2025年北師大新版選擇性必修3生物上冊階段測試試卷

…………○…………內(nèi)…………○…………裝…………○…………內(nèi)…………○…………裝…………○…………訂…………○…………線…………○…………※※請※※不※※要※※在※※裝※※訂※※線※※內(nèi)※※答※※題※※…………○…………外…………○…………裝…………○…………訂…………○…………線…………○…………第=page22頁，總=sectionpages22頁第=page11頁，總=sectionpages11頁2025年北師大新版選擇性必修3生物上冊階段測試試卷80考試試卷考試范圍：全部知識點；考試時間：120分鐘學(xué)校：______姓名：______班級：______考號：______總分欄題號一二三四五六總分得分評卷人得分一、選擇題(共6題，共12分)1、圖1為某種質(zhì)粒簡圖；圖2表示某外源DNA上的目的基因，小箭頭所指分別為限制性核酸內(nèi)切酶EcoRⅠ；BamHⅠ、HindⅢ的酶切位點。下列有關(guān)敘述錯誤的是()

A.在基因工程中若只用一種限制酶完成對質(zhì)粒和外源DNA的切割，則可選EcoRⅠB.如果將一個外源DNA分子和一個質(zhì)粒分別用EcoRⅠ酶切后，再用DNA連接酶連接，形成一個含有目的基因的重組DNA，此重組DNA中EcoRⅠ酶切點有1個C.為了防止質(zhì)粒和含目的基因的外源DNA片段自身環(huán)化，酶切時可使用BamHⅠ和HindⅢ兩種限制酶同時處理D.一個圖1所示的質(zhì)粒分子經(jīng)EcoRⅠ切割后，含有2個游離的磷酸基團(tuán)2、正常情況下，人體胚胎發(fā)育的主要場所是（）A.胎盤B.子宮C.輸卵管D.卵巢3、下列關(guān)于微生物鑒別方面的敘述正確的是（）A.尿素為唯一氮源的培養(yǎng)集中加入酚紅培養(yǎng)細(xì)菌，指示劑變紅，說明該細(xì)菌能分解尿素B.纖維素粉為唯一碳源的培養(yǎng)基中加入剛果紅培養(yǎng)細(xì)菌，菌落周圍出現(xiàn)透明圈則說明該細(xì)菌能分解纖維素C.在一定培養(yǎng)條件下，培養(yǎng)基上形成菌落的形狀、大小、隆起程度可作為菌種計數(shù)的依據(jù)D.鑒別淀粉分解菌的藍(lán)色培養(yǎng)基（加碘）上出現(xiàn)透明圈，一定是碘被分解了4、下圖表示抗人體胃癌的單克隆抗體的制備過程；有關(guān)敘述不正確的是（）

A.用特定的選擇培養(yǎng)基對乙篩選，融合細(xì)胞均能生長，未融合細(xì)胞均不能生長B.圖中實驗小鼠注射的甲是能與抗人體胃癌抗體特異性結(jié)合的抗原C.利用PEG融合法、電融合法和滅活病毒誘導(dǎo)法等方法均可誘導(dǎo)細(xì)胞融合獲得乙D.丙需進(jìn)行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測，經(jīng)多次篩選后可獲得大量能分泌所需抗體的丁5、我國具有悠久的釀酒文化和歷史，漢代以后的相當(dāng)長一段時間內(nèi)，中國人喝的酒其實是各種黃酒，黃酒是曲蘗參與糖化發(fā)酵制成的谷物酒。在《說文解字》中，關(guān)于酒的記載也有著類似的描繪“曲，酒母也；蘗，芽米也”。黃酒的制作流程主要為：制曲→浸米→煮酒（浸好的小米加入開水中煮熟）→拌曲→入缸發(fā)酵→壓榨→裝瓶。下列有關(guān)敘述正確的是（）A.一般選擇溫度較低的天氣制曲，避免其腐壞變質(zhì)B.浸米有利于淀粉水解產(chǎn)生酒精從而提高酒的產(chǎn)量C.入缸發(fā)酵時不能將攪拌好的煮熟的小米裝滿發(fā)酵缸D.煮酒完成后為避免雜菌污染要立刻拌曲6、使用現(xiàn)代生物科技手段達(dá)到所需目的的物質(zhì)或過程，與生物體內(nèi)有差異的是（）A.植物組織培養(yǎng)過程中形成的愈傷組織B.PCR技術(shù)擴(kuò)增基因時使用的DNA聚合酶C.動物細(xì)胞培養(yǎng)時細(xì)胞正常分裂的代數(shù)是有限的D.構(gòu)建的基因表達(dá)載體中需要啟動子來驅(qū)動轉(zhuǎn)錄評卷人得分二、多選題(共6題，共12分)7、從藍(lán)光到紫外線都能使綠色熒光蛋白（GFP）激發(fā)；發(fā)出綠色螢光。研究人員將某病毒的外殼蛋白（L1）基因與GFP基因連接，獲得了L1-GFP融合基因，并將其插入質(zhì)粒PO，構(gòu)建了重組質(zhì)粒P1。下圖為P1部分結(jié)構(gòu)和限制酶酶切位點的示意圖，相關(guān)敘述正確的是（）

A.將L1-GFP融合基因插入質(zhì)粒PO時，使用了E1、E2和E4三種限制性核酸內(nèi)切酶B.可借助基因工程、核移植技術(shù)、早期胚胎培養(yǎng)及胚胎移植技術(shù)獲得轉(zhuǎn)基因的克隆牛C.可采用抗原-抗體雜交技術(shù)檢測該融合基因是否存在于轉(zhuǎn)基因牛的不同組織細(xì)胞中D.若在某轉(zhuǎn)基因牛皮膚細(xì)胞中觀察到綠色熒光，則說明L1基因在該細(xì)胞中完成表達(dá)8、下列關(guān)于動物細(xì)胞培養(yǎng)的敘述，錯誤的是（）A.培養(yǎng)基一般為固體培養(yǎng)基B.培養(yǎng)結(jié)果只能獲得大量細(xì)胞及生物制品，而不能獲得生物體C.需要氧氣來滿足細(xì)胞代謝的需要，不需要二氧化碳D.通過細(xì)胞培養(yǎng)可以檢測有毒物質(zhì)，判斷某物質(zhì)的毒性9、下列就“土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計數(shù)”實驗的有關(guān)敘述，正確的是（）A.經(jīng)高壓蒸汽滅菌的培養(yǎng)基所倒平板和接種后培養(yǎng)時的平板均要倒置B.同一稀釋度下至少要涂布三個平板并且要培養(yǎng)到菌落數(shù)穩(wěn)定時計數(shù)C.在稀釋度足夠高時，所形成的單個菌落中所有細(xì)胞的遺傳信息必定相同D.在相同培養(yǎng)條件下，未接種的培養(yǎng)基表面無菌落生長說明培養(yǎng)基沒有被雜菌污染10、下列關(guān)于小鼠體外受精及胚胎發(fā)育的敘述，錯誤的是（）A.精子在獲能液中培養(yǎng)的目的是使精子獲取能量B.注射到囊胚腔中的胚胎干細(xì)胞可以參與個體器官的發(fā)育C.小鼠在特定光控周期條件下飼養(yǎng)，注射相關(guān)激素有促進(jìn)超數(shù)排卵的作用D.分割的胚胎細(xì)胞有相同的遺傳物質(zhì)，因此發(fā)育成的個體沒有形態(tài)學(xué)差異11、下列有關(guān)生物技術(shù)安全性和倫理問題的觀點，合理的是（）A.對轉(zhuǎn)基因技術(shù)，我們應(yīng)該趨利避害，理性看待B.我國禁止生殖性克隆和治療性克隆C.我國不發(fā)展、不生產(chǎn)、不儲存生物武器，并反對其擴(kuò)散D.對基因檢測應(yīng)該保護(hù)個人遺傳信息的隱私權(quán)12、下列關(guān)于現(xiàn)代生物技術(shù)的敘述正確的是（）A.從酵母菌細(xì)胞中提取到人干擾素說明相應(yīng)的目的基因完成了在受體細(xì)胞中的表達(dá)B.在植物細(xì)胞與組織培養(yǎng)中，花藥不能作為組織培養(yǎng)的材料C.在動物細(xì)胞培養(yǎng)中，用胰蛋白酶處理肝組織可獲得單個肝細(xì)胞D.多種顯微操作和處理技術(shù)使體外受精、胚胎移植和胚胎分割成為可能評卷人得分三、填空題(共6題，共12分)13、在課題1中，我們學(xué)習(xí)了稀釋涂布平板法。這一方法常用來統(tǒng)計樣品中_________________的數(shù)目。當(dāng)樣品的稀釋度足夠高時，____________________。14、1.基因檢測引發(fā)的倫理問題。

（1）基因身份證：基因身份證指把個人的_____和_____檢測出來；記錄在磁卡上，而做成的個人基因身份證。

（2）基因檢測引發(fā)的爭論①_____②_____③_____④_____⑤_____⑥_____

。項目。

反對。

支持。

技術(shù)方面。

目前人類對①及基因間的相互作用尚缺乏足夠的認(rèn)識；通過基因檢測達(dá)到②的目的是很困難的；基因檢測結(jié)果會給受檢者帶來巨大的③。

通過基因檢測可以對遺傳性疾病及早采?、?；適時進(jìn)行治療，達(dá)到挽救患者生命的目的。

道德方面。

基因資訊的泄露造成⑤；如個人婚姻困難；人際關(guān)系疏遠(yuǎn)，更明顯的是造成一支遺傳性失業(yè)大軍。

對于基因歧視現(xiàn)象；可以通過正確的科學(xué)知識傳播；⑥教育和立法得以解決。

2.試管嬰兒與設(shè)計試管嬰兒的比較①_____②_____③_____④_____

。項目。

設(shè)計試管嬰兒。

試管嬰兒。

技術(shù)手段。

胚胎移植前①（填“需要”或“不需要”）進(jìn)行遺傳學(xué)診斷這一環(huán)節(jié)。

②（填“需要”或‘不需要”）進(jìn)行遺傳學(xué)診斷。

實踐應(yīng)用。

用于白血??；貧血病等遺傳性疾病的預(yù)測。

解決不孕不育問題。

聯(lián)系。

二者都是③受精；體外進(jìn)行早期胚胎發(fā)育，再進(jìn)行胚胎移植，從生殖方式上都為④

15、本課題對能分解尿素的細(xì)菌進(jìn)行了初步的篩選。但是，這只是分離純化菌種的第一步。對分離的菌種作進(jìn)一步的鑒定，還需要借助生物化學(xué)的方法。在細(xì)菌分解尿素的化學(xué)反應(yīng)中，細(xì)菌合成的___________將尿素分解成了_____________。氨會使培養(yǎng)基的________________，pH______________。因此，我們可以通過檢測培養(yǎng)基______________來判斷該化學(xué)反應(yīng)是否發(fā)生。在以尿素為唯一氮源的培養(yǎng)基中加入_____________，培養(yǎng)某種細(xì)菌后，如果pH升高，指示劑將變________________。16、_________℃左右最適合酵母菌繁殖，酒精發(fā)酵時一般將溫度控制在_______________℃。17、動物細(xì)胞培養(yǎng)的流程：

取動物組織塊（動物胚胎或幼齡動物的器官或組織）→剪碎→用______處理分散成______→制成______→轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶中進(jìn)行______培養(yǎng)→貼滿瓶壁的細(xì)胞重新用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理分散成單個細(xì)胞繼續(xù)_____培養(yǎng)。18、基因表達(dá)載體的組成及其作用。

一個基因表達(dá)載體的組成，除了______________、_______________外，還必須有__________、______________等(如圖所示)。

①______________②______________③______________

④______________⑤______________⑥______________

⑦_(dá)_____________評卷人得分四、判斷題(共4題，共28分)19、目前，種植的轉(zhuǎn)基因作物中以水稻和小麥最多，其次是轉(zhuǎn)基因棉花和油菜（______）A.正確B.錯誤20、培養(yǎng)動物細(xì)胞一般使用液體培養(yǎng)基，培養(yǎng)基通常需要加入血清等一些天然成分。()A.正確B.錯誤21、胚胎發(fā)育早期，細(xì)胞的數(shù)量不斷增加，胚胎的總體積也增加。()A.正確B.錯誤22、蛋白質(zhì)工程是一項難度很大的工程，主要是因為蛋白質(zhì)發(fā)揮功能必須依賴于正確的高級結(jié)構(gòu)，而這種高級結(jié)構(gòu)往往十分復(fù)雜。（選擇性必修3P95）()A.正確B.錯誤評卷人得分五、實驗題(共2題，共8分)23、某化工廠為了處理排出污水中的一種有害的；難以降解的有機(jī)化合物A；其研究團(tuán)隊用化合物A、磷酸鹽鎂鹽和微量元素等配制了培養(yǎng)基，成功地篩選出能高效降解化合物A的細(xì)菌（目的菌）。實驗的主要步驟如下圖所示，請分析回答問題。

（1）在培養(yǎng)基中加入化合物A的目的是______________，這種培養(yǎng)基屬于____________培養(yǎng)基。

（2）培養(yǎng)若干天后，應(yīng)選擇培養(yǎng)瓶中化合物A含量__________的培養(yǎng)液，接入新的培養(yǎng)液中連續(xù)培養(yǎng)，使目的菌的數(shù)量____________。

（3）若要研究目的菌的生長規(guī)律，可挑取單個菌落進(jìn)行液體培養(yǎng)，再采用______方法進(jìn)行計數(shù)。請你預(yù)測目的菌的種群數(shù)量會發(fā)生怎樣的變化。

（4）將目的菌用于環(huán)境保護(hù)實踐時，還有哪些問題需要解決？_______

（5）有人提出，可以通過改造細(xì)菌的基因來獲得能夠降解化合物A的細(xì)菌，請分析這種方法是否可行。_______24、三氯生是一種抑菌物質(zhì)，具有優(yōu)異的貯存穩(wěn)定性，可以替代抗生素用于基因工程中篩選含目的基因的受體細(xì)胞。已知fabV（從霍亂弧菌中發(fā)現(xiàn)的烯脂酰ACP還原酶）基因可以使大腸桿菌抵抗三氯生。

(1)通過PCR方法擴(kuò)增fabV基因時，先要根據(jù)_____設(shè)計兩種特異性引物序列，以確保Taq酶從引物的3′端延伸DNA鏈，至少需要經(jīng)過_____次擴(kuò)增才能獲得8個雙鏈等長的目的基因。

(2)基因工程的核心步驟是_____；某科研團(tuán)隊將可以受溫度調(diào)控的基因插入上述選出的重組質(zhì)粒中，構(gòu)建了溫度調(diào)控表達(dá)質(zhì)粒（如圖2）。其中C基因在低溫下會抑制P2，R基因在高溫下會抑制P1，如果將lacZ基因和GFP（綠色熒蛋白）基因插入圖2質(zhì)粒中，使得最后表現(xiàn)為低溫下只表達(dá)GFP蛋白，而高溫下只表達(dá)lacZ蛋白。則lacZ基因插在_____之間，GFP基因的插入位置及注意點是_____。

(3)若以大腸桿菌為受體細(xì)胞，篩選上述插入了GFP基因的受體細(xì)胞的依據(jù)是：大腸桿菌能在含_____的培養(yǎng)基上生長，且_____。評卷人得分六、綜合題(共4題，共36分)25、利用B淋巴細(xì)胞雜交瘤技術(shù)制備出單克隆抗體的流程如下圖所示。請據(jù)圖回答問題：

（1）通過過程①得到的B淋巴細(xì)胞在從小鼠體內(nèi)分離出之前；需對小鼠____________________。

（2）該過程中區(qū)別于原生質(zhì)體融合的方法是用________________處理。

（3）過程③至少需要通過兩次篩選和克隆培養(yǎng)；其中第一次篩選的目的是獲得______________。圖中X細(xì)胞具有________________________________的特點。單克隆抗體的特點是______________________________________________。

（4）經(jīng)過篩選和克隆化培養(yǎng)得到雜交瘤細(xì)胞后，一般采用體內(nèi)培養(yǎng)和體外培養(yǎng)兩種方式進(jìn)行培養(yǎng)，動物細(xì)胞的體外培養(yǎng)對環(huán)境條件的要求比較高，如培養(yǎng)液需適宜的溫度、________________________等。（答出兩項即可）26、近日，中國農(nóng)科院周文彬團(tuán)隊在水稻中發(fā)現(xiàn)一個低氮誘導(dǎo)下表達(dá)量顯著上升的基因OsDREBIC（簡稱D基因）。為了探究D基因的作用，科研人員將D基因?qū)胍吧退?，獲得轉(zhuǎn)基因水稻。該實驗主要流程如下，其中Hygr為潮霉素抗性基因，Kanr為卡拉霉素抗性基因；請回答。

(1)提取水稻的_____，經(jīng)過逆轉(zhuǎn)錄獲得cDNA，以cDNA為模板設(shè)計引物擴(kuò)增D基因。為使目的基因與載體正確連接，在設(shè)計上游引物時需添加限制酶_____的識別序列。

(2)切割無菌苗葉片置于添加_____（填植物激素的名稱）的培養(yǎng)上，誘導(dǎo)形成愈傷組織。農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化愈傷組織時，用含_____的選擇培養(yǎng)基篩選轉(zhuǎn)化的愈傷組織。將經(jīng)組織培養(yǎng)獲得的D基因過度表達(dá)水稻種植；發(fā)現(xiàn)產(chǎn)量較野生型水稻高41．3%～68%。

(3)進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，D基因表達(dá)產(chǎn)物發(fā)揮轉(zhuǎn)錄因子作用。轉(zhuǎn)錄因子是一類與基因上游特定序列專一性結(jié)合，激活或者抑制基因表達(dá)的蛋白質(zhì)。已知R基因會提高水稻光合作用中二氧化碳固定酶的含量和活性。為探究D轉(zhuǎn)錄因子對R基因的表達(dá)的影響，團(tuán)隊人員用熒光素酶（能夠催化熒光素氧化發(fā)光的酶）報告基因法，將_____基因的啟動子與熒光素酶基因融合形成嵌合基因表達(dá)載體（P1），與另一個含有D基因的表達(dá)載體（P2）一起導(dǎo)入水稻原生質(zhì)體，得到實驗組。加入熒光素后，結(jié)果如圖所示。

①對照組水稻；原生質(zhì)體應(yīng)導(dǎo)入_____。

②科學(xué)家繼續(xù)用N基因（氮素吸收轉(zhuǎn)運相關(guān)基因）替代R基因，進(jìn)行如上實驗，熒光對比結(jié)果類似。結(jié)合以上實驗結(jié)果推測D基因有助于大幅增產(chǎn)的分子機(jī)制：_____。27、接種疫苗是控制新冠肺炎的重要措施之一；新冠病毒疫苗有多種，我國科學(xué)家團(tuán)隊研發(fā)的腺病毒載體重組新冠病毒疫苗（重組疫苗）是一種基因工程疫苗。如圖是構(gòu)建含新冠病毒S蛋白（抗原）基因的重組腺病毒表達(dá)載體的過程，箭頭表示NcoⅠ，SphI，NheⅠ，BamHI的酶切位點（四種酶的識別序列詳見下表）。回答下列問題：

識別序列和切割位點限制酶NcoISphINheIBamHIC↓CATGGCCATG↓CG↓GATCCG↓CTAGC

(1)新冠病毒是RNA病毒，一般先通過逆轉(zhuǎn)錄得到_____，再經(jīng)PCR技術(shù)獲取大量S蛋白基因，PCR技術(shù)擴(kuò)增S蛋白基因依據(jù)的原理是_____。

(2)根據(jù)圖表可知，構(gòu)建重組質(zhì)粒時，需要選擇的限制酶是_____。將重組質(zhì)粒導(dǎo)入受體細(xì)胞后，需要用_____技術(shù)檢測S蛋白是否成功合成。合成的S蛋白多次注射到實驗鼠體內(nèi)后，在實驗鼠的脾臟中分離出漿細(xì)胞，利用_____（答出兩種）技術(shù)，至少經(jīng)過_____次篩選，就能得到_____的雜交瘤細(xì)胞；該細(xì)胞經(jīng)體外培養(yǎng)后就能得到大量的單克隆抗體，用于治療新冠肺炎。

(3)腺病毒是DNA病毒，對人體危害較小，利用腺病毒制備的重組腺病毒疫苗只需注射一針即可完成接種。數(shù)周后接種者體內(nèi)仍然能檢測到重組腺病毒DNA．請由此推測只需注射一針即可起到免疫保護(hù)作用的原因是_____。28、5月13日起；全程只需打一針的腺病毒載體重組新冠疫苗已經(jīng)在上海開始接種了，該疫苗由中國人民解放軍軍事科學(xué)院軍事醫(yī)學(xué)研究院生物工程研究所陳薇院士團(tuán)隊研發(fā)。該疫苗研發(fā)原理是：剔除腺病毒中與復(fù)制相關(guān)的基因，使其不能增殖，同時插入新冠病毒外殼上的刺突蛋白（S蛋白）基因。重組疫苗進(jìn)入人體后，S蛋白基因可在體內(nèi)表達(dá)出新冠病毒刺突蛋白。激發(fā)機(jī)體產(chǎn)生S蛋白抗體和記憶細(xì)胞，請回答下列問題：

（1）擴(kuò)增S蛋白基因要用到PCR技術(shù)，PCR是___________________的縮寫，反應(yīng)需在一定的緩沖溶液中進(jìn)行，除需要模板、原料外，還需要_________________種引物和________________。擴(kuò)增循環(huán)一次依次分為變性、________________和________________三步。

（2）在構(gòu)建基因表達(dá)載體時，在S蛋白基因的上游與下游需要分別具有__________、________。

（3）與S蛋白抗體的合成和運輸有關(guān)的有膜細(xì)胞器是_______________________。

（4）該疫苗與滅活或減毒的疫苗相比會更安全，原因是_____________。參考答案一、選擇題(共6題，共12分)1、B【分析】【詳解】

目的基因兩側(cè)都有，且質(zhì)粒也有的限制酶是EcoRⅠ，所以在基因工程中若只用一種限制酶完成對質(zhì)粒和外源DNA的切割，可選EcoRⅠ，A正確；如果將一個外源DNA分子和一個質(zhì)粒分別用EcoRⅠ酶切后，再用DNA連接酶連接，形成一個含有目的基因的重組DNA，此重組DNA中EcoRⅠ酶切點有2個，B錯誤；為了防止質(zhì)粒和含目的基因的外源DNA片段自身環(huán)化，酶切時可使用BamHⅠ和HindⅢ兩種限制酶同時處理，C正確；一個圖1所示的質(zhì)粒分子經(jīng)EcoRⅠ切割后，產(chǎn)生兩個黏性末端，含有2個游離的磷酸基團(tuán)，D正確。2、B【分析】【分析】

精子的精液進(jìn)入陰道后；精子緩慢通過子宮，在輸卵管內(nèi)與卵細(xì)胞相遇，一個精子與卵細(xì)胞結(jié)合，形成受精卵。受精卵不斷進(jìn)行細(xì)胞分裂，逐漸發(fā)育成胚泡，胚泡緩慢移動到子宮，最終植入子宮內(nèi)膜，這是懷孕。胚泡中細(xì)胞繼續(xù)分裂和分化，逐漸發(fā)育成胚胎，并于懷孕后8周左右發(fā)育成胎兒--開始呈現(xiàn)人的形態(tài)。胎兒生活在子營內(nèi)半透明液體羊水中，通過胎盤；臍帶從母體獲取所需營養(yǎng)物質(zhì)和氧，并排出二氧化碳等廢物．一般懷孕到第38周，胎兒發(fā)育成熟．成熟胎兒和胎盤從母體陰道排出，這個過程叫分娩，可見，人體胚胎發(fā)育的主要場所是子宮。

【詳解】

結(jié)合分析可知；人體胚胎發(fā)育大約需要38周，而在子宮內(nèi)發(fā)育的時間是36周，因此人體胚胎發(fā)育的主要場所是子宮。

故選B。3、A【分析】尿素分解菌能夠產(chǎn)生脲酶；在脲酶的作用下能夠?qū)⒛蛩胤纸鉃榘?，使pH升高與酚紅指示劑反應(yīng)呈紅色。剛果紅染液可以與纖維素反應(yīng)呈紅色，纖維素分解菌能夠?qū)⒗w維素分解而出現(xiàn)無色的透明圈。不同細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上形成的菌落大小；顏色、隆起程度等特征不同，可利用固體培養(yǎng)基上菌落的特征來判斷和鑒別細(xì)菌的類型。淀粉與碘反應(yīng)呈藍(lán)色，淀粉分解菌能夠分解淀粉而使菌落周圍出現(xiàn)透明圈。

【詳解】

A；尿素為唯一氮源的培養(yǎng)集中加入酚紅指示劑培養(yǎng)細(xì)菌；如果指示劑變紅，說明該細(xì)菌能分解尿素，A正確；

B；剛果紅染液可以與纖維素反應(yīng)呈紅色；纖維素分解菌能夠?qū)⒗w維素分解而出現(xiàn)無色的透明圈，說明該細(xì)菌能分解纖維素，B錯誤；

C；不同細(xì)菌在固體培養(yǎng)基上形成的菌落大小、顏色、隆起程度等特征不同；可利用固體培養(yǎng)基上菌落的特征來判斷和鑒別細(xì)菌的類型，不是計數(shù)的依據(jù)，C錯誤；

D；淀粉與碘反應(yīng)呈藍(lán)色；淀粉分解菌能夠分解淀粉而使菌落周圍出現(xiàn)透明圈，D錯誤。

故選A。4、A【分析】【分析】

甲表示抗原；乙表示雜種細(xì)胞，丙表示雜交瘤細(xì)胞，丁表示能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞。單克隆抗體的兩次篩選：①篩選得到雜交瘤細(xì)胞（去掉未雜交的細(xì)胞以及自身融合的細(xì)胞）；②篩選出能夠產(chǎn)生特異性抗體的細(xì)胞群，兩次抗體檢測：專一抗體檢驗陽性。

【詳解】

A；用特定的選擇培養(yǎng)基對乙篩選；自身融合的細(xì)胞以及未融合的細(xì)胞均不能生長，A錯誤；

B；實驗?zāi)康氖侵苽淇谷梭w胃癌的單克隆抗體；因此給小鼠注射的甲應(yīng)是能與抗人體胃癌抗體特異性結(jié)合的抗原，B正確；

C；誘導(dǎo)動物細(xì)胞融合可用PEG融合法、電融合法和滅活病毒誘導(dǎo)法；C正確；

D；丙為雜交瘤細(xì)胞；為了篩選能產(chǎn)生所需抗體的雜交瘤細(xì)胞，丙需進(jìn)行克隆化培養(yǎng)和抗體檢測，經(jīng)多次篩選后可獲得大量能分泌所需抗體的丁，D正確。

故選A。5、C【分析】【分析】

酵母菌是兼性厭氧菌；有氧呼吸產(chǎn)生二氧化碳和水，無氧呼吸產(chǎn)生酒精和二氧化碳；釀酒利用的是酵母菌進(jìn)行無氧呼吸，從而產(chǎn)生酒精。

【詳解】

A；制曲主要是為了獲得足夠多的酵母菌；環(huán)境溫度稍高，有利于酵母菌的生長和繁殖，A錯誤；

B；釀酒主要是將葡萄糖不徹底氧化分解形成酒精；小米的主要成分是淀粉，經(jīng)過浸泡后有利于淀粉分解成葡萄糖，B錯誤；

C；酵母菌無氧呼吸會產(chǎn)生二氧化碳；為防止發(fā)酵液溢出，故入缸發(fā)酵時不能將發(fā)酵缸裝滿，C正確；

D；煮酒完成后若立刻拌曲；材料溫度過高會使酒曲中的酵母菌死亡，D錯誤。

故選C。6、B【分析】【分析】

1；轉(zhuǎn)錄過程需要啟動子來驅(qū)動。

2；PCR技術(shù)的條件：模板DNA、四種脫氧核苷酸、一對引物、熱穩(wěn)定DNA聚合酶（Taq酶）。

3；正常動物細(xì)胞的分裂能力是有限的；傳代次數(shù)也是有限的。

【詳解】

A；植物組織培養(yǎng)過程中通過脫分化形成愈傷組織的過程進(jìn)行有絲分裂；細(xì)胞內(nèi)遺傳物質(zhì)不變，與生物體無差異，A錯誤；

B；PCR技術(shù)擴(kuò)增基因時使用的DNA聚合酶是熱穩(wěn)定DNA聚合酶；而體內(nèi)DNA復(fù)制所用的酶不能耐高溫，這與題意相符，B正確；

C；動物細(xì)胞培養(yǎng)時細(xì)胞正常分裂的代數(shù)是有限的；體內(nèi)細(xì)胞分裂的代數(shù)也是有限的，與題意不符，C錯誤；

D；構(gòu)建的基因表達(dá)載體中需要啟動子來驅(qū)動轉(zhuǎn)錄；體內(nèi)轉(zhuǎn)錄過程也需要啟動子來驅(qū)動，與題意不符，D錯誤。

故選B。二、多選題(共6題，共12分)7、B:D【分析】【分析】

基因工程技術(shù)的基本步驟：

（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲??；利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。

（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟；基因表達(dá)載體包括目的基因；啟動子、終止子和標(biāo)記基因等。

（3）將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同；導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法；基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)雱游锛?xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法。

（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因--DNA分子雜交技術(shù)；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA--分子雜交技術(shù)；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)--抗原-抗體雜交技術(shù)。個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定；抗病鑒定、活性鑒定等。

【詳解】

A；將L1-GFP融合基因插入質(zhì)粒P0時；使用了El和E4兩種限制性核酸內(nèi)切酶，A錯誤；

B；可借助基因工程、核移植技術(shù)、早期胚胎培養(yǎng)及胚胎移植技術(shù)獲得轉(zhuǎn)基因的克隆牛；B正確；

C；可采用DNA分子雜交技術(shù)檢測該融合基因是否存在于轉(zhuǎn)基因牛的不同組織細(xì)胞中；抗原-抗體雜交技術(shù)用于檢測目的基因是否成功表達(dá)，C錯誤；

D；若在某轉(zhuǎn)基因牛皮膚細(xì)胞中觀察到綠色熒光；則說明L1基因在該細(xì)胞中完成表達(dá)，D正確。

故選BD。8、A:C【分析】【分析】

1；動物細(xì)胞培養(yǎng)的流程：取動物組織塊（動物胚胎或幼齡動物的器官或組織）→剪碎→用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理分散成單個細(xì)胞→制成細(xì)胞懸液→轉(zhuǎn)入培養(yǎng)瓶中進(jìn)行原代培養(yǎng)→貼滿瓶壁的細(xì)胞重新用胰蛋白酶或膠原蛋白酶處理分散成單個細(xì)胞繼續(xù)傳代培養(yǎng)。

2、動物細(xì)胞培養(yǎng)需要滿足以下條件：①無菌、無毒的環(huán)境；②營養(yǎng)；③溫度和pH；④氣體環(huán)境：95%空氣+5%CO2。

【詳解】

A；動物細(xì)胞一般用液體培養(yǎng)基來培養(yǎng)；需要無菌、無毒的環(huán)境、基本營養(yǎng)物質(zhì)、適宜的溫度和pH、一定量的氧氣和二氧化碳等，A錯誤；

B；由于動物細(xì)胞分化程度高；雖然細(xì)胞核內(nèi)具有該物種的全套遺傳物質(zhì)，但單個細(xì)胞不能形成完整生物體，所以目前還不能通過動物細(xì)胞培養(yǎng)獲得生物體，B正確；

C；動物細(xì)胞培養(yǎng)過程中；需要氧氣滿足細(xì)胞代謝，需要二氧化碳維持培養(yǎng)液的pH，C錯誤；

D；通過動物細(xì)胞培養(yǎng)可以生產(chǎn)生物制品；可以培養(yǎng)皮膚移植的材料，還可以檢測有毒物質(zhì)等，D正確。

故選AC。9、A:B:D【分析】【分析】

土壤中分解尿素的細(xì)菌的分離與計數(shù)實驗中；需要使用以尿素為唯一氮源的選擇培養(yǎng)基，計數(shù)的關(guān)鍵是經(jīng)梯度稀釋后的倍數(shù)要合適，計數(shù)時通常選擇菌落數(shù)在30-300之間的實驗組平板進(jìn)行計數(shù)。

【詳解】

A；倒置培養(yǎng)的原因是可以防止培養(yǎng)皿蓋上凝結(jié)的水珠落入培養(yǎng)基中造成污染；經(jīng)高壓蒸汽滅菌的培養(yǎng)基所倒平板和接種后培養(yǎng)時的平板均要倒置，以防止雜菌污染，A正確；

B；為使實驗結(jié)果更準(zhǔn)確；同一稀釋度下可以多涂布幾個平板，至少要涂布三個平板并且要培養(yǎng)到菌落數(shù)穩(wěn)定時計數(shù)，求平均值，B正確；

C；細(xì)菌在分裂生殖中也會產(chǎn)生基因突變；雖然一個菌落是由一個活菌繁殖而來，但是個菌落中所有細(xì)胞的遺傳信息不一定相同，C錯誤；

D；證明選擇培養(yǎng)基沒有被雜菌污染的方法是對培養(yǎng)基進(jìn)行空白培養(yǎng)；即選取未接種的培養(yǎng)皿與接種樣品的培養(yǎng)皿同時培養(yǎng)，在相同培養(yǎng)條件下，未接種的培養(yǎng)基表面無菌落生長，說明培養(yǎng)基沒有被雜菌污染，D正確。

故選ABD。10、A:D【分析】【分析】

1；胚胎分割的特點：來自同一胚胎的后代具有相同的遺傳物質(zhì)；胚胎分割可以看做動物無性繁殖或克隆的方法之一。

2；胚胎干細(xì)胞的特點：具有胚胎細(xì)胞的特性；在形態(tài)上表現(xiàn)為體積小，細(xì)胞核大，核仁明顯；在功能上，具有發(fā)育的全能性，可分化為成年動物體內(nèi)任何一種組織細(xì)胞。另外，在體外培養(yǎng)的條件下，可以增殖而不發(fā)生分化，可進(jìn)行冷凍保存，也可進(jìn)行遺傳改造。

【詳解】

A；精子在獲能液中培養(yǎng)的目的是使精子獲能；不是獲取能量，A錯誤；

B；注射到囊胚腔中的胚胎干細(xì)胞可以分化形成各種組織；因此可以參與個體器官的發(fā)育，B正確；

C；小鼠在特定光控周期條件下飼養(yǎng)；注射相關(guān)激素（促性腺激素）有促進(jìn)超數(shù)排卵的作用，C正確；

D；分割的胚胎細(xì)胞有相同的遺傳物質(zhì)；由于生物體的性狀還受環(huán)境因素的影響，因此發(fā)育成的個體可能會存在形態(tài)學(xué)差異，D錯誤。

故選AD。

【點睛】11、A:C:D【分析】【分析】

1；轉(zhuǎn)基因生物的安全性問題：食物安全（滯后效應(yīng)、過敏源、營養(yǎng)成分改變）、生物安全（對生物多樣性的影響）、環(huán)境安全（對生態(tài)系統(tǒng)穩(wěn)定性的影響）。

2；治療性克?。褐咐每寺〖夹g(shù)產(chǎn)生特定細(xì)胞和組織（皮膚、神經(jīng)或肌肉等）用于治療性移植。

3；生殖性克隆：指將克隆技術(shù)用于生育目的；即用于產(chǎn)生人類個體。

4；中國政府：禁止生殖性克隆人；堅持四不原則（不贊成、不允許、不支持、不接受任何生殖性克隆人實驗），不反對治療性克隆。

【詳解】

A；對轉(zhuǎn)基因技術(shù)；我們應(yīng)該趨利避害，理性看待，A正確；

B；中國政府的態(tài)度是禁止生殖性克隆人；堅持四不原則（不贊成、不允許、不支持、不接受任何生殖性克隆人實驗），不反對治療性克隆，B錯誤；

C；中國在任何情況下不發(fā)展、不生產(chǎn)、不儲存生物武器；并反對生物武器及其技術(shù)和設(shè)備的擴(kuò)散，C正確；

D；對基因檢測應(yīng)該保護(hù)個人遺傳信息的隱私權(quán)；D正確。

故選ACD。12、A:C:D【分析】【分析】

1；動物細(xì)胞培養(yǎng)過程：取動物組織塊--剪碎組織--用胰蛋白酶處理分散成單個細(xì)胞--制成細(xì)胞懸液--轉(zhuǎn)入培養(yǎng)液中（原代培養(yǎng)）--放入二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)--貼滿瓶壁的細(xì)胞用酶分散為單個細(xì)胞；制成細(xì)胞懸液--轉(zhuǎn)入培養(yǎng)液（傳代培養(yǎng)）--放入二氧化碳培養(yǎng)箱培養(yǎng)。

2；胚胎工程是指對動物早期胚胎或配子所進(jìn)行的多種顯微操作和處理技術(shù)；如體外受精、胚胎分割、胚胎移植、胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)等技術(shù)。

【詳解】

A；干擾素是人體的蛋白質(zhì)；故從酵母菌細(xì)胞中提取到人的干擾素，說明目的基因已經(jīng)完成了在受體細(xì)胞中的表達(dá)，A正確；

B；在植物細(xì)胞和組織培養(yǎng)中；花藥可以進(jìn)行離體培養(yǎng)成單倍體植株，B錯誤；

C；使用酶解法可以獲得單個細(xì)胞；故在動物細(xì)胞培養(yǎng)中，用胰蛋白酶處理肝組織可獲得單個肝細(xì)胞，C正確；

D；對動物早期胚胎或配子所進(jìn)行的多種顯微操作和處理技術(shù)；使體外受精、胚胎移植和胚胎分割成為可能，D正確。

故選ACD。

【點睛】三、填空題(共6題，共12分)13、略

【解析】①.活菌②.培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌14、略

【分析】【分析】

1.基因檢測可以把人體內(nèi)的致病基因和易感基因檢測出來；通過采取一定的預(yù)防措施預(yù)防遺傳病的發(fā)生，但同時可能會帶來基因歧視等倫理道德方面的問題。

2.設(shè)計試管嬰兒不同于試管嬰兒；試管嬰兒是為了解決不孕不育的問題，而設(shè)計試管嬰兒是為了解決器官移植方面的醫(yī)療問題。

【詳解】

1.（1）基因身份證是指把每個人的致病基因和易感基因都檢測出來；并記錄在磁卡上，這樣到醫(yī)院看病時，只要帶上這種身份證，醫(yī)生就可以“對證”治療。

（2）反對基因檢測的人認(rèn)為：目前人類對基因結(jié)構(gòu)及基因間相互作用尚缺乏足夠的認(rèn)識；要想通過基因檢測達(dá)到預(yù)防疾病的目的是困難的；況且人類的多基因病，既與基因有關(guān)，又與環(huán)境和生活習(xí)慣有關(guān)，有某種致病基因的人不見得就會患病。但是，基因檢測結(jié)果本身就已經(jīng)足以給受檢者帶來巨大的心理壓力。個人基因資訊的泄露所造成的基因歧視，勢必造成奇特的失業(yè)大軍，即遺傳性失業(yè)大軍。個人基因資訊被暴露之后，還會造成個人婚姻困難；人際關(guān)系疏遠(yuǎn)等嚴(yán)重后果。支持基因檢測的人認(rèn)為：通過基因檢測可以對遺傳性疾病及早采取預(yù)防措施，適時進(jìn)行治療，達(dá)到挽救患者生命的目的。對于基因歧視現(xiàn)象，可以通過正確的科學(xué)知識傳播、倫理道德教育和立法得以解決。

2.設(shè)計試管嬰兒需要因而具有特定的性別或遺傳性狀；因此胚胎移植前需要進(jìn)行遺傳學(xué)診斷這一環(huán)節(jié)，而試管嬰兒是為了解決不孕不育問題，不需要考慮嬰兒的性別等問題，不需要進(jìn)行遺傳學(xué)診斷。二者的共同點是：兩者都是體外受精，并進(jìn)行體外早期胚胎培養(yǎng)，都要經(jīng)過胚胎移植，都是有性生殖。

【點睛】

1.基因與疾病的關(guān)系：具有致病基因的個體不一定患遺傳??；因為生物的性狀還受到環(huán)境因素的影響；沒有致病基因也可能患病，因為基因表達(dá)的蛋白質(zhì)，在加工或修飾過程中出現(xiàn)錯誤，也會出現(xiàn)癥狀。

2.明確設(shè)計試管嬰兒和試管嬰兒目的的不同是解答本題的關(guān)鍵之一?！窘馕觥恐虏』蛞赘谢蚧蚪Y(jié)構(gòu)預(yù)防疾病心理壓力預(yù)防措施基因歧視倫理道德需要不需要體外有性生殖15、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】脲酶氨堿性增強(qiáng)升高pH的變化酚紅指示劑紅16、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】2018～2517、略

【分析】【分析】

【詳解】

略【解析】胰蛋白酶單個細(xì)胞細(xì)胞懸液原代傳代18、略

【分析】略【解析】目的基因標(biāo)記基因啟動子終止子啟動子上游RNA聚合酶終止子下游轉(zhuǎn)錄標(biāo)記四、判斷題(共4題，共28分)19、B【分析】【詳解】

目前，種植的轉(zhuǎn)基因作物中以大豆和玉米最多，其次是轉(zhuǎn)基因棉花和油菜，所以錯誤。20、A【分析】【分析】

液體培養(yǎng)基主要是模擬動物體內(nèi)環(huán)境；動物體細(xì)胞是生活在組織液當(dāng)中，而且細(xì)胞要直接從組織液里獲得營養(yǎng)和排出廢物。所以液體培養(yǎng)基相當(dāng)于組織液的液體環(huán)境。

【詳解】

為了保證細(xì)胞培養(yǎng)時營養(yǎng)物質(zhì)和生長因子的供給，培養(yǎng)基中需添加一定量的動物血清等天然成分，可以補充合成培養(yǎng)基中缺乏的物質(zhì)，故該表述正確。21、B【分析】【詳解】

胚胎發(fā)育早期；細(xì)胞數(shù)量不斷增加，但胚胎總體積不變或略有縮小。

故錯誤。22、A【分析】【詳解】

蛋白質(zhì)工程是一項難度很大的工程，主要是因為蛋白質(zhì)發(fā)揮功能必須依賴于正確的高級結(jié)構(gòu)，而這種高級結(jié)構(gòu)往往十分復(fù)雜，并且蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)具有多樣性，這也在一定程度上增加了蛋白質(zhì)工程的難度，故說法正確。五、實驗題(共2題，共8分)23、略

【分析】【分析】

分析題干信息；該實驗的目的是篩選出高效降解化合物A的細(xì)菌，在以化合物A為唯一碳源的培養(yǎng)基中只有能降解化合物A的微生物才能以化合物A為碳源和氮源生長繁殖，不能利用化合物A的微生物因缺乏碳源和氮源，無法生長繁殖。

【詳解】

（1）由題意可知；本實驗是分離出降解的有機(jī)化合物A的菌種，所以培養(yǎng)基中加入化合物A的目的是篩選降解的有機(jī)化合物A的菌種，這種培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基。

（2）由于“目的菌”有降解的有機(jī)化合物A的作用；所以培養(yǎng)若干天后，應(yīng)選擇培養(yǎng)瓶中化合物A含量低的培養(yǎng)基，接入新的培養(yǎng)液中連續(xù)培養(yǎng)，使“目的菌”的數(shù)量進(jìn)一步增加。

（3）若研究“目的菌”的群體生長規(guī)律；將單個菌落進(jìn)行液體培養(yǎng)，再采用稀釋涂布平板方法進(jìn)行計數(shù)。培養(yǎng)液中目的菌的種群數(shù)量在開始一段時間范圍內(nèi)，由于營養(yǎng)充分；空間充裕，種群數(shù)量類似于“J”形增長，隨著營養(yǎng)物質(zhì)的消耗，種群增長速率逐漸下降，最終會達(dá)到K值，繼續(xù)培養(yǎng)，由于營養(yǎng)物質(zhì)缺乏、有害代謝物積累、pH改變等，種群數(shù)量將會下降。

（4）將目的菌用于環(huán)境保護(hù)實踐之前；還要對目的菌進(jìn)行研究，檢測其是否會產(chǎn)生對環(huán)境有害的代謝物；當(dāng)使用大量目的菌時會不會使目的菌成為優(yōu)勢菌群，對其他微生物的生存構(gòu)成威脅，從而打破微生物菌群的平衡等。

（5）可以利用基因工程的方法；將能降解化合物A的基因?qū)胧荏w菌中來實現(xiàn)。但在使用之前要檢驗其安全性。

【點睛】

本題考查了微生物分離與培養(yǎng)的有關(guān)知識，要求考生能夠識記培養(yǎng)基的成分和培養(yǎng)條件，掌握微生物分離與純化的方法與步驟，再結(jié)合所學(xué)知識準(zhǔn)確判斷?！窘馕觥亢Y選出能降解化合物A的細(xì)菌選擇低增多稀釋涂布平板培養(yǎng)液中目的菌的種群數(shù)量在開始一段時間范圍內(nèi)，由于營養(yǎng)充分、空間充裕，種群數(shù)量類似于“J”形增長，隨著營養(yǎng)物質(zhì)的消耗，種群增長速率逐漸下降，最終會達(dá)到K值，繼續(xù)培養(yǎng)，由于營養(yǎng)物質(zhì)缺乏、有害代謝物積累、pH改變等，種群數(shù)量將會下降將目的菌用于環(huán)境保護(hù)實踐之前，還要對目的菌進(jìn)行研究，檢測其是否會產(chǎn)生對環(huán)境有害的代謝物；當(dāng)使用大量目的菌時會不會使目的菌成為優(yōu)勢菌群，對其他微生物的生存構(gòu)成威脅，從而打破微生物菌群的平衡等可以利用基因工程的方法，將能降解化合物A的基因?qū)胧荏w菌中來實現(xiàn)。但在使用之前要檢驗其安全性24、略

【分析】【分析】

1；基因工程技術(shù)的基本步驟：

（1）目的基因的獲取：方法有從基因文庫中獲?。焕肞CR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。

（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟；基因表達(dá)載體包括目的基因；啟動子、終止子和標(biāo)記基因等；

（3）將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同；導(dǎo)入的方法也不一樣。將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法；基因槍法和花粉管通道法；將目的基因?qū)雱游锛?xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞的方法是感受態(tài)細(xì)胞法。

（4）目的基因的檢測與鑒定：分子水平上的檢測：

①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因DNA分子雜交技術(shù)；

②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA-分子雜交技術(shù)；

③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)抗原一抗體雜交技術(shù)。

④個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定；抗病鑒定、活性鑒定等。

2；圖1中①-④依次為目的基因的獲取、表達(dá)載體的構(gòu)建、目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞、目的基因的檢測。

（1）

PCR是一項在生物體外復(fù)制特定DNA的核酸合成技術(shù)，需要Taq酶，但Taq酶不能從頭開始合成DNA，前提條件是要有一段已知目的基因的核苷酸序以便合成一對引物，因此需要根據(jù)目的基因fabV基因的兩端按堿基互補配對原則設(shè)計引物。至少需要經(jīng)過4次擴(kuò)增才能獲的8個雙鏈等長的目的基因。

（2）

基因工程的核心步驟是基因表達(dá)載體的構(gòu)建，題干信息顯示C基因在低溫下會抑制P2，R基因在高溫下會抑制P1，說明P2啟動子在高溫下可以啟動轉(zhuǎn)錄；P1啟動子在低溫下可以啟動轉(zhuǎn)錄。題目顯示高溫下只表達(dá)lacz蛋白，則lacZ基因要插在“高溫下不被抑制”的啟動子的后面，即P2→T2之間；GFP基因要低溫下表達(dá)，則插入位置要在P1→T1之間；且不破壞C基因和R基因。

（3）

因為fabV（從霍亂弧菌中發(fā)現(xiàn)的烯脂酰ACP還原酶）基因可以使大腸桿菌抵抗三氯生；大腸桿菌能在含三氯生的培養(yǎng)基上生長，說明大腸桿菌插入重組質(zhì)粒，且依據(jù)是低溫下有綠色熒光高溫下無綠色熒光。

【點睛】

本題考查基因工程相關(guān)知識點，要求學(xué)生熟練掌握基因工程的原理、步驟及相關(guān)的目的，形成知識網(wǎng)絡(luò)，結(jié)合題目要求解決相關(guān)問題?！窘馕觥?1)目的基因（fabV基因）兩端堿基序列4

(2)基因表達(dá)載體的構(gòu)建P2→T2插在P1→T1之間；且不破壞C基因和R基因。

(3)三氯生低溫下有綠色熒光，高溫下無綠色熒光六、綜合題(共4題，共36分)25、略

【分析】【分析】

圖示為單克隆抗體的制備過程；分析圖示可知，①過程為小鼠體內(nèi)發(fā)生免疫反應(yīng)，②為已免疫的B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合，③為經(jīng)過篩選；克隆化培養(yǎng)和抗體檢測后獲得產(chǎn)生專一抗體的雜交瘤細(xì)胞（X細(xì)胞）。

【詳解】

（1）通過過程①得到的B淋巴細(xì)胞在從小鼠體內(nèi)脾臟分離出之前；需對小鼠注射特異性抗原，使其發(fā)生免疫反應(yīng)，產(chǎn)生能分泌特定抗體的B淋巴細(xì)胞。

（2）該過程利用了動物細(xì)胞融合技術(shù)；與植物原生質(zhì)體融合相比，動物細(xì)胞融合還可以利用滅活病毒進(jìn)行誘導(dǎo)融合。

（3）過程③至少需要通過兩次篩選和克隆培養(yǎng)；由于經(jīng)過誘導(dǎo)融合的細(xì)胞中還包含同種細(xì)胞融合的細(xì)胞和未融合的細(xì)胞，因此第一次篩選的目的是獲得雜交瘤細(xì)胞。經(jīng)過第二次篩選獲得的X細(xì)胞為能產(chǎn)生特異性抗體的雜交瘤細(xì)胞，由于其含有雙親的遺傳物質(zhì)，具有既能產(chǎn)生特異性抗體，又能無限增殖的特點。單克隆抗體的特點是特異性強(qiáng)；靈敏度高，并可大量制備。

（4）經(jīng)過篩選和克隆化培養(yǎng)得到雜交瘤細(xì)胞后；一般采用體內(nèi)培養(yǎng)和體外培養(yǎng)兩種方式進(jìn)行培養(yǎng)，可以從細(xì)胞培養(yǎng)液或小鼠腹腔提取大量單克隆抗體。動物細(xì)胞的體外培養(yǎng)對環(huán)境條件的要求比較高，如培養(yǎng)液需適宜的溫度；pH、動物血漿、氣體環(huán)境、無菌、無毒的環(huán)境等。

【點睛】

本題考查單克隆抗體的制備相關(guān)知識，要求考生能掌握單克隆抗體的制備原理、相關(guān)技術(shù)，準(zhǔn)確識別圖示各個過程，明確單克隆抗體的優(yōu)點和動物細(xì)胞培養(yǎng)的條件，能根據(jù)要求作答?！窘馕觥孔⑸涮禺愋钥乖瓬缁畈《倦s交瘤細(xì)胞既能產(chǎn)生特異性抗體，又能無限增殖特異性強(qiáng)、靈敏度高、并可大量制備pH、動物血漿、氣體環(huán)境、無菌、無毒的環(huán)境（答出兩項即可）26、略

【分析】【分析】

基因工程技術(shù)的基本步驟：

（1）目的基因的獲?。悍椒ㄓ袕幕蛭膸熘蝎@??；利用PCR技術(shù)擴(kuò)增和人工合成。

（2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建：是基因工程的核心步驟；基因表達(dá)載體包括目的基因；啟動子、終止子和標(biāo)記基因等。

（3）將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞：根據(jù)受體細(xì)胞不同，導(dǎo)入的方法也不一樣．將目的基因?qū)胫参锛?xì)胞的方法有農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、花粉管通道法；將目的基因?qū)雱游锛?xì)胞最有效的方法是顯微注射法；將目的基因?qū)胛⑸锛?xì)胞的方法是Ca2+處理法。

（4）目的基因的檢測與鑒定：①檢測轉(zhuǎn)基因生物染色體的DNA是否插入目的基因；②檢測目的基因是否轉(zhuǎn)錄出了mRNA；③檢測目的基因是否翻譯成蛋白質(zhì)；④個體水平上的鑒定：抗蟲鑒定；抗病鑒定、活性鑒定等。

【詳解】

（1）由題干“逆轉(zhuǎn)錄成cDNA”可知；故應(yīng)提取RNA（或mRNA）；限制酶酶切位點需只在啟動子與終止子之間，排除NdeI和EcoRI，為使目的基因與載體正確連接，要用兩種不同限制酶切割質(zhì)粒，若用XhoⅠ，另一個無論選BamHI或SmaI，都會將T-DNA上唯一的抗性基因潮霉素抗性基因切去，故應(yīng)選擇BamHI和SmaⅠ。

（2）誘導(dǎo)形成愈傷組織；需要培養(yǎng)基的生長素和細(xì)胞分裂素比例適中；農(nóng)桿菌侵染愈傷組織時，Ti質(zhì)粒只有T-DNA上的基因會轉(zhuǎn)移到受體細(xì)胞中，故選用含潮霉素的選擇培養(yǎng)基篩選轉(zhuǎn)化的愈傷組織。

（3）實驗?zāi)康臑樘骄緿轉(zhuǎn)錄因子對R基因的表達(dá)的影響。將R基因的啟動子與熒光素酶基因融合形成嵌合基因表達(dá)載體（P1），與另一個含有D基因的表達(dá)載體（P2）一起導(dǎo)入水稻原生質(zhì)體；加入熒光素后，出現(xiàn)熒光，說明D基因表達(dá)產(chǎn)物能與R基因的啟動子結(jié)合，并激活R基因表達(dá)。

①對照組要排除D基因表達(dá)外其他無關(guān)變量對實驗結(jié)果的干擾，應(yīng)選用P1+不含有D基因的P2導(dǎo)入原生質(zhì)體中。

②D基因有助于大幅增產(chǎn)的原因是：D基因通過表達(dá)D轉(zhuǎn)錄因子，同時激活R基因和N基因的表達(dá)，分別提高二氧化碳固定酶的含量和活性、促進(jìn)氮素吸收轉(zhuǎn)運，從而實現(xiàn)水稻大幅增產(chǎn)?！窘馕觥?1)RNA（或mRNA）B