2025年冀教新版選擇性必修3生物上冊階段測試試卷

…………○…………內(nèi)…………○…………裝…………○…………內(nèi)…………○…………裝…………○…………訂…………○…………線…………○…………※※請※※不※※要※※在※※裝※※訂※※線※※內(nèi)※※答※※題※※…………○…………外…………○…………裝…………○…………訂…………○…………線…………○…………第=page22頁，總=sectionpages22頁第=page11頁，總=sectionpages11頁2025年冀教新版選擇性必修3生物上冊階段測試試卷855考試試卷考試范圍：全部知識點；考試時間：120分鐘學(xué)校：______姓名：______班級：______考號：______總分欄題號一二三四五六總分得分評卷人得分一、選擇題(共8題，共16分)1、下列生物技術(shù)操作對遺傳物質(zhì)的改變，不會遺傳給子代的是（）A.將腺苷酸脫氨酶基因轉(zhuǎn)入淋巴細胞后回輸患者，進行基因治療B.將花青素代謝基因?qū)胫参矬w細胞，經(jīng)組培獲得花色變異植株C.將腸乳糖酶基因?qū)肽膛Ｊ芫眩嘤龅腿樘桥Ｈ榈哪膛.將胰島素基因表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸桿菌，篩選獲得基因工程菌2、圖為實驗室培養(yǎng)和純化大腸桿菌過程中的部分操作步驟；下列說法不正確的是（）

A.①步驟使用的培養(yǎng)基需先滅菌再調(diào)節(jié)pHB.②步驟接種環(huán)經(jīng)灼燒滅菌冷卻后蘸取菌液C.③到④過程中，每次接種前后都需要對接種環(huán)進行灼燒處理D.①②③步驟操作時都需要在酒精燈火焰旁進行3、有人認為轉(zhuǎn)基因生物勢必會打破自然界物種的原有界限，改變生態(tài)系統(tǒng)中的能量流動和物質(zhì)循環(huán)，會對生態(tài)系統(tǒng)的穩(wěn)定性造成破壞。下列哪項是對上述觀點的完全反駁（）A.種植轉(zhuǎn)基因抗蟲作物，可以減少農(nóng)藥的使用量B.種植抗除草劑農(nóng)作物，可以保護農(nóng)田土壤環(huán)境C.重組的微生物在降解某些化合物的過程中所產(chǎn)生的中間產(chǎn)物，可能會造成二次污染D.轉(zhuǎn)基因生物不會改變生物原有的分類地位，充其量只能說是具有某種新特征的同一物種，不會破壞生態(tài)系統(tǒng)的穩(wěn)定性4、下列不宜作為基因工程中標記基因的是（）A.核糖體蛋白基因B.熒光蛋白基因C.產(chǎn)物具有顏色反應(yīng)的基因D.抗性基因5、PCR引物的3'端為結(jié)合模板DNA的關(guān)鍵堿基，5'端無嚴格限制，可用于添加限制酶切點等序列。下列敘述正確的是（）

A.該圖表示PCR循環(huán)中的變性環(huán)節(jié)B.PCR第四次循環(huán)要消耗15對引物C.Taq酶催化相鄰的兩個游離dNTP之間形成磷酸二酯鍵D.用圖中引物擴增兩個循環(huán)后即可獲得添加限制酶切點的產(chǎn)物6、下列關(guān)于限制酶的敘述，錯誤的是（）A.限制酶可從原核生物中提取B.同一種限制酶切割不同的DNA分子產(chǎn)生的末端能夠進行堿基互補配對C.限制酶能任意切割DNA分子，從而產(chǎn)生大量的DNA片段D.每種限制酶只能識別特定的脫氧核苷酸序列7、胚胎工程技術(shù)在生產(chǎn)中的應(yīng)用不包括（）A.移植胚胎干細胞使退化的組織修復(fù)并恢復(fù)正常功能B.進行胚胎移植以充分發(fā)揮雌性優(yōu)良個體的繁殖潛能C.在小鼠腹腔中培養(yǎng)雜交瘤細胞生產(chǎn)單克隆抗體D.采用機械方法將早期胚胎分割產(chǎn)生同卵雙胎8、下列關(guān)于生物工程的敘述，正確的是A.在花藥離體培養(yǎng)形成愈傷組織的的過程中，有可能發(fā)生基因的突變和基因重組B.目的基因?qū)胫参锛毎某Ｓ梅椒ㄊ秋@微注射法C.植物的單倍體育種和雜交育種都必須利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)D.蛋白質(zhì)工程也需要構(gòu)建含控制預(yù)期蛋白質(zhì)合成的基因表達載體評卷人得分二、多選題(共8題，共16分)9、下列動物細胞培養(yǎng)過程中屬于原代培養(yǎng)的是（）A.通常將動物組織消化后的初次培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)B.從機體取得細胞后立即進行培養(yǎng)的過程C.出現(xiàn)接觸抑制現(xiàn)象后接下來的細胞培養(yǎng)過程D.哺乳動物細胞在培養(yǎng)基中的懸浮生長過程10、重疊延伸PCR技術(shù)是一種通過寡聚核苷酸鏈之間重疊的部分互相搭橋；互為模板；經(jīng)過多次PCR擴增。從而獲得目的基因的方法。該技術(shù)在擴增較長片段的DNA、不同來源的DNA片段拼接、基因的定點誘變等方而具有廣泛的應(yīng)用前景，下圖表示利用重疊延伸PCR技術(shù)擴增某目的基因的過程。下列敘述正確的是（）

A.引物中G＋C的含量越高，引物與模板DNA結(jié)合的穩(wěn)定性越高B.在第一階段由于引物2和引物3發(fā)生堿基互補配對，因此兩者置于不同反應(yīng)系統(tǒng)中C.引物1、2組成的反應(yīng)系統(tǒng)和引物3、4組成的反應(yīng)系統(tǒng)中均進行一次復(fù)制，共產(chǎn)生4種雙鏈DNA分子D.在引物1、2組成的反應(yīng)系統(tǒng)中，經(jīng)第一階段要形成圖示雙鏈DNA，至少要經(jīng)過3次復(fù)制11、研究人員從土壤中篩選得到酵母菌纖維素酶高產(chǎn)菌株；并對其降解纖維素的條件進行了研究。據(jù)圖分析正確的是（）

A.篩選該高產(chǎn)菌株需要在纖維素為唯一碳源的培養(yǎng)基中培養(yǎng)B.探究最適溫度時應(yīng)盡可能將發(fā)酵液的pH控制在9左右C.該酵母菌高產(chǎn)菌株產(chǎn)生纖維素酶的最適溫度是35℃D.利用該高產(chǎn)菌株降解纖維素時需嚴格保持厭氧環(huán)境12、野生型大腸桿菌菌株能在基本培養(yǎng)基上生長，氨基酸營養(yǎng)缺陷型突變株無法合成某種氨基酸，只能在完全培養(yǎng)基上生長，下圖為純化某氨基酸營養(yǎng)缺陷型突變株的部分流程圖，①②③④代表培養(yǎng)基，A、B、C表示操作步驟，D、E為菌落。下列敘述正確的是（）

A.圖中①②④為完全培養(yǎng)基，③為基本培養(yǎng)基B.A操作的目的是提高突變率，增加突變株的數(shù)量C.B的正確操作是用涂布器蘸取菌液后均勻地涂布在②表面D.經(jīng)C過程原位影印及培養(yǎng)后，可從④中挑取D進行純化培養(yǎng)13、地球上的植物每年產(chǎn)生的纖維素超過70億噸，其中40%~60%能被土壤中的某些微生物分解利用，這是因為他們能夠產(chǎn)生纖維素酶。研究者從牛的瘤胃中篩選產(chǎn)生纖維酶的纖維素分解菌，其篩選過程如圖1所示。將丙中的菌懸液轉(zhuǎn)接于含有稻草作碳源的固體培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到若干菌落后用剛果紅處理，看到如圖2所示情況，下列有關(guān)敘述，錯誤的是（）

A.②過程是涂布器取乙中的菌液均勻的涂布在Ⅰ號培養(yǎng)表面B.甲、乙試管中的液體都屬于液體培養(yǎng)基，主要作用是稀釋菌種C.Ⅰ號、Ⅱ號培養(yǎng)基都屬于固體培養(yǎng)基，配置時先滅菌后調(diào)節(jié)pHD.可挑取圖2中周圍出現(xiàn)透明圈的菌落，用平板劃線法繼續(xù)純化14、聚羥基脂肪酸酯(PHA)是由嗜鹽細菌合成的一種胞內(nèi)聚酯，它具有類似于合成塑料的理化特性，且廢棄后易被生物降解，可用于制造無污染的“綠色塑料”?？茖W(xué)家從某咸水湖中尋找生產(chǎn)PHA菌種的流程圖如下。下列敘述錯誤的是（）

A.步驟②可用稀釋涂布平板法接種到含合成塑料的選擇培養(yǎng)基上B.步驟③所用的培養(yǎng)基中營養(yǎng)物質(zhì)濃度越高，對嗜鹽細菌的生長越有利C.步驟④所用到的培養(yǎng)基應(yīng)加入瓊脂，以便挑取單菌落獲得純化菌株D.挑取菌落時，應(yīng)挑取多個菌落并分別測定嗜鹽細菌的PHA含量15、下圖1表示限制酶SpeⅠ、XbaⅠ的識別序列和切割位點，圖2表示基因P（960bp）、基因Q（840bp）的限制酶SpeⅠ或XbaⅠ的酶切圖譜和融合基因，圖3表示幾種基因經(jīng)限制酶SpeⅠ或XbaⅠ處理后進行電泳（電泳條帶表示特定長度的DNA片段）得到的帶譜圖，下列相關(guān)分析正確的是（）

A.基因P經(jīng)限制酶SpeⅠ處理后進行電泳的結(jié)果與圖3中的Ⅰ相同B.基因Q經(jīng)限制酶XbaⅠ處理后進行電泳的結(jié)果與圖3中的Ⅱ相同C.融合基因經(jīng)限制酶SpeⅠ處理后進行電泳的結(jié)果與圖3中的Ⅲ相同D.融合基因經(jīng)限制酶XbaⅠ處理后進行電泳的結(jié)果與圖3中的Ⅳ相同16、下列關(guān)于試管嬰兒和克隆猴的敘述，錯誤的是（）A.受精過程中，透明帶和卵細胞膜的反應(yīng)保證了受精卵染色體數(shù)目的正常B.克隆猴的性狀表現(xiàn)與細胞核供體的一模一樣，體現(xiàn)了動物細胞核具有全能性C.試管嬰兒的生殖方式屬于無性生殖，克隆猴的生殖方式屬于有性生殖D.“設(shè)計試管嬰兒”與“試管嬰兒”在操作上唯一的區(qū)別是前者需要進行遺傳學(xué)診斷評卷人得分三、填空題(共6題，共12分)17、載體具備的條件：①_____。②具有一至多個限制酶切點，供外源DNA片段插入。③______。18、_________℃左右最適合酵母菌繁殖，酒精發(fā)酵時一般將溫度控制在_______________℃。19、在____________的溫度范圍內(nèi)，DNA的雙螺旋結(jié)構(gòu)解體，雙鏈分開，這過程成為__________。20、___________（簡稱PCR）是一種____________迅速_______________的技術(shù)，它能以極少數(shù)的DNA為模板，在幾個小時內(nèi)復(fù)制出上百萬份的DNA拷貝。21、植物基因工程：______。22、蛋白質(zhì)工程在生物制藥上有廣泛的應(yīng)用。如果已經(jīng)確認某種新蛋白質(zhì)可能具有特殊的抗癌功能，其氨基酸序列也已經(jīng)確認，如何通過蛋白質(zhì)工程生產(chǎn)這種新藥？如果回答有困難，可以向老師請教或通過互聯(lián)網(wǎng)查找答案。_____評卷人得分四、判斷題(共2題，共6分)23、生殖性克隆和治療性克隆兩者有著本質(zhì)的區(qū)別。()A.正確B.錯誤24、中國政府禁止生殖性克隆，但不反對治療性克隆。()A.正確B.錯誤評卷人得分五、實驗題(共2題，共6分)25、苯酚是工業(yè)生產(chǎn)排放的有毒污染物質(zhì),自然界中存在著降解苯酚的微生物。某工廠產(chǎn)生的廢水中含有苯酚,為了降解廢水中的苯酚,研究人員從土壤中篩選獲得了只能降解利用苯酚的細菌菌株,篩選的主要步驟如圖所示,①為土壤樣品。請回答下列問題:

(1)②中培養(yǎng)目的菌株的培養(yǎng)基中應(yīng)加入________作為碳源,②中不同濃度碳源的培養(yǎng)基____（A.影響;B.不影響)細菌的數(shù)量,如果要測定②中活細菌數(shù)量,常采用_____法.

(2)④為對照,微生物在④中不生長,在⑤中生長,④與⑤培養(yǎng)基的主要區(qū)別在于_______;使用________法可以在⑥上獲得單菌落;采用固體平板培養(yǎng)細菌時為什么進行倒置培養(yǎng)?___________________。

(3)如何比較不同菌株降解苯酚能力的大小?____________________________。

(4)實驗過程中如何防止其他微生物的污染?____________________________。26、炭疽；是一種由炭疽芽孢桿菌引起的人獸共患性傳染病，也是我國規(guī)定的乙類傳染病?；卮鹣铝杏嘘P(guān)問題：

(1)人通常是通過接觸患炭疽的動物或動物制品被感染，皮膚炭疽病在人類炭疽病中最為常見，這類患者的皮膚滲出物中含有炭疽芽孢桿菌。皮膚炭疽病疑似患者就醫(yī)時，醫(yī)生先要取患者的皮膚滲出物稀釋后涂布到固體培養(yǎng)基上，經(jīng)過一段時間的培養(yǎng)獲得的平板可能是_____。A．B．C．D．(2)挑取上述培養(yǎng)基上的菌落進行如圖所示實驗（注：實驗組中的噬菌體能特異性地侵染炭疽芽孢桿菌）。

①該實驗的目的是_____。

②對照組試管中應(yīng)加入_____，實驗過程中為避免雜菌污染進行的操作包括_____（至少寫出兩點）。

③實驗結(jié)果為_____時；表明該疑似患者被炭疽芽孢桿菌感染。

④實驗過程中需將錐形瓶固定在搖床上，在35℃下振蕩培養(yǎng)24h，直至液體培養(yǎng)基變渾濁。振蕩培養(yǎng)說明炭疽芽孢桿菌的代謝類型是_____，振蕩培養(yǎng)的目的是_____。液體培養(yǎng)基變渾濁的原因是_____。

(3)對炭疽芽孢桿菌進行計數(shù)時，選用10-4、10-5、10-6三個稀釋度的菌液，各取0．2mL涂布，每個稀釋度作三次重復(fù)，經(jīng)24h恒溫培養(yǎng)后結(jié)果如表。稀釋度10-410-510-6平板編號A1A2A3B1B2B3C1C2C3菌落數(shù)31529830245535112911

由表可知，最適合計數(shù)的稀釋度為_____，原因是_____。評卷人得分六、綜合題(共3題，共24分)27、科學(xué)家從某細菌中提取抗鹽基因；轉(zhuǎn)入煙草并培育成轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草，培育過程如圖1所示，圖2為相關(guān)限制酶識別序列及切割位點。回答下列問題：

。限制酶。

BamHⅠ

BclⅠ

Sau3AⅠ

HindⅢ

識別序列及切劑位點。

（1）用圖中質(zhì)粒和目的基因構(gòu)建重組質(zhì)粒，應(yīng)選用______________________兩種限制酶切割。若Sau3AI酶切的DNA末端與BamHI酶切的DNA末端連接，該連接序列___________（填“能”；“不能”或“不一定能”）被BamHI酶識別。

（2）步驟①構(gòu)建的表達載體，除圖1中質(zhì)粒所示結(jié)構(gòu)外，還需具有___________及目的基因：步驟②中需先用___________處理農(nóng)桿菌以便將重組質(zhì)粒導(dǎo)入農(nóng)桿菌細胞；步驟③中通常需要添加酚類物質(zhì)，其目的是________________________________________________________。

（3）將轉(zhuǎn)入抗鹽基因的煙草細胞在固體培養(yǎng)基上培育成完整的植株需要用___________技術(shù)，此過程除營養(yǎng)物質(zhì)外還必須向培養(yǎng)基中添加______________________。

（4）基因工程中的檢測篩選是一個重要的步驟。為篩選出導(dǎo)入了重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌，圖2表示運用影印培養(yǎng)法（使一系列培養(yǎng)皿的相同位置上能出現(xiàn)相同菌落的一種接種培養(yǎng)方法）檢測基因表達載體是否導(dǎo)入了農(nóng)桿菌。在培養(yǎng)基A篩選的基礎(chǔ)上，培養(yǎng)基B除了含有細菌生長繁殖必需的成分外，還應(yīng)加入___________。從檢測篩選的結(jié)果分析，含有目的基因的是___________菌落中的細菌。28、請回答基因工程方面的有關(guān)問題:

（1）利用PCR技術(shù)擴增目的基因,其原理與細胞內(nèi)DNA復(fù)制類似（如下圖所示）。圖中引物為單鏈DNA片段,它是子鏈合成延伸的基礎(chǔ)。

①理論上推測,第四輪循環(huán)產(chǎn)物中含有引物A的DNA片段所占的比例為____________。

②在第_________輪循環(huán)產(chǎn)物中開始出現(xiàn)兩條脫氧核苷酸鏈等長的DNA片段。

（2）設(shè)計引物是PCR技術(shù)關(guān)鍵步驟之一。某同學(xué)設(shè)計的兩組引物（只標注了部分堿基序列）都不合理（如圖）,請分別說明理由。

①第1組:_____________________________________________；

②第2組:_____________________________________________。

（3）PCR反應(yīng)體系中含有熱穩(wěn)定DNA聚合酶,下面的表達式不能正確反映DNA聚合酶的功能,這是因為_____。

（4）用限制酶EcoRV、MboⅠ單獨或聯(lián)合切割同一種質(zhì)粒,得到的DNA片段長度如下圖（1kb即1000個堿基對）,請畫出質(zhì)粒上EcoRV、MboⅠ的切割位點_____________________。

29、新冠病毒外殼中的5蛋白具有很強的抗原性；S蛋白與人細胞膜上ACE2受體結(jié)合后入侵人體細胞，導(dǎo)致人體患肺炎，抗體可阻斷病毒的黏附或入侵。2021年12月8日，我國首個抗新冠病毒特效藥——安巴韋單抗/羅米司韋單抗聯(lián)合療法特效藥獲得中國藥監(jiān)局的上市批準，這標志著中國擁有的首個全自主研發(fā)并證明有效的抗新冠病毒抗體特效藥正式問世?；卮鹣铝袉栴}：

(1)制備抗S蛋白單克隆抗體時，分多次間隔給小鼠注射S蛋白，能獲得大量產(chǎn)生_________的B淋巴細胞。誘導(dǎo)小鼠B淋巴細胞和骨髓瘤細胞融合時，采用的誘導(dǎo)方法具體有_________（2點）。

(2)為選出能產(chǎn)生專一抗體的細胞，要從特定培養(yǎng)基上篩選出雜交瘤細胞，然后稀釋滴入多孔培養(yǎng)板中，使多孔培養(yǎng)板每孔中_________，然后篩選出抗體檢測呈_________（填“陽性”或“陰性”）的細胞進行克隆化培養(yǎng)；該克隆化培養(yǎng)細胞具有_________的特點（2點）。

(3)用抗S蛋白的單克隆抗體生產(chǎn)的新冠病毒抗原試紙能準確診斷出某人是否感染原因是抗S蛋白的單克隆抗體_________。

(4)鼠源單克隆抗體進入人體后，會使人體產(chǎn)生特異性免疫反應(yīng)，導(dǎo)致該抗體失效。目前有多種技術(shù)可以解決抗體失效問題，如從雜交瘤細胞中提取編碼鼠源單克隆抗體的_________（填“5區(qū)”或“6區(qū)”，抗體的結(jié)構(gòu)如下圖所示）序列的基因，與從人體中獲得的編碼抗體_________（填“5區(qū)”或“6區(qū)”）的基因進行拼接，然后導(dǎo)入骨髓瘤細胞中，進行培養(yǎng)獲得新的抗體。

參考答案一、選擇題(共8題，共16分)1、A【分析】【分析】

轉(zhuǎn)基因技術(shù)的原理是基因重組?；蛑亟M和基因突變；染色體變異均屬于可遺傳的變異?；蛑委熓侵赴颜；?qū)氩∪梭w內(nèi)；使該基因的表達產(chǎn)物發(fā)揮功能，從而達到治療疾病的目的。

【詳解】

A；將腺苷酸脫氨酶基因轉(zhuǎn)入淋巴細胞后回輸患者；進行基因治療時不會改變其他細胞的基因組成，且淋巴細胞不能進行減數(shù)分裂，產(chǎn)生配子，所以不會遺傳給子代，A正確；

B；將花青素代謝基因?qū)胫参矬w細胞；經(jīng)組培獲得花色變異植株，說明花青素代謝基因可表達，花色變異植株細胞中都含花青素代謝基因，因而能遺傳給子代，B錯誤；

C；將腸乳糖酶基因?qū)肽膛Ｊ芫?；培育出產(chǎn)低乳糖牛乳的奶牛細胞中都含腸乳糖酶基因，因而能遺傳給子代，C錯誤；

D；將胰島素基因表達質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸桿菌；篩選獲得基因工程菌，重組質(zhì)粒能隨細菌分裂而遺傳給后代，D錯誤。

故選A。2、A【分析】【分析】

根據(jù)題圖分析；①是倒平板，②是用接種環(huán)沾取菌液，③是進行平板劃線，④是培養(yǎng)。

【詳解】

A；①步驟為倒平板；使用的培養(yǎng)基需要先調(diào)節(jié)pH再滅菌，避免調(diào)pH時造成污染，A錯誤；

B；②中接種環(huán)經(jīng)火焰滅菌后應(yīng)冷卻后再挑取菌液；以防高溫殺死大腸桿菌，B正確；

C；③到④過程中；每次劃線前后對接種環(huán)進行灼燒處理，是為了殺死接種環(huán)上殘留的菌種，使劃線時接種環(huán)上的菌種直接來源于上次劃線的末端，C正確；

D；①②③步驟操作時都需要在酒精燈火焰旁進行；防止被雜菌污染，D正確。

故選A。

【點睛】3、D【分析】【分析】

轉(zhuǎn)基因生物的安全性問題：食物安全（滯后效應(yīng)；過敏源、營養(yǎng)成分改變）、生物安全（對生物多樣性的影響）、環(huán)境安全（對生態(tài)系統(tǒng)穩(wěn)定性的影響）?？瓜x棉的種植；減少了農(nóng)藥的使用，有利于保護農(nóng)田的土壤環(huán)境；但是抗蟲棉不抗蚜蟲、盲椿象、紅蜘蛛等害蟲，導(dǎo)致這些害蟲大面積的爆發(fā)，破壞了自然界的生態(tài)平衡，對環(huán)境造成了負面影響；另外棉鈴蟲對抗性頻率越來越大．重組的微生物在降解污染物的過程中可能產(chǎn)生一些中間產(chǎn)物，產(chǎn)生二次污染。

【詳解】

A；種植轉(zhuǎn)基因抗蟲作物；可以減少農(nóng)藥的使用量是轉(zhuǎn)基因生物的優(yōu)點，A錯誤；

B；種植抗除草劑農(nóng)作物可以保護農(nóng)田土壤環(huán)境是轉(zhuǎn)基因生物的優(yōu)點；B錯誤；

C；重組的微生物在降解某些化合物的過程中所產(chǎn)生的中間產(chǎn)物；可能會造成第二次污染與題干要求不符，C錯誤；

D；轉(zhuǎn)基因生物不會改變生物原有的分類地位；充其量只能說明它具有某種新特征的同一物種，不會破壞生態(tài)系統(tǒng)的穩(wěn)定性，該觀點與轉(zhuǎn)基因生物對生態(tài)系統(tǒng)的穩(wěn)定性造成破壞相反，D正確。

故選D。4、A【分析】【分析】

基因工程的關(guān)鍵步驟是構(gòu)建基因表達載體；基因表達載體主要由啟動子；目的基因、標記基因和終止子組成，其中標記基因用于篩選重組DNA分子，可以是四環(huán)素、氨芐青霉素等抗性基因，也可以是熒光蛋白基因或產(chǎn)物能顯色的基因。

【詳解】

A；核糖體蛋白所有細胞中都含有；不易檢測，不宜作為基因工程中標記基因，A符合題意；

B；發(fā)光基因如綠色熒光蛋白基因可以用作基因工程的標記基因；B不符合題意；

C；產(chǎn)物具有顏色反應(yīng)的基因可根據(jù)顏色反應(yīng)是否發(fā)生篩選重組質(zhì)粒；可以用作基因工程的標記基因，C不符合題意；

D；抗性基因可作為基因工程的標記基因；篩選重組質(zhì)粒，D不符合題意。

故選A。5、D【分析】【分析】

PCR全稱為聚合酶鏈式反應(yīng)；是一項在生物體外復(fù)制特定DNA的核酸合成技術(shù)。PCR需要模板DNA；四種脫氧核苷酸、一對引物、熱穩(wěn)定DNA聚合酶（Taq酶）。

【詳解】

A；圖中引物與模板鏈堿基互補配對；該圖表示PCR循環(huán)中的復(fù)性環(huán)節(jié)，A錯誤；

B、PCR三次循環(huán)共消耗7（23-1）對引物，PCR四次循環(huán)共消耗15（24-1）對引物；第四次循環(huán)要消耗8對引物，B錯誤；

C；dNMP只有一個磷酸基團；為脫氧核苷酸，dNTP有三個磷酸基團，延伸時，在Taq酶催化下，dNMP作為擴增的原料會依次連接到3'端，相鄰的dNMP間形成磷酸二酯鍵，C錯誤；

D；由于一個引物不在該片段的端點；因此第一輪循環(huán)后，得到的一個DNA片段中兩條脫氧核苷酸鏈都不等長，通過繪圖可推知，再經(jīng)過一次循環(huán)，產(chǎn)物中開始出現(xiàn)脫氧核苷酸鏈等長的DNA片段，所以擴增兩個循環(huán)后即可獲得添加限制酶切點的產(chǎn)物，D正確。

故選D。6、C【分析】【分析】

限制酶屬于基因工程中的工具酶的一種：

來源：主要從原核生物中分離純化出來。

特異性：能夠識別雙鏈DNA分子的某種特定核苷酸序列；并且使每一條鏈中特定部位的兩個核苷酸之間的磷酸二酯鍵斷裂，形成黏性末端和平末端兩種。

作用部位：磷酸二酯鍵。

【詳解】

A；限制酶可以從某些原核生物中提取；A正確；

B；同一種限制酶切割不同的DNA分子時；由于識別位點相同，所產(chǎn)生的末端相同，能夠進行堿基互補配對，B正確；

C；限制酶只能識別特定的脫氧核苷酸序列；而不能任意切割DNA分子，C錯誤；

D；一種限制酶只能識別一種特定的脫氧核苷酸序列；D正確。

故選C。7、C【分析】【分析】

胚胎工程是指對動物早期胚胎或配子所進行的多種顯微操作和處理技術(shù)。包括體外受精；胚胎移植、胚胎分割移植、胚胎干細胞培養(yǎng)等技術(shù)。

【詳解】

A；胚胎工程包括體外受精、胚胎移植、胚胎分割移植、胚胎干細胞培養(yǎng)等技術(shù)；移植胚胎干細胞使退化的組織修復(fù)并恢復(fù)正常功能，屬于胚胎工程技術(shù)，A正確；

B；進行胚胎移植可以充分發(fā)揮雌性優(yōu)良個體的繁殖潛能；胚胎移植屬于胚胎工程，B正確；

C；在小鼠腹腔中培養(yǎng)雜交瘤細胞生產(chǎn)單克隆抗體屬于動物細胞融合工程中；不屬于胚胎工程，C錯誤；

D；采用機械方法將早期胚胎分割產(chǎn)生同卵雙胎；胚胎分割屬于胚胎工程，D正確。

故選C。8、D【分析】【分析】

【詳解】

A；基因重組只發(fā)生在減數(shù)分裂過程中；愈傷組織的形成過程只有有絲分裂，A錯誤；

B；目的基因?qū)胫参锛毎某Ｓ梅椒ㄊ寝r(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法；B錯誤；

C；植物的單倍體育種必須利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)；雜交育種不需要利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)，C錯誤；

D；蛋白質(zhì)工程包含基因工程技術(shù)；也需要構(gòu)建含控制預(yù)期蛋白質(zhì)合成的基因表達載體，D正確。

故選D

【點睛】二、多選題(共8題，共16分)9、A:B【分析】【分析】

動物細胞培養(yǎng)時；取幼齡動物的組織，剪碎后，用胰蛋白酶處理分散成單個細胞，制成細胞懸浮液，轉(zhuǎn)入細胞培養(yǎng)液中進行的培養(yǎng)是原代培養(yǎng)；當細胞貼滿瓶壁，在用胰蛋白酶處理分散成單個細胞，制成細胞懸浮液，轉(zhuǎn)入培養(yǎng)液中進行的是傳代培養(yǎng)。

【詳解】

A；通常將動物組織經(jīng)處理后的初次培養(yǎng)稱為原代培養(yǎng)；A正確；

B；從機體取得細胞后立即進行培養(yǎng)過程是原代培養(yǎng)；B正確；

C；出現(xiàn)接觸抑制現(xiàn)象后；接去下的細胞的培養(yǎng)過程是傳代培養(yǎng)，C錯誤；

D；無論原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)細胞過程；細胞都有在培養(yǎng)基中的懸浮生長過程，D錯誤。

故選AB。10、A:B【分析】【分析】

PCR擴增運用DNA分子復(fù)制的原理；經(jīng)過變性；復(fù)性、延伸，最終獲得大量DNA的過程。

【詳解】

A；引物中G＋C的含量越高；C和G之間是三個氫鍵連接，因此引物與模板DNA結(jié)合的穩(wěn)定性越高，A正確；

B；圖中可知；引物2和引物3分別作用同一段DNA的兩條鏈，會發(fā)生堿基互補配對，因此兩者置于不同反應(yīng)系統(tǒng)中，B正確；

C；引物1、2組成的反應(yīng)系統(tǒng)和引物3、4組成的反應(yīng)系統(tǒng)中均進行一次復(fù)制；共產(chǎn)生2種雙鏈DNA分子，C錯誤；

D；在引物1、2組成的反應(yīng)系統(tǒng)中；經(jīng)第一階段要形成圖示雙鏈DNA，至少要經(jīng)過2次復(fù)制，D錯誤。

故選AB。11、A:B【分析】【分析】

分解纖維素微生物的分離實驗原理：

（1）土壤中存在著大量纖維素分解酶；包括真菌；細菌和放線菌等，它們可以產(chǎn)生纖維素酶。纖維素酶是一種復(fù)合酶，可以把纖維素分解為纖維二糖，進一步分解為葡萄糖使微生物加以利用，故在用纖維素作為唯一碳源的培養(yǎng)基中，纖維素分解菌能夠很好地生長，其他微生物則不能生長。

（2）在培養(yǎng)基中加入剛果紅；可與培養(yǎng)基中的纖維素形成紅色復(fù)合物，當纖維素被分解后，紅色復(fù)合物不能形成，培養(yǎng)基中會出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈，從而可篩選纖維素分解菌。

【詳解】

A；篩選該高產(chǎn)菌株需要在纖維素為唯一碳源的培養(yǎng)基中培養(yǎng)；A正確；

B；由pH與纖維素酶活性的曲線圖分析可知；當pH為9時，纖維素酶的活性最高，故在探究最適溫度時應(yīng)盡可能將發(fā)酵液的pH控制在9左右，B正確；

C；由溫度與纖維素酶活性的曲線圖分析可知；當溫度為35℃時纖維素酶的活性最大，但是由于缺少35℃之后的溫度實驗組，故無法判斷該酵母菌高產(chǎn)菌株產(chǎn)生纖維素酶的最適溫度是35℃，C錯誤；

D；酵母菌是兼性厭氧微生物；在有氧條件下，酵母菌進行有氧呼吸，大量繁殖，故在降解初期需要給酵母菌提高有氧環(huán)境，以保證酵母菌的數(shù)量，D錯誤。

故選AB。

【點睛】12、A:D【分析】【分析】

由題圖信息分析可知；圖中首先利用培養(yǎng)基擴增菌體，然后在涂布在平板上，再通過影印法將菌種接種到兩種培養(yǎng)基中，分別是基本培養(yǎng)基；完全培養(yǎng)基；野生型大腸桿菌菌株能在基本培養(yǎng)基上生長，而氨基酸營養(yǎng)缺陷型菌株由于發(fā)生基因突變無法合成某種氨基酸只能在完全培養(yǎng)基上生長，據(jù)此利用培養(yǎng)基的種類便可以選擇出氨基酸突變株。

【詳解】

A；野生型大腸桿菌菌株能在基本培養(yǎng)基上生長；氨基酸營養(yǎng)缺陷型突變株無法合成某種氨基酸，只能在完全培養(yǎng)基上生長，根據(jù)題干信息和圖形分析，圖中①②④中含有菌落，①②④為完全培養(yǎng)基，③中影印處無菌落，③為基本培養(yǎng)基，A正確；

B；紫外線可以提高突變的頻率；而A操作即培養(yǎng)的目的是提高已經(jīng)突變菌株的濃度（A操作不能提高突變率），即增加突變株的數(shù)量，B錯誤；

C；B操作是將菌液滴加到培養(yǎng)基表面；再用涂布器將菌液均勻的涂布在②表面，C錯誤；

D；從圖中可看出；D在③基本培養(yǎng)基中無法生長，在完全培養(yǎng)基中可生長，說明D是氨基酸缺陷型菌落，故經(jīng)C過程影印及培養(yǎng)后，可從④培養(yǎng)基中挑取D菌落進行純化培養(yǎng)，D正確。

故選AD。13、A:B:C【分析】分解纖維素的微生物的分離實驗的原理：①土壤中存在著大量纖維素分解酶；包括真菌；細菌和放線菌等，它們可以產(chǎn)生纖維素酶。纖維素酶是一種復(fù)合酶，可以把纖維素分解為纖維二糖，進一步分解為葡萄糖使微生物加以利用，故在用纖維素作為唯一碳源的培養(yǎng)基中，纖維素分解菌能夠很好地生長，其他微生物則不能生長。②在培養(yǎng)基中加入剛果紅，可與培養(yǎng)基中的纖維素形成紅色復(fù)合物，當纖維素被分解后，紅色復(fù)合物不能形成，培養(yǎng)基中會出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心的透明圈，從而可篩選纖維素分解菌。

【詳解】

A；根據(jù)Ⅰ號培養(yǎng)基上菌落分布均勻可知；②過程是用涂布器取乙中的樣品稀釋液均勻的涂布在Ⅰ號培養(yǎng)表面，即乙中是分解纖維素菌的樣品稀釋液，不是菌液，A錯誤；

B；液體培養(yǎng)基的作用是讓菌體增殖；而不是稀釋菌種，甲、乙試管中的液體都是樣品稀釋液，捕食液體培養(yǎng)基，B錯誤；

C；配置固體培養(yǎng)基的基本步驟是計算、稱量、溶化、調(diào)pH、滅菌、倒平板；故需要先調(diào)pH，再滅菌，C錯誤；

D；剛果紅能與纖維素形成紅色復(fù)合物；若菌落周圍出現(xiàn)透明圈，說明纖維素分解菌將纖維素進行了分解，可挑取該菌落用平板劃線法繼續(xù)純化該菌體，D正確。

故選ABC。14、A:B:C【分析】【分析】

聚羥基脂肪酸酯（PHA）是由嗜鹽細菌合成的一種胞內(nèi)聚酯；要從某咸水湖中尋找生產(chǎn)PHA菌種，首先要進行目的菌株的篩選，可將咸湖水接種在含鹽量較高的選擇培養(yǎng)基上，篩選培養(yǎng)得到嗜鹽細菌；然后，從選擇培養(yǎng)基上挑選多個單菌落分別進行擴大培養(yǎng)，擴大培養(yǎng)的培養(yǎng)基是液體培養(yǎng)基；最后檢測嗜鹽細菌的數(shù)目和PHA的產(chǎn)量，選擇PHA產(chǎn)量最高的嗜鹽細菌作為目的菌株。

【詳解】

A；PHA是由嗜鹽細菌合成的一種胞內(nèi)聚酯；要篩選嗜鹽細菌，步驟②可用稀釋涂布平板法接種到含鹽量較高的選擇培養(yǎng)基上，A錯誤；

B；步驟③培養(yǎng)基濃度過高；會導(dǎo)致菌體失水死亡，不利于嗜鹽細菌的生長，B錯誤；

C；步驟④擴大培養(yǎng)應(yīng)選用液體培養(yǎng)基；液體培養(yǎng)基中無需加入瓊脂，C錯誤；

D；要挑選高產(chǎn)聚羥基脂肪酸酯（PHA）的嗜鹽菌；挑取菌落時，應(yīng)挑取多個菌落并分別測定嗜鹽細菌的PHA含量，進行比較，D正確。

故選ABC。15、A:B:D【分析】【分析】

限制酶能識別雙鏈DNA中特定的核苷酸序列并進行切割；具有特異性；DNA連接酶將不同的DNA片段連接成DNA鏈。

【詳解】

A、根據(jù)圖2所示，基因P上有限制酶SPeⅠ的一個酶切位點，基因P的總長度960bp；所以經(jīng)酶切后可以得到兩個小于960的片段，符合圖3中的Ⅰ，A正確；

B、根據(jù)圖2所示，基因Q上有限制酶XbaⅠ的一個酶切位點，基因P的總長度為840bP；所以經(jīng)酶切后可以得到兩個小于840的片段，符合圖3中的Ⅱ，B正確；

CD、融合基因中沒有限制酶SPeⅠ和限制酶XbaⅠ的酶切位點；所以用這兩種端處理都不會斷開，因此處理之后只有一個片段，符合圖3中的Ⅳ，C錯誤，D正確。

故選ABD。16、B:C:D【分析】【分析】

1；“試管嬰兒”是利用體外授精和胚胎移植的方法；解決不孕夫婦的生育問題。

2；設(shè)計試管嬰兒概念：是指體外受精形成的胚胎在植入母體孕育前；根據(jù)人們的需要，將胚胎的一個細胞取出，進行某些設(shè)計，當檢測結(jié)果符合人們需要時，再把胚胎植入母體孕育。

【詳解】

A；透明帶和卵細胞膜的反應(yīng)可以防止多精入卵；從而保證受精卵染色體數(shù)目的正常，A正確；

B；由于細胞質(zhì)中也存在基因控制生物性狀；所以克隆猴的性狀不完全與細胞核供體的相同，B錯誤；

C；試管嬰兒技術(shù)與正常的生殖過程相比僅僅是受精和早期胚胎發(fā)育的場所不同；實質(zhì)沒有變化，屬于有性生殖；而克隆猴是將動物體細胞的細胞核移植到去核的卵細胞后發(fā)育成的新個體，屬于無性生殖的范疇，C錯誤；

D；設(shè)計試管嬰兒與試管嬰兒的主要區(qū)別是前者在胚胎植入前需進行遺傳學(xué)診斷；設(shè)計試管嬰兒有時除體外受精、胚胎培養(yǎng)和胚胎移植外還需要借助其它技術(shù)，D錯誤。

故選BCD。三、填空題(共6題，共12分)17、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】能在受體細胞中復(fù)制并穩(wěn)定保存具有標記基因，供重組DNA的鑒定和選擇18、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】2018～2519、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】80—100℃變性20、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】多聚酶鏈式反應(yīng)體外擴增DNA片段21、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】抗蟲、抗病、抗逆轉(zhuǎn)基因植物，利用轉(zhuǎn)基因改良植物的品質(zhì)22、略

【分析】【詳解】

蛋白質(zhì)工程的基本途徑：從預(yù)期的蛋白質(zhì)功能出發(fā)，設(shè)計預(yù)期的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)，推測應(yīng)有的氨基酸序列，找到相對應(yīng)的脫氧核苷酸序列，以下按照基因工程的一般步驟進行。該蛋白質(zhì)的氨基酸序列已知，因此通過蛋白質(zhì)工程，生產(chǎn)該蛋白質(zhì)新藥的基本過程為：根據(jù)已知的氨基酸序列→找到相對應(yīng)的脫氧核苷酸序列→合成該蛋白質(zhì)新藥基因→將獲得的目的基因與質(zhì)粒構(gòu)建形成基因表達載體→將重組質(zhì)粒導(dǎo)入受體菌→獲得工程菌→生產(chǎn)該蛋白質(zhì)新藥。【解析】根據(jù)已知的氨基酸序列→找到相對應(yīng)的脫氧核苷酸序列→合成該蛋白質(zhì)新藥基因→將獲得的目的基因與質(zhì)粒構(gòu)建形成基因表達載體→將重組質(zhì)粒導(dǎo)入受體菌→獲得工程菌→生產(chǎn)該蛋白質(zhì)新藥四、判斷題(共2題，共6分)23、A【分析】【分析】

生殖性克隆和治療性克隆兩者有著本質(zhì)區(qū)別；最重要的體現(xiàn)在目的不同。

【詳解】

治療性克?。菏侵赴芽寺〕鰜淼慕M織和器官用于治療疾病，這種用于醫(yī)療目的的使用克隆技術(shù)制造胚胎稱為治療性克隆。生殖性克?。禾幱谏车哪康氖褂每寺〖夹g(shù)在實驗室制造人類胚胎。治療性克隆和生殖性克隆最重要的差別是目的不同。24、A【分析】【分析】

轉(zhuǎn)基因生物的安全性問題：食物安全（滯后效應(yīng)；過敏源、營養(yǎng)成分改變）、生物安全（對生物多樣性的影響）、環(huán)境安全（對生態(tài)系統(tǒng)穩(wěn)定性的影響）。治療性克?。褐咐每寺〖夹g(shù)產(chǎn)生特定細胞和組織（皮膚、神經(jīng)或肌肉等）用于治療性移植。生殖性克?。褐笇⒖寺〖夹g(shù)用于生育目的；即用于產(chǎn)生人類個體。中國政府：禁止生殖性克隆人，堅持四不原則（不贊成、不允許、不支持、不接受任何生殖性克隆人實驗），不反對治療性克隆人。

【詳解】

據(jù)分析可知；中國政府禁止生殖性克隆，但不反對治療性克隆。

故正確。五、實驗題(共2題，共6分)25、略

【分析】【詳解】

（1）②中的選擇培養(yǎng)基中應(yīng)加入苯酚作為碳源；②中不同濃度的碳源A影響細菌數(shù)量，稀釋涂布平板法來測定②中活菌數(shù)目。

（2）④與⑤培養(yǎng)基的主要區(qū)別在于④的培養(yǎng)基沒有加入苯酚作為碳源；⑤培養(yǎng)基的中加入苯酚作為碳源。使用釋涂布平板法或平板劃線法可以在（6）上獲得單菌落。采用固體平板培養(yǎng)細菌時要倒置培養(yǎng)，以防止冷凝后形成的水珠滴落在培養(yǎng)基上污染培養(yǎng)基。

（3）5支潔凈培養(yǎng)瓶→分別加入相同培養(yǎng)基（加等量的苯酚；用pH試紙檢測這5支瓶內(nèi)培養(yǎng)基的pH值，用苯酚調(diào)試使之相等，苯酚是唯一的碳源）→分別接種5種等量的來自不同菌株的菌種→在相同的適宜條件下培養(yǎng)相同時間→再用pH試紙檢測這5支瓶內(nèi)培養(yǎng)基的pH.苯酚顯酸性，不同菌株的菌種降解苯酚的能力不同，5支瓶內(nèi)培養(yǎng)基中的苯酚被分解的量不同，所以pH值不同。用pH試紙檢測這5支瓶內(nèi)培養(yǎng)基的pH值，從而比較不同菌株降解苯酚能力的大小。

（4）從制備培養(yǎng)基到接種與培養(yǎng)等全部實驗過程要無菌操作，通過培養(yǎng)基滅菌、接種環(huán)境滅菌、接種過程無菌操作等都可以防止其他微生物的污染。【解析】①.苯酚②.A③.稀釋涂布平板④.①含除苯酚外的其他碳源；②以苯酚作為唯一碳源⑤.稀釋涂布平板法或平板劃線⑥.避免培養(yǎng)過程中產(chǎn)生的水分影響微生物的生長⑦.用同樣苯酚濃度的培養(yǎng)液培養(yǎng)不同菌株,一定時間后,測定培養(yǎng)液中苯酚的含量⑧.培養(yǎng)基滅菌、接種環(huán)境滅菌、接種過程無菌操作26、略

【分析】【分析】

1；稀釋涂布平板法：將待測樣品制成均勻的系列稀釋液；盡量使樣品中的微生物細胞分散開，使成單個細胞存在，再取一定稀釋度、一定量的稀釋液接種到平板中，使其均勻分布于平板中的培養(yǎng)基內(nèi)。2、平板劃線法：把混雜在一起的微生物或同一微生物群體中的不同細胞，用接種環(huán)在平板表面上作多次由點到線的劃線稀釋而獲得較多獨立分布的單個細胞，并讓其成長為單菌落的方法。

【詳解】

（1）A；B、C中的菌落分布較均勻；是通過稀釋涂布平板法獲得的，而D是通過平板劃線法獲得的，劃線平板法是從上一次劃線的末端開始劃線。故選ABC。

（2）①從整個實驗過程可以看出；實驗通過對皮膚滲出物稀釋培養(yǎng)形成的菌落進行擴大培養(yǎng)后，利用噬菌體的作用檢測其中是否含有炭疽芽孢桿菌。②對照組中加入的液體不應(yīng)含有噬菌體，因此應(yīng)加入等量的生理鹽水；在進行微生物培養(yǎng)時為防止雜菌的混入，消毒和滅菌工作是關(guān)鍵，主要包括對操作的空間；操作者的衣著和手進行清潔和消毒；將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等進行滅菌；實驗操作在酒精燈火焰附近進行；操作過程中避免已經(jīng)滅菌的材料用具與周圍物品相接觸等。③若實驗組液體培養(yǎng)基的渾濁度低于對照組，說明實驗組中的炭疽芽孢桿菌被噬菌體侵染與破壞，即該疑似患者感染了炭疽芽孢桿菌。④炭疽芽孢桿菌屬于細菌，能寄生在人和動物體內(nèi)，說明它是異養(yǎng)型生物，培養(yǎng)時需要借助搖床振蕩培養(yǎng)，說明它是需氧型生物；振蕩培養(yǎng)的目的是增加培養(yǎng)液中的氧氣含量，使細菌與營養(yǎng)物質(zhì)充分接觸，有利于炭疽芽孢桿菌的大量繁殖；培養(yǎng)液變渾濁表明炭疽芽孢桿菌大量繁殖。

（3）分析表中數(shù)據(jù)可知，只有稀釋度為10-5時菌落數(shù)在30~300之間，適合用于計數(shù)?！窘馕觥?1)ABC

(2)檢驗皮膚炭疽病疑似患者的皮膚滲出物中是否含有炭疽芽孢桿菌與實驗組等量的生理鹽水對操作的空間；操作者的衣著和手進行清潔和消毒；將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用具和培養(yǎng)基等進行滅菌；實驗操作在酒精燈火焰附近進行；操作過程中避免已經(jīng)滅菌的材料用具與周圍物品相接觸實驗組液體培養(yǎng)基的渾濁度比對照組低（異養(yǎng)）需氧型增加培養(yǎng)液中的氧氣含量；使細菌與營養(yǎng)物質(zhì)充分接觸炭疽芽孢桿菌大量繁殖。

(3)10-5稀釋度為10-5時菌落數(shù)在30~300之間六、綜合題(共3題，共24分)27、略

【分析】【分析】

分析圖1：圖1所示為轉(zhuǎn)基因抗鹽煙草的培育過程；其中①表示重組質(zhì)粒的構(gòu)建過程；②表示重組質(zhì)粒導(dǎo)入農(nóng)桿菌；③表示采用農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法將目的基因?qū)胧荏w細胞；④表示植物組織培養(yǎng)。

分析表格：表中BamHI；BclI和Sau3AI三種酶切割位點有共同的序列GATC；其中Sau3AI酶能切割BamHI、BclI和Sau3AI三種切割位點。

【詳解】

（1）用圖中質(zhì)粒和目的基因構(gòu)建重組質(zhì)粒；不能選用BclI酶，因為該酶會破壞復(fù)制原點；也不能用HindⅢ酶切割，該酶與Sau3AI酶和BamHI酶切割后的粘性末端不同。所以應(yīng)選用Sau3AI酶和BamHI酶兩種限制酶切割。若Sau3AI酶切的DNA末端與BamHI酶切的DNA末端連接，序列可能是GGATCC，也可能不是，該連接序列不一定能被BamHI酶識別。

（2）基因表達載體的組成包括目的基因、標記基因、啟動子、終止子和復(fù)制原點，步驟①構(gòu)建的表達載體，除圖1中質(zhì)粒所示結(jié)構(gòu)外，還需具有啟動子、終止子及目的基因；農(nóng)桿菌為細菌，細菌作受體細胞時需先用Ca2+處理；讓細胞膜通過性增加，以使農(nóng)桿菌細胞處于能吸收周圍環(huán)境中DNA分子的生理狀態(tài)，以便將重組質(zhì)粒導(dǎo)入農(nóng)桿菌細胞；為吸引農(nóng)桿菌移向煙草細胞，有利于目的基因成果轉(zhuǎn)化，通常在步驟③中通常需要添加酚類物質(zhì)。

（3）運用植物組織培養(yǎng)技術(shù)；能將轉(zhuǎn)入抗鹽基因的煙草細胞在固體培養(yǎng)基上培育成完整的植株。題中植物組織培養(yǎng)過程除營養(yǎng)物質(zhì)外還必須向培養(yǎng)基中添加植物激素（生長素和細胞分裂素），以促進細胞增殖分化產(chǎn)生根；莖等。

（4）基因工程中的檢測篩選是一個重要的步驟。常根據(jù)標記基因設(shè)計培養(yǎng)基；最終篩選出導(dǎo)入了重組質(zhì)粒的農(nóng)桿菌。圖3表示影印培養(yǎng)法，分析可知，培養(yǎng)基B除了含有細菌生長繁殖必需的成分外，還含有氨芐青霉素（或四環(huán)素或氨芐青霉素和四環(huán)素），能在此培養(yǎng)基上生長的農(nóng)桿菌含有非重組質(zhì)粒（有氨芐青霉素抗性基因），不能在此培養(yǎng)基上生長的農(nóng)桿菌只含有重組質(zhì)粒（重組質(zhì)粒構(gòu)建破壞了氨芐青霉素抗性基因，