細(xì)菌性疾病監(jiān)測標(biāo)本采集常見的問題及技術(shù)要求課件

免疫規(guī)劃針對細(xì)菌性傳染病樣本

的采集、保存及運(yùn)輸2015-06-051山東省2012-2015

年流腦健康

人群帶菌率調(diào)查結(jié)果2樣本采集的要求

及時性？病源樣本、腦脊液樣本、血清樣本合理性？雙份血（病例的急性期與恢復(fù)期血清；免疫成功率血清）信息的清晰與完整性？歸屬關(guān)系，采樣日期，檢測樣本編號與樣本來源者一致性問題采樣部位的準(zhǔn)確性？樣本量足夠？腦脊液、血清密閉性：防治泄漏避免污染：廢棄物的處理4采前準(zhǔn)備（二）鼻咽拭子：平板、無菌咽拭子、壓舌板；血樣本：平板（增菌液）、一次性注射器、采血管、止血帶、無菌棉簽；腦脊液：平板、無菌保存管；信息記錄：油性筆、簽字筆、采樣單；樣品保存措施：冰排、冷藏箱、熱水袋等（視樣本種類選擇）；其他：試管架、剪刀、酒精/碘酒、膠布、酒精燈、防護(hù)用品、垃圾袋等。6樣本的采集樣本的采集樣本的處理常見問題及要求7流腦CSF樣本

如果為疑似腦膜炎病例,腦脊液是分離和鑒別病原菌的最佳樣本。采集過程應(yīng)無菌操作，至少1～3mL。可用0.1～0.5mL直接接種巧克力或雙抗巧克力平板，其余應(yīng)立即送至微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行樣本處理與保存。適宜檢測的樣本為腦脊液（CSF）、血液、皮膚黏膜瘀點(diǎn)或瘀斑組織液及鼻咽拭子。8流腦血液樣本無菌操作抽取發(fā)熱患者全血5～10mL，取0.1～0.5ml直接接種巧克力或雙抗巧克力平板，1mL用來作血清學(xué)檢測，其余采集后應(yīng)立即注入30ml增菌用的葡萄糖肉湯增菌液內(nèi)?；颊邞?yīng)采集發(fā)病早期和恢復(fù)期雙份全血各約1mL，檢測血清中特異性抗體滴度。。瘀點(diǎn)或瘀斑選取患者皮膚上的新鮮瘀點(diǎn)或瘀斑，生理鹽水消毒后用針頭挑破，擠出組織液，用消毒的玻片直接蘸取組織液涂片，革蘭氏染色鏡檢。也可用無菌棉簽沾取組織液接種含雙抗的葡萄糖肉湯管中，送至微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行檢測。9咽拭子采集11流腦注意事項(xiàng)

腦膜炎奈瑟菌對溫度較為敏感，溫度過高或過低均可導(dǎo)致菌株死亡。采集樣本后，應(yīng)盡量做到旁床接種，若無可能則應(yīng)在最短時間內(nèi)送至實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行接種培養(yǎng)。

接種過的培養(yǎng)基可在室溫（20℃～25℃）放置4～6小時，運(yùn)送溫度不低于18℃不高于37℃。切記不能低溫運(yùn)送。用于進(jìn)行血清抗體及分子生物學(xué)檢測的CSF和血液樣本應(yīng)冷藏條件下送檢。

12百日咳

適宜檢測的樣本為腦脊液（CSF）、鼻咽拭子

鼻咽抽吸物、血液。咳碟法

用咳碟法采集樣品時，應(yīng)在病人咳嗽時，將包－姜(Bordet－Gengou）或炭瓊脂培養(yǎng)基平板打開放在病人口前10cm處，使病人對準(zhǔn)平板表面咳嗽數(shù)次，直接收集病人咳出的飛沫。然后蓋好平皿蓋送檢。平板暴露時間以15s為宜。13百日咳鼻咽拭子及其保存液：聚丙烯纖維頭的塑料拭子

由于百日咳多發(fā)于兒童，所以采樣時，病兒的頭部斜依于母親的胸懷，母親以雙手固定病兒的頭部，醫(yī)師以右手執(zhí)棉拭子，左手按病人的頭頂部，使頂端稍向下彎的棉拭子自前鼻孔進(jìn)入，沿下鼻道的底部向緩緩深入，由于鼻道呈弧形，不可用力過猛，以免發(fā)生外傷出血。待棉拭子頂端到達(dá)鼻咽腔后壁時，將棉拭子稍留片刻，以待反射性咳嗽，然后輕輕旋轉(zhuǎn)一周，緩緩取出棉拭子接種平板后放入保存液中。14

百日咳×15百日咳病人血清樣本

無菌操作抽取患者早期和恢復(fù)期雙份全血各約1mL放入無菌血清管中，旋緊蓋子，做好標(biāo)記，盡快送檢。檢測血清中特異性抗體滴度。

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百日咳－樣本采集的最佳時期（周）1818白

喉

適宜檢測的樣本為血液、咽拭子、假膜。病人咽拭子樣本：用無菌長柄棉拭子從疑似患者咽喉假膜邊緣蘸取樣本或同時采取鼻咽拭子接種血平板或亞蹄酸鉀血平板送檢。帶菌者或疑似病人咽拭子樣本：由于未見到假膜，故應(yīng)采集鼻咽部或扁桃體粘膜上的分泌物接種亞蹄酸鉀血平板送檢。病人血清樣本：無菌操作抽取患者早期和恢復(fù)期雙份全血各約1mL放入無菌血清管中，旋緊蓋子，做好標(biāo)記，盡快送檢待檢。1920白喉注意事項(xiàng)：在鼻咽拭子樣本采集前12小時內(nèi)，患者口腔不可用防腐劑（如漱口劑等）或用其涂抹病灶局部，采樣時應(yīng)避免觸及口腔粘膜與唾液。由于白喉?xiàng)U菌在棉拭子上生存時間不長，易于死亡，故樣本采集后需立即接種。不能立即接種，應(yīng)將樣本侵于無菌生理鹽水或15％甘油生理鹽水中保存，盡快送檢。

21樣本的保存與運(yùn)送（一）疑似菌株

保存：將分離出的疑似菌株菌落保存在無菌牛奶凍存管中，旋緊蓋子并用封口膜封口，貼好標(biāo)簽，-20℃以下保存，并盡快送檢。

運(yùn)送：將填寫完整的采樣單及菌株初篩實(shí)驗(yàn)記錄，與冷凍條件下的菌種保存管一起送檢。在未落實(shí)菌株送檢成功信息前，應(yīng)保存菌株，以防菌株遺失。22樣本的保存與運(yùn)送（三） 全血及血清樣本：

運(yùn)送：因采集的全血樣本要求不使用抗凝劑，所以在運(yùn)輸過程中應(yīng)避免劇烈震蕩，防止溶血。分離：全血樣本在2-8℃冷藏時間不應(yīng)超過24h，應(yīng)盡快分離血清。分裝血清樣本時，要貼好標(biāo)簽，避免交叉污染，于-20℃以下凍存待檢。24樣本的保存與運(yùn)送（四）百日咳鼻咽拭子（保存液）：