T-CVMA 201-2024 貓衣原體實時熒光RAA檢測方法

Real-timeRAAmethodfordetectionofChlamydiafelis中國獸醫(yī)協(xié)會發(fā)布I1貓衣原體實時熒光RAA檢測方法NY/T541獸醫(yī)診斷樣品采集、保存與運輸技術(shù)規(guī)范4縮略語C.felis：貓衣原體（Chlamydiafelis）Ct值：每個反應(yīng)管內(nèi)的熒光信號量達(dá)到設(shè)定的閾值所經(jīng)歷的循環(huán)DNA：脫氧核糖核酸（DeoxyribonucleicaciPBS：磷酸鹽緩沖鹽水（PhosphatebufferedRAA：重組酶介導(dǎo)的核酸擴(kuò)增（Recombinase-aidednucleicacRNA：核糖核苷酸（Ribonucleicac結(jié)合后，核酸外切酶Ⅲ（ExonucleaseⅢ,ExoⅢ)能夠識別并切除THF殘基，并解除3’端阻斷，熒光2）：三磷酸腺苷6mmol/L，三（羥甲基）氨基甲烷（pH7.9）100mmol/L，乙酸6.2.4冰盒(?20℃以下預(yù)冷）。3用無菌棉拭子采集雙眼結(jié)膜囊和鼻分泌物，下可以穩(wěn)定保存3個月，-70℃及以下可長期保存，應(yīng)避免反復(fù)凍低溫保存進(jìn)行運輸，并在規(guī)定溫度下的保存期內(nèi)送達(dá)實1個檢測反應(yīng)的加入量(μL）注：在試劑配制區(qū)進(jìn)行。先將熒光RAA反應(yīng)管中，最后將乙酸鎂加在反應(yīng)單元管蓋上，蓋上蓋子，短暫離心后進(jìn)行檢測。每次進(jìn)行熒性、陰性及空白對照。陽性對照應(yīng)為陽性質(zhì)41被檢樣品Ct對數(shù)增長，且熒光通道出現(xiàn)典型的擴(kuò)增曲線，相應(yīng)的Ct值≤30.0，則判為C.felis核酸陽性；被檢樣品檢測結(jié)果無Ct值或Ct值>35，且無典型的擴(kuò)增曲線，則判定為C.felis核酸陰性；被檢樣品然Ct值≤35，且為典型的擴(kuò)增曲線，則判定為C.felis核酸陽性，否則為陰性。5[BHQ1-dT]CCGTGTCGTA（C3-Spacer）-3’6B.1陽性對照質(zhì)粒序列（C.felisFe/Pn-1株16SrRNA，GenBa5-ctgagaatttgatcttggttcagattgaacgctggcggcgtggatgaggcatgcaagtcgaacggaacaatgacttcggttgttgtttagggttagtaatacatagataatctgccctcaacttgggaataacggttggaaacgaccgctaataccgaatgggtgtgtttaggaatctaaaacacattaaagggatcttcggacctttcggttggggaagagtctatgggatatcagcttgttggtggggtaatggcctaccaaggctttgacgtctaggcggattgagagattggccaacactgggactgagacactgcccagacttctacggaaggctgcagtcgagaatctttcgcaatggacgaaagtctgacgaagcgacgccgcgtgtgaaggctctagggttgtaaagcactttcgcttgggaataagagaagttggctaatatccaactgatttgagcgtaccaggtaaagaagcaccggctaactcccagcagctgcggtaatacggagggtgctagcgttaatcggattcattgggcgtaaagggcgtttaggcggaaaggaaagttagatgtcaaatcttggggcccccaaatcggcatctaatactatctttctagagggtagatggagaaaagggaattccacgtgtagcggtgaaatgcgtagatatgtggaagaacaccagtaaggcgcttttctaatttacacctgacgctaaggcgcgaaagcaaggggagcaaacaggattagatatgtggatagtctcaaccctatccgtgtcgtagctaacgcgttaagtatgccgcctgagggcccgcacaagcagtggagcatgtggtttaattcgatgcaacgcgaagaaccttacctgggcttgacatgtatttcaccgcggcagaaatgtcgttttccgcacagatacacaggtgctgcatggctgtcgtcagctcgtgccgtgaggtgttgggttaagtcccgcaacgagcgcaacccttatcgttagttgccaacactttgggagaactctagcgagactgcctgggttaaccaggaggaaggcgaggatgacgtcaagtcagcatggcccttatgcccagggctacacacgtgctacaatggccagtacagaaggtagcaatatcgtgagatggagcaaatcctcaaagctggccccagttcggattgtagtctgcaaatcgactacatgaagtcggaattatggcgtgtcagctataacgccgtgaatacgttcccgggccttgtacacaccgcccgtcacatcatgggagttggttttgccttaagtcgttgactcaacctgcggagagaggcgcccaaggtgaggctgatgactgggatgaagtcgtaacaaggtagccctaccgga