2024-2025學(xué)年高中生物第一部分微生物的利用實(shí)驗(yàn)1大腸桿菌的培養(yǎng)和分離學(xué)案浙科版選修1

PAGEPAGE1試驗(yàn)1大腸桿菌的培育和分別[學(xué)考報(bào)告]學(xué)問(wèn)內(nèi)容考試屬性考情解讀大腸桿菌的培育和分別加試1.進(jìn)行大腸桿菌的擴(kuò)增，利用液體培育基進(jìn)行細(xì)菌培育的操作。2.進(jìn)行大腸桿菌的分別，用固體平面培育基進(jìn)行細(xì)菌的劃線培育。3.說(shuō)明大腸桿菌培育的條件和試驗(yàn)原理一、大腸桿菌1．大腸桿菌是革蘭氏陰性、兼性厭氧的腸道桿菌。2．在腸道中，大腸桿菌一般對(duì)人無(wú)害，但也有一些菌株可以侵襲腸黏膜并產(chǎn)生毒素，任何大腸桿菌假如進(jìn)入人的泌尿系統(tǒng)，都會(huì)對(duì)人體產(chǎn)生危害。3．大腸桿菌是基因工程技術(shù)中被廣泛采納的工具。二、試驗(yàn)內(nèi)容1．本試驗(yàn)的內(nèi)容是將大腸桿菌擴(kuò)大培育和劃線分別。分別后，一個(gè)菌體便會(huì)形成一個(gè)菌落，這是消退污染雜菌的通用方法，也是用于篩選高表達(dá)量菌株的最簡(jiǎn)便方法之一。2．本試驗(yàn)用LB液體培育基(通用的細(xì)菌培育基)擴(kuò)大培育大腸桿菌。培育后再在LB固體平面培育基上劃線進(jìn)行分別，隨后培育基上便會(huì)形成一個(gè)個(gè)單獨(dú)的菌落。三、細(xì)菌的培育和分別1．細(xì)菌以分裂的方式繁殖，分裂速度很快，約20分鐘分裂一次。人們?cè)谂嘤?xì)菌時(shí)，一般用接種環(huán)轉(zhuǎn)移帶菌的培育物。接種時(shí)，先將接種環(huán)在明火上燒紅后冷卻，再操作。2．細(xì)菌的分別(1)劃線分別法：在液體培育基中，只要接種后培育8h，每毫升培育基中就有幾億個(gè)細(xì)菌。可用接種環(huán)蘸菌液在含有固體培育基的培育皿平板上劃線，在劃線過(guò)程中接種環(huán)上的菌液漸漸削減，因此，劃線到最終，可使細(xì)菌間的距離加大。在固體培育基培育10～20h后，可由一個(gè)細(xì)菌產(chǎn)生單菌落，菌落不會(huì)重疊。假如再將每個(gè)菌落分別接種至含有固體培育基的試管斜面上，在斜面上劃線，則每個(gè)斜面的菌群就是由一個(gè)細(xì)菌產(chǎn)生的后代。這種方法也可用于分別細(xì)菌，將污染的雜菌除去。(2)涂布分別法：先將培育的菌液稀釋?zhuān)ǔＯ♂?0－5～10－7倍，然后取0.1mL稀釋度不同的菌液，加在培育皿的固體培育基上，用玻璃刮刀涂布在培育基平面上進(jìn)行培育。在適當(dāng)?shù)南♂尪认?，可產(chǎn)生相互分開(kāi)的菌落。通常每個(gè)培育皿有20個(gè)以?xún)?nèi)的單菌落最為合適。將每個(gè)菌落分別接種在斜面上擴(kuò)增培育后，再做功能性試驗(yàn)。(3)細(xì)菌的兩種分別法各有優(yōu)點(diǎn)，都可采納。劃線分別法，方法簡(jiǎn)潔；涂布分別法，單菌落更易分開(kāi)，但操作困難些。四、滅菌操作1．各種器皿必需是無(wú)菌的：試驗(yàn)用具用牛皮紙或報(bào)紙包好，全部容器都先封口，然后進(jìn)行高壓蒸汽滅菌(1kg/cm2壓力、121℃、15min)處理，并在超凈臺(tái)上運(yùn)用。留意：試驗(yàn)中所需棉花不能用脫脂棉，因?yàn)槊撝抟孜?．各種培育基必需是無(wú)菌的。3．細(xì)菌轉(zhuǎn)移過(guò)程要避開(kāi)雜菌污染和菌種外泄。留意：培育皿需倒置，防止冷凝后形成的水珠滴落在培育基上污染培育基，沖散菌落。五、大腸桿菌培育與分別的試驗(yàn)步驟1．在兩個(gè)250mL三角瓶中分別裝入50mLLB液體培育基和50mLLB固體培育基，加上封口膜。將培育皿包好，連同培育基一同滅菌15min。2．滅菌后待培育基冷卻至60℃時(shí)，關(guān)閉紫外燈，點(diǎn)燃酒精燈，并用酒精棉球擦拭桌面和試驗(yàn)者的手。在酒精燈火焰旁用右手持盛有固體培育基的三角瓶，左手拿培育皿，并將培育基倒入4個(gè)培育皿中，將培育皿置于水平位置上，待其凝固。3．?dāng)U大培育先將接種環(huán)在酒精燈火焰上燒紅，再深化到大腸桿菌斜面，使環(huán)冷卻后，取菌體，并將菌體放入三角瓶液體培育基中，封瓶后在37℃每分鐘200轉(zhuǎn)的搖床上振蕩培育12h。4．劃線分別用在酒精燈火焰上灼燒后的接種環(huán)深化到在搖床上培育后的菌液中，然后在固體培育基的平板上連續(xù)劃線，接種環(huán)需蘸菌液1次，劃線后蓋好皿蓋，將培育皿倒置，在37℃恒溫培育箱中培育12～24h后，可在劃線的末端出現(xiàn)不連續(xù)的單個(gè)菌落，表明菌已被分別。5．在無(wú)菌操作下將單菌落用接種環(huán)取出，再用劃線法接種在斜面上，37℃培育24h后，置于4℃冰箱中保存。1．如何操作才可以盡量避開(kāi)被雜菌污染？提示：(1)膽大心細(xì)，操作快捷；(2)留意滅菌操作原則，滅菌徹底，降低環(huán)境污染概率；(3)留意微生物生長(zhǎng)條件，如pH、滲透壓、溫度等。細(xì)菌喜堿，喜蛋白質(zhì)，喜37℃；霉菌喜酸，喜糖，喜25～30℃。2．在培育后如何推斷是否有雜菌污染？提示：(1)從菌落的形態(tài)看，是否潮濕、透亮、黏稠、顏色等，是區(qū)分細(xì)菌、酵母菌、放線菌和霉菌關(guān)鍵指標(biāo)；(2)顯微鏡視察其形態(tài)、大小，看是否有菌絲、孢子、芽孢，是區(qū)分細(xì)菌、酵母菌、放線菌和霉菌關(guān)鍵指標(biāo)；(3)上述方法較難區(qū)分同類(lèi)的不同物種，需借助化學(xué)和進(jìn)一步的形態(tài)視察，如用革蘭氏染色法等。3．進(jìn)行恒溫培育時(shí)為什么要將培育皿倒置？提示：平板冷凝后，皿蓋上會(huì)凝聚水珠，凝固后的培育基表面的濕度也比較大，將平板倒置，既可以使培育基表面的水分更好地?fù)]發(fā)，又可以防止皿蓋上的水珠落入培育基，造成污染。4．試驗(yàn)完成后，接種過(guò)細(xì)菌的器皿應(yīng)如何處理？提示：全部接觸過(guò)細(xì)菌的器皿都要先高壓蒸汽滅菌后再洗滌(特殊是培育基)；運(yùn)用后的廢棄物也要高壓蒸汽滅菌后再拋棄。5．假如分別的是轉(zhuǎn)基因的大腸桿菌，如何保證不被一般的大腸桿菌所污染？提示：轉(zhuǎn)基因用的質(zhì)粒不是細(xì)菌中原有的，而是經(jīng)過(guò)改造的，通常加入了抗性基因的DNA序列，所以可用含有相應(yīng)抗生素的培育基對(duì)菌體進(jìn)行培育。微生物培育的基本條件1．培育基(1)含義：人們依據(jù)微生物對(duì)養(yǎng)分物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長(zhǎng)繁殖的養(yǎng)分基質(zhì)。(2)種類(lèi)劃分標(biāo)準(zhǔn)培育基種類(lèi)特點(diǎn)用途物理液體培育基不加凝固劑工業(yè)生產(chǎn)性質(zhì)半固體培育基加凝固劑，如瓊脂視察微生物的運(yùn)動(dòng)、分類(lèi)、鑒定固體培育基微生物分別、鑒定、活菌計(jì)數(shù)、保藏菌種用途選擇培育基培育基中加入某種化學(xué)物質(zhì)，以抑制不須要的微生物的生長(zhǎng)，促進(jìn)所須要的微生物的生長(zhǎng)培育、分別出特定微生物鑒別培育基依據(jù)微生物的代謝特點(diǎn)，在培育基中加入某種指示劑或化學(xué)藥品鑒別不同種類(lèi)的微生物(3)成分：一般都含有水、碳源、氮源和無(wú)機(jī)鹽等最基本的物質(zhì)，有時(shí)還須要加入特殊的養(yǎng)分物質(zhì)。2．無(wú)菌技術(shù)(1)含義：無(wú)菌技術(shù)不僅能防止試驗(yàn)室的培育物被其他外來(lái)微生物污染，保持微生物的純培育，而且在分別、轉(zhuǎn)接時(shí)亦能防止其他微生物污染。(2)無(wú)菌操作①對(duì)試驗(yàn)空間、操作臺(tái)可用紫外線或酒精消毒，操作者的手用酒精消毒。②試驗(yàn)用的培育器皿和培育基一般用高壓蒸汽滅菌法滅菌，接種環(huán)用灼燒方法滅菌。③為避開(kāi)四周環(huán)境中微生物的污染，試驗(yàn)操作應(yīng)在酒精燈火焰旁邊進(jìn)行。④試驗(yàn)操作時(shí)應(yīng)避開(kāi)已經(jīng)滅菌處理的材料用具與四周的物品相接觸。(1)不同種類(lèi)微生物須要的培育基不同，但各種培育基配制完成后均需嚴(yán)格滅菌。(2)培育基滅菌通常采納高壓蒸汽滅菌法，但假如培育基中含有葡萄糖，為防止葡萄糖分解碳化，要用500g/cm2壓力(90℃以上)滅菌30min；有些不能加熱滅菌的化合物，如尿素等只能用G6玻璃砂漏斗過(guò)濾。(3)配制固體培育基時(shí)，須要添加凝固劑，如瓊脂，但凝固劑不止瓊脂一種。1．下列有關(guān)微生物培育條件的敘述，不正確的是()A．分別微生物常用固體培育基，擴(kuò)大培育常用液體培育基B．“細(xì)菌喜葷，霉菌喜素”，培育基中成分的含量和配比因培育物而異C．培育基的滅菌均采納高壓蒸汽滅菌法，即在121℃(1kg/cm2壓力)下滅菌15minD．制作固體培育基時(shí)經(jīng)常加入瓊脂解析：選C。培育基的滅菌通常是采納高壓蒸汽滅菌法，但因培育基的成分而異。如培育基中有葡萄糖，高壓蒸汽條件下會(huì)導(dǎo)致葡萄糖分解碳化，而采納500g/cm2壓力滅菌30min。2．細(xì)菌培育過(guò)程中分別采納了高壓蒸汽、用酒精棉球擦拭、火焰灼燒等幾種不同的處理，這些方法依次用于殺滅哪些部位的雜菌()A．接種環(huán)、手、培育基 B．高壓鍋、手、接種環(huán)C．培育基、手、接種環(huán) D．接種環(huán)、手、高壓鍋解析：選C。高壓蒸汽滅菌鍋是滅菌的一個(gè)設(shè)備，通常用于培育基的滅菌。用酒精擦拭雙手是消毒的一種方法。火焰灼燒，可以快速?gòu)氐椎販缇m用于微生物接種工具的滅菌，如接種環(huán)。eq\a\vs4\al()消毒和滅菌的比較項(xiàng)目條件結(jié)果常用方法應(yīng)用范圍消毒較為溫柔的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物煮沸消毒法日常用品紫外線消毒法接種室、超凈臺(tái)化學(xué)藥劑消毒法用酒精擦拭雙手，用氯氣消毒水源滅菌劇烈的理化因素殺死物體內(nèi)外全部的微生物，包括芽孢和孢子灼燒滅菌法接種工具干熱滅菌法玻璃器皿、金屬工具高壓蒸汽滅菌法培育基及容器滅菌過(guò)濾滅菌不能加熱滅菌的化合物，要用G6玻璃砂漏斗過(guò)濾大腸桿菌的培育和分別1．LB培育基的制備(1)計(jì)算：依據(jù)LB培育基配方的比例，計(jì)算配制50mL的培育基時(shí)各種成分的用量。(2)稱(chēng)量：精確地稱(chēng)取各種成分。即：蛋白胨0.5g、酵母提取物0.25g、氯化鈉0.5g，加水50mL。(如配LB固體培育基，則再加1g瓊脂)(3)制備空白斜面：將LB液體培育基配好，加入瓊脂并加熱使之溶化后，通過(guò)玻璃漏斗加入試管中，每試管2mL，加棉塞并將試管捆在一起，上端加蓋一張牛皮紙，滅菌。滅菌后斜靠在平放的鉛筆上，冷卻后即成空白斜面培育基。2．進(jìn)行大腸桿菌培育與分別操作(1)滅菌eq\b\lc\\rc\}(\a\vs4\al\co1(250mL三角瓶甲→50mL,LB液體培育基,250mL三角瓶乙→50mL,LB固體培育基（尚未凝固）,牛皮紙包好的培育皿))eq\a\vs4\al(置于滅菌鍋1kg,壓力滅菌15min)(2)制備LB固體平面培育基——倒平板操作待培育基冷卻至60℃左右時(shí)，在酒精燈火焰旁邊倒平板。倒平板的詳細(xì)操作描述如下：(3)擴(kuò)大培育①左手持大腸桿菌斜面和有液體培育基的三角瓶，右手拿接種環(huán)并用無(wú)名指、小指夾住斜面的棉塞和三角瓶封口膜。②將接種環(huán)在火焰上燒紅，再深化到斜面，使其冷卻后取菌體。③將菌體放入三角瓶液體培育基中(將封口膜及斜面棉塞復(fù)原)。④三角瓶在37℃搖床振蕩培育12h。(4)劃線分別①取種在酒精燈火焰上灼燒接種環(huán)，將上述培育后的菌液打開(kāi)，接種環(huán)部分深化到菌液中取種。②平板劃線操作在LB固體培育基的平板上連續(xù)劃線(如下圖所示)，劃線后蓋好培育皿。③培育將上述劃線操作后的培育皿倒置放至37℃恒溫培育箱中培育12～24h，可看到劃線的末端出現(xiàn)不連續(xù)的單個(gè)菌落，表明菌已被分別。(5)菌種純化與保藏在無(wú)菌操作下，將單菌落用接種環(huán)取出，再用劃線法接種至斜面上，37℃培育24h后，4℃冰箱保存即可。劃線的目的是將聚集的菌種逐步稀釋分散到培育基表面，以期在連續(xù)劃線后，可以分別到由單個(gè)細(xì)胞繁殖而來(lái)的子細(xì)胞群體(菌落)，從而達(dá)到純化菌種的目的，為此，在劃線操作時(shí)，接種環(huán)只需在菌液中蘸取菌液一次，且作其次次及其以后的劃線操作時(shí)，須從上一次劃線的末端劃線——如此可使菌體數(shù)量隨劃線次數(shù)的增加而削減，并逐步分散，最終實(shí)現(xiàn)在平板上得到單菌落的目的。請(qǐng)結(jié)合圖示，回答下列有關(guān)大腸桿菌分別與純化的問(wèn)題：(1)稀釋用1mL無(wú)菌吸管吸取1mL大腸桿菌培育液，加入到盛有9mL________的大試管中，充分混勻，稀釋________倍；依據(jù)同樣的方法依次進(jìn)行稀釋制成10－1、10－2、10－3、10－4、10－5、10－6系列稀釋度的大腸桿菌稀釋液。(2)劃線或涂布①劃線分別法a．操作：在________旁，左手拿皿底，右手拿接種環(huán)，挑取大腸桿菌培育液在平板上劃線。b．劃線方法：________劃線和________劃線。c．平行劃線時(shí)，第一次劃線及每次劃線之間都要灼燒接種環(huán)，劃線結(jié)束后也要灼燒接種環(huán)，目的分別是什么？②涂布分別法a．操作：取0.1mL稀釋度不同的菌液，加在培育皿的固體培育基上，用玻璃刮刀涂布在培育基平面上，然后進(jìn)行培育。b．圖示：(3)培育：將接種的平板________于培育箱或溫室中37℃培育12～24h。答案：(1)無(wú)菌水10(2)a.酒精燈火焰b．平行連續(xù)c.第一次灼燒每次劃線之前灼燒劃線結(jié)束時(shí)灼燒目的殺死接種環(huán)上原有的微生物殺死上次劃線后接種環(huán)上殘留的菌種，使下次劃線的菌種干脆來(lái)源于上次劃線的末端，使每次劃線后菌種數(shù)目削減殺死接種環(huán)上殘存的菌種，避開(kāi)細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者(3)倒置eq\a\vs4\al()大腸桿菌培育和分別的留意事項(xiàng)①在倒平板過(guò)程中，不能將培育基濺在皿壁與皿蓋上，防止雜菌污染。②本試驗(yàn)需設(shè)置空白培育基在相同條件下一起培育，以確定是否有雜菌污染。③培育皿倒置的目的是防止皿蓋上的水珠落入培育基中難以形成單菌落。④試驗(yàn)操作的第一步灼燒接種環(huán)是為了避開(kāi)接種環(huán)上可能存在的微生物污染培育物；每次劃線前灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時(shí)，接種環(huán)上的菌種干脆來(lái)源于上次劃線的末端，從而通過(guò)劃線次數(shù)的增加，使每次劃線時(shí)菌種的數(shù)目漸漸削減，以便得到菌落。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能剛好殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避開(kāi)細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。一、選擇題eq\a\vs4\al(1.)有關(guān)大腸桿菌養(yǎng)分物質(zhì)的敘述中，正確的是()A．是碳源的物質(zhì)也可能同時(shí)是氮源B．凡碳源都供應(yīng)能量C．除水以外的無(wú)機(jī)物只供應(yīng)無(wú)機(jī)鹽D．無(wú)機(jī)氮源也能供應(yīng)能量解析：選A。是碳源的物質(zhì)也可能同時(shí)是氮源，如碳酸氫銨、氨基酸等，既能為微生物供應(yīng)碳源，同時(shí)也能供應(yīng)氮源；凡碳源未必能為大腸桿菌供應(yīng)能量，如無(wú)機(jī)的碳源；除水以外的無(wú)機(jī)物可能同時(shí)具有供應(yīng)無(wú)機(jī)鹽、碳源和氮源等多重作用；無(wú)機(jī)氮源對(duì)硝化細(xì)菌可以供應(yīng)能量，但是對(duì)大腸桿菌不能供應(yīng)能量。eq\a\vs4\al(2.)在光照下，將等細(xì)胞數(shù)量的衣藻和大腸桿菌分別接種到只含無(wú)機(jī)鹽的培育液中培育，結(jié)果是(虛線和實(shí)線分別表示大腸桿菌和衣藻的生長(zhǎng)曲線)()解析：選C。衣藻是低等植物，能利用無(wú)機(jī)鹽進(jìn)行光合作用自己合成有機(jī)物。大腸桿菌是異養(yǎng)生物，不能自己制造有機(jī)物只能攝取現(xiàn)成有機(jī)物，在只含無(wú)機(jī)鹽的培育基上幾乎不能生長(zhǎng)。eq\a\vs4\al(3.)培育基配制須要運(yùn)用滅菌和消毒技術(shù)，但兩者殲滅的微生物種類(lèi)和數(shù)量是不同的，下列哪一項(xiàng)能正確表示消毒結(jié)果和滅菌結(jié)果之間的關(guān)系()解析：選B。消毒的目的是殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物(不包括芽孢和孢子)，滅菌則是殺死物體內(nèi)外全部的微生物，包括孢子和芽孢。所以，一般來(lái)說(shuō)，滅菌的結(jié)果應(yīng)包含消毒的結(jié)果，故選B。eq\a\vs4\al(4.)下列所述環(huán)境條件下的微生物，能正常生長(zhǎng)繁殖的是()A．在缺乏生長(zhǎng)素的無(wú)氮培育基中的圓褐固氮菌B．在人體表皮擦傷部位的破傷風(fēng)桿菌C．在新配制的植物礦質(zhì)養(yǎng)分液中的酵母菌D．在滅菌后的動(dòng)物細(xì)胞培育液中的禽流感病毒解析：選A。圓褐固氮菌是自生固氮菌，能合成生長(zhǎng)素滿(mǎn)意自身生長(zhǎng)。破傷風(fēng)桿菌是嚴(yán)格厭氧生活的細(xì)菌，在表皮不能生長(zhǎng)。在新配制的植物礦質(zhì)養(yǎng)分液中由于缺乏有機(jī)物，因此不能培育酵母菌。禽流感病毒營(yíng)嚴(yán)格的胞內(nèi)寄生生活，在滅菌后的動(dòng)物細(xì)胞培育液中不能培育禽流感病毒，通常在活的雞胚細(xì)胞中進(jìn)行培育。eq\a\vs4\al(5.)有關(guān)涂布分別法的敘述，錯(cuò)誤的是()A．首先將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋B．然后將不同稀釋度的菌液分別涂布到瓊脂固體培育基的表面C．其核心是防止雜菌污染，保證培育液的純度D．結(jié)果都是在培育基表面形成單個(gè)的菌落解析：選D。涂布分別法是將菌液進(jìn)行一系列梯度稀釋?zhuān)缓髮⒉煌♂尡稊?shù)的菌液分別涂布到瓊脂固體培育基的表面，進(jìn)行培育。在稀釋倍數(shù)足夠高的菌液里，聚集在一起的微生物將被分散成單個(gè)細(xì)菌，從而能在培育基表面形成單個(gè)的菌落。eq\a\vs4\al(6.)下列關(guān)于微生物的培育和運(yùn)用的敘述，錯(cuò)誤的是()A．通過(guò)消毒不能殺死物體內(nèi)全部的微生物B．利用劃線分別法可以統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目C．劃線分別法和涂布分別法常用于微生物的接種D．微生物所用的培育基成分和植物組織培育用的培育基成分不同解析：選B。消毒是指殺死病原微生物，但不肯定能殺死細(xì)菌芽孢的方法。統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目要用涂布分別法，劃線分別法辦不到。不同的培育對(duì)象，所需的養(yǎng)分成分不同，培育基中加入的物質(zhì)也就不同。微生物接種最常見(jiàn)的方法是劃線分別法和涂布分別法。eq\a\vs4\al(7.)下圖是利用牛肉膏蛋白胨培育基培育和純化X細(xì)菌的部分操作步驟。有關(guān)敘述正確的是()A．步驟①中，倒好平板后應(yīng)馬上將其倒置，防止水蒸氣落在培育基上污染培育物B．步驟②接種環(huán)和試管口應(yīng)先在火焰上灼燒，接種環(huán)冷卻后再放入試管中蘸取菌液C．步驟③沿多個(gè)方向劃線，使接種物漸漸稀釋?zhuān)嘤罂梢罁?jù)出現(xiàn)的單個(gè)菌落計(jì)數(shù)D．步驟④是將培育皿放在恒溫培育箱中培育，一段時(shí)間后所得到的都是X細(xì)菌的菌落答案：Beq\a\vs4\al(8.)能解除培育基是否有雜菌污染的方法是()A．將未接種的培育基放在試驗(yàn)桌上培育 B．將未接種的培育基放在窗臺(tái)上培育C．將未接種的培育基放在恒溫箱中培育 D．將已接種的培育基放在恒溫箱中培育解析：選C。解除雜菌污染的常用手段是將未接種的培育基放在恒溫箱中培育。eq\a\vs4\al(9.)下列有關(guān)微生物的培育或純化的敘述，錯(cuò)誤的是()A．微生物在培育前要先對(duì)培育基進(jìn)行滅菌處理再接種B．培育液中溶氧量的變更會(huì)影響酵母菌的繁殖和代謝途徑C．大腸桿菌的純化培育包括培育基的配制和純化大腸桿菌兩個(gè)階段D．分別自養(yǎng)型微生物的方法是用纖維素作為唯一碳源的培育基解析：選D。微生物在培育前要先對(duì)培育基進(jìn)行滅菌處理，常用高壓蒸汽滅菌法滅菌，留意要冷卻后再接種。分別自養(yǎng)型微生物時(shí)，培育基中不用加碳源，利用空氣中的CO2即可。eq\a\vs4\al(10.)下列操作中，需用到接種環(huán)的是()A．平板劃線操作 B．梯度稀釋操作C．涂布平板操作 D．倒平板操作解析：選A。平板劃線操作需用到接種環(huán)。eq\a\vs4\al(11.)在涂布平板操作時(shí)錯(cuò)誤的是()A．將涂布器在酒精燈火焰上灼燒，直到燒紅B．取少量菌液滴加在培育基表面C．將沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃待酒精燃盡后，冷卻8～10s再用D．涂布時(shí)可轉(zhuǎn)動(dòng)培育皿，使涂布勻稱(chēng)答案：Aeq\a\vs4\al(12.)酵母菌培育液常含有肯定濃度的葡萄糖，但當(dāng)葡萄糖濃度過(guò)高時(shí)，反而抑制微生物的生長(zhǎng)，緣由是()A．碳源供應(yīng)太足夠B．葡萄糖不是酵母菌的原料C．變更了酵母菌培育液的pHD．細(xì)胞會(huì)發(fā)生質(zhì)壁分別解析：選D。當(dāng)培育基中葡萄糖的濃度上升時(shí)，會(huì)導(dǎo)致培育液的滲透壓上升，從而導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生質(zhì)壁分別。eq\a\vs4\al(13.)用涂布分別法來(lái)統(tǒng)計(jì)樣品中活菌的數(shù)目，其結(jié)果與實(shí)際值比()A．比實(shí)際值要高B．比實(shí)際值要低C．和實(shí)際值一樣D．比實(shí)際值可能高也可能低解析：選B。涂布分別法統(tǒng)計(jì)活菌的數(shù)目時(shí)，由于在培育的過(guò)程中有細(xì)菌會(huì)死亡，還有許多細(xì)菌聚集在一起，導(dǎo)致其菌落也聚集在一起，統(tǒng)計(jì)時(shí)只能算一個(gè)，這樣都會(huì)造成統(tǒng)計(jì)的結(jié)果比實(shí)際的值要低。eq\a\vs4\al(14.)將配制好的培育基進(jìn)行滅菌應(yīng)用()A．灼燒滅菌 B．高壓蒸汽滅菌C．干熱滅菌 D．煮沸滅菌解析：選B。對(duì)配制好的培育基的滅菌一般采納高壓蒸汽滅菌。eq\a\vs4\al(15.)某探討小組從有機(jī)廢水中分別微生物用于廢水處理。下列敘述正確的是()A．培育基分裝到培育皿后進(jìn)行滅菌B．轉(zhuǎn)換劃線角度后需灼燒接種環(huán)再進(jìn)行劃線C．接種后的培育皿須放在光照培育箱中培育D．培育過(guò)程中每隔一周視察一次解析：選B。培育基滅菌后再分裝到培育皿中；轉(zhuǎn)換劃線角度前要灼燒接種環(huán)，冷卻后再?gòu)纳洗蝿澗€的末端起先進(jìn)行劃線；接種后的培育皿需放在恒溫箱中進(jìn)行培育，一般每隔12h或24h視察一次。eq\a\vs4\al(16.)有關(guān)平板劃線操作的敘述，不正確的是()A．第一次灼燒接種環(huán)是為了避開(kāi)接種環(huán)上可能存在的微生物污染培育物B．每次劃線前，灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種C．在其次區(qū)域內(nèi)劃線時(shí)，接種環(huán)上的菌種干脆來(lái)源于菌液D．劃線結(jié)束后，灼燒接種環(huán)，能剛好殺死接種環(huán)上的菌種，避開(kāi)細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者解析：選C。第一次灼燒接種環(huán)，這是為了避開(kāi)接種環(huán)上可能存在的微生物對(duì)試驗(yàn)過(guò)程帶來(lái)污染。每次劃線前，灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結(jié)束后，接種環(huán)上殘留的菌種，防止對(duì)接種過(guò)程帶來(lái)污染。在其次區(qū)域內(nèi)劃線時(shí)，接種環(huán)上的菌種來(lái)源于第一接種區(qū)。劃線結(jié)束后灼燒接種環(huán)，能剛好殺死接種環(huán)上的菌種，避開(kāi)細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者，使試驗(yàn)過(guò)程更平安。eq\a\vs4\al(17.)在培育微生物的培育基中加入某些物質(zhì)能分別出所需的微生物。下列選項(xiàng)中，前者是在培育基中加入的物質(zhì)，后者是能被分別出的微生物，其中正確的是()A．氫氧化鈉，酵母菌B．鹽酸，放線菌C．適量的青霉素，霉菌D．適量的伊紅—美藍(lán)，大腸桿菌解析：選C。氫氧化鈉、鹽酸為強(qiáng)堿、強(qiáng)酸，酵母菌和放線菌都不能生存。加入伊紅—美藍(lán)的培育基是用來(lái)鑒定大腸桿菌，并不能分別大腸桿菌。適量的青霉素對(duì)原核生物有抑制作用，對(duì)真核生物的生命活動(dòng)并不影響。eq\a\vs4\al(18.)下面對(duì)發(fā)酵過(guò)程中滅菌的理解不正確的是()A．防止雜菌污染B．接種前菌種要進(jìn)行滅菌C．培育基和發(fā)酵設(shè)備都必需滅菌D．滅菌必需在接種前解析：選B。在發(fā)酵過(guò)程中要嚴(yán)格防止雜菌污染，否則將會(huì)使培育的微生物不能正常的生長(zhǎng)。接種前要對(duì)培育基、試驗(yàn)中須要用到的器皿和工具進(jìn)行滅菌處理，但是菌種不能進(jìn)行滅菌。eq\a\vs4\al(19.)廣東省微生物菌種保藏中心有各種微生物超過(guò)上萬(wàn)種，其中大部分是自己“養(yǎng)”出來(lái)的，少部分是引進(jìn)的，下列有關(guān)“養(yǎng)”細(xì)菌的敘述，正確的是()A．題干中的“養(yǎng)”具有篩選、培育和保藏等含義B．在培育基中加入青霉素可篩選出細(xì)菌C．在固體培育基上長(zhǎng)出的單個(gè)菌落含有多種細(xì)菌D．各種細(xì)菌的保藏是在液態(tài)培育基中進(jìn)行的答案：Aeq\a\vs4\al(20.)金黃色葡萄球菌有很強(qiáng)的致病力，常引起骨髓炎等，還可能引起食物中毒，下列試驗(yàn)結(jié)束后的做法錯(cuò)誤的是()A．對(duì)接種環(huán)進(jìn)行灼燒處理B．帶菌培育基必需經(jīng)高壓蒸汽滅菌鍋滅菌后才能倒掉C．帶菌培育基必需經(jīng)加熱后才能倒掉D．接種后雙手必需用肥皂洗凈，再用75%的酒精棉球擦拭解析：選C。金黃色葡萄球菌有很強(qiáng)的致病力，所以在操作時(shí)肯定要做到平安防范，接種后雙手用肥皂洗凈，再用75%的酒精棉球擦拭，以起到殺菌的作用；對(duì)接種環(huán)進(jìn)行灼燒也可以殺滅細(xì)菌，防止污染環(huán)境；高壓蒸汽滅菌也可殺死培育基中的金黃色葡萄球菌；假如只對(duì)帶菌培育基進(jìn)行加熱，殺不盡其中的致病菌，因?yàn)榇司哪透邷貙?shí)力很強(qiáng)，會(huì)污染環(huán)境。二、非選擇題eq\a\vs4\al(21.)依據(jù)所學(xué)學(xué)問(wèn)回答問(wèn)題：(1)在大腸桿菌培育過(guò)程中，除考慮養(yǎng)分條件外，還要考慮________、________和滲透壓等條件。由于該細(xì)菌具有體積小、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)潔、變異類(lèi)型簡(jiǎn)潔選擇、________、________等優(yōu)點(diǎn)，因此常作為遺傳學(xué)探討的試驗(yàn)材料。(2)在微生物培育操作過(guò)程中，為防止雜菌污染，需對(duì)培育基和培育皿進(jìn)行________(填“消毒”或“滅菌”)；操作者的雙手須要進(jìn)行清洗和________；靜止空氣中的細(xì)菌可用紫外線殺滅，其緣由是紫外線能使蛋白質(zhì)變性，還能________。(3)若用涂布分別法計(jì)數(shù)大腸桿菌活菌的個(gè)數(shù)，要想使所得估計(jì)值更接近實(shí)際值，除應(yīng)嚴(yán)格操作、多次重復(fù)外，還應(yīng)保證待測(cè)樣品稀釋的________。(4)通常，對(duì)獲得的純菌種還可以依據(jù)菌落的形態(tài)、大小等菌落特征對(duì)細(xì)菌進(jìn)行初步的________。(5)培育大腸桿菌時(shí)，在接種前須要檢測(cè)培育基是否被污染。對(duì)于固體培育基應(yīng)采納的檢測(cè)方法是________________________________________________________________________________________________________________________________________________。(6)若用大腸桿菌進(jìn)行試驗(yàn)，運(yùn)用過(guò)的培育基及其培育物必需經(jīng)過(guò)________處理后才能丟棄，以防止培育物的擴(kuò)散。解析：(1)大腸桿菌具有體積小、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)潔、變異類(lèi)型簡(jiǎn)潔選擇、易培育、生活周期短等優(yōu)點(diǎn)，培育過(guò)程中，除考慮養(yǎng)分條件外，還要考慮溫度、酸堿度和滲透壓等條件。(2)滅菌是運(yùn)用劇烈的理化因素殺死物體內(nèi)外全部的微生物，所以對(duì)培育基和培育皿進(jìn)行滅菌，消毒是運(yùn)用較為溫柔的物理或化學(xué)方法僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分微生物，操作者的雙手須要進(jìn)行清洗和消毒，紫外線能使蛋白質(zhì)變性，還能損傷DNA的結(jié)構(gòu)。(3)涂布分別法是將菌液進(jìn)行一系列的梯度稀釋?zhuān)缓髮⒉煌♂尡稊?shù)的菌液分別涂布到固體培育基的表面，進(jìn)行培育，應(yīng)保證樣品稀釋的比例合適。(4)對(duì)獲得的純菌種還可以依據(jù)菌落的形態(tài)、大小等菌落特征對(duì)細(xì)菌進(jìn)行初步的鑒定。(5)培育大腸桿菌時(shí)，在接種前須要檢測(cè)培育基是否被污染。對(duì)于固體培育基應(yīng)采納的檢測(cè)方法是將未接種的培育基在相宜的溫度下放置相宜的時(shí)間，視察培育基上是否有菌落產(chǎn)生。(6)因?yàn)橛械拇竽c桿菌會(huì)釋放一種劇烈的毒素，并可能導(dǎo)致腸管出現(xiàn)嚴(yán)峻損傷，運(yùn)用過(guò)的培育基及其培育物必需經(jīng)過(guò)滅菌處理后才能丟棄，以防止培育物的擴(kuò)散。答案：(1)溫度酸堿度易培育生活周期短(2)滅菌消毒損傷DNA的結(jié)構(gòu)(3)比例合適(4)鑒定(或分類(lèi))(5)將未接種的培育基在相宜的溫度下放置相宜的時(shí)間，視察培育基上是否有菌落產(chǎn)生(6)滅菌22．為了調(diào)查某河流的水質(zhì)狀況，某探討小組測(cè)定了該河流水樣中的細(xì)菌含量，并進(jìn)行了細(xì)菌分別等工作?；卮鹣铝袉?wèn)題：(1)該小組采納稀釋涂布平板法檢測(cè)水樣中的細(xì)菌含量。在涂布接種前，隨機(jī)取若干滅菌后的空白平板先行培育了一段時(shí)間，這樣做的目的是_________________________________________________________________________________________________________；然后，將1mL水樣稀釋100倍，在3個(gè)平板上用涂布法分別接入0.1mL稀釋液；經(jīng)適當(dāng)培育后，3個(gè)平板上的菌落數(shù)分別為39、38和37。據(jù)此可得出每升水樣中的活菌數(shù)為_(kāi)_______。(2)該小組采納平板劃線法分別水樣中的細(xì)菌，操作時(shí)，接種環(huán)通過(guò)________滅菌。在其次次及以后的劃線時(shí)，總是從上一次劃線的末端起先劃線。這樣做的目的是________________________________________________________________________________________________________________________________________________。(3)示意圖A和B中，________表示的是用稀釋涂布平板法接種培育后得到的結(jié)果。(4)該小組將得到的菌株接種到液體培育基中并混勻，一部分進(jìn)行靜置培育，另一部分進(jìn)行振蕩培育。結(jié)果發(fā)覺(jué)：振蕩培育的細(xì)菌比靜置培育的細(xì)菌生長(zhǎng)速度快。分析其緣由是：振蕩培育能提高培育液中________的含量，同時(shí)可使菌體與培育液充分接觸，提高_(dá)_______的利用率。解析：(1)為了檢測(cè)培育基平板滅菌是否合格，可在涂布接種前，隨機(jī)取滅菌后的空白平板先行培育一段時(shí)間。0.1mL稀釋液中平均有(39＋38＋37)/3＝38個(gè)活菌，則每毫升稀釋液中活菌的數(shù)目為38/0.1＝380，則稀釋前每毫升水樣中活菌數(shù)目為380×100＝3.8×104，則每升水樣中活菌數(shù)目為3.8×104×1000＝3.8×107。(2)接種環(huán)、接種針等金屬用具可干脆在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒，以達(dá)到快速?gòu)氐诇缇哪康?。在其次次及以后的劃線時(shí)，總是從上一次劃線的末端起先劃線，其目的是將聚集的菌體逐步稀釋以便獲得單個(gè)菌落。(3)比較圖A和圖B可以看出：A培育基中細(xì)菌的分布呈線性，是用平板劃線法接種培育后得到的結(jié)果；B培育基中細(xì)菌勻稱(chēng)分布，是用稀釋涂布平板法接種培育后得到的結(jié)果。(4)振蕩培育可以提高培育液中溶解氧的含量，還可以使菌體與培育液充分接觸，提高了養(yǎng)分物質(zhì)的利用率，因此振蕩培育的細(xì)菌比靜置培育的細(xì)菌生長(zhǎng)速度快。答案：(1)檢測(cè)培育基平板滅菌是否合格3.8×107(2)灼燒將聚集的菌體逐步稀釋以便獲得單個(gè)菌落(3)B(4)溶解氧養(yǎng)分物質(zhì)eq\a\vs4\al(23.)炭疽病是由炭疽桿菌引起的一種人畜共患傳染病。炭疽桿菌兩端截平、呈竹節(jié)狀排列，菌落呈卷發(fā)狀。對(duì)炭疽病疑似患者，可依據(jù)噬菌體的宿主專(zhuān)一性，通過(guò)試驗(yàn)確診。(1)細(xì)菌培育：采集疑似患者的樣本，分別培育，獲得可疑菌落。(2)細(xì)菌鑒定：試驗(yàn)流程如圖所示：①對(duì)配制的液體培育基等需實(shí)行____________方法滅菌；試驗(yàn)所用液體培育基的碳源為_(kāi)_______(填“無(wú)機(jī)碳”或“有機(jī)碳”)。②選擇可疑菌落制片后，用________視察，可看到呈竹節(jié)狀排列的桿菌。③接種可疑菌后，35℃培育24小時(shí)，液體培育基變渾濁，緣由是____________________。比照組試管中應(yīng)加入____________________，與試驗(yàn)組同時(shí)培育6小時(shí)后，若試驗(yàn)組液體培育基的渾濁度比比照組________(填“高”或“低”)，則可明確疑似患者被炭疽桿菌感染，反之則解除。解析：(2)①培育可疑炭疽桿菌之前應(yīng)先將液體培育基進(jìn)行高壓蒸汽滅菌。由于炭疽桿菌是異養(yǎng)生物，因此培育基中的碳源應(yīng)是有機(jī)碳。②視察桿菌應(yīng)用顯微鏡。③接種可疑菌24小時(shí)后，液體培育基變渾濁的緣由是細(xì)菌大量繁殖。答案：(2)①高壓蒸汽有機(jī)碳②顯微鏡③細(xì)菌大量繁殖等量生理鹽水低eq\a\vs4\al(24.)蘋(píng)果干腐病是一種名為茶藤