)感染協(xié)作組我國(guó)指南關(guān)于CT/NG的檢查建議5RNA檢測(cè)技術(shù)在生殖道病原體診療中的應(yīng)用檢驗(yàn)科1/22/2025生殖道病原體實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法細(xì)菌法免疫法分子生物學(xué)法培養(yǎng)法鏡檢法抗原抗體檢測(cè)DNA檢測(cè)RNA檢測(cè)6RNA檢測(cè)技術(shù)在生殖道病原體診療中的應(yīng)用檢驗(yàn)科1/22/2025方法學(xué)檢測(cè)方法檢測(cè)樣本檢測(cè)復(fù)雜程度特點(diǎn)檢測(cè)項(xiàng)目細(xì)菌法培養(yǎng)法細(xì)菌培養(yǎng)分泌物較復(fù)雜，檢測(cè)過程長(zhǎng)準(zhǔn)確率低，易漏檢及誤檢用于NG/UU/CT/MG檢測(cè)形態(tài)學(xué)法涂片鏡檢分泌物全手工操作，較復(fù)雜準(zhǔn)確率較高，但有漏檢用于NG檢測(cè)免疫法免疫法膠體金/酶聯(lián)免疫法分泌物耗時(shí)短，操作簡(jiǎn)單準(zhǔn)確率低，假陰性問題突出用于CT檢測(cè)分子生物學(xué)法DNA檢測(cè)PCR分泌物操作較復(fù)雜，需有一定經(jīng)驗(yàn)才能做好檢測(cè)準(zhǔn)確率相對(duì)較高，但存在污染和死亡病原體導(dǎo)致的假陽(yáng)性問題用于CT/NG/UU檢測(cè)RNA檢測(cè)TMA/SAT尿液和分泌物耗時(shí)耗時(shí)短，儀器自動(dòng)化操作，較簡(jiǎn)單檢測(cè)活體RNA，靈敏度和特異性均很高歐美國(guó)家用于CT/NG/MG檢測(cè)常用CT/NG/UU/MG檢測(cè)方法比較7RNA檢測(cè)技術(shù)在生殖道病原體診療中的應(yīng)用檢驗(yàn)科1/22/2025國(guó)外診療指南推薦使用分子檢測(cè)法診斷生殖道病原體CT/NG美國(guó)疾控2014版《CT/NG實(shí)驗(yàn)室診斷指南》RecommendationsfortheLaboratory-BasedDetectionofChlamydiatrachomatisandNeisseriagonorrhoeae.USACDC.March2014.Unemoetal.Laboratorydiagnosisofsexuallytransmitted

infections,includinghumanimmunodeficiencyvirus,WHO,2013WHO2013版《性傳播疾病實(shí)驗(yàn)室診斷方法》8RNA檢測(cè)技術(shù)在生殖道病原體診療中的應(yīng)用檢驗(yàn)科1/22/2025

WHO性傳播疾病實(shí)驗(yàn)室診斷指南利用16SrRNA為靶標(biāo)的RNA檢測(cè)技術(shù)（TMA），在靈敏度上比PCR要高，它是目前一種靈敏度、特異度均非常高的MG檢測(cè)技術(shù)。Unemoetal.Laboratorydiagnosisofsexuallytransmitted。a.infections,includinghumanimmunodeficiencyvirus,WHO,2013WHO明確指出核酸檢測(cè)法（NAAT）是診斷MG的唯一可行方法;通過RNA檢測(cè)技術(shù)檢測(cè)生殖支原體比PCR方法要更準(zhǔn)確。核酸檢測(cè)法（NAAT）是診斷MG的唯一可行方法WHO推薦用RNA技術(shù)檢測(cè)MG9RNA檢測(cè)技術(shù)在生殖道病原體診療中的應(yīng)用檢驗(yàn)科1/22/2025RNA用于臨床檢驗(yàn)的優(yōu)勢(shì)靈敏度高，不易漏檢：RNA拷貝數(shù)≥DNA拷貝數(shù)（e.g，16srRNA104copy/cell）與臨床相關(guān)性好，可以區(qū)分“死菌”“活菌”：病原體死亡，RNA很快降解，可進(jìn)行療效評(píng)估和輔助判愈，減少無效治療，比如抗生素濫用。無創(chuàng)取樣：尿液檢測(cè)，顯著降低病人的采樣痛苦和檢測(cè)依從性。不易誤檢：靶標(biāo)和擴(kuò)增產(chǎn)物都是RNA，不易污染，不易出現(xiàn)假陽(yáng)性。10RNA檢測(cè)技術(shù)在生殖道病原體診療中的應(yīng)用檢驗(yàn)科1/22/2025RNA檢測(cè)技術(shù)NASBA（Biomerieux）(NAsequencebasedamplification)TMA（Gen-probe）(TranscriptionMediatedAmplification)SAT（上海仁度)（SimultaneousAmplificationandTesting)11RNA檢測(cè)技術(shù)在生殖道病原體診療中的應(yīng)用檢驗(yàn)科1/22/2025SAT技術(shù)12RNA檢測(cè)技術(shù)在生殖道病原體診療中的應(yīng)用檢驗(yàn)科1/22/2025SAT與PCR技術(shù)原理比較RTRNAcDNART~1000copiesT7SATDNATaqTaqPCR30分鐘內(nèi)擴(kuò)增1010倍13RNA檢測(cè)技術(shù)在生殖道病原體診療中的應(yīng)用檢驗(yàn)科1/22/2025中國(guó)診療指南推薦用SAT診斷生殖道病原體梅毒、淋病、生殖器皰疹、生殖道沙眼衣原體感染診療指南。中國(guó)疾控中心、中華醫(yī)學(xué)會(huì)皮膚性病學(xué)分會(huì)性病學(xué)組。2014。中國(guó)2014版《梅毒、淋病、生殖器皰疹、生殖道沙眼衣原體感染診療指南》14RNA檢測(cè)技術(shù)在生殖道病原體診療中的應(yīng)用檢驗(yàn)科1/22/2025CT/NG/UU/MG-SAT是國(guó)內(nèi)唯一獲得CFDA認(rèn)證的RNA檢測(cè)試劑15RNA檢測(cè)技術(shù)在生殖道病原體診療中的應(yīng)用檢驗(yàn)科1/22/2025SAT擴(kuò)增曲線圖（ABI7500）陰性結(jié)果陽(yáng)性結(jié)果以CT-SAT為例16RNA檢測(cè)技術(shù)在生殖道病原體診療中的應(yīng)用檢驗(yàn)科1/22/2025SAT技術(shù)可實(shí)現(xiàn)尿液檢測(cè)

樣本類型：宮頸拭子、尿液金華中心醫(yī)院浙大醫(yī)學(xué)院附屬婦產(chǎn)科醫(yī)院臨床結(jié)果顯示拭子和尿液標(biāo)本檢測(cè)陽(yáng)性率基本一致。鄭雅萍

袁青

陳偉,實(shí)時(shí)核酸恒溫?cái)U(kuò)增技術(shù)在奈瑟菌感染檢測(cè)中的應(yīng)用,《浙江實(shí)用醫(yī)學(xué)》,2015年01期

沙眼衣原體淋病奈瑟菌17RNA檢測(cè)技術(shù)在生殖道病原體診療中的應(yīng)用檢驗(yàn)科1/22/2025編號(hào)作者發(fā)表時(shí)間研究中心病例數(shù)項(xiàng)目靈敏度特異性診斷標(biāo)準(zhǔn)1王千秋等2010中科院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院皮膚病研究所205NG100%94.5%PCR2顧偉鳴等2010上海市皮膚病性病醫(yī)院229CT97.1%100%培養(yǎng)+PCR3高志華等2012東莞市南方醫(yī)科大學(xué)廣濟(jì)醫(yī)院218NG100%97.08%培養(yǎng)+PCR4陳敏等2014湖南省婦幼保健院,解放軍163醫(yī)院200CT88.12%100%培養(yǎng)+PCR5鄭雅萍等2015金華市中心醫(yī)院153NG95.9%88.8%分離培養(yǎng)SAT技術(shù)具有高靈敏度，高特異性18RNA檢測(cè)技術(shù)在生殖道病原體診療中的應(yīng)用檢驗(yàn)科1/22/2025男科多種樣本類型檢測(cè)（課題）仁度CT/NG/UU/MGRNA檢測(cè)試劑用于精液檢測(cè)

采用SAT技術(shù)對(duì)438例男性精液標(biāo)本進(jìn)行CT/NG/UU/MG檢測(cè)結(jié)論：1、SAT技術(shù)可對(duì)精漿標(biāo)本進(jìn)行CT/NG/UU/MG檢測(cè)。2、與醫(yī)院傳統(tǒng)檢測(cè)方法相比，傳統(tǒng)檢測(cè)方法陽(yáng)性標(biāo)本，SAT檢測(cè)均為陽(yáng)性；同時(shí)SAT還比傳統(tǒng)方法多檢出陽(yáng)性標(biāo)本。19RNA檢測(cè)技術(shù)在生殖道病原體診療中的應(yīng)用檢驗(yàn)科1/22/2025仁度UU/MGRNA檢測(cè)試劑用于尿液和前列腺液檢測(cè)（同一患者同時(shí)采集尿液和前列腺液）前列腺液標(biāo)本合計(jì)陽(yáng)性陰性尿液標(biāo)本陽(yáng)性35136陰性06363合計(jì)356499表199例患者兩種樣本類型UU檢測(cè)結(jié)果前列腺液標(biāo)本合計(jì)陽(yáng)性陰性尿液標(biāo)本陽(yáng)性303陰性09696合計(jì)39699表299例患者兩種樣本類型MG檢測(cè)結(jié)果結(jié)論：前列腺液檢測(cè)陽(yáng)性樣本，尿液檢測(cè)均為陽(yáng)性！SAT可應(yīng)用于前列腺液和尿液的檢測(cè)！20RNA檢測(cè)技術(shù)在生殖道病原體診療中的應(yīng)用檢驗(yàn)科1/22/2025操作簡(jiǎn)單-----小批量樣本檢測(cè)樣本磁珠法提取核酸恒溫?cái)U(kuò)增檢測(cè)結(jié)果報(bào)告21RNA檢測(cè)技術(shù)在生殖道病原體診療中的應(yīng)用檢驗(yàn)科1/22/2025操作簡(jiǎn)單----大批量樣本檢測(cè)全自動(dòng)高通量樣本適用范圍廣全自動(dòng)樣本制備工作站的開發(fā)陰性結(jié)果陽(yáng)性結(jié)果全自動(dòng)核酸提取儀22RNA檢測(cè)技術(shù)在生殖道病原體診療中的應(yīng)用檢驗(yàn)科1/22/2025適用范圍廣-----多種檢測(cè)機(jī)型ABI系列熒光定量PCR儀器羅氏實(shí)時(shí)熒光PCR儀器STRATAGENE熒光定量PCR儀器西安天隆實(shí)時(shí)熒光PCR儀器23RNA檢測(cè)技術(shù)在生殖道病原體診療中的應(yīng)用檢驗(yàn)科1/22/2025CT/NG/UU/MG-SAT產(chǎn)品特點(diǎn)SAT產(chǎn)品特點(diǎn)SAT的優(yōu)勢(shì)帶給檢驗(yàn)科的益處檢測(cè)靶標(biāo)：RNA靈敏度高活菌檢測(cè)可尿液檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確度高，可靠尿液檢測(cè)，減少醫(yī)務(wù)人員工作量，減輕病人痛苦擴(kuò)增產(chǎn)物：RNA產(chǎn)物易降解，減少實(shí)驗(yàn)室污染風(fēng)險(xiǎn)維護(hù)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)控水平實(shí)驗(yàn)室質(zhì)控、污染非常少核酸提取：超聲波處理15min操作簡(jiǎn)單，快速操作簡(jiǎn)單、易掌握擴(kuò)增方式：42℃恒溫降低實(shí)驗(yàn)室設(shè)備要求縮短檢測(cè)時(shí)間減少工作量提高工作效率檢測(cè)方法：實(shí)時(shí)熒光檢測(cè)實(shí)時(shí)反映擴(kuò)增反應(yīng)的動(dòng)態(tài)過程結(jié)果是否容易判讀24RNA檢測(cè)技術(shù)在生殖道病原體診療中的應(yīng)用檢驗(yàn)科1/22/2025CT/NG/UU/MG-SAT項(xiàng)目開展相關(guān)參數(shù)CT/NG/UU/MG-SAT項(xiàng)目開展相關(guān)參數(shù)樣本樣本類型宮頸拭子、尿道拭子、陰道拭子（MG項(xiàng)目）、尿液樣本保存尿液樣本2℃～30℃條件下24小時(shí)內(nèi)加入樣本保存液加入樣本保存液的標(biāo)本，-20℃保存3個(gè)月，-70℃可長(zhǎng)期保存。注意：不立即進(jìn)行檢測(cè)的樣本，最好放入-20℃凍存，防止樣本RNA降解。試劑主要試劑CT/NG/UU/MG-SAT試劑盒試劑保存

A盒（提取盒）：4℃冰箱冷藏B盒（擴(kuò)增檢測(cè)盒）：-20℃冰箱凍存主要設(shè)備提取磁珠分離器、電動(dòng)吸引器擴(kuò)增檢測(cè)熒光定量PCR儀（ABI系列PCR儀、Roche480等）、連續(xù)加樣槍操作操作步驟樣本處理→核酸提取→擴(kuò)增檢測(cè)操作時(shí)間樣本處理時(shí)間90m