室內(nèi)檢驗(yàn)員專業(yè)技術(shù)知識之重量、活力等測定

室內(nèi)檢驗(yàn)員專業(yè)技術(shù)知識之重量、活力等測定

第十二章重量測定

第一節(jié)概述

一、種子千粒重的含義

種子重量測定是指測定一定數(shù)量種子的重量,通常是指測定1000粒種子的重量，即千粒重。

種子千粒重是指種子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定水分的1000粒種子的重量，以克為單位。

千粒重測定原則是從充分混合的凈種子中隨機(jī)數(shù)取一定數(shù)量的種子，稱其重量。

第一節(jié)概述

二、千粒重測定目的和意義

1.種子千粒重反映種子的飽滿程度，是種子質(zhì)量的指標(biāo)之一。

2.根據(jù)千粒重，可以做到精量播種，節(jié)約用種。

3.千粒重是作物產(chǎn)量構(gòu)成的要素之一。

第二節(jié)測定程序

、測定方法

分為百粒法、千粒法和全量法三種。

二、百粒法測定程序

1.數(shù)取試樣:從凈度分析后充分混合的凈種子中，隨機(jī)數(shù)取試驗(yàn)樣品8個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)100粒。

2.試樣稱重:8個(gè)重復(fù)分別稱重，小數(shù)位點(diǎn)保留位數(shù)與凈度分析中的規(guī)定相同。

3.檢查重復(fù)間的容許變異系數(shù)，計(jì)算實(shí)測千粒重。

4.換算成規(guī)定水分下的千粒重。

5.結(jié)果報(bào)告。

第二節(jié)測定程序

三、千粒法測定程序

1.數(shù)取試樣:從凈度分析后充分混合的凈種子中，隨機(jī)數(shù)取試驗(yàn)樣品2個(gè)重復(fù)，大粒種子每個(gè)重

復(fù)500粒,中小粒種子每個(gè)重復(fù)1000粒。

2.試樣稱重:2個(gè)重復(fù)分別稱重，小數(shù)位點(diǎn)保留位數(shù)與凈度分析中的規(guī)定相同。

3.檢查重復(fù)間的容許變異系數(shù)，計(jì)算實(shí)測千粒重.

兩份重量的差數(shù)與平均數(shù)之比不能超過去5%,否則再做一份重復(fù),直至達(dá)到要求.取差數(shù)最

小的兩份重復(fù)平均數(shù)來計(jì)算千粒重。

4.換算成規(guī)定水分下的千粒重。pl52

5.結(jié)果報(bào)告。

第二節(jié)測定程序

四、全量變法測定程序

1.數(shù)取試樣:數(shù)取凈度分析后的全部凈種子的種子總粒數(shù)。

2.試樣稱重:小數(shù)位點(diǎn)保留位數(shù)與凈度分析中的規(guī)定相同。

3.換算成規(guī)定水分下的千粒重。

4.結(jié)果報(bào)告。

第十四章生活力的四唾測定

實(shí)際工作中如種子貿(mào)易時(shí)常需要在短時(shí)間內(nèi)掌握種子批的生活力狀況，如果種子處于休眠狀

態(tài)則難以通過發(fā)芽測定得到結(jié)果。

種子生活力測定可以滿足這一需要，四哇測定可以測定出休眠種子樣品的生活力百分率。

四晚測定方法于1942年由德國的GLakon教授發(fā)明，第2次世界大戰(zhàn)期間傳入美國。隨著四

映測定技術(shù)的發(fā)展，1STA（國際種子檢驗(yàn)協(xié)會）于1950年成立四哇測定技術(shù)委員會，致力于種

子四哇測定技術(shù)的發(fā)展。

2003年出版《ISTA四唾測定工作手冊》，列有120種農(nóng)業(yè)和122種林業(yè)種、屬的四晚測定方

法。

第一節(jié)概述

一、生活力概念

種子生活力（seedviability）是種子發(fā)芽的潛在能力或種胚具有的生命力。

第一節(jié)概述

二、種子生活力測定的意義

1.可以測定休眠種子的生活力

2.快速預(yù)測種子發(fā)芽能力

種子貿(mào)易中，常因時(shí)間緊迫，不可能采用正規(guī)的發(fā)芽試驗(yàn)來測定發(fā)芽力，這是因?yàn)榘l(fā)芽試驗(yàn)

所需的時(shí)間更長。

林木種子可用生活力代替發(fā)芽力。

第一節(jié)概述

三、四理染色測定的原理

在種子組織活細(xì)胞內(nèi)脫氫酶的作用下，無色的氯化三苯基四氮唾，接收活種子代謝過程中呼

吸鏈上的氫，在活細(xì)胞里變成還原態(tài)的紅色、穩(wěn)定、不擴(kuò)散的三苯基甲月替（Triphenyl

Formazam）?？筛鶕?jù)四哇染成的顏色和部位，區(qū)分種子紅色的有生活力部分和無色的死亡部分。

2,3,5-氯化三苯基四氮哇三苯基甲月替

（無色）（紅色）

第一節(jié)概述

種子有無生活力主要取決于胚和（或）胚乳（或配子體）壞死組織的部位和面積的大小，而不一定

在于顏色的深淺。顏色的差異主要是將健全的、衰弱的和死亡的組織判別出來。根據(jù)以上理

由和所用指示劑，把這種測定稱為“局部解剖圖形的四哇測定”（topographicaltetrazoliumtest）。

這就是說，是根據(jù)種子胚和活營養(yǎng)組織局部解剖染色部位及顏色狀況，鑒定種子胚的死亡部

分，查明種子死亡的原因。

第一節(jié)概述

四、四理測定適用的范圍

收獲后需馬上播種的種子；

具有深休眠的種子；

發(fā)芽緩慢的種子；

要求估測發(fā)芽潛力的種子。

另外，也適用于測定發(fā)芽末期個(gè)別種子的生活力，特別是懷疑有休眠時(shí)；測定已萌發(fā)種子，

或收獲期間存在的不同類型和/或加工的損傷（熱害、機(jī)械損傷或蟲蛀等）種子；解決發(fā)芽試

驗(yàn)中存在的問題，如不清楚不正常幼苗產(chǎn)生的原因或懷疑殺菌劑的處理效果等。

第一節(jié)概述

五、四哩測定方法的特點(diǎn)

四晚測定是一種世界公認(rèn)、廣泛應(yīng)用、實(shí)用方便、省時(shí)快速、結(jié)果可靠的種子生活力檢驗(yàn)方

法。具體地說具有以下幾個(gè)特點(diǎn)：

1.原理可靠，結(jié)果準(zhǔn)確。

如能正確使用四哇測定方法，四陛測定結(jié)果與發(fā)芽率誤差一般不會超過3%?5%。

2.不受休眠限制。

3.方法簡便、省時(shí)快速。

4.成本低廉。

四哇測定也有其缺陷：如對種子檢驗(yàn)員經(jīng)驗(yàn)和技能要求較高；結(jié)果不能提供休眠的程度；處

理種子不會像發(fā)芽試驗(yàn)?zāi)芊从乘幒η闆r。

第二節(jié)試劑的配制和儀器設(shè)備

一、試劑的配制

1.四唾溶液

2.磷酸緩沖液

3.乳酸苯酚透明液

采用乳酸苯酚透明液，是使小粒豆類和牧草種子經(jīng)四唾染色后使種皮、移殼或胚乳變?yōu)橥该?

以便透過這些部分清楚地觀察其胚主要構(gòu)造的染色情況。

第二節(jié)試劑的配制和儀器設(shè)備

二、儀器和設(shè)備

四晚測定的主要儀器設(shè)備與發(fā)芽試驗(yàn)設(shè)備相同，可采用其設(shè)備：如電熱恒溫箱或發(fā)芽箱、冰

箱。

四哇測定需配備的小器具有：種子切割工具如解剖刀或刀片、小針、切割墊板等；種子預(yù)濕

需要紙、毛巾、燒杯等器具；染色時(shí)，要準(zhǔn)備有蓋的不同規(guī)格的染色盤、棕色加液器、鑲子、

吸管等；觀察器具如體視顯微鏡或放大鏡；以及保護(hù)器具如手套、眼睛保護(hù)鏡、廢液處理容

器等。

第三節(jié)四哇測定程序

一、試驗(yàn)樣品的來源數(shù)取

試驗(yàn)樣品來源必須是凈種子。凈種子可以從凈度分析后的凈種子中隨機(jī)數(shù)取，也可以從送驗(yàn)

樣品中直接隨機(jī)數(shù)取。一般隨機(jī)數(shù)取100粒種子，2?4個(gè)重復(fù)或少于100粒的若干副重復(fù)。

如果是測定發(fā)芽末期休眠種子的生活力，則可單用試驗(yàn)?zāi)┢诘男菝叻N子。

委托檢驗(yàn)可以直接從經(jīng)充分混合的種子樣品中隨機(jī)數(shù)取種子。

第三節(jié)四哇測定程序

二、種子預(yù)處理

在正式測定前，對所測種子樣品需經(jīng)過預(yù)處理（預(yù)措預(yù)濕），其主要目的是使種子加快和充分

吸濕，軟化種皮，方便樣品準(zhǔn)備和促進(jìn)活組織酶系統(tǒng)的活化，以提高染色的均勻度、鑒定的

可靠性和正確性。

第三節(jié)四哩測定程序

預(yù)措一是指在種子預(yù)濕前除去種子的外部附屬物和在種子非要害部位弄破種皮，如水稻種子

需脫去內(nèi)外移殼，豆科硬實(shí)種子刺破種皮等，但須注意，預(yù)措不能損傷種子內(nèi)部胚的主要構(gòu)

造。絕大多數(shù)種子不須進(jìn)行預(yù)措處理，但有一些種子在預(yù)濕前要進(jìn)行預(yù)措處理。

預(yù)濕是四哇染色測定的必要步驟。預(yù)濕方法目前常用的有以下兩種方法：

第三節(jié)四唾測定程序

1.緩慢潤濕

緩慢潤濕是按種子發(fā)芽試驗(yàn)所采用方法，將種子放在紙床上或紙巾間，讓其緩慢吸濕。該法

適用于那些直接浸在水中容易破裂和損傷的種子，以及已經(jīng)劣變的種子或過分干燥的種子。

緩慢潤濕可采用下面兩種方法：

①紙卷或紙間預(yù)濕

②紙床上預(yù)濕

第三節(jié)四唾測定程序

2水中浸潰

水中浸漬是1種子完全浸入水中，種子吸水快、均勻，并可縮短預(yù)濕時(shí)間。該法適用于種子

直接浸入水中不會造成組織破裂損傷，并不會影響鑒定結(jié)果的種子種類，包括水稻、小麥、

大麥、燕麥、黑麥草、黑麥、玉米等，詳見表14L浸種溫度一般采用20?30℃或30C水溫。

第三節(jié)四唾測定程序

三、染色前的樣品準(zhǔn)備

為了使四哇溶液快速和充分滲入種子的全部活組織，加快染色反應(yīng)和正確鑒定胚的主要構(gòu)造,

大多數(shù)種子在染色前必須采用適當(dāng)?shù)姆椒ㄊ古叩闹饕獦?gòu)造和(或)活的營養(yǎng)組織暴露出來。

第三節(jié)四畦測定程序

1.不須樣品準(zhǔn)備

種皮滲水性良好的豆類種子，在四唾溶液里染色時(shí)，就能隨著四哇溶液的滲入而吸脹，并在

染色后剝?nèi)シN皮就可正確鑒定，這類種子不須樣品準(zhǔn)備。

2.沿胚縱切

3.近胚縱切

第三節(jié)四哇測定程序

4.上半?？v切

5.斜切種子

6.剝?nèi)シN皮

7.橫切胚軸和盾片

8.平切果種皮和胚乳，暴露出胚的構(gòu)造

9.穿刺或切開胚乳

10.切去種子基端

11.橫切胚乳

圖14-1一些常見作物種子的準(zhǔn)備示意圖

1.禾谷類和禾本科牧草種子通過胚和約在胚乳四分之三處縱切。

2.燕麥屬(Avena)和禾本科牧草種子靠近胚部橫切。

3.禾本科牧草種子通過胚乳末端部分橫切和縱切。

4.禾本科牧草種子刺穿胚乳。

5.通過子葉末端一半縱切，如葛苣屬(Lactuca)和菊科(Asteraceae)中的其他屬。

6.縱切面表明似上述第5種方式進(jìn)行縱切時(shí)的解剖刀部位。

7o沿胚的旁邊縱切［傘形科(Apiaceae)中的種和其他具有直立胚的種］

8.針葉樹種子沿胚旁邊縱切。

9.在兩端橫切，打開胚腔，并切去小部分胚乳(配子體組織)。

第三節(jié)四哇測定程序

四、四哇染色

四哇溶液必須完全淹沒種子，溶液不能直接露光，因?yàn)楣饩€可能使四唾鹽類還原而降低其濃

度，影響染色效果。

按表14-1(GB/T3543.7-1995表1)的要求，將經(jīng)過樣品準(zhǔn)備或不須準(zhǔn)備的規(guī)定數(shù)量種子分

別放入四哇溶液里染色。小粒種子可用直徑6cm培養(yǎng)皿，大、中粒種子可用9cm培養(yǎng)皿或更

大的容器，特別細(xì)小的種子可包在濾紙內(nèi)，分別放入容器里。然后加入適宜濃度的四理溶液,

移置一定溫度的恒溫箱內(nèi)進(jìn)行染色反應(yīng)。

第三節(jié)四哇測定程序

五、鑒定前處理

為了確保鑒定結(jié)果的正確性，還應(yīng)將已染色的種子樣品，加以適當(dāng)?shù)奶幚?，再進(jìn)一步使胚的

主要構(gòu)造和活的營養(yǎng)組織明顯地暴露出來，以便觀察鑒定。

1.不須處理，直接觀察

適用于染色前已進(jìn)行樣品準(zhǔn)備的整個(gè)胚、摘出的胚中軸、縱切或橫切的胚等樣品。因?yàn)檫@些

種子胚的主要構(gòu)造已暴露在外面，所以不須附加處理，就可直接觀察鑒定。

第三節(jié)四唾測定程序

2.輕壓出胚，觀察鑒定

3.扯開營養(yǎng)組織，暴露出胚

4.切去一層營養(yǎng)組織，暴露出胚和活營養(yǎng)組織

5.沿胚中軸縱切，暴露胚的構(gòu)造

6.沿種子中線縱切，暴露出胚和活營養(yǎng)組織

第三節(jié)四哇測定程序

7.剝?nèi)グ胪该鞯姆N皮或種子組織，暴露出胚

8.切去切面碎片或掰開子葉，暴露出胚

9.剝?nèi)シN皮和殘余營養(yǎng)組織，暴露出胚

10.乳酸苯酚透明液的應(yīng)用

加入2—4滴乳酸苯酚透明液，適當(dāng)搖晃，使其與種子良好接觸，38c恒溫箱保持30?60min,

經(jīng)清水漂洗或直接觀察。

第三節(jié)四哇測定程序

六、觀察鑒定

一般鑒定原則是，凡是胚的主要構(gòu)造及有關(guān)活營養(yǎng)組織染成有光澤的鮮紅色，且組織狀態(tài)正

常的，為有生活力種子。

凡是胚的主要構(gòu)造局部不染色或染成異常的顏色和光澤，并且活營養(yǎng)組織不染色部分已超過

二分之一，或超過容許范圍，以及組織軟化的，完全不染色或染成無光澤的淡紅色或灰白色,

且組織已軟化腐爛或異常、蟲蛀、損傷的均為無生活力種子。

圖14-2玉米種子四睫染色圖譜

1.有生活力——胚全染成深紅色。2.有生活力——僅盾片兩端少部不染色。3.有生活力一僅盾

片先端及胚芽鞘先端及少部不染色4.有生活力——胚芽鞘先端不染色5有生活力一胚芽鞘先

端及胚根頂端2/3以下不染色，種子根區(qū)染色6.無生活力——胚根大部不染色，已波及種子

根區(qū)。7.無生活力——胚芽全不染色。8.無生活力——胚軸不染色。9.無生活力一盾片與胚軸

連接處不染色。10.無生活力——盾片兩端不染色部份已超過1/2。11.無生活力——盾片1

/2以上不染色。12.無生活力——胚全不染色。

圖14-3水稻種子四晚染色圖譜

1.有生活力一一胚全染成深紅色（不染部分屬胚芽鞘和盾片間隙）。2.有生活力一一盾片先端

染色稍淺。3.有生活力一盾片先端及胚芽鞘先端不染色4.無生活力——胚根全不染色.5.無生

活力一胚芽先端、胚芽鞘及盾片先端染色較淺。6.有生活力——胚全染成紅色。7.有生活力一

一盾片全部染色，胚根胚芽鞘部分染色較淺。8.無生活力一盾片全不染色。9.無生活力一一胚

大部分染色較淺。10.無生活力一一胚全不染色。

圖14-4棉花種子四睫染色圖譜

1.有生活力——染色后將子葉分開的胚可見兩片子葉及怔根均染成紅色。2.有生活力——胚全

染成深紅色3.無生活力一一胚根中段不染色。4.無生活力——子葉關(guān)鍵部位不染色。5.無生

活力——子葉基部不染色。6.無生活力——胚根中部很長一段不染色。7.無生活力—胚根先

端不染色，子葉內(nèi)部大部染色很淺。8.無生活力——子葉大部不染色。9.無生活力——胚全不

染色。

圖14-5番茄種子四睫染色圖譜

1.有生活力——胚全染色。2.無生活力——胚根基部及子葉先端不染色或染色很淡。3.無生活

力一一子葉基部不染色。4.無生活力——子葉大部染色很淡。5.無生活力——子葉全不染色。

6.無生活力——胚根先端明顯不染色。7.無生活力——胚的中段，包括胚軸及與之相連的胚根

及子葉均不染色8.無生活力一一胚全不染色。

圖14-6辣椒種子四哇染色圖譜

1.有發(fā)芽力—胚全染色。2.有發(fā)芽力一一片子葉頂端約1/2不染色，另一片全染色。3.無

發(fā)芽力一胚根先端不染色，子葉中部有一小段染色很淺。4.無發(fā)芽力——子葉中段不染色。

5.無發(fā)芽力—子葉全不染色。6.無發(fā)芽力——子葉基部一端不染色。7.無發(fā)芽力——胚多處

不染色。8.無發(fā)芽力——胚全不染色。

圖14-7油菜種子四哇染色圖譜

1、2.有生活力——胚全染成深紅色。3.有生活力一子葉頂端有小于1/3不染色4.無生活力一

一胚根先端及側(cè)面有大于直徑1/4的不染色.5.無生活力一胚根基部不染色，子葉極小部分不

染色6.無生活力——胚根一側(cè)約1/2不染色。7.無生活力——胚根大部分不染色。8.無生活力

——子葉與胚軸相連處不染色。9.有生活力一外方一枚子葉非關(guān)鍵部位部分不染色。10.無生

活力——外方一枚子葉染色很淺。11.無生活力——僅子葉的一部分染成淺紅色，其余全部不

染色。12.無生活力——胚全不染色。

case

第十四章

第十五章活力測定

種子活力(seedvigor)是種子質(zhì)量的重要指標(biāo)之一，也是反映種用價(jià)值的主要組成部分,與種子

田間出苗質(zhì)量密切相關(guān)?；盍Φ臏y定經(jīng)過幾十年的研究，已經(jīng)取得了重大進(jìn)展。在美國和歐

洲I，活力測定應(yīng)用已經(jīng)很普遍，許多種子公司把活力測定作為常規(guī)的檢測項(xiàng)目。

第一節(jié)概述

一、種子活力的概念和定義

種子活力不像種子發(fā)芽率那樣是一個(gè)單一的測定特性，而是描述種子出苗不同方面(包括田

間和貯藏期間)的綜合特性。

第一節(jié)概述

2004年出版的《國際種子檢驗(yàn)規(guī)程》將活力定義為：

“種子活力是指在廣泛的環(huán)境條件下，決定可接受發(fā)芽率的種子批的活性和性能那些特性的

綜合表現(xiàn)”。

并作了進(jìn)一步的闡述，種子活力不是一種簡單的測定概念，而是一種能表達(dá)如下有關(guān)種子批

性能多種特性的綜合概念：(1)種子發(fā)芽和幼苗生長速率和整齊度；

(2)種子在不利環(huán)境條件下的出苗能力；

(3)貯藏后，特別是能保持發(fā)芽力的性能。

高活力種子批即使在不適宜的環(huán)境條件下，仍具有良好性能的潛力。

第一節(jié)概述

二、種子活力的重要意義

1.高活力種子的生產(chǎn)優(yōu)越性

種子活力是種子重要的品質(zhì)，高活力種子具有明顯的生長優(yōu)勢和生產(chǎn)潛力。

(1)提高田間出苗率。

(2)抵御不良環(huán)境條件。

第一節(jié)概述

⑶增強(qiáng)對病蟲、雜草的競爭能力。

(4)抗寒力強(qiáng)，適于早播。

(5)節(jié)約播種費(fèi)用。

(6)增加作物產(chǎn)量。

(7)提高種子耐藏性。

可見，高活力種子對農(nóng)業(yè)生產(chǎn)具有十分重要的意義。

第一節(jié)概述

三、活力、生活力和發(fā)芽力的區(qū)別及關(guān)系

1.種子生活力是指種子發(fā)芽的潛在能力或種胚具有的生命力，通常用供檢樣品中活種子數(shù)占

樣品總數(shù)的百分率表示。

2.種子發(fā)芽力是指種子在適宜條什下(檢驗(yàn)室控制條件下)長成正常植株的能力，通常用

供檢樣品中長成正常幼苗數(shù)占樣品總數(shù)的百分率，即發(fā)芽率表示。

第一節(jié)概述

《國際種子檢驗(yàn)規(guī)程》指出，在下列6種情況下，如果鑒定正確，生活力測定和發(fā)芽率測定

的結(jié)果基本是一致：

①無休眠、無硬實(shí)或通過適宜的預(yù)處理破除了休眠和硬實(shí)；

②沒有感染或已經(jīng)過適宜的清潔處理；

③在加工時(shí)未受到不利條件或貯藏期間未用有害化學(xué)藥品處理；

④尚未發(fā)生萌芽；

⑤在正?；蜓娱L的發(fā)芽試驗(yàn)中耒發(fā)生劣變；

⑥發(fā)芽試驗(yàn)是在適宜的條件下進(jìn)行的。

第…節(jié)概述

3.種子活力簡單地說就是指高發(fā)芽率種子批間在田間表現(xiàn)的差異。

由此可見，種子活力是比發(fā)芽率更敏感的指標(biāo)，在高發(fā)芽率的種子批中，仍然表現(xiàn)出活力的

差異。通常高發(fā)芽率的種子具有較高活力，但兩者不存在正相關(guān)。

關(guān)于活力和發(fā)芽之間的關(guān)系,Isely已于1957年以圖解形式表示(見圖15-1)?

第二節(jié)種子活力測定方法分類和要求

一、活力測定方法的分類

種子活力測定方法的種類多達(dá)數(shù)十種。其分類的方法歸納起來不外乎直接法和間接法兩類。

直接法是在檢驗(yàn)室條件下模擬田間不良條件測定田間出苗率的方法，如低溫處理是模擬早春

播種期的低溫條件；磚砂(礫)試驗(yàn)是模擬田間板結(jié)土壤或粘土地區(qū)的條件。

間接法是在檢驗(yàn)室內(nèi)測定與田間出苗率(活力)相關(guān)的種子特性的方法，如測定某些生理生

化指標(biāo)(酶的活性、呼吸強(qiáng)度等)及測定生化劣變處理后的發(fā)芽率(加速老化試驗(yàn)、人工劣

變試驗(yàn)等)。

第二節(jié)種子活力測定方法分類和要求

現(xiàn)將ISTA和AOSA推薦和建議的活力測定方法及種類簡介如下：

1.ISTA活力測定方法(《活力測定力法手冊》，1995版)

第二節(jié)種子活力測定方法分類和要求

第一類是推薦種子活力測定方法，也是目前《國際種子檢驗(yàn)規(guī)程》已經(jīng)列入的方法，包括兩

種方法：

電導(dǎo)率測定(conductivitytest)、

加速老化測定(acceleratedageingtest)。這兩種推薦方法已基本上標(biāo)準(zhǔn)化，將在下面作詳細(xì)的

介紹。

第二節(jié)種子活力測定方法分類和要求

第二類是建議的種子活力測定方法，包括七種不同類型的方法：

①冷凍測定(coldtest)；

②低溫發(fā)芽測定(coolgerminationtest)；

③人工控制劣變試驗(yàn)(controlleddeteriorationtest)；

④復(fù)合逆境活力測定(complexstressingvigortest)；

⑤希爾特納試驗(yàn)(hiltnertest)；

⑥幼苗生長測定(seedlinggrowthtest)包括幼苗測量和幼苗評定，幼苗測量包括幼苗生長測

定和幼苗生長速率測定，幼苗評定包括卷紙法和砂法；

⑦四II坐測定(tetrazoliumtest)包括剖面四?哇法和糊粉層四唾測定兩種方法。

第二節(jié)種子活力測定方法分類和要求

2.AOSA（種子分析者協(xié)會）活力測定方法（《活力測定手冊》）

AOSA于1983年頒發(fā)了《活力測定手冊》，該手冊也包括兩類的方法。

第一類是廣泛應(yīng)用的方法：①幼苗生長和評定試驗(yàn)（幼苗活力分級、幼苗生長速率測定發(fā)芽

末期幼苗長度和干重）；②逆境試驗(yàn)（包括加速老化試驗(yàn)、低溫試驗(yàn)、冷發(fā)芽試驗(yàn)）；③生化

試驗(yàn)（包括四哇法和電導(dǎo)率法）。

第二類是推薦應(yīng)用的方法：①幼苗生長和評定試驗(yàn)；②逆境試驗(yàn)（包括磚砂試驗(yàn)、滲透逆境

試驗(yàn)即高滲試驗(yàn)）；③生化測定（包括呼吸測定、谷氨酸脫竣酶（GADA）活性測定、ATP含

量齪）o

AOSA所列方法較多，其中有六種測定方法與ISTA規(guī)定的方法基本相同。

第二節(jié)種子活力測定方法分類和要求

二、選用活力測定方法的原則和要求

1.選用原則

根據(jù)當(dāng)?shù)赝寥罋夂驐l件選用適宜的方法，如低溫試驗(yàn)適合早春播種季節(jié)低溫氣候條件，不適

合于早春溫暖地區(qū)，再如磚砂試驗(yàn)適用于粘土地區(qū)或雨后土壤板結(jié)情況，不適用于土壤較為

疏松地區(qū)，歐洲土壤粘重應(yīng)用磚砂試驗(yàn)較多，而美國則很少應(yīng)用，僅作為推薦方法。

根據(jù)作物的特性選用適宜的方法。如低溫試驗(yàn)和冷發(fā)芽法適用發(fā)芽期間耐寒性較差的喜溫作

物，如玉米、大豆等，不適用于耐寒性較強(qiáng)的作物，如大麥、小麥、油菜等。又如電導(dǎo)率測

定是豌豆種子的典型測定方法，其測定結(jié)果與田間出苗率高度相關(guān)，但對其他作物種子并非

適合，其測定結(jié)果與田間出苗相關(guān)性較差。

第二節(jié)種子活力測定方法分類和要求

2.選用要求

①節(jié)約費(fèi)用,儀器設(shè)備不能太昂貴；

②簡單易行,測定技術(shù)不太復(fù)雜，易于推廣；

③快速省時(shí),短期內(nèi)可獲得測定結(jié)果；

④結(jié)果準(zhǔn)確,能真實(shí)反映一批種子的活力水平，且與田間出苗率有良好相關(guān)；

⑤重演性好,在同一檢驗(yàn)室不同檢驗(yàn)人員或在不同檢驗(yàn)室能獲得比較…致的結(jié)果。

第二節(jié)種子活力測定方法分類和要求

三、活力測定方法的基本要求

1.試樣種子

試驗(yàn)樣品來源必須是凈種子。凈種子可以從凈度分析后的凈種子中隨機(jī)數(shù)取，也可以從送驗(yàn)

樣品中直接隨機(jī)數(shù)取。

除委托檢驗(yàn)外，所需種子數(shù)和重復(fù)必須隨機(jī)從種子批的有代表性樣品的凈種子部分中數(shù)取。

2.方法和試驗(yàn)條件

活力測定方法各不相同，具體的方法和使用儀器及試驗(yàn)條件將在本章以后各節(jié)中加以說明。

第二節(jié)種子活力測定方法分類和要求

3.對照樣品

活力測定需要比標(biāo)準(zhǔn)發(fā)芽試驗(yàn)更加嚴(yán)格的試驗(yàn)條件控制，因此，種子活力測定的檢驗(yàn)室需要

制備對照樣品。

設(shè)置對照樣品的目的是為活力測定結(jié)果提供一致性的內(nèi)在質(zhì)量控制。對照樣品的結(jié)果差異反

映了試驗(yàn)條件（如溫度、種子水分或其他因素）的微小變異，而會導(dǎo)致明顯影響結(jié)果的可靠

性。

第二節(jié)種子活力測定方法分類和要求

4.結(jié)果計(jì)算與表示

將在本章以后各具體方法中節(jié)中加以敘述給出其詳細(xì)程序。

5.結(jié)果報(bào)告

填報(bào)采用本章第三節(jié)和第四節(jié)規(guī)定的程序，將活力測定結(jié)果，填報(bào)在檢驗(yàn)報(bào)告“其他測定”

欄內(nèi)。同時(shí)結(jié)果還須附有檢測方法的說明，包括必要時(shí)測定方法及條件包括時(shí)間、溫度和種

子水分等信息。

第三節(jié)加速老化試驗(yàn)

一、原理

加速老化試驗(yàn)（acceleratedageingtest,以卜.簡稱AA測定）是根據(jù)高溫（40?45℃）和高濕（100%

相對濕度）能導(dǎo)致種子快速劣變這一原理進(jìn)行測定。

高活力種子能忍受逆境條件處理，劣變較慢；而低活力種子劣變較快，長成較多的不正常幼

苗或者完全死亡。

AA測定最早是由Delouehe等（1973）創(chuàng)造的用來預(yù)測許多種的種子壽命。經(jīng)過多年的發(fā)展，

目前AA測定主要用于兩方面，

一是預(yù)測田間出苗率

二是預(yù)測耐藏性

第三節(jié)加速老化試驗(yàn)

二、適用范圍與局限性

《國際種子檢驗(yàn)規(guī)程》所規(guī)范的AA測定法適用于大豆種子；

ISTA手冊指出該法也適用于許多其他種，詳見表15-2所列的種。AA測定結(jié)果也是可以控制

的。AOSA和ISTA用大豆種子核準(zhǔn)試驗(yàn)表明在試驗(yàn)室間有很大的一致性，并證實(shí)AA發(fā)芽試

驗(yàn)與田間出苗的關(guān)系。現(xiàn)在也有足夠證據(jù)證實(shí)用該試驗(yàn)?zāi)苋〉弥匮菪越Y(jié)果。因此，AOSA現(xiàn)

在認(rèn)為作為大豆試驗(yàn)的方法已經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)化，可以推薦。但是必須按本節(jié)所規(guī)定的程序和儀器進(jìn)

行操作，在溫度控制、樣品大小或老化時(shí)間的小量改動(dòng)會引起最后水分和（或）發(fā)芽率的變化。

第三節(jié)加速老化試驗(yàn)

三、儀器和藥品

1.老化外箱：推薦應(yīng)用水套培養(yǎng)箱，保持恒溫（41土0.3）℃。如果沒有水套培養(yǎng)箱，其他有

加水的加熱培養(yǎng)箱也可。使用這些培養(yǎng)箱，水應(yīng)在外箱內(nèi)，以防凝結(jié)。水掉在內(nèi)箱盒上，會

在蓋內(nèi)產(chǎn)生凝結(jié)，提高種子水分，降低發(fā)芽率，增加發(fā)霉。因此，當(dāng)外箱有大量凝結(jié)水時(shí)，

當(dāng)心保護(hù)內(nèi)箱在老化期間的小水點(diǎn)積累。外箱通常不需要很準(zhǔn)確的溫度控制，需要附加控制

保持溫度均勻。

2.老化內(nèi)箱：老化內(nèi)箱為帶蓋的塑料盒，大小為ll.OcmXILOcmX3.5cm,內(nèi)有一個(gè)網(wǎng)架

盤10.0cmX10.0cmXO3cm（網(wǎng)孔為14X18）。老化內(nèi)箱可以購買,也可以自制（見圖15-3）。

注意蓋不應(yīng)密封（見圖15-3）。

第三節(jié)加速老化試驗(yàn)

3.天平：感量為0.001g。

4.水：去離子水或蒸儲水。

5.帶刻度的容量杯：刻度從0至100mL,從標(biāo)準(zhǔn)的容量器或有50mL刻度的容器準(zhǔn)確量取

40mL水o

6.鋁盒（供種子水分測定）。

7.發(fā)芽試驗(yàn)設(shè)備。

第三節(jié)加速老化試驗(yàn)

四、程序

1.預(yù)備試驗(yàn).

（1）檢查老化外箱

老化外箱的溫度必須經(jīng)過國家標(biāo)準(zhǔn)計(jì)量院的檢定或類似的溫度計(jì)。

（2）檢查溫度

收集按規(guī)定的程序/系統(tǒng)進(jìn)行操作的老化外箱的溫度和其均勻度的記錄數(shù)據(jù)，如果記錄顯示

能達(dá)到表15-2所規(guī)定的溫度（對于大豆種子，所有水平應(yīng)達(dá)到41±0.3℃）下才能進(jìn)行AA測

定。

（3）保證老化內(nèi)箱的清潔度

為了防止菌類污染，使用過的老化內(nèi)箱、蓋和網(wǎng)架需經(jīng)過熱消毒或用15%次氯酸鈉溶液洗凈

并烘干，才可進(jìn)行AA測定。

第三節(jié)加速老化試驗(yàn)

2.測定每一種子批的程序

（1）檢查種子水分

如果不知道測定種子批的水分，應(yīng)采用烘箱法測定種子批的水分。對于水分低于10%或高于

14%的種子批，應(yīng)在AA測定前將其水分調(diào)節(jié)至10%?14%。

記錄種子水分，決定是否必須提高種子水分或降低種子水分至規(guī)定范圍。

第三節(jié)加速老化試驗(yàn)

（2）準(zhǔn)備老化內(nèi)箱

把40mL去離子水或蒸鐳水放入老化內(nèi)箱，然后放入網(wǎng)架，確信水不滲到網(wǎng)架和后加的種子

±o

從凈種子中稱取42g（至少含有200粒種子）種子，稱重后放在網(wǎng)架上，攤成一層。

老化的種子最好不要經(jīng)過處理，然而，該作物種子是以殺菌劑處理銷售的，可以使用處理種

子。每次外箱用于AA測定，應(yīng)包括一個(gè)對照樣品。保證每一內(nèi)箱有蓋（不要封口）。注意蓋不

應(yīng)密封。

第三節(jié)加速老化試驗(yàn)

（3）使用老化外箱

內(nèi)箱排成一排放在架上，同時(shí)放入外箱內(nèi)。為了使溫度均勻一致，外箱內(nèi)的兩個(gè)內(nèi)箱之間間

隔大約為2.5cm。

記錄內(nèi)箱放人外箱的時(shí)間。準(zhǔn)確監(jiān)控老化外箱的溫度在表15-2的范圍和時(shí)間內(nèi)，如大豆種子

在（41±0.3）℃溫度保持72ho

在老化規(guī)定期間，不能打開外箱的門。如果這時(shí)已經(jīng)打開門，應(yīng)從箱中取出種子重新進(jìn)行測

定。

表15-2不同作物種子AA測定老化條件

第三節(jié)加速老化試驗(yàn)

（4）發(fā)芽試驗(yàn)

經(jīng)72h老化時(shí)間后，從外箱取出內(nèi)箱，記錄這時(shí)的時(shí)間。取出一小時(shí)內(nèi)用50粒四個(gè)重復(fù)進(jìn)行

標(biāo)準(zhǔn)發(fā)芽試驗(yàn)。

在同一天內(nèi)如果有許多批種子進(jìn)行老化試驗(yàn)，樣品應(yīng)進(jìn)行分類，在兩個(gè)老化外箱的試驗(yàn)應(yīng)間

隔lh,以便有時(shí)間在老化后進(jìn)行置床發(fā)芽。大豆種子發(fā)芽的條件已在GB/T3543.4中給出。

第三節(jié)加速老化試驗(yàn)

（5）檢查老化后對照樣品的水分

在老化結(jié)束時(shí)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)發(fā)芽前，從內(nèi)箱中取出對照樣品的一個(gè)小樣品（10?20粒），馬上稱重，

用烘箱法測定種子水分（以鮮重為基礎(chǔ)）。

記錄對照樣品種子水分，如果種子水分低于或高于表15-2所規(guī)定的值（對于大豆，種子水分

應(yīng)在27%?30%）,則試驗(yàn)結(jié)果不準(zhǔn)確，應(yīng)重作試驗(yàn)。

第三節(jié)加速老化試驗(yàn)

（6）結(jié)果計(jì)算與表示

用四次50粒重復(fù)的平均結(jié)果表示人工老化發(fā)芽結(jié)果，以百分率表示。

（7）結(jié)果說明解釋

AA測定并不提供一個(gè)絕對的活力范圍，只是通過一段時(shí)間的高溫高濕逆境后進(jìn)行發(fā)芽試驗(yàn)

的結(jié)果。

該結(jié)果與老化前同一種子批的發(fā)芽試驗(yàn)結(jié)果比較，如果AA結(jié)果類同于標(biāo)準(zhǔn)發(fā)芽試驗(yàn)結(jié)果為

高活力，低于標(biāo)準(zhǔn)發(fā)芽試驗(yàn)結(jié)果為中至低活力。這樣，可用該結(jié)果來排列種子批活力，來判

定貯藏潛力或每一種子批的播種潛力。

第四節(jié)電導(dǎo)率測定

高活力種子細(xì)胞膜完整性好，浸入水中后滲出的可溶性物質(zhì)或電解質(zhì)少，浸泡液的電導(dǎo)率低。

電導(dǎo)率與田間出苗率成顯著的負(fù)相關(guān)，借此可用電導(dǎo)率的高低判別種子活力的高低。

大粒豆類種子的電導(dǎo)率結(jié)果提供比標(biāo)準(zhǔn)發(fā)芽與田間出苗率更強(qiáng)的相關(guān)性。

第四節(jié)電導(dǎo)率測定

一、原理

細(xì)胞膜在種子生理成熟前的種子發(fā)育中發(fā)生了結(jié)構(gòu)變化，種子劣變發(fā)生于成熟前和發(fā)芽前的

吸脹。劣變生化變化和生理紊亂所引起的細(xì)胞膜完整性變化是造成種子活力的最主要差異。

在早期吸脹時(shí)一，細(xì)胞膜的恢復(fù)和修補(bǔ)可能影響種子的滲漏率。種子重組恢復(fù)細(xì)胞膜的速度越

快，滲漏液越少。高活力種子能迅速修復(fù)細(xì)胞膜能力，而低活力種子較差，所以，高活力種

子所測得的電導(dǎo)率比低活力種子低。低活力種子批的滲漏會造成二次感染，種子滲漏的營養(yǎng)

液加速土壤微生物活動(dòng)和二次感染。種子中滲出的碳水化合物的數(shù)量也與細(xì)菌生長呈正相關(guān)。

第四節(jié)電導(dǎo)率測定

二、適用范圍與局限性

《國際種子檢驗(yàn)規(guī)程》所規(guī)范的電導(dǎo)率測定適用于豌豆種子；

ISTA活力手冊指出該法也適用于許多其他種，如大粒豆科種子（特別是大豆、綠豆等）、棉

花、玉米、番茄、洋蔥等種子。AOSA和ISTA活力測定委員會認(rèn)為，菜豆和大豆的電導(dǎo)率

測定結(jié)果具有重演性，與田間出苗率有較大的相關(guān)性，該測定已被種子產(chǎn)業(yè)用來評定菜豆種

子出售前的出苗率。

已在歐洲、澳大利亞、新西蘭和北美已得到廣泛地使用。電導(dǎo)率測定作為一個(gè)快速、客觀的

活力測定方法，特別易用于大多數(shù)種子檢驗(yàn)室檢測，因?yàn)樵擁?xiàng)目的儀器投入較少、人員培訓(xùn)

簡單。

有幾種因素影響電導(dǎo)率結(jié)果，

第一種因素是大粒豆類種皮的物理損傷導(dǎo)致水分快速吸收，造成機(jī)械損傷和高水平的電解質(zhì)

滲漏，因此，某些研究者建議除去物理損傷種子。然而機(jī)械損傷種子的肉眼觀察是主觀的、

不準(zhǔn)確的，這些種子結(jié)果的例外會導(dǎo)致種子活力的過高估計(jì)。只能按照ISTA規(guī)定從樣品中

托取凈種子，這樣才能提供不偏樣品供檢驗(yàn)。

第二種因素是種子大小，這涉及到在測定前通過稱重而消失，并將結(jié)果表示為|jScm-lg-l。

第三種因素是原始種子水分，在測定前測定種子水分，調(diào)節(jié)種子水分不在10%?14%的種子

批，可以消除這個(gè)問題。

第四種是處理種子的影響，用大豆種子的研究表明，并不支持從處理后的種子去除殺菌劑，

但是其他種子處理對電導(dǎo)率的影響并不知道，如果可能，應(yīng)測定未處理的種子。

三、儀器和藥品

1.電導(dǎo)儀

可用直流電或交流電直接讀數(shù)的電導(dǎo)儀，電極常數(shù)必須達(dá)到1。（電極常數(shù)是指電極板之間的

有效距離與極板的面積之比）。有關(guān)具體品牌、型號的電導(dǎo)儀可向ISTA秘書處咨詢。

2.水

最好使用去離子水，也可使用蒸錦水。凡使用的水必須進(jìn)行電導(dǎo)率測定。在20℃下，去離子

水電導(dǎo)率不超過2口Scm-1；蒸餌水電導(dǎo)率不超過511scm-K使用前水應(yīng)保持在（20土

1）℃o

第四節(jié)電導(dǎo)率測定

3.燒杯或容器

為了保證有適宜的水浸沒種子和電極，燒杯和容器的容量為500mL,基部寬80mm±5mm。

容器使用前必須沖洗干凈，并用去離子水或蒸儲水沖洗兩次。

4.發(fā)芽箱、培養(yǎng)箱或發(fā)芽室

滿足保持(20±1)。。的恒溫。

5.烘箱

滿足溫度達(dá)到130c或者103ro

6.天平

感量達(dá)到0.01g。

7.鋁盒(供種子水分測定用)。

第四節(jié)電導(dǎo)率測定

四、程序

1.預(yù)備試驗(yàn)

(1)校正電極

(2)核查對照種子批的電導(dǎo)率

(3)檢查儀器清潔度

(4)檢查溫度

第四節(jié)電導(dǎo)率測定

2.測定每一種子批的程序

(1)檢查種子水分

如果不知道測定種子批的水分，應(yīng)采用烘箱法測定種子批的水分。對于水分低于10%或高于

14%的種子批，應(yīng)在浸種前將其水分調(diào)至10%?14%。

第四節(jié)電導(dǎo)率測定

(2)準(zhǔn)備燒杯

準(zhǔn)確量取250mL去離子水或蒸儲水，放入500mL的燒杯中。每種子批測定4個(gè)燒杯。含水

的所有燒杯應(yīng)用鋁箔或薄膜蓋子蓋好，以防止污染。在盛放種子前，先在20C下平衡24h。

為了控制水的質(zhì)量，每次測定準(zhǔn)備兩個(gè)只含去離子水或蒸得水的對照杯。

(3)準(zhǔn)備試樣

隨機(jī)從種子批凈種子部分?jǐn)?shù)取每個(gè)各為50粒的四個(gè)次級樣品，稱重至0.01g。

第四節(jié)電導(dǎo)率測定

(4)浸種

已稱重的試樣放入已盛有250mL去離子水的500mL、先粘有標(biāo)鑒的容器中。輕輕搖晃容器，

確保所有種子完全浸沒。所有容器用鋁箔或薄膜蓋蓋好，在(20±1)°C放置24h。在同一時(shí)

間內(nèi)測定的燒杯的數(shù)量不能太多，不能超過電導(dǎo)率評定的數(shù)目，通常為10?12個(gè)容器，一批

測定一般不超過15mino

(5)準(zhǔn)備電導(dǎo)儀

試驗(yàn)前先啟動(dòng)電導(dǎo)儀至少15mino每次測定同時(shí)用去離子水或蒸儲水填滿容器杯400?600mL

沖洗電極，作為沖洗水，去離子水電導(dǎo)率不應(yīng)超過2口Scm—1或蒸儲水不超過5uScm—1。

第四節(jié)電導(dǎo)率測定

(6)測定溶液電導(dǎo)率

24h(±15min)的浸種結(jié)束后，應(yīng)馬上測定溶液的電導(dǎo)率。盛有種子的燒杯應(yīng)輕微搖晃10?

15s,移去鋁箱或薄膜蓋，電極插入不要過濾的溶液，注意不要把電極放在種子上。測定幾次

直到獲得一個(gè)穩(wěn)定值。測定一個(gè)試樣重復(fù)后，用去離子水或蒸儲水沖洗電極兩次，用濾紙吸

干，再測定下一個(gè)試樣重復(fù)。如果在測定期間觀察到硬實(shí)，測定電導(dǎo)率后應(yīng)將其除去，記數(shù)，

干燥表面，稱量，并從50粒種子樣品重量中減去其重量。

第四節(jié)電導(dǎo)率測定

(7)扣除試驗(yàn)用水的電導(dǎo)率

在(20±1)℃測定對照杯的去離子水或蒸偏水的電導(dǎo)率，比較該數(shù)與日常的水源記錄(如果

讀數(shù)高于日常水源讀數(shù)，表明電極清潔度有問題，應(yīng)重新清洗電極，重新測定另一對照杯)。

每一重復(fù)應(yīng)從上述容器的測定值中減去對照杯中的測定值(燒杯的背景值)。

處理種子的送驗(yàn)樣品可能已經(jīng)殺菌劑處理。目前沒有證據(jù)表明種子殺菌劑處理會影響電導(dǎo)率

結(jié)果，但是沒有對所有的商用種子處理評定過。但是，不同純度的商用殺菌劑中的某些含有

添加劑會嚴(yán)重改變電導(dǎo)結(jié)果。所以，對于經(jīng)過殺菌劑處理的種子應(yīng)特別小心，特別是使用新

的殺菌劑。

(8)結(jié)果計(jì)算與表示

根據(jù)下列公式計(jì)算每一重復(fù)的種子重量的每克電導(dǎo)率：

4次重復(fù)間平均值為種子批的結(jié)果。

四次重復(fù)間容許差距為5口Scm—lg—1(最低和最高的差)，如超過，應(yīng)重做4次重復(fù)。

第四節(jié)電導(dǎo)率測定

(9)結(jié)果說明解釋

根據(jù)電導(dǎo)率測定結(jié)果，即用活力水平對種子批進(jìn)行排列。英國已在豌豆上應(yīng)用多年，總結(jié)出

表15-3的經(jīng)驗(yàn)。

表15-3豌豆種子電導(dǎo)率值的解釋

第五節(jié)種子活力的其他測定方法

一、幼苗生長特性測定

幼苗生長特性測定主要包括幼苗生長測定、幼苗評定測定、種子發(fā)芽速率、發(fā)芽指數(shù)和活力

指數(shù)測定等方法。

這類測定方法是根據(jù)高活力種子幼苗生長快、幼苗健壯、生長正常、幼苗株大和重量較重等

生長特性，而低活力種子則相反，借此來評定種子活力水平的差異。

1.幼苗生長測定

幼苗生長測定方法適用于具有直立胚芽和胚根的禾谷類和蔬菜類作物種子。其測定方法是取

試樣4份，各25粒。各取發(fā)芽紙3張(30cmX45cm),取其中1張畫線，先在紙長軸中心畫一

條橫線作為中心線，距頂端15cm,并在其上、下每隔1cm畫平行線。在中心線上平均間隔

畫25個(gè)點(diǎn)，在每點(diǎn)上放一粒種子，胚根端朝向紙卷底部，再蓋兩層濕潤發(fā)芽紙，紙的基部向

上折疊2cm,將紙松卷成4cm直徑的筒狀，用橡皮筋扎好，將紙卷豎放在容器內(nèi)，上用塑料

袋覆蓋，置于黑暗恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)7d,溫度為正常發(fā)芽所規(guī)定的溫度，然后統(tǒng)計(jì)苗長；計(jì)算每

對平行線之間的胚芽尖端的數(shù)目；按下列公式求出幼苗平均長度。

式中：L為胚芽平均長度(cm)；

n為每對平行線之間的胚芽尖端數(shù)；

x為每對平行線之間中點(diǎn)至中心線之間的距離(cm)；

N為種子試樣粒數(shù)。

發(fā)芽試驗(yàn)中不正常幼苗不統(tǒng)計(jì)長度。

第五節(jié)種子活力的其他測定方法

直根作物種子可用直立玻板發(fā)芽法測定其幼根長度：各取濾紙2張，其中1張劃一條中線，

用水濕潤貼在玻板上。將25粒種子等距排列在中心線上，將另一張濾紙濕潤后蓋上，將玻板

以70°角直立置于水盤內(nèi)，放在25℃黑暗下培養(yǎng)3d后測量根的長度，計(jì)算平均值。據(jù)報(bào)道

葛苣田間出苗率與其苣種子發(fā)芽3d的根長密切相關(guān)。

第五節(jié)種子活力的其他測定方法

2.幼苗評定試驗(yàn)

幼苗評定試驗(yàn)(seedlingevaluationtest)適用于大粒豆類種子。這些種子不能用幼苗長度表示活

力，因其細(xì)弱苗可達(dá)相當(dāng)?shù)拈L度，可采用標(biāo)準(zhǔn)發(fā)芽方法，幼苗評定時(shí)分成不同等級。例如，

豌豆種子試驗(yàn)方法如下：取試樣4份，各50粒。將1?2mm的粗砂清洗消毒后加水，使保持

最大持水力約15%(W/W),再放入4個(gè)容積為15cmX20cmXI0cm的聚乙烯盒中，移于生長

箱或培養(yǎng)箱中，于20℃、相對濕度95%-98%的條件下，光照12h、以光強(qiáng)度120001X培養(yǎng)，

經(jīng)6d后取出幼苗，洗滌干凈，進(jìn)行幼苗評定，先將種子分成發(fā)芽和不發(fā)芽兩類，再將幼苗分

成3級：

(1)健壯幼苗胚芽強(qiáng)壯、深綠色。初生根強(qiáng)壯或初生根少而有大量次生根。

(2)細(xì)弱幼苗胚芽短或細(xì)長，初生根少或較弱，但屬正常幼苗。

(3)不正常幼苗根或芽殘缺或根芽破裂，苗色褪綠等。第一級為高活力種子，第二級為低活

力而具有發(fā)芽力的種子，將第一、二級相加即為種子發(fā)芽率。

3.發(fā)芽速率測定

發(fā)芽速率測定(germinationratetest)是一種最古老和最簡單的方法，適用于各種作物的活力測

定。其方法是采用標(biāo)準(zhǔn)發(fā)芽試驗(yàn)，每日記載正常發(fā)芽種子數(shù)(牧草、樹木等種子發(fā)芽緩慢，可

隔日或隔數(shù)日記載)，然后按公式計(jì)算各種與發(fā)芽速度有關(guān)的指標(biāo)。(1)初期發(fā)芽率測定：許

多作物種子如小麥、大豆、玉米等，采用計(jì)算3d發(fā)芽率。也可采用計(jì)算發(fā)芽勢或初次計(jì)算發(fā)

芽率O

⑵發(fā)芽達(dá)90%所需天數(shù)或達(dá)50%所需天數(shù)測定：達(dá)50%所需天數(shù)測定可適用于發(fā)芽率較

低的種子樣品。

(3)發(fā)芽指數(shù)測定：

式中：Dt為相應(yīng)的發(fā)芽天數(shù)，Gt為與Dt相對應(yīng)的不同時(shí)間(t天)的發(fā)芽數(shù)。X為總和。

測定結(jié)果GI值與活力成正相關(guān)關(guān)系。

(4)活力指數(shù)測定

式中：S為一定時(shí)期內(nèi)幼苗長度(cm)或幼苗重量(g),GI為發(fā)芽指數(shù)。

⑸簡易活力指數(shù)測定：

此法適用于發(fā)芽快速的作物種子，如油菜、黃麻等。

式中：G為發(fā)芽率，S為幼苗長度(cm)或重量(g)。

(6)平均發(fā)芽天數(shù)(MGT)的測定：

式中：G,Dt與發(fā)芽指數(shù)公式中相同。

(7)相對發(fā)芽率測定此法適用于發(fā)芽緩慢的樹木或牧草種子。先計(jì)算峰值(PV),然后計(jì)算平

均發(fā)芽率(MDG),最后計(jì)算發(fā)芽值(GV)

第五節(jié)種子活力的其他測定方法

幼苗生長和幼苗評定試驗(yàn)以及發(fā)芽速度的測定，均采用標(biāo)準(zhǔn)發(fā)芽試驗(yàn)，必須嚴(yán)格控制發(fā)芽溫

度、濕度和光照等條件，否則容易產(chǎn)生誤差，同時(shí)測定人員必須具有評定幼苗的經(jīng)驗(yàn)，才能

獲得準(zhǔn)確結(jié)果。

第五節(jié)種子活力的其他測定方法

二、抗冷測定

抗冷測定(coldtest)適用于春播喜溫作物種子，如玉米、棉花、大豆、豌豆等。而秋播作物種

子如大麥、小麥、油菜等種子，在發(fā)芽時(shí)具有忍耐低溫的能力，故不宜應(yīng)用此法測定活力。

抗冷測定通常采用土壤卷法和土壤盒法，是將種子置于低溫和潮濕的土壤中，經(jīng)一定時(shí)間處

理后移至適宜溫度處生長，模擬早春田間逆境條件，觀察和評定種子發(fā)芽成苗的能力。

第五節(jié)種子活力的其他測定方法

1.土壤卷法

取面積為30cmX60cm的發(fā)芽紙3張，各取種子50粒，4次重復(fù)。每一重復(fù)的種子排放在雙

層的、經(jīng)充分吸濕并在10℃下預(yù)冷的紙巾上，種子在距紙巾頂邊6cm和12cm處排成兩行，

每行25粒種子，然后覆蓋土壤（從所需測定作物的地里取土），保證所有種子直接與土壤接觸。

再用一張吸濕的發(fā)芽紙覆蓋在上面，并將播有種子和土壤的發(fā)芽紙松卷成筒狀，豎放在內(nèi)有

金屬線分隔器的塑料桶或其他容器內(nèi)。保證紙巾卷互相不接觸。在塑料桶或容器頂部套蓋上

塑料袋防止水分的散失，將容器置于10℃（±0.5）的低溫黑暗下處理7d,再移至25c的黑暗

條件下生長5d,按照標(biāo)準(zhǔn)發(fā)芽試驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)評價(jià)幼苗，也可以將幼苗按強(qiáng)壯、細(xì)弱等進(jìn)行分類。

第五節(jié)種子活力的其他測定方法

2.土壤盒法

各取玉米種子或大豆種子50粒，重復(fù)4次，播于裝有3?4cm深的土壤盒內(nèi)，然后蓋土2cm,

在10℃的低溫下處理7d后，移入適宜溫度下培養(yǎng)。玉米、水稻于30℃條件下經(jīng)3d；大豆、

豌豆于25c條件下經(jīng)4d；計(jì)算發(fā)芽率，凡正常幼苗作為高活力種子計(jì)算。此法手續(xù)簡單，但

所占空間較大。

第五節(jié)種子活力的其他測定方法

三、低溫發(fā)芽試驗(yàn)

低溫發(fā)芽試驗(yàn)（coolgerminationtest）主要適用于棉花，也可用于高粱、黃瓜和水稻等種子。棉

花早春播種常遇低溫，會引起胚根損傷，下胚軸生長速率降低，棉花發(fā)芽最低溫度一般為15℃。

本法采用18℃低溫模擬田間低溫條件，其試驗(yàn)方法與標(biāo)準(zhǔn)發(fā)芽試驗(yàn)基本相同。種子置砂床后

于18℃、黑暗條件下發(fā)芽，培養(yǎng)6d（硫酸去絨）或7d（未去短絨），檢查幼苗生長，凡苗高達(dá)

4cm或以上的即為高活力種子。

第五節(jié)種子活力的其他測定方法

低溫發(fā)芽試驗(yàn)法也可用紙巾卷發(fā)芽，用30cmX45cm的濕潤發(fā)芽紙一張，置放50粒種子（類

似于紙間發(fā)芽），上蓋--張濕潤的發(fā)芽紙，將兩層紙松卷成筒狀，筒直徑約為4cm,用橡皮筋

扎住筒兩端，斜放在桶或盒內(nèi)，容器上頂留有10cm的空間，用塑料袋套住容器，用橡皮筋

扎緊，將容器置于18c黑暗條件下處理7d,到時(shí)間后將種子分成正常幼苗和不正常幼苗，計(jì)

算正常幼苗是從根尖到子葉著生點(diǎn)的距離，凡達(dá)到4cm或以上的作為高活力種子。

四、控制劣變測定

五、復(fù)合逆境測定

復(fù)合逆境測定是將種子進(jìn)行一種以上的逆境脅迫處理，然后轉(zhuǎn)入適宜條件下進(jìn)行發(fā)芽。

此類方法評定活力的指標(biāo)基于一種以上的活力測定原理，因而能更準(zhǔn)確的反映種子活力水平,

試驗(yàn)結(jié)果與田間出苗率相關(guān)極顯著，且重演性較好。

目前，此法主要用于玉米、小麥種子，如將加速老化處理的種子再進(jìn)行低溫處理，然后進(jìn)行

適溫發(fā)芽，統(tǒng)計(jì)正常幼苗（％）,即加速老化試驗(yàn)與低溫處理試驗(yàn)相結(jié)合測定種子活力。玉米

種子的飽和抗冷測定，是將種子置于水分飽和的土壤床中進(jìn)行低溫處理試驗(yàn)，屬于冷浸試驗(yàn)

和低溫處理試驗(yàn)二種原理相結(jié)合的復(fù)合逆境測定。

六、希爾特納試驗(yàn)

七、解剖圖形的四哇測定

八、糊粉層四哇測定

九、TTCH含量測定

十、ATP含量測定

第十五章

第十六章品種真實(shí)性及品種純度的室內(nèi)測定

品種真實(shí)性（Cultivargenuineness）和品種純度（Varietalpurity）是構(gòu)成種子質(zhì)量的兩個(gè)重要

指標(biāo)，是種子質(zhì)量評價(jià)的重要依據(jù)。這兩個(gè)指標(biāo)都與品種的遺傳基礎(chǔ)有關(guān)，因此都屬于品種

的遺傳品質(zhì)。

第一節(jié)品種純度室內(nèi)測定概述

-、品種純度的含義及意義

品種純度檢驗(yàn)應(yīng)包括兩方面內(nèi)容，即品種真實(shí)性和品種純度。

品種真實(shí)性是指一批種子所屬品種、種或?qū)倥c文件描述(description)是否相符。如果品種真

實(shí)性有問題，品種純度檢驗(yàn)就毫無意義了。

品種純度是指品種個(gè)體與個(gè)體之間在特征特性方面典型一致的程度，用本品種的種子數(shù)(或

株、穗數(shù))占供檢驗(yàn)本作物樣品數(shù)的百分率表示。

第一節(jié)品種純度室內(nèi)測定概述

二、品種純度檢驗(yàn)的方法分類

品種純度檢驗(yàn)的方法很多，在實(shí)際應(yīng)用中，理想的測定方法要達(dá)到4個(gè)要求：

測定結(jié)果在不同實(shí)驗(yàn)室或同一實(shí)驗(yàn)室能重演；

方法應(yīng)簡單易行；

省時(shí)快速；

成本低廉。

第…節(jié)品種純度室內(nèi)測定概述

第一大類形態(tài)鑒定又分為籽粒形態(tài)測定、種苗形態(tài)測定和植株形態(tài)測定。

籽粒形態(tài)測定雖簡單快速，對于形態(tài)性狀豐富的，可以作為鑒定前的簡單分類，便于其他方

法的利用。種苗形態(tài)測定，適合于幼苗形態(tài)性狀豐富的作物，如十字花科、豆科等雙子葉植

物，種苗測定需要的時(shí)間一般在7?30天，因苗期所依據(jù)的性狀有限，所以測定結(jié)果不太準(zhǔn)

確。植株形態(tài)測定，依據(jù)的性狀較多，測定結(jié)果較準(zhǔn)確，如田間純度檢驗(yàn)和田間小區(qū)種植鑒

定都屬于植株形態(tài)測定，但植株形態(tài)測定需要時(shí)間較長，難以滿足在調(diào)種過程中快速測定的

需要。

第一節(jié)品種純度室內(nèi)測定概述

第二大類物理化學(xué)法鑒定，又分為物理的方法和化學(xué)方法。

物理方法如熒光鑒定法(fluorescencetest)等，這些方法區(qū)別品種的種類較少，難以滿足品

種純度準(zhǔn)確測定的要求。

化學(xué)方法(chemicalmethod)主要依據(jù)化學(xué)反應(yīng)所產(chǎn)生的顏色的差異區(qū)分不同品種，如苯酚

染色法(phenoltest)等。同物理法一樣，化學(xué)方法區(qū)別品種的種類較少，也難以對品種純度

準(zhǔn)確測定。但這類方法測定速度快，在實(shí)踐中有一定的參考價(jià)值。

第一節(jié)品種純度室內(nèi)測定概述

第三大類方法生理生化方法，是利用生理生化反應(yīng)和生理生化技術(shù)進(jìn)行品種純度測定。

這類方法中包括的技術(shù)較多，以生理生化反應(yīng)為基礎(chǔ)的有愈傷木酚染色法，光周期反應(yīng)鑒定

法，除草劑敏感性鑒定法等。這些方法鑒別品種的能力較低，因此，測定結(jié)果不太準(zhǔn)確。以

生理生化技術(shù)為基礎(chǔ)的方法有電泳法鑒定(electrophoresismethod)、色譜法鑒定

(chromatographicmethod)免疫技術(shù)鑒定(immunolgymethod)等。

色譜法技術(shù)含量較高，免疫技術(shù)需要大量技術(shù)開發(fā)研究，目前兩者難以在生產(chǎn)實(shí)際廣泛應(yīng)用。

電泳法相對技術(shù)較為簡單，依據(jù)蛋白質(zhì)或同工酶電泳，可以相對較準(zhǔn)確地測定品種純度，是

目前品種純度測定中較為快速準(zhǔn)確的方法。

第一節(jié)品種純度室內(nèi)測定概述

第四大類細(xì)胞學(xué)方法鑒定。

細(xì)胞學(xué)方法主要依據(jù)染色體數(shù)量和結(jié)構(gòu)變異、染色體帶型差異以及細(xì)胞形態(tài)的差異區(qū)分種及

品種，在品種純度測定中應(yīng)用價(jià)值不大。

第五大類分子生物學(xué)方法。分子生物學(xué)方法種類非常多，它是在DNA和RNA等分子水平上

鑒別不同品種。

目前在品種檢測中最常用的分子技術(shù)主要有RAPD技術(shù)(randomamplifiedpolymorphic

DNA),SSR技術(shù)(simplesequencerepeats,蘇爾為microsatelliteDNA),AFLP(amplified

fragmentlengthpolymorphism)以及RFLP技術(shù)(restrictionfragmentlengthpolymorphism)?分

子技術(shù)在品種純度測定和品種DNA指紋的制作方面具有廣泛的用途。一

第一節(jié)品種純度室內(nèi)測定概述

綜上所述，品種真實(shí)性和品種純度測定的方法非常多，但在生產(chǎn)實(shí)際中真正能廣泛應(yīng)用的方

法較少。本章將主要以國家和國際標(biāo)準(zhǔn)為依據(jù)，介紹在品種純度檢驗(yàn)中有著廣泛應(yīng)用價(jià)值的

方法。

三、室內(nèi)純度測定的基本程序

室內(nèi)純度測定的基本程序：從送驗(yàn)樣品中隨機(jī)數(shù)取一定數(shù)量的樣品，測定異品種種子或雜株

數(shù)，再計(jì)算樣品純度。

品種純度測定的送驗(yàn)樣品的最小重量應(yīng)符合表16-1的規(guī)定。樣品純度按下列公式計(jì)算：

有時(shí)需要將測定結(jié)果與規(guī)定值比較。測定的結(jié)果(x)是否符合國家種子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)值或合同、

標(biāo)簽值(a)要求可利用表16-2判別，如果|a-x|2容許差距，則說明不符合國家種子質(zhì)量

標(biāo)準(zhǔn)值或合同、標(biāo)簽值要求。表中的容許差距，可以通過下列公式計(jì)算：

式中：T為容許差距；p為標(biāo)準(zhǔn)或合同或標(biāo)簽值；q為100—p；n為樣品的粒數(shù)或株數(shù)。

表16-1品種純度測定的送驗(yàn)樣品重量

表16-2品種純度的容許差距(5%顯著水平的一尾測定)

第二節(jié)品種純度的形態(tài)測定

品種純度的形態(tài)測定是純度測定中最基本的方法，又可分為籽粒形態(tài)測定、種苗形態(tài)測定和

植株形態(tài)測定。因其依據(jù)的形態(tài)性狀的多少、差異大小和可靠性，而影響測定結(jié)果的可靠性。

在形態(tài)測定時(shí)主要從被檢品種的器官或部位的顏色、形狀、多少、大小等進(jìn)行區(qū)別。

第二節(jié)品種純度的形態(tài)測定

一、種子形態(tài)測定

籽粒形態(tài)測定特別適合于籽粒形態(tài)性狀豐富、籽粒較大的作物。在測定時(shí)特別應(yīng)注意因環(huán)境

影響易引起變異的籽粒性狀，同時(shí)該方法易受主觀因素的影響。這一技術(shù)可以與計(jì)算機(jī)識別

相結(jié)合對品種真實(shí)性和純度進(jìn)行快速測定，消除主觀影響(Chuang等，1990)。

第二節(jié)品種純度的形態(tài)測定

二、生長箱測定

(-)生長箱測定的應(yīng)用

生長箱測定可用于幼苗和植株形態(tài)測定。該方法可保證全部幼苗和植株都生長在同樣的條件

下，其品種形態(tài)特征的差異是遺傳基礎(chǔ)的表達(dá)。

生長箱測定，可采用兩種方法：第…種方法，給予幼苗加速生長發(fā)育的條件，可以鑒定如田

間植株一樣的許多性狀，而大大縮短測定時(shí)間。第二種方法，將種子或植株種植在特殊逆境

條件下，可對品種進(jìn)行逆境反應(yīng)差異的鑒定。

第二節(jié)品種純度的形態(tài)測定

當(dāng)進(jìn)行幼苗或植株的特別性狀鑒定時(shí)，盡量按推薦的生長條件進(jìn)行。如幼苗芽鞘、莖或下胚

軸色素鑒定時(shí):應(yīng)將幼苗種植在石英砂或惰性砂礫中，并用特定營養(yǎng)液澆灌。含有磷的土壤

營養(yǎng)將會影響幼苗花青素或紫色素的形成。強(qiáng)光照對花青素的發(fā)育是很重要的。當(dāng)進(jìn)行植株

的抽穗、開花、顏色的形成鑒定時(shí)，將植株放在推薦的光周期下。為了促進(jìn)花芽分化，有些

品種的植株必須每天暴露在特別長的黑暗中。同時(shí)，開花或抽穗測定要求較長的測定時(shí)間，

因此應(yīng)供應(yīng)適當(dāng)?shù)臓I養(yǎng)，確保鑒定植株的健康生長。

第二節(jié)品種純度的形態(tài)測定

應(yīng)準(zhǔn)備適當(dāng)?shù)膶φ諛悠?，以便供檢樣品的性狀或反應(yīng)與對照樣品進(jìn)行比較。同其他方法一樣，

生長箱測定法也有其局限性。有些性狀，如花的顏色、幼苗色素的差異是質(zhì)量性狀，既可用

于真實(shí)性的鑒定，也可用于鑒定異型株；而株高、穗數(shù)等數(shù)量性狀的測定只能用于真實(shí)性鑒

定，不能用于鑒定異型株。

第二節(jié)品種純度的形態(tài)測定

(二)生長箱測定的程序

1.種植

(1)培養(yǎng)基質(zhì)為鑒定下胚軸、芽鞘、苗端的花青素或紫色素的發(fā)育，所有樣品都應(yīng)種植在

無雜質(zhì)的砂床里。用于除草劑賽克津敏感性測定的幼苗，也應(yīng)種植在惰性砂床里。

為鑒定花色、葉片特征，并且從播種至抽穗或開花需要較長時(shí)間的樣品，應(yīng)播種在惰性砂床

里或灌溉