藥物的鑒別試驗藥物的含量測定與分析方法的驗證

第四章藥物的含量測定與分析方法的驗證

緒論

藥品質(zhì)量研究的內(nèi)容與藥典概況

藥物的鑒別試驗藥物的雜質(zhì)檢查回顧內(nèi)容

定量分析方法的分類與特點藥物分析方法的驗證

分析樣品的制備

主要內(nèi)容藥物的含量測定容量分析法三種分析方法光譜分析法色譜分析法第一節(jié)定量分析方法的分類與特點一、容量分析法（滴定法）第一節(jié)定量分析方法的分類與特點

將已知濃度的滴定液，由滴定管滴加到被測藥物溶液中，直至滴定液與被測藥物反應完全（達到化學計量點），停止滴定，然后根據(jù)滴定液消耗的濃度和被消耗的體積，按化學計量關系式計算出被測藥物的含量。滴定誤差通過指示劑的顏色或者電子設備的電流或電壓來指示滴定終點一、容量分析法（滴定法）第一節(jié)定量分析方法的分類與特點特點：1.方法簡單易行：所用儀器價廉易得，操作簡便快速2.方法耐用性高：影響測定的實驗條件與環(huán)境因素少3.測定結果準確：誤差＜0.2%，滿足要求準確度高的樣品測定4.方法專屬性差：對相近雜質(zhì)干擾缺少選擇，適用于主成分含量較高的樣品分析。一、容量分析法（滴定法）第一節(jié)定量分析方法的分類與特點適用范圍：廣泛應用于化學原料藥物的測定，較少應用于藥物制劑的測定。一、容量分析法----滴定度（T）第一節(jié)定量分析方法的分類與特點

滴定度系指每1ml規(guī)定濃度的滴定液相當于被測物質(zhì)的質(zhì)量(mg)。用碘量法測定維生素C的含量時，《中國藥典》規(guī)定：每1ml碘滴定液（0.05mol/L）相當于8.806mg的維生素C（C6H8O6）。例如一、容量分析法----滴定度（T）的計算第一節(jié)定量分析方法的分類與特點

aA（待測物）+bB（滴定液）cC+dD滴定液反應的質(zhì)量被測藥物反應的質(zhì)量被測藥物的分子量滴定液的分子量滴定液消耗的體積滴定液的摩爾濃度每1ml規(guī)定濃度的滴定液相當于被測物質(zhì)的質(zhì)量(mg)一、容量分析法----滴定度（T）的計算第一節(jié)定量分析方法的分類與特點例4-1碘量法測定VC含量，計算VC的滴定度T已知M(C6H8O6)=176.13，C(I2)=0.05mol/LmB=0.05mol/L11MA=176.13一、容量分析法----滴定度（T）的計算第一節(jié)定量分析方法的分類與特點例4-2溴酸鉀法測定異煙肼含量，計算異煙肼的滴定度T已知M(C6H7N3O)=137.14，C溴酸鉀=0.01667mol/L一、容量分析法----含量的計算第一節(jié)定量分析方法的分類與特點直接滴定法：用滴定液直接滴定被測藥物，計算被測藥物百分含量。消耗滴定液體積一、容量分析法----含量的計算第一節(jié)定量分析方法的分類與特點直接滴定法：

在實際工作中，滴定液的濃度可能與藥典規(guī)定的濃度并不一致，所以應該進行校正。濃度校正因數(shù)一、容量分析法----含量的計算第一節(jié)定量分析方法的分類與特點直接滴定法：例4-2

精密稱取本品0.3630g加稀鹽酸回流1小時后，放冷，用亞硝酸鈉液（0.1010mol/L）滴定，用去20.00ml。每1ml亞硝酸鈉液（0.1mol/L）相當于17.92mg的C10H13O2N，計算非那西丁的含量。一、容量分析法----含量的計算第一節(jié)定量分析方法的分類與特點間接滴定法：

不直接對待測物進行滴定，而采用間接途徑滴定。生成物滴定法剩余量滴定法（回滴法）被測藥物

→B+A

滴定滴定液被測藥物

+

滴定液A定量過量→B+

滴定液A剩余滴定液B滴定一、容量分析法----含量的計算第一節(jié)定量分析方法的分類與特點間接滴定法：生成物滴定法被測藥物

→B+A

滴定滴定液一、容量分析法----含量的計算第一節(jié)定量分析方法的分類與特點間接滴定法：例4-3供試品0.3g＋水100ml＋鹽酸15ml＋碘化鉀試液10ml→密塞，振搖后暗處放置10min→硫代硫酸鈉滴定液（0.1mol/L）→淀粉指示液指示終點1112請讀取請校正一、容量分析法----含量的計算第一節(jié)定量分析方法的分類與特點間接滴定法：剩余量滴定法（回滴法）被測藥物

+

滴定液A定量過量→B+

滴定液A剩余滴定液B滴定定量的滴定液A的體積滴定液B消耗的的體積供試品的稱取量滴定液B的濃度校正因子滴定液A的濃度校正因子未進行空白試驗校正一、容量分析法----含量的計算第一節(jié)定量分析方法的分類與特點間接滴定法：剩余量滴定法（回滴法）被測藥物

+

滴定液A定量過量→B+

滴定液B滴定

剩余量滴定法在滴定過程中，常涉及化學反應、加熱、分取等操作步驟，使測定誤差顯著增加?？瞻自囼炐Ｕ味ㄒ篈剩余一、容量分析法----含量的計算第一節(jié)定量分析方法的分類與特點間接滴定法：剩余量滴定法（回滴法）被測藥物

+

滴定液A定量過量→B+

滴定液A剩余滴定液B滴定空白溶液+

滴定液A等量滴定液B滴定一、容量分析法----含量的計算第一節(jié)定量分析方法的分類與特點間接滴定法：空白試驗校正空白試驗消耗滴定液B的體積供試品的稱取量滴定液B的濃度校正因子樣品測定消耗滴定液B的體積生成物滴定法剩余量滴定法（回滴法）直接滴定法：間接滴定法：滴定度（T）光譜分析法藥典收載方法第一節(jié)定量分析方法的分類與特點紫外可見分光光度法原子吸收分光光度法紅外分光度法熒光分析法火焰光度法二、光譜分析法---紫外可見分光光度法第一節(jié)定量分析方法的分類與特點定義:利用被測物質(zhì)的分子對紫外-可見光具有選擇性吸收的特性而建立的分析方法。波長

10pm300pm200nm

400nm800nm500mm1cm1m光譜

射線X射線

紅外光微波無線電波方法

光譜法分光光度法

光譜法核磁共振可見光紫外光二、光譜分析法---紫外可見分光光度法第一節(jié)定量分析方法的分類與特點bA:吸光度值（表征物質(zhì)對光吸收程度的量）T：透過率E:吸光系數(shù)l：液層厚度c：溶液濃度朗伯－比爾定律：l二、光譜分析法---紫外可見分光光度法第一節(jié)定量分析方法的分類與特點物理意義：當待測溶液濃度為1g/100mL(1%)、液層厚度為1cm時的吸光度值朗伯－比爾定律：第一節(jié)定量分析方法的分類與特點特點：1.簡單易行：所用儀器較價廉，操作簡單、易于普及2.靈敏度高：10-6g/mL，適合于低濃度試樣的分析3.準確度較高：相對誤差不大于2%，滿足準確度要求較高的試樣分析4.專屬性較差：本法通常不受一般雜質(zhì)的干擾，但對結構相近的有關物質(zhì)缺乏選擇性。二、光譜分析法---紫外可見分光光度法第一節(jié)定量分析方法的分類與特點二、光譜分析法---紫外可見分光光度法適用范圍：較少應用于原料藥的含量測定，可用于藥物制劑的含量測定，更多用于藥物制劑的定量檢查。四種方法紫外可見分光度法含量測定方法第一節(jié)定量分析方法的分類與特點第一節(jié)定量分析方法的分類與特點對照品比較法：供試品溶液CX二、光譜分析法---紫外可見分光光度法對照品溶液CR分別相同溶劑量AXAR規(guī)定波長下

對照品溶液所含被測藥物的量應為：供試品溶液中被測成分規(guī)定量的100±10%第一節(jié)定量分析方法的分類與特點對照品比較法：二、光譜分析法---紫外可見分光光度法原料藥百分含量：稀釋倍數(shù)供試品的稱取量供試品的濃度第一節(jié)定量分析方法的分類與特點對照品比較法：二、光譜分析法---紫外可見分光光度法固體制劑百分標示含量：稀釋倍數(shù)供試品的稱取量供試品的濃度制劑平均重量制劑的標示量第一節(jié)定量分析方法的分類與特點吸收系數(shù)法：二、光譜分析法---紫外可見分光光度法

制備供試品溶液，在規(guī)定的波長處測定其吸光度，再以該品種在規(guī)定條件下的吸收系數(shù)計算含量。CX（g/ml）第一節(jié)定量分析方法的分類與特點吸收系數(shù)法：二、光譜分析法---紫外可見分光光度法第一節(jié)定量分析方法的分類與特點吸收系數(shù)法：二、光譜分析法---紫外可見分光光度法稀釋倍數(shù)供試品的稱取量供試品的濃度制劑平均重量制劑的標示量供試品的濃度（g/100ml）單位換算因數(shù)1g=1000mg第一節(jié)定量分析方法的分類與特點吸收系數(shù)法：二、光譜分析法---紫外可見分光光度法注射液片劑取樣體積稀釋體積注射液裝量（ml/支）標示量（mg/支）取樣量稀釋體積平均片重（g/片）標示量（mg/片）單位換算因素1g=1000mg單位換算因素1g=1000mg第一節(jié)定量分析方法的分類與特點計算分光光度法：二、光譜分析法---紫外可見分光光度法按各品種項下規(guī)定的方法進行使用。比色法：供試品本身在紫外可見光區(qū)沒有強吸收在紫外區(qū)雖有吸收，但為了避免干擾或增加靈敏度加顯色劑使反應產(chǎn)物最大吸收移至可見光區(qū)，以避免干擾或增加靈敏度。吸收系數(shù)法：對照品比較法：朗伯－比爾定律：第一節(jié)定量分析方法的分類與特點

是根據(jù)物質(zhì)的熒光譜線的位置及其強度進行物質(zhì)鑒定和含量測定的儀器方法。二、光譜分析法----熒光分析法

熒光分析法熒光光譜熒光強度定性分析定量分析第一節(jié)定量分析方法的分類與特點特點：1.高靈敏度：10-9g/mL2.熒光自熄滅：當溶液中熒光物質(zhì)的濃度太高時，溶液會發(fā)生自熄滅現(xiàn)象，同時由于在液面附近的溶液會吸收激發(fā)光，使發(fā)射光強度下降，導致熒光強度與濃度不成正比。因此熒光分析法應在低濃度溶液中進行。3.易受干擾：熒光分光光度法因靈敏度高，故干擾因素也多，因此必須作空白試驗。二、光譜分析法---熒光分析法第一節(jié)定量分析方法的分類與特點

含量測定：

當激發(fā)光強度、波長、所用溶劑及溫度等條件固定時，物質(zhì)在一定濃度范圍內(nèi)，其熒光強度R與該物質(zhì)濃度C成正比：R=Kc

二、光譜分析法----熒光分析法對照品比較法：第一節(jié)定量分析方法的分類與特點三、色譜分析法

一種分離分析方法；根據(jù)混合物中各組分的色譜行為差異，將各組分從混合物中分離后再選擇性對待測組分進行分析的方法。色譜分析法分離原理第一節(jié)定量分析方法的分類與特點分子排阻色譜法薄層色譜法吸附色譜法紙色譜法分配色譜法離子交換色譜法分離方式柱色譜法氣相色譜法高效液相色譜法第一節(jié)定量分析方法的分類與特點特點：1.高靈敏度：最低檢出濃度可達10-12～10-9g/mL2.高專屬性：可有效分離樣品中與待測組分結構相近的有關物質(zhì)，實現(xiàn)對待測組分的選擇性檢測3.高效能和高速度：通常10～20min完成藥物的定量分析，30min內(nèi)完成藥物復方制劑的多組分同時定量分析，60min內(nèi)完成藥物中有關物質(zhì)的分離與同時定量。三、色譜分析法----高效液相色譜法第一節(jié)定量分析方法的分類與特點1.適用范圍：廣泛應用于藥物及其中有關物質(zhì)檢查，是藥物制劑尤其是復方制劑含量測定的首選方法。三、色譜分析法----高效液相色譜法三、色譜分析法----高效液相色譜法第一節(jié)定量分析方法的分類與特點2.對儀器一般要求：三、色譜分析法----高效液相色譜法第一節(jié)定量分析方法的分類與特點2.對儀器一般要求：色譜柱：

填充劑種類、流動相組成按品種項下要求選用三、色譜分析法----高效液相色譜法第一節(jié)定量分析方法的分類與特點

填充劑類型：反相色譜用非極性填充劑——化學鍵合硅膠；正相色譜用極性填充材料——硅膠；離子交換色譜——離子交換填充劑；對映異構體——手性填充劑色譜柱：2.對儀器一般要求：三、色譜分析法----高效液相色譜法第一節(jié)定量分析方法的分類與特點

柱溫：通常不超過40℃，最高不超過60℃色譜柱：

pH：2-8之間，大于8，使得硅膠溶解小于2，化學鍵合相易脫落2.對儀器一般要求：三、色譜分析法----高效液相色譜法第一節(jié)定量分析方法的分類與特點

紫外-可見分光檢測器（包括二極管陣列檢測器）；熒光檢測器；蒸發(fā)光散射檢測器；示差折光檢測器；電化學檢測器；質(zhì)譜（MS）檢測器。檢測器：2.對儀器一般要求：三、色譜分析法----高效液相色譜法第一節(jié)定量分析方法的分類與特點反相色譜系統(tǒng)的流動相首選甲醇-水。流動相：2.對儀器一般要求：三、色譜分析法----高效液相色譜法第一節(jié)定量分析方法的分類與特點美國Vydacprotein&peptideC18柱(5μm)天津試劑二廠YWG-C18柱(10μm)天津特納公司KromasilC18柱(5μm)大連依利特公司HypersilC18柱(5μm)8min12min26min13min

相同實驗條件下，不同廠家色譜柱分離效果考察1.苯酚；2.間甲酚；3.胰島素流動相：硫酸鹽緩沖液-50%乙腈水溶液(45:55)；流速：1.0mL/min；柱溫：40℃；進樣量：20μL

藥典未規(guī)定色譜柱廠家：“用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑…”不同的色譜結果考察實驗所用的分析系統(tǒng)與設定的參數(shù)是否適用色譜系統(tǒng)適用性試驗的目的意義三、色譜分析法----高效液相色譜法第一節(jié)定量分析方法的分類與特點3.系統(tǒng)適應性試驗理論板數(shù)n分離度R靈敏度拖尾因子T重復性

采用理論板數(shù)作為衡量柱效能的指標時，應指明測定物質(zhì)，一般為待測組分或內(nèi)標物的理論板數(shù)。理論板數(shù)n三、色譜分析法----高效液相色譜法第一節(jié)定量分析方法的分類與特點系統(tǒng)適用性試驗：評價色譜柱的分離效能

采用理論板數(shù)作為衡量柱效能的指標時，應指明測定物質(zhì)，一般為待測組分或內(nèi)標物的理論板數(shù)。理論板數(shù)n保留時間（min）峰寬半峰寬n越大，柱效率越高，分離能力越強。三、色譜分析法----高效液相色譜法第一節(jié)定量分析方法的分類與特點系統(tǒng)適用性試驗：評價色譜柱的分離效能三、色譜分析法----高效液相色譜法第一節(jié)定量分析方法的分類與特點系統(tǒng)適用性試驗：分離度R評價待測組分與鄰近共存物或難分離物質(zhì)之間的分離程度三、色譜分析法----高效液相色譜法第一節(jié)定量分析方法的分類與特點系統(tǒng)適用性試驗：分離度R評價待測組分與鄰近共存物或難分離物質(zhì)之間的分離程度前一峰的保留時間后一峰寬前一峰寬半峰寬R越大，相鄰組分分離越好。R=1.5通常用作是否分開的判據(jù)。

后一峰的保留時間三、色譜分析法----高效液相色譜法第一節(jié)定量分析方法的分類與特點系統(tǒng)適用性試驗：分離度R評價待測組分與鄰近共存物或難分離物質(zhì)之間的分離程度R=0.75R=1.0R=1.5三、色譜分析法----高效液相色譜法第一節(jié)定量分析方法的分類與特點系統(tǒng)適用性試驗：靈敏度評價色譜系統(tǒng)檢測微量物質(zhì)的能力

通常以信噪比（S/N）表示。定量測定時，信噪比應不小于10定性測定時，信噪比應不小于3。

三、色譜分析法----高效液相色譜法第一節(jié)定量分析方法的分類與特點系統(tǒng)適用性試驗：拖尾因子T評價色譜峰的對稱性

為保證測量精度和分離效果，應檢查待測峰的拖尾因子是否符合各品種項下的規(guī)定。峰頂點-峰前沿距離5%峰高處峰寬三、色譜分析法----高效液相色譜法第一節(jié)定量分析方法的分類與特點系統(tǒng)適用性試驗：拖尾因子T評價色譜峰的對稱性

為保證測量精度和分離效果，應檢查待測峰的拖尾因子是否符合各品種項下的規(guī)定。

除另有規(guī)定外，用峰高定量時T應在0.95～1.05。拖尾峰前沿峰三、色譜分析法----高效液相色譜法第一節(jié)定量分析方法的分類與特點系統(tǒng)適用性試驗：重復性評價連續(xù)進樣中，色譜系統(tǒng)響應值的重復性能

外標法：按要求取對照液連續(xù)進樣5次，測定峰面積Ai(A1～A5)，要求峰面積的相對標準偏差（RSD）不得大于2.0%。相對標準偏差標準偏差平均峰面積三、色譜分析法----高效液相色譜法第一節(jié)定量分析方法的分類與特點系統(tǒng)適用性試驗：重復性評價連續(xù)進樣中，色譜系統(tǒng)響應值的重復性能內(nèi)標物的峰面積對照品的濃度對照品的峰面積內(nèi)標物的濃度

內(nèi)標法：按要求配制高（120%）、中(100%)、低(80%)濃度的對照液，分別加入規(guī)定量的內(nèi)標液，配制成3種不同溶液，分別至少進樣2次，計算平均校正因子，RSD不大于2.0%。三、色譜分析法----高效液相色譜法第一節(jié)定量分析方法的分類與特點系統(tǒng)適用性試驗：重復性評價連續(xù)進樣中，色譜系統(tǒng)響應值的重復性能

內(nèi)標法：按要求配制高（120%）、中(100%)、低(80%)濃度的對照液，分別加入規(guī)定量的內(nèi)標液，配制成3種不同溶液，分別至少進樣2次，計算平均校正因子，RSD不大于2.0%。平均校正因子相對標準偏差標準偏差用于評價色譜柱的分離效能用于評價待測組分與鄰近共存物或難分離物質(zhì)之間的分離程度定量測定時信噪比應不小于10；定性測定時，信噪比應不小于3用于評價色譜峰的對稱性色譜系統(tǒng)適用性試驗理論塔板數(shù)n分離度R靈敏度拖尾因子T五個指標用于評價連續(xù)進樣中，色譜系統(tǒng)響應值的重復性能重復性三、色譜分析法----高效液相色譜法第一節(jié)定量分析方法的分類與特點美國Vydacprotein&peptideC18柱(5μm)天津試劑二廠YWG-C18柱(10μm)天津特納公司KromasilC18柱(5μm)大連依利特公司HypersilC18柱(5μm)8min12min26min13min

相同實驗條件下，不同廠家色譜柱分離效果考察1.苯酚；2.間甲酚；3.胰島素流動相：硫酸鹽緩沖液-50%乙腈水溶液(45:55)；流速：1.0mL/min；柱溫：40℃；進樣量：20μL三、色譜分析法----高效液相色譜法第一節(jié)定量分析方法的分類與特點測定方法：

外標法供試品溶液CX對照品溶液CR分別AXARHPLC色譜儀三、色譜分析法----高效液相色譜法第一節(jié)定量分析方法的分類與特點測定方法：對照液的峰面積對照液的濃度供試液的峰面積供試液的濃度

外標法三、色譜分析法----高效液相色譜法第一節(jié)定量分析方法的分類與特點測定方法：內(nèi)標物的峰面積對照品的濃度對照品的峰面積內(nèi)標物的濃度

內(nèi)標法對照品溶液CR內(nèi)標溶液CsARASHPLC色譜儀混合三、色譜分析法----高效液相色譜法第一節(jié)定量分析方法的分類與特點測定方法：

內(nèi)標法AX，AS，HPLC色譜儀混合供試品溶液CX內(nèi)標溶液Cs三、色譜分析法----高效液相色譜法第一節(jié)定量分析方法的分類與特點特點：

外標法：

操作簡單不需要校正因子受進樣量、進樣重復性和操作條件影響大每次進樣量應一致，否則產(chǎn)生誤差內(nèi)標法：進樣量不超量時，重復性及操作條件對結果無影響須尋找合適內(nèi)標物第一節(jié)定量分析方法的分類與特點特點：1.主要應用于具有揮發(fā)性或其衍生物具有揮發(fā)性的藥物及其相關物質(zhì)的分析；2.藥典中廣泛應用于殘留溶劑測定法、水分測定法、酒劑或酊劑中甲醇量檢查法等相關雜質(zhì)的檢查，維生素E等部分脂溶性較強的藥物及其制劑的含量測定等。三、色譜分析法----氣相色譜法三、色譜分析法----氣相色譜法第一節(jié)定量分析方法的分類與特點對儀器一般要求