1.2.1 微生物的基本培養(yǎng)技術(shù)課件高二下學(xué)期生物人教版（2019）選擇性必修3

第1章

發(fā)酵工程微生物的培養(yǎng)技術(shù)及應(yīng)用傳統(tǒng)發(fā)酵技術(shù)以混合菌種進(jìn)行發(fā)酵制作食品，并且利用的菌種很多是原材料中天然存在的微生物。

向經(jīng)過殺菌處理的牛奶中添加某些對人體有益的細(xì)菌，再經(jīng)過發(fā)酵就可以制成酸奶。由于制作工藝并不復(fù)雜，一些人會在家里自制酸奶。自制酸奶雖然方便，但是食用自制酸奶導(dǎo)致腸胃不適的事例屢見不鮮，主要原因是在制作過程中有雜菌混入。那么，怎樣才能保證無處不在的雜菌不混入發(fā)酵物中呢？應(yīng)該先對制作用具和原料進(jìn)行滅菌處理，再接種純的菌種，并控制發(fā)酵條件，避免雜菌進(jìn)入。防止雜菌污染，獲得純凈的微生物培養(yǎng)物是研究和應(yīng)用微生物的前提，也是發(fā)酵工程的重要基礎(chǔ)。實驗室培養(yǎng)微生物的條件:提供微生物合適的營養(yǎng)和環(huán)境條件；要確保其他微生物無法混入，并將需要的微生物分離出來。本章提及的微生物主要是指用于發(fā)酵的細(xì)菌和真菌。一、培養(yǎng)基的配制1.培養(yǎng)基概念：人們按照微生物對營養(yǎng)物質(zhì)的不同需求，配制出供其生長繁殖的營養(yǎng)基質(zhì)，用以培養(yǎng)、分離、鑒定、保存微生物或積累其代謝物。2.培養(yǎng)基種類：（按照物理狀態(tài)劃分）固體培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基加凝固劑如：瓊脂瓊脂僅作為凝固劑，不為微生物生長提供物質(zhì)和能量。工業(yè)化大規(guī)模生產(chǎn)以及培養(yǎng)對象的擴(kuò)大化培養(yǎng)微生物的分離與鑒定、活菌計數(shù)、菌種保存一、培養(yǎng)基的配制2.培養(yǎng)基種類：（按照功能劃分）選擇培養(yǎng)基鑒別培養(yǎng)基微生物在瓊脂固體培養(yǎng)基的表面或內(nèi)部生長，形成肉眼可見的菌落。一、培養(yǎng)基的配制組分含量提供的主要營養(yǎng)物質(zhì)牛肉膏5g碳源、氮源、磷酸鹽和維生素等蛋白胨10g碳源、氮源和維生素等NaCl5g無機(jī)鹽H2O定容至1000mL水▼1000mL牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的營養(yǎng)結(jié)構(gòu)稱取去皮的馬鈴薯200g，切成小塊，加水1000mL，加熱煮沸至馬鈴薯軟爛，用紗布過濾。向濾液中加入20g葡萄糖（也可用蔗糖代替）、15~20g瓊脂，用蒸餾水定容至1000mL。▼

馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基的配方注：牛肉膏和蛋白胨來源于動物，含有糖、維生素和有機(jī)氮等營養(yǎng)物質(zhì)。100g馬鈴薯中含有：水75-80g，蛋白質(zhì)約2g，碳水化合物17-20g、

維生素、無機(jī)鹽等上述兩種培養(yǎng)基的營養(yǎng)構(gòu)成有哪些相同點？又有哪些不同？都含有水、碳源、氮源、無機(jī)鹽和維生素等，其中馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基中主要由糖類提供碳源，蛋白質(zhì)提供氮源；牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中主要由牛肉膏提供碳源，主要由蛋白胨提供氮源。一、培養(yǎng)基的配制3.培養(yǎng)基的營養(yǎng)構(gòu)成：各種培養(yǎng)基的配方不同，但一般都含有水、無機(jī)鹽、碳源和氮源等營養(yǎng)物質(zhì)。碳源氮源水無機(jī)鹽無機(jī)碳源--CO2、CO32-、HCO3-有機(jī)碳源--葡萄糖、牛肉膏、蛋白胨等自養(yǎng)微生物異養(yǎng)微生物無機(jī)氮源--N2、NH4＋、NO3-、NH3等（有機(jī)碳既是碳源又是異養(yǎng)微生物的能源物質(zhì)。）有機(jī)氮源--蛋白胨、尿素、氨基酸等含C、H、O、N的有機(jī)物是異養(yǎng)型微生物的碳源、氮源、能源。--微生物生長和代謝必不可少的營養(yǎng)物質(zhì)。--提供無機(jī)營養(yǎng)、調(diào)節(jié)酸堿平衡、

維持滲透壓。一、培養(yǎng)基的配制（1）為什么培養(yǎng)基需要氮源？思考：氮是微生物合成蛋白質(zhì)、核酸等物質(zhì)所必需的。（2）培養(yǎng)微生物時，培養(yǎng)基中是否必須有碳源和氮源？不一定。例如，培養(yǎng)自養(yǎng)型微生物時，一般不需要添加碳源，微生物可以利用空氣中的二氧化碳；培養(yǎng)固氮微生物時，一般不需要添加氮源，微生物可以利用空氣中的氮?dú)狻Ｎ⑸锾荚吹茨茉此{(lán)細(xì)菌CO2NH4＋、NO3-等光能硝化細(xì)菌CO2NH3NH3的氧化根瘤菌糖類等有機(jī)物N2有機(jī)物大腸桿菌糖類、蛋白質(zhì)等有機(jī)物蛋白質(zhì)等有機(jī)物自養(yǎng)微生物異養(yǎng)微生物一、培養(yǎng)基的配制培養(yǎng)基的其他需求：微生物對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)、O2的需求微生物生長所必須的、微量的、自身不能合成或合成很少的有機(jī)物，如維生素、氨基酸、堿基等。培養(yǎng)乳酸桿菌時，需要在培養(yǎng)基中添加維生素；培養(yǎng)霉菌時，需要將培養(yǎng)基調(diào)至酸性；培養(yǎng)細(xì)菌時，需要將培養(yǎng)基調(diào)至中性或弱堿性；培養(yǎng)厭氧微生物時，需要提供無氧的條件。具體處理原理目的選擇培養(yǎng)基加入青霉素青霉素能抑制細(xì)菌生長，對真菌無作用不加氮源固氮微生物能利用空氣中的氮?dú)獠患佑袡C(jī)碳源自養(yǎng)型微生物能利用無機(jī)碳源鑒別培養(yǎng)基加入酚紅培養(yǎng)基尿素被分解產(chǎn)生氨，培養(yǎng)基呈堿性，酚紅指示劑變紅。加入剛果紅剛果紅與纖維素能形成紅色復(fù)合物，當(dāng)纖維素被分解后，復(fù)合物就無法形成，培養(yǎng)基中會出現(xiàn)以菌落為中心的透明圈。分離酵母菌、霉菌等真菌分離固氮菌分離自養(yǎng)微生物鑒別分解尿素的細(xì)菌鑒別纖維素分解菌

對培養(yǎng)基的成分進(jìn)行控制可以起到不同的作用：微生物種類繁多，培養(yǎng)條件也各不相同。下列關(guān)于微生物培養(yǎng)基的描述正確的是(

)A．同一物質(zhì)不可能既作碳源又作氮源B．凡是碳源都能提供能量，氮源有些也能提供能量C．牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基是培養(yǎng)細(xì)菌、病毒等常用的培養(yǎng)基D．培養(yǎng)硝化細(xì)菌，可用無機(jī)碳源的培養(yǎng)基D該表為某培養(yǎng)基的配方，下列敘述錯誤的是()成分NaNO3KH2PO4MgSO4·7H2O(CH2O)蒸餾水青霉素含量3g1g0.5g30g定容至1000mL0.1萬單位A．根據(jù)物理性質(zhì)劃分，該培養(yǎng)基屬于液體培養(yǎng)基B．根據(jù)用途劃分，該培養(yǎng)基屬于選擇培養(yǎng)基C．根據(jù)培養(yǎng)基的配方可知，該培養(yǎng)基培養(yǎng)的微生物的同化作用類型是異養(yǎng)型D．固體培養(yǎng)基中加入少量水即可形成液體培養(yǎng)基D（多選）下列四種生物的能源、碳源、氮源和代謝類型的描述，正確的是()硝化細(xì)菌乳酸菌酵母菌衣藻能源氧化NH3分解乳酸固定N2利用光能碳源CO2糖類糖類CO2氮源NH3N2N2NO3-代謝類型自養(yǎng)需氧型異養(yǎng)需氧型異養(yǎng)需氧型自養(yǎng)需氧型ADA.硝化細(xì)菌B.乳酸菌C.酵母菌D.衣藻下圖所示為某微生物培養(yǎng)基的配方，請據(jù)此分析回答問題：成分NaNO3K2HPO4FeSO4H20瓊脂青霉素含量3g1g0.01g定容至100ml15g0.1萬單位（1）該培養(yǎng)基可用于觀察微生物的菌落特點，是因為培養(yǎng)加中添加有_______。（2）此表中含有的微生物所需的營養(yǎng)成分是___________________。從培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分看，此培養(yǎng)基可用于培養(yǎng)的微生物的同化作用類型為_____________。利用該培養(yǎng)基培養(yǎng)微生物時，微生物所需的碳源來自________________。（3）該培養(yǎng)基________（填“能”或“不能”）用于培養(yǎng)細(xì)菌，原因是________________________________________________。（4）去掉NaNO3后以及青霉素后，該培養(yǎng)基________（填“能”或“不能”）用于培養(yǎng)硝化細(xì)菌。硝化細(xì)菌利用的氮源為__________。（5）若去除NaNO3后不再加入含氮元素的有機(jī)物，則此培養(yǎng)基可培養(yǎng)的微生物種類是_______________________。瓊脂氮源、水、無機(jī)鹽自養(yǎng)型空氣中的CO2不能青霉素為抗生素，會殺死細(xì)菌，篩選出真菌。不能NH3自生固氮微生物二、無菌技術(shù)

獲得純凈微生物的關(guān)鍵是防止雜菌污染。無菌技術(shù)應(yīng)圍繞著如何避免雜菌污染展開，主要包括消毒和滅菌。指使用較為溫和的物理、化學(xué)或生物等方法殺死物體表面或內(nèi)部一部分微生物。1.消毒：方法適用范圍操作方法煮沸消毒法巴氏消毒法化學(xué)藥物消毒法紫外線消毒法某些實驗器具、家庭餐具等在100℃下煮沸5~6min不耐高溫的液體，如牛奶等62~65℃下煮30min或80~90℃處理30s~1min用于皮膚、傷口、動植物組織表面等利用生物或其代謝物除去環(huán)境中的部分微生物的方法。用（70%）酒精擦拭雙手、用氯氣消毒水源等接種室、接種箱，超凈工作臺等可用30W紫外燈照射30min二、無菌技術(shù)2.滅菌：指使用強(qiáng)烈的理化方法殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子。芽孢：有些細(xì)菌在一定的條件下，細(xì)胞里面形成一個橢圓形的休眠體。當(dāng)環(huán)境適宜時，芽孢可以形成一個細(xì)菌。芽孢壁很厚，對干旱、低溫、高溫等惡劣的環(huán)境有很強(qiáng)的抵抗力。例如，有的細(xì)菌的芽孢，煮沸3小時以后才死亡。孢子：細(xì)菌、原生動物、真菌和植物等產(chǎn)生的一種有繁殖或休眠作用的生殖細(xì)胞，能直接長成新個體。二、無菌技術(shù)常用的滅菌方法：（1）濕熱滅菌利用沸水、流通蒸汽或高壓蒸汽進(jìn)行滅菌。

其中高壓蒸汽滅菌的效果最好。實驗室常用的高壓蒸汽滅菌鍋，就是以水蒸氣為介質(zhì)在壓力為100kPa、溫度為121℃的條件下，維持15~30min來對培養(yǎng)基進(jìn)行滅菌的。

高壓蒸汽滅菌鍋適用范圍：培養(yǎng)基及多種器材等二、無菌技術(shù)常用的滅菌方法：（2）干熱滅菌

干熱滅菌箱內(nèi)，在160-170℃的熱空氣中維持下2-3h達(dá)到滅菌目的。適用范圍：耐高溫，需保持干燥的物品干熱滅菌箱玻璃器皿（如試管、培養(yǎng)皿、吸管、注射器）金屬器具

（如針頭、鑷子、剪刀等）二、無菌技術(shù)常用的滅菌方法：（3）灼燒滅菌

直接在酒精燈火焰的充分燃燒層灼燒，可以迅速徹底地滅菌。適用范圍：接種工具如涂布器、接種環(huán)、接種針以及試管口或瓶口等容易被污染的部位。123接種環(huán)的灼燒滅菌（1、2、3表示先后順序）涂布器接種環(huán)和接種針消毒與滅菌對比比較項目消毒滅菌概念使用較為溫和的物理、化學(xué)或生物等方法殺死物體表面或內(nèi)部一部分微生物。使用強(qiáng)烈的理化因素殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽孢和孢子作用強(qiáng)度作用程度芽孢和孢子適用對象常用方法較為溫和的理化因素強(qiáng)烈的物理、化學(xué)因素殺死物體表面或內(nèi)部的部分微生物殺死物體內(nèi)外所有的微生物消滅部分芽孢能殺滅全部芽孢和孢子操作空間、活體生物材料、操作者的衣著和雙手操作工具、玻璃器皿、培養(yǎng)基等煮沸消毒法、巴氏消毒法、化學(xué)藥劑消毒法、紫外線消毒法濕熱滅菌法、灼燒滅菌法、干熱滅菌法思考：1.無菌技術(shù)除了用來防止實驗室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外，還有什么作用？還能有效避免操作者自身被微生物感染。2.為什么體積分?jǐn)?shù)為70%～75%的酒精殺菌效果最好？若酒精濃度過高，菌體表面蛋白質(zhì)變性過快而凝固成一層保護(hù)膜，酒精不能滲入其中；若酒精濃度過低，殺菌能力減弱。3.避免已經(jīng)滅菌的材料用具與周圍物品接觸。為了避免周圍環(huán)境微生物污染應(yīng)在哪里進(jìn)行后續(xù)操作？在超凈工作臺并在酒精燈火焰旁進(jìn)行。以下物品所采用的滅菌或消毒方法依次是：培養(yǎng)基：_____________培養(yǎng)皿：_____________接種環(huán)：_____________實驗操作者的雙手：________________實驗室：_____________牛奶：_____________

高壓蒸汽滅菌干熱滅菌灼燒滅菌化學(xué)藥物消毒法紫外線消毒法巴氏消毒法關(guān)于消毒、滅菌的方法，下列描述錯誤的是（

）A.接種用的無菌操作臺要進(jìn)行滅菌處理B.用巴氏消毒法處理牛奶是因為高溫易破壞牛奶的營養(yǎng)成分C.煮沸半小時后的涼開水中可能仍含有部分芽孢和孢子D.先噴灑消毒液，再用紫外線照射可增強(qiáng)消毒效果B生產(chǎn)、生活和科研實驗中常用到無菌技術(shù)。下列相關(guān)敘述不正確的是()A.腌制泡菜時，泡菜壇內(nèi)缺氧、呈酸性的環(huán)境不利于雜菌生長B.實驗室中的玻璃涂布器、吸管、培養(yǎng)基等均可以用干熱滅菌法處理C.生活中用巴氏消毒法處理牛奶既可消毒，又基本不會破壞牛奶中的營養(yǎng)成分D.濕熱滅菌是一種利用沸水、流通蒸汽或高壓蒸汽進(jìn)行滅菌的方法B三、微生物的純培養(yǎng)1、相關(guān)概念（1）培養(yǎng)物：在微生物學(xué)中，將接種于培養(yǎng)基內(nèi)，在合適條件下形成的含有特定種類微生物的群體。（2）純培養(yǎng)物：由單一個體繁殖所獲得的微生物群體。（3）純培養(yǎng)：獲得純培養(yǎng)物的過程。2、純培養(yǎng)的步驟：配制培養(yǎng)基滅菌接種分離培養(yǎng)酵母菌的純培養(yǎng)1.實驗原理：微生物群分散或稀釋單個細(xì)胞繁殖單個菌落菌落是指分散的微生物在適宜的固體培養(yǎng)基表面或內(nèi)部可以繁殖形成肉眼可見的、有一定形態(tài)結(jié)構(gòu)的子細(xì)胞群體。酵母菌菌落大腸桿菌菌落金黃色葡萄球菌菌落青霉菌菌落菌落大小、形狀、隆起程度、顏色等是鑒定菌種的重要依據(jù)。獲得單菌落的方法：平板劃線法和稀釋涂布平板法酵母菌的純培養(yǎng)2.材料用具：酵母菌培養(yǎng)液、馬鈴薯、葡萄糖(或蔗糖)、瓊脂、蒸餾水、天平、小刀、紗布、燒杯、錐形瓶、棉塞、牛皮紙(或報紙)、皮筋、培養(yǎng)皿、接種環(huán)、酒精燈、超凈工作臺、高壓蒸汽滅菌鍋、干熱滅菌箱和恒溫培養(yǎng)箱等。酵母菌培養(yǎng)液提供接種用的酵母菌配制酵母菌固體培養(yǎng)基馬鈴薯葡萄糖（或蔗糖）蒸餾水瓊脂酵母菌的純培養(yǎng)3.實驗步驟：①

制備培養(yǎng)基：

配制培養(yǎng)基→滅菌→倒平板稱取去皮的馬鈴薯200g切成小塊加水1000mL，加熱煮沸至馬鈴薯軟爛用紗布過濾得到濾液濾液中加入20g葡萄糖，15~20g瓊脂用蒸餾水定容至1000mL酵母菌的純培養(yǎng)3.實驗步驟：①

制備培養(yǎng)基：

配制培養(yǎng)基→滅菌→倒平板取5~8套培養(yǎng)皿培養(yǎng)皿疊成一束用幾層牛皮紙包緊放入干熱滅菌箱內(nèi)，160~170℃滅菌2h將配制好的培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移到錐形瓶中，加棉塞包上牛皮紙，并用皮筋勒緊壓力100kPa、溫度為121℃的條件下，滅菌15~30min酵母菌的純培養(yǎng)3.實驗步驟：①

制備培養(yǎng)基：

配制培養(yǎng)基→滅菌→倒平板拔出錐形瓶的棉塞。12將瓶口迅速通過火焰。3用拇指和食指將培養(yǎng)皿打開一條稍大于瓶口的縫隙，將培養(yǎng)基（10-20mL）倒入培養(yǎng)皿，立即蓋上皿蓋。4等待培養(yǎng)基冷卻凝固后，將培養(yǎng)皿倒過來放置。待培養(yǎng)基冷卻到50℃左右，在酒精燈火焰附近倒平板。酵母菌的純培養(yǎng)3.實驗步驟：①

制備培養(yǎng)基：

配制培養(yǎng)基→滅菌→倒平板思考：(1)培養(yǎng)基PH要適宜，調(diào)PH是在滅菌前還是滅菌后？如果需要調(diào)節(jié)培養(yǎng)基的PH，應(yīng)該在定容完成后，滅菌之前進(jìn)行操作。計算稱量溶化定容調(diào)PH滅菌倒平板(2)在滅菌前，用牛皮紙、舊報紙包緊盛有培養(yǎng)基的錐形瓶的目的是什么？在滅菌時能避免水蒸汽凝結(jié)時浸濕棉塞；在取出培養(yǎng)基錐形瓶時也起到隔絕空氣中雜菌污染的作用。(3)培養(yǎng)基滅菌后需要冷卻到50℃左右時才能倒平板，為什么？用什么辦法來估計培養(yǎng)基的溫度？瓊脂在98℃以上熔化，在44℃以下凝固。高于50℃會燙手，溫度過低瓊脂會凝固。用手觸摸盛有培養(yǎng)基的錐形瓶，感覺溫度下降到剛剛不燙手時即可。酵母菌的純培養(yǎng)3.實驗步驟：①

制備培養(yǎng)基：

配制培養(yǎng)基→滅菌→倒平板思考：(4)倒平板時，為什么將錐形瓶瓶口迅速通過火焰？通過灼燒滅菌，防止瓶口的微生物污染培養(yǎng)基。(5)在倒平板的過程中，如果不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間部位，這個平板還能用來培養(yǎng)微生物嗎？為什么？不可以，因為空氣中的微生物可能在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，從而污染培養(yǎng)基。(6)平板冷凝后，為什么要將平板倒置？既可以避免培養(yǎng)基中的水分過快蒸發(fā)，保持培養(yǎng)基的水分；又可防止皿蓋上的冷凝水落入培養(yǎng)基，造成污染。如果未接種的培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫1-2d后無菌落生長，說明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則需要重新制備。(7)如何判斷所倒平板是否被雜菌污染？酵母菌的純培養(yǎng)3.實驗步驟：②

接種和分離酵母菌接種是指通過接種環(huán)在固體培養(yǎng)基表面連續(xù)劃線的操作，將聚集的菌種逐步稀釋分散到培養(yǎng)基表面。經(jīng)數(shù)次劃線后，可以（在培養(yǎng)后）分離得到單菌落。--平板劃線法平板劃線法接種酵母菌的純培養(yǎng)3.實驗步驟：②

接種和分離酵母菌5將試管口通過火焰，并塞上棉塞。6在火焰旁打開一條縫隙，用接種環(huán)在培養(yǎng)基表面迅速劃3~5條平行線，蓋上皿蓋。7灼燒接種環(huán)，待其冷卻后，從第一次劃線的末端開始作第二次劃線。重復(fù)以上操作，作第三、四、五次劃線。注意不要將最后一次的劃線與第一次的劃線相連。將接種環(huán)放在火焰上灼燒，直到接種環(huán)的金屬絲燒紅。12在火焰旁冷卻接種環(huán)。同時，拔出裝有酵母菌培養(yǎng)液的棉塞。3試管口通過火焰。4在火焰附近用接種環(huán)蘸取一環(huán)菌液。酵母菌的純培養(yǎng)3.實驗步驟：②

接種和分離酵母菌平板劃線法的注意事項：12345接種環(huán)滅菌第1區(qū)劃線接種環(huán)滅菌第2區(qū)劃線接種環(huán)滅菌第3區(qū)劃線接種環(huán)只蘸一次菌液，但要在培養(yǎng)基不同

位置連續(xù)劃線多次。劃線首尾不能相接。每次劃線前后灼燒接種環(huán)進(jìn)行滅菌。劃線操作結(jié)束后，仍需灼燒接種環(huán)。劃線后，培養(yǎng)皿倒置培養(yǎng)。酵母菌的純培養(yǎng)3.實驗步驟：②

接種和分離酵母菌思考：(1)為什么在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結(jié)束時，仍然需要灼燒接種環(huán)，為什么？灼燒時期目的取菌種前每次劃線前接種結(jié)束后殺死上次劃線時殘留菌種，使下一次劃線的菌種直接來源上次劃線的末端，從而使每次劃線時菌種數(shù)目逐漸減少，直至得到單個細(xì)胞。殺死接種環(huán)上原有微生物，防止雜菌污染。殺死接種環(huán)上殘留的菌種，避免細(xì)菌污染環(huán)境和感染操作者。酵母菌的純培養(yǎng)3.實驗步驟：②

接種和分離酵母菌思考：劃線后，線條末端酵母菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使酵母菌的數(shù)目隨著劃線次數(shù)的增加而逐步減少，最終能得到由單個細(xì)胞繁殖而來的菌落。(3)為什么最后一次劃線與第一次的劃線不能相連？(2)在作第二次以及其后的劃線操作時，總是從上一次劃線的末端開始劃線的原因是？最后一次劃線已經(jīng)將酵母菌稀釋成單個的細(xì)胞，如果與第一次劃線相連則增加了細(xì)胞的數(shù)目，達(dá)不到純化的效果。3.實驗步驟：②

接種和分離酵母菌酵母菌的純培養(yǎng)(4)在觀察時發(fā)現(xiàn)第一區(qū)有菌落生長，而第二區(qū)域無菌落生長，可能是哪個操作失誤造成的？思考：接種環(huán)灼燒后未冷卻直接進(jìn)行劃線；劃線未從第一區(qū)域的劃線末端開始。(5)平板劃線時不能劃破培養(yǎng)基的原因？一旦劃破，會造成劃線不均勻，難以達(dá)到分離單菌落的目的；存留在劃破處的單個細(xì)胞無法形成規(guī)矩的菌落，菌落會沿著劃破處生長，會形成一個條狀的菌落。3.實驗步驟：③

培養(yǎng)酵母菌酵母菌的純培養(yǎng)

完成平板劃線后，待菌液被培養(yǎng)基吸收，將接種后的平板和一個未接種的平板倒置，放入28℃左右（培養(yǎng)溫度因酵母菌種類的不同而稍有差異）的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24-48h。為什么要同時放入未接種的平板？作對照，通過觀察未接種平板是否有菌落存在以確定培養(yǎng)基是否被污染或滅菌是否徹底。在實驗室中，切不可吃東西、喝水，離開實驗室時一定要洗手，以防止被微生物感染。使用后的培養(yǎng)基在丟棄前一定要進(jìn)行滅菌處理，以免污染環(huán)境。警示酵母菌的純培養(yǎng)4.實驗結(jié)果分析：在接種酵母菌的培養(yǎng)基上可觀察到獨(dú)立的菌落，這些菌落在顏色、形狀和大小上相似，酵母菌菌落一般表面光滑，多呈乳白色。若在培養(yǎng)基中觀察到不同形態(tài)的菌落，原因可能是：菌液不純，混入其他雜菌；或在實驗操作過程中被雜菌污染。酵母菌的純培養(yǎng)有一段時間，水果“酵素”風(fēng)靡各地。水果“酵素”制作的大致過程是：將洗凈、切成塊狀的水果放入潔凈的容器，再加入糖和水，密封，置于陰涼處發(fā)酵一至兩周。有人說，吃水果“酵素”可以美容、減肥、促進(jìn)消化和提高免疫力。請評估這一論點是否可信。追問以下問題可以幫助你分析。水果“酵素”是什么？其制作原理是什么？其中可能含有哪些成分？其是否含有人們無法從其他食品中獲取但又是維護(hù)健康所必需的成分？其中的所有成分都有益于人體健康嗎？酶的另一種說法。其制作是利用微生物進(jìn)行無氧呼吸的原理，進(jìn)行像制作泡菜一樣的發(fā)酵。其中可能有糖類（包括一些簡單的糖和膳食纖維等）、蛋白質(zhì)（包括多種酶）、有機(jī)酸等成分。不存在它獨(dú)有的、特殊的營養(yǎng)物質(zhì)。其中甚至可能含有微生物發(fā)酵產(chǎn)生的有毒物質(zhì)，食用后可能會危害人體健康。以下關(guān)于倒平板的操作，錯誤的是(

)A．在火焰旁取下裝有培養(yǎng)基的瓶塞B．倒平板前，讓錐形瓶的瓶口迅速通過火焰C．倒平板時將培養(yǎng)皿的蓋拿開，以方便將錐形瓶中的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿D．平板冷卻凝固后要倒過來放置C如圖為實驗室培養(yǎng)和純化大腸桿菌過程中的部分操作步驟，下列說法不正確的是(

)A．①步驟使用的培養(yǎng)基是已經(jīng)調(diào)節(jié)過pH并滅菌的培養(yǎng)基B．①②③步驟操作時需要在酒精燈火焰旁進(jìn)行C．③到④的過程中，接種環(huán)共灼燒了5次D．④步驟操作時，不能將第1區(qū)和第5區(qū)的劃線相連C在分離、純化細(xì)菌的實驗中，劃線接種(甲)、培養(yǎng)結(jié)果(乙)如下圖，a、b、c、d是劃線的四個區(qū)域。下列敘述錯誤的是（

）A.每次劃線前后都要對接種環(huán)灼燒滅菌B.連續(xù)劃線的目的是獲得單個細(xì)菌形成的菌落C.甲圖中的a區(qū)域為劃線的起始區(qū)域D.蘸取菌液和劃線要