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實(shí)驗(yàn)七免疫熒光技術(shù)及其應(yīng)用溶血與熒光--實(shí)驗(yàn)?zāi)康?歸納免疫熒光技術(shù)的原理,描述免疫熒光的實(shí)驗(yàn)操作步驟。2歸納免疫熒光技術(shù)的特點(diǎn)及應(yīng)用。溶血與熒光--二、實(shí)驗(yàn)原理免疫標(biāo)記技術(shù)(immunolabellingtechnique):
是指用熒光素、放射性同位素、酶、發(fā)光劑或電子致密物質(zhì)等作為示蹤劑,標(biāo)記抗體或抗原進(jìn)行的抗原抗體反應(yīng)。特點(diǎn):高度靈敏、特異、快速,定性、定量、定位分類(lèi):免疫酶技術(shù)、免疫熒光技術(shù)、放射免疫技術(shù)、免疫電鏡技術(shù)、免疫膠體金技術(shù)和發(fā)光免疫測(cè)定。溶血與熒光--免疫熒光技術(shù)1熒光色素與抗體或抗原牢固結(jié)合,但不影響該抗體或抗原的免疫特性。2熒光標(biāo)記的抗原抗體復(fù)合物經(jīng)激發(fā)后產(chǎn)生熒光,可檢測(cè)和定位未知的抗原或分析抗體的產(chǎn)生。溶血與熒光--免疫熒光的種類(lèi)溶血與熒光--檢測(cè)小鼠脾臟當(dāng)中的T細(xì)胞數(shù)溶血與熒光--T細(xì)胞表面標(biāo)記TCR識(shí)別結(jié)合MHC分子的抗原
CD3參與受體的裝配及信號(hào)傳遞溶血與熒光--溶血與熒光--溶血與熒光--檢測(cè)小鼠脾臟當(dāng)中的T細(xì)胞數(shù)溶血與熒光--實(shí)驗(yàn)材料
小鼠脾臟(四人一只)剪刀、鑷子載玻片每組二張兔抗鼠CD3一抗
FITC標(biāo)記的羊抗兔二抗熒光顯微鏡及熒光燈源。溶血與熒光--實(shí)驗(yàn)步驟1.印片:小鼠取出脾臟,以小剪刀剪開(kāi),吸干創(chuàng)面血液,用創(chuàng)面輕壓玻片,使之粘上1~2層細(xì)胞,然后晾干。2.標(biāo)本的固定:預(yù)冷的丙酮室溫10min,標(biāo)本片固定后立刻用冷PH7.4,0.01MPBS沖洗,取出后空氣干燥溶血與熒光--實(shí)驗(yàn)步驟3.熒光抗體染色法:兔抗鼠CD3一抗PBSPBS37度濕盒中溫育1小時(shí),PBS浸洗三邊,每次三分鐘溶血與熒光--實(shí)驗(yàn)步驟(2)加熒光標(biāo)記二抗:
PI+FITC標(biāo)記的羊抗兔二抗PI然后在濕盒中37℃保溫30min,同上法洗滌。溶血與熒光
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