生物檢測(cè)技術(shù)考試題

這3道大題是每張?jiān)嚲砩隙加械模?、聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）是體外酶促合成特異DNA片段的一種方法，由高溫變性、低溫退火（復(fù)性）及適溫延伸等幾步反應(yīng)組成一個(gè)周期，循環(huán)進(jìn)行，使目的DNA得以迅速擴(kuò)增，具有特異性強(qiáng)、靈敏度高、操作簡(jiǎn)便、省時(shí)等特2、SDS是一種陰離子表面活性劑能打斷蛋白質(zhì)的氫鍵和疏水鍵，并按一定的比例和蛋白質(zhì)分子結(jié)合成復(fù)合物，使蛋白質(zhì)帶負(fù)電荷的量遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)其本身原有的電荷，掩蓋了各種蛋白分子間天然的電荷差異。各種蛋白質(zhì)SDS復(fù)合物在電泳時(shí)程度3、免疫細(xì)胞：血液白細(xì)胞；血中T細(xì)胞與B細(xì)胞。下面12道實(shí)驗(yàn)題只需要抽一道！實(shí)驗(yàn)操作答：所需儀器設(shè)備：冷凍離心機(jī)、菌液、移液槍系數(shù)和浮力密度的物質(zhì)分離開(kāi)。（1）取另外一支潔凈的空離心管，將待離心液體均分成2個(gè)離心管，每個(gè)管等重，蓋緊蓋子對(duì)稱放入轉(zhuǎn)頭。（2）擰緊轉(zhuǎn)軸螺母，蓋好蓋門(mén)，將儀器按上電源后，打開(kāi)儀器后面的電源開(kāi)關(guān)。（3）按運(yùn)行鍵啟動(dòng)儀器，儀器按出廠所設(shè)定的參數(shù)工作，數(shù)碼管顯示實(shí)際轉(zhuǎn)速和溫度；按制冷開(kāi)關(guān)，溫度數(shù)碼管顯示腔內(nèi)實(shí)際溫度。（4）調(diào)整運(yùn)行參數(shù)：數(shù)碼管中有一位數(shù)字在閃爍，此時(shí)可用數(shù)字選擇換位鍵和增鍵及減鍵相結(jié)合調(diào)整該參數(shù)直4℃，然后，按制冷開(kāi)鍵，按一次制冷功能鍵，退出設(shè)定程序。此時(shí)可用數(shù)字選擇換位鍵、增鍵、減鍵相結(jié)合調(diào)整該參數(shù)至10000rpm離心5min，并按記憶（5）儀器運(yùn)行過(guò)程中數(shù)碼管顯示轉(zhuǎn)速和溫度，當(dāng)需要查看其它參數(shù)時(shí)，可按功能鍵或制冷停機(jī)，停機(jī)過(guò)程中數(shù)碼管閃爍顯示轉(zhuǎn)速。2）提取肌肉組織的蛋白質(zhì)，如何操作？答：所需儀器設(shè)備：離心機(jī)、真空干燥器或干燥箱、蒸發(fā)皿、離心管、燒杯、pH試紙、滴管、玻棒。稱為水溶性蛋白；分子量偏大一些的在鹽的作用下也能有溶于鹽水中一般就稱為鹽溶蛋白，分子量再大一些的不能溶于水中。緩沖溶液中的鹽能與蛋白質(zhì)結(jié)合成穩(wěn)定的螯合物而從組織與提取溫度、pH、機(jī)械作用、酶的作用和溶液組成關(guān)系密切。①采集新鮮組織材料，洗凈，晾干，根據(jù)樣品重量（1g樣品加入5-10ml提取液，可根據(jù)材③用離心機(jī)離心8000rpm40min4℃或11100rpm20min4℃④提取上清液，樣品制備完成。3）細(xì)胞臺(tái)盼藍(lán)拒染的原理與操作？答：所需儀器設(shè)備：微量加樣器、離心管、臺(tái)盼藍(lán)染液、白細(xì)胞計(jì)數(shù)板、光學(xué)顯微鏡法通過(guò)正常的細(xì)胞膜，因而正常的細(xì)胞不被臺(tái)盼藍(lán)染上，而死細(xì)胞則可被臺(tái)盼藍(lán)染成藍(lán)色。臺(tái)盼藍(lán)拒染法是利用臺(tái)盼藍(lán)只能將死細(xì)胞染成藍(lán)色而活細(xì)胞不被染上的方法檢測(cè)細(xì)胞存活率的一種快速簡(jiǎn)便的方法。①收集細(xì)胞，稀釋成一定體積。②取一定體積的細(xì)胞，與一定體積的臺(tái)盼藍(lán)（V：V=1：9）混合2min。③染色細(xì)胞加載于白細(xì)胞計(jì)數(shù)板，在顯微鏡下計(jì)數(shù)，染藍(lán)及不染色細(xì)胞，計(jì)算細(xì)胞存活率。根據(jù)下式求細(xì)胞活力：細(xì)胞總數(shù)=四個(gè)方格總細(xì)胞數(shù)∕4×105（個(gè)∕ml）活細(xì)胞率（%）=活細(xì)胞總數(shù)∕（活細(xì)胞總數(shù)+死細(xì)胞總數(shù)）×1004）請(qǐng)你制作一塊濃度為1%瓊脂糖電泳凝膠。所需儀器設(shè)備：瓊脂糖凝膠電泳系統(tǒng)、三角燒瓶、制膠槽、齒梳、核酸染料、電爐瓊脂糖加熱到80℃以上即可溶解，在pH（8.0）高于其pI時(shí)，DNA分子帶負(fù)電荷，在直流電場(chǎng)中DNA向正極泳動(dòng)，冷卻后（50℃凝膠溶液加入的核酸染料與DNA分子結(jié)合，在紫外線照射下顯示出熒光，便于對(duì)DNA進(jìn)行定性或定量檢測(cè)。①稱取0.4g瓊脂糖粉，加入三角瓶，加入40ml0.5×TBE電泳緩沖液，瓶口上倒扣一個(gè)小燒杯或小平皿，將該三角瓶置于微波爐或電爐加熱直至瓊脂糖溶解。注意觀察三角瓶中的瓊脂糖粉末，待完全熔化后停止微波爐或電爐（切不可讓膠溶液溢出到微波爐或電爐中！）②帶上棉手套，從微波爐或電爐上取出三角瓶，置桌面上冷卻致不燙手（約50℃再加核酸染料適量。③膠板的制備：將有機(jī)玻璃內(nèi)槽洗凈、晾干，放入制膠模具中，并在固定位置插上梳子。將冷卻至50℃左右的瓊脂糖凝膠液輕輕搖勻，小心地倒在有機(jī)玻璃內(nèi)槽上，使膠液緩慢展開(kāi)，直到在整個(gè)有機(jī)玻璃板表面形成均勻的膠層。室溫下靜置30min左右，凝固完全后，輕輕拔出梳子，這時(shí)在膠板上即形成相互隔開(kāi)的上樣孔。5）如何使用紫外透射觀測(cè)儀觀察凝膠上的條帶。答：所需儀器設(shè)備：紫外透射儀、一次性手套、照相機(jī)（成像儀）、吸水紙（1）將儀器接通電源，電源插座與儀器的插頭相連。（2）接通總電源開(kāi)關(guān)。（3）紫外光可通過(guò)開(kāi)關(guān)控制通斷，確定所需的光源后應(yīng)穩(wěn)定1-2min即可使用。（4）將樣品置于工作臺(tái)上，進(jìn)行觀察和照相。6）用移液器吸取酶液時(shí)應(yīng)注意哪些問(wèn)題？請(qǐng)回答并演示答：所需儀器設(shè)備：移液槍、酶液、冰盒要將吸取出來(lái)的酶盡快地到達(dá)反應(yīng)體系中。②微量移液器調(diào)節(jié)到需要的體積。③上緊吸頭，插入液體液面下0.5cm，輕柔釋放彈簧，吸取需要的體積，打出時(shí)全部釋放出7）闡述光學(xué)顯微鏡的使用方法？答：設(shè)備儀器：顯微鏡、載玻片（細(xì)胞計(jì)數(shù)板）、拭鏡紙（1）顯微鏡的拿取與放置。①右手握住鏡臂，左手托住鏡座②把顯微鏡放在試驗(yàn)臺(tái)上，略偏左（顯微鏡放在距試驗(yàn)臺(tái)邊緣7cm左右處）。安裝好目鏡和物鏡。②把一個(gè)較大的光圈對(duì)準(zhǔn)通光孔。左眼注視目鏡內(nèi)（右眼睜開(kāi)，同時(shí)畫(huà)圖）。轉(zhuǎn)動(dòng)反光鏡，使光線通過(guò)通光孔反射到鏡筒內(nèi)。通過(guò)目鏡，可以看到白亮的視野。（3）觀察①把所要觀察的玻片標(biāo)本放在載物臺(tái)上，用壓片夾壓住，標(biāo)本要正對(duì)通光孔的中到看清物像為止。再略微轉(zhuǎn)動(dòng)細(xì)準(zhǔn)焦螺旋，使看到的物象更加清晰。注意事項(xiàng)：實(shí)驗(yàn)完畢，把顯微鏡的外表擦拭干凈。轉(zhuǎn)動(dòng)轉(zhuǎn)換器，把兩個(gè)物鏡偏到兩旁，并將鏡筒緩緩下降到最低處。最后把顯微鏡放進(jìn)鏡箱里，送回原處。根據(jù)朗伯比耳定律，光能量減弱的程度與物質(zhì)的濃度有一定的比例關(guān)系。答1）接通電源，打開(kāi)儀器開(kāi)關(guān)，掀開(kāi)樣品室暗箱蓋，預(yù)熱10min（2）將靈敏度開(kāi)關(guān)調(diào)至“1”檔（若零點(diǎn)調(diào)節(jié)器調(diào)不到“0”時(shí)，需選用較高檔。）（3）根據(jù)所需波長(zhǎng)轉(zhuǎn)動(dòng)波長(zhǎng)選擇鈕。（4）將空白液及測(cè)定液分別倒入比色杯3/4處，用擦鏡紙擦清外壁，放入樣品室內(nèi)，使空白管對(duì)準(zhǔn)光路。（5）在暗箱蓋開(kāi)啟狀態(tài)下調(diào)節(jié)零點(diǎn)調(diào)節(jié)器，使讀數(shù)盤(pán)指針指向T=0處。分別讀出測(cè)定管的光密度值，并記錄。（7）比色完畢，關(guān)上電源，取出比色皿洗凈，樣品室用軟布或軟紙擦凈。9）考馬斯亮藍(lán)法測(cè)蛋白含量的原理和操作方法步驟？答：儀器設(shè)備：可見(jiàn)分光光度計(jì)、玻璃比色杯、蛋白質(zhì)溶液、考馬斯亮藍(lán)G250染料。實(shí)驗(yàn)原理：考馬斯亮藍(lán)G250在酸性溶液中為棕紅色，當(dāng)它與蛋白質(zhì)結(jié)合后，變成藍(lán)色，最大吸收波長(zhǎng)從465nm轉(zhuǎn)移到595nm處，在一定的范圍內(nèi)，蛋白質(zhì)含量與595nm的吸光度成正比。大大提高了測(cè)定蛋白質(zhì)的靈敏度（1ug）考馬斯亮藍(lán)G250試劑，充分振蕩混合，放置5min后，測(cè)定A595值。用1ml加5.0ml考馬斯亮藍(lán)G250混合液調(diào)零。②以測(cè)定管的A595nm為縱坐標(biāo)，蛋白質(zhì)含量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再加入3.0ml考馬斯亮藍(lán)G250試劑，充分振蕩混合，放置5min后，測(cè)定A595值。根據(jù)A595值，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查找樣品蛋白的含量，取均值。儀器設(shè)備：PCR儀、微量加樣器、2×PCRMix、ddH2O、引物、模板PCR原理：在DNA聚合酶催化下，以母鏈DNA為模板，以特定引物為延伸起點(diǎn)，通過(guò)變性、退火、延伸等步驟，體外復(fù)制出與母鏈模板DNA互補(bǔ)的子鏈DNA的過(guò)程。是一項(xiàng)DNA體外合成放大技術(shù)，能快速特異地在體外擴(kuò)增任何目的DNA。答：①取PCR管，分別加入10ulPCRMix，②上、下游引物各1ul，③1ul模板DNA，④用滅菌水補(bǔ)足體積至20ul，混勻，離心甩到管底。⑤加入PCR儀擴(kuò)增。答：儀器設(shè)備：ELISA試紙、待測(cè)標(biāo)本合在固相上的酶標(biāo)抗原愈少，最后的