2023年人教版高中生物選修一知識點總結

高中生物選修畢生物技術實踐知識點總結

專題一老式發(fā)酵技術的應用課題一果酒和果醋的制作

1、發(fā)酵：通過微生物技術的培養(yǎng)來生產(chǎn)大量代謝產(chǎn)物的過程。

2,有氧發(fā)酯：醋酸發(fā)酵谷氨酸發(fā)醉無氧發(fā)酵：灑精發(fā)酵乳酸發(fā)酵

3、酵母菌是兼性厭氧菌型微生物真菌酵母菌的生殖方式：出芽生殖（重要）分裂生殖電子生殖

他

4、在有氧條件下，酵母菌進行有氧呼吸,大量繁殖。CM206+602-6C02+6H20

冊

5、在無氧條件下，酵母菌能進行酒精發(fā)酵。。孤2（）6-2（：汨5（出+2c。2

6、2（TC左右最合適酵母菌繁殖酒精發(fā)酵時一般將溫度控制在18C-25c

7、在福萄酒自然發(fā)酵的過程中，起重要作用日勺是附著在葡萄皮表面的I鞋型醛理菌。在發(fā)酵過程中,

伴隨酒精濃度的提高，紅葡萄皮H勺色素也進入發(fā)酵液，使葡萄酒展現(xiàn)深紅色。在缺氧呈酸性的發(fā)

酵液中上酵母菌可以生長繁殖，而絕大多數(shù)其他微生物都因無法適應這一環(huán)境而受到制約。

8、醋酸菌是單細胞細菌（原核生物），代謝類型是異養(yǎng)需氧型，生殖方式為二分裂

9、當氧氣、糖源都充足時，醋酸菌將由萄汁中的糖分解成醋酸:當缺乏糖源時，醋酸菌將乙醇變

悔

為乙醛，再將乙醛變?yōu)榇姿帷?02H50H+402fCH3C00H+6H2。

10、控制發(fā)酵條件的作用①甜酸菌對氧氣的含量尤其敏感，當進行深層發(fā)酵時，雖然只是短時間中

斷通入氧氣，也會引起酷段菌死亡。②醋酸菌最適生長溫度為30?35℃,控制好發(fā)酵溫度，使

發(fā)酵時間縮短，乂減少雜菌污染的機會。③有兩條途徑生成醋酸：直接氧化和以酒精為底物H勺

氧化。

11、試驗流程：挑選葡萄一沖洗一榨汁一酒精發(fā)酵一果酒（一醋酸發(fā)酵一果醋）

12、酒精檢查：果汁發(fā)酵后與否有酒精產(chǎn)生，可以用重鋁酸鉀來檢查。在酸性條件下,重銘酸鉀與

酒精反應展現(xiàn)灰綠色,先在試管中加入發(fā)酵液2mL,再滴入物質(zhì)H勺量濃度為3mol/LH勺H2S0,3

滴，振蕩混勻，最終滴加常溫下飽和口勺重銘酸鉀溶液3滴，振蕩試管，觀測顏色

13、充氣口是在醋酸發(fā)酵時連接充氣泵進行充氣用的；排氣口是在酒精發(fā)酵時

用來排出二氧化碳H勺：出料口是用來取樣的。排氣I1要通過?種長而彎曲的膠

管與瓶身相連接，其目的是防止空氣中微生物的污染。開口向下的目的是有助于二氧化碳的排出。

使用該裝置制酒時，應當關閉充氣口；制醋時，應當充氣口連接氣泵，輸入氧氣。

疑難解答

（1）你認為應當先沖洗葡萄還是先除去枝梗？為何？

應當先沖洗，然后再除去枝梗,以防止除去枝梗時引起葡萄破損，增長被雜菌污染的機會。

（2）你認為應當從哪些方面防止發(fā)酵液被污染？

如：要先沖洗葡萄，再除去枝梗；榨汁機、發(fā)酵裝置要清洗潔凈，并進行酒精消毒；每次排氣

時只需擰松瓶蓋，不要完全揭開瓶蓋等。

（3）制葡萄酒時，為何要將溫度控制在18?25C?制葡萄醋時，為何要將溫度控制在

30?35℃?

溫度是酵母菌生長和發(fā)酵H勺重要條件。20c左右最適合酵母菌的繁殖。因此需要將溫度控制在其最

適溫度范圍內(nèi)。而醋酸菌是適溫菌，最適生長溫度為30?35℃,因此要將溫度控制在30?35℃。

課題二腐乳日勺制作

1、多種微生物參與了豆腐口勺發(fā)酵，如青霉、酵母、曲霉、毛霉等，其中起重要作用的是玉霉C毛

霉是一種絲狀真菌。代謝類型是異養(yǎng)需氧型C生殖方式是抱子生殖。營腐生生活。

2、原理：毛霉等微生物產(chǎn)生H勺蛋白酶能將豆腐中的蛋白質(zhì)分解成小分子的肽和氨基酸；脂肪酶可

將脂肪水解為甘油和脂肪酸。

3、試驗流程：讓豆腐上長出毛霉一加鹽腌制一加鹵湯裝瓶一密封腌制

4、釀造腐乳的重要生產(chǎn)工序是將豆腐進行前期發(fā)酵和后期發(fā)酵。

前期發(fā)酵的重要作用：1.發(fā)明條件讓毛霉生長。2.使毛酶形成菌膜包住豆腐使腐乳成型。

后期發(fā)酵重要是酶與微生物協(xié)同參與生化反應的過程。通過多種輔料與酶H勺緩和作用，生成腐乳

的香氣。

5、將豆腐切成3cmX3cm><15的若干塊。所用豆腐的含水量為70%左右，水分過多則腐乳不易成

娶

樣品水分含量(%)計算公式：

(烘干前容器和樣品質(zhì)量-烘干后容器和樣品質(zhì)量)/烘干前樣品質(zhì)量

?毛霉的生長：條件：將豆腐塊平放在籠屜內(nèi)，將籠屜中時控制在15?18P,并保持?定時溫

度。

來源：1.來自空氣中H勺毛霉泡子2.直接接種優(yōu)良毛霉菌種時間：5天

?加鹽腌制：將長滿毛霉H勺豆腐塊分層整潔地擺放在瓶中，同步逐層加鹽，伴隨層數(shù)的加高而增長

鹽量，靠近瓶口表面的鹽要鋪厚某些。加鹽腌制的時間約為8天左右。

.用鹽腌制時，注意控制鹽日勺用量：鹽的濃度過低，局限性以克制微生物的生長，也許導致豆腐腐

敗變質(zhì)；鹽的濃度過高會影響腐乳的口味

?食鹽的作用：1.克制微生物的生長，防止腐敗變質(zhì)2.析出水分，是豆腐變硬，在后期制作過程

中不易酥爛3調(diào)味作用，給腐乳以必要的咸味4.浸提毛酶茵絲上的蛋白酶。

?配制鹵湯：鹵湯直接關系到腐乳的色、香、味。鹵湯是由酒及多種香辛料配制而成的。鹵湯中酒

日勺含量?般控制在12%左右。

?酒的作用：1.防止雜菌污染以防腐2.與有機酸結合形成酯，賦予腐乳風味3.酒精含量的高下與

腐乳后期發(fā)酵時間的長短有很大關系，酒精含量越高，對蛋白酶的克制作用也越大，使腐乳成熟期

延長；酒精含量過低，蛋白酶的活性高，加緊蛋白質(zhì)的水解，雜菌繁殖快，豆腐易腐敗，難以成

塊。

?香辛料的作用：L調(diào)味作用2.殺菌防腐作用3.參與并增進發(fā)酵過程

?防止雜菌污染：①用來腌制腐乳的玻璃瓶，洗刷潔凈后要用沸水消毒。②裝瓶時，操作要迅速小

心。整潔地擺放好豆腐、加入鹵湯后，要用膠條將瓶口密封。封瓶時，最佳將瓶口通過酒精燈的火

焰，防止瓶口被污染。

期艱解率

（1）運用所學H勺生物學知識，解釋豆腐長白毛是怎么一回事？

豆腐生長日勺白毛是毛霉的白色菌絲。嚴格地說是直立菌絲，在豆腐中尚有制匐菌絲。

（2）我們平常吃的豆腐，哪種適合用來做腐乳？

含水量為70$左右的豆腐適于作腐乳。用含水量高的豆腐制作腐乳，不易成形。

（3）吃腐乳時，你會發(fā)現(xiàn)腐乳外部有一層致密日勺“皮”。這層“皮”是怎樣形成的J呢？

它對人體有吉嗎？它W、J作用是什么？

“皮”是前期發(fā)酵時在豆腐表面上生長H勺菌絲（匍匐菌絲），對人體無害。它能形成腐乳歐I

“體”，使腐乳成形。

課題三制作泡菜

?制作泡菜所用微生物是乳酸菌，其代謝類型是異養(yǎng)厭氧型。在無氧條件下，降糖分解為乳酸。

的、

分裂方式是二分裂。反應式為：C此外------2aH23+能量

常見的乳酸菌有乳酸鏈球菌和乳酸桿菌。乳酸桿菌常用于生產(chǎn)酸奶。

?亞硝酸鹽為白色粉末，易溶于水，在食品生產(chǎn)中用作食品添加劑。

?膳食中的亞硝酸鹽一般不會危害人體健康,國家規(guī)定肉制品中不超過30mg/kg,磐腌菜中不超過

20mg/kg,嬰兒奶粉中不超過2mg/kg。亞硝酸鹽被吸取后隨樂液排出體外，但在合適pH、溫度和

一定微生物作用下形成致癌物質(zhì)亞硝胺。

?一般在腌制10天后亞硝酸鹽含量開始減少，故在1（）天之后食用最佳

*測定亞硝酸鹽含量的原理是在鹽酸酸化條件下，亞小酸鹽與對氨基茶磺酸發(fā)生重氮化反應后，與

N7-養(yǎng)基乙二胺鹽酸鹽結合形成玫瑰紅色染料，與已知濃度的原則顯色液目測比較，估算泡菜中亞

硝酸鹽含量。

專題二微生物日勺培養(yǎng)與應用

課題一微生物日勺試驗室培養(yǎng)

?培養(yǎng)基按照物理性質(zhì)可分為液體培養(yǎng)基、半固體培養(yǎng)基和固體培養(yǎng)基，，在液體培養(yǎng)基中加入凝固

劑瓊脂（是從紅藻中提取的一種多糖，在配制培養(yǎng)基中用作凝固劑）后，制成瓊脂固體培養(yǎng)基。微

生物在固體培養(yǎng)基表面生長，可以形成肉眼可見的菌落。根據(jù)菌落的特性可以判斷是哪一種菌。液

體培養(yǎng)基應用于工業(yè)或生活生產(chǎn)，固體培養(yǎng)基應用于微生物的分離和鑒定，半固體培養(yǎng)基則常用于

觀測微生物日勺運動及菌種保藏等。

?按照成分培養(yǎng)基可分為人工合成培養(yǎng)基和天然培養(yǎng)基。合成培養(yǎng)基是用成分已知的化學物質(zhì)配制

而成，其中成分的種類比例明確，常用于微生物H勺分離鑒定。天然培養(yǎng)基是用化學成分不明的天然

物質(zhì)配制而成，常用于實際工業(yè)生產(chǎn)。

?按照培養(yǎng)基的用途，可將培養(yǎng)基分為選擇培養(yǎng)基和鑒定培養(yǎng)基,選擇培養(yǎng)基是指在培養(yǎng)基中加入

某種化學物質(zhì)，以克制不需要的微生物生長，增進所需要的微生物的生長。鑒別培養(yǎng)基是根據(jù)微生

物的特點，在培養(yǎng)基中加入某種指示劑或化學藥物配制而成為，用以鑒別不一樣類別的微生物。

?培養(yǎng)基的化學成分包括水、無機鹽、碳源、氮源、生長因子等。

.碳源：能為微生物的代謝提供碳元素的物質(zhì)。如CO?、NaMU.等無機碳源；糖類、石油、花牛.粉

餅等有機碳源。異養(yǎng)微生物只能運用有機碳源。單質(zhì)碳不能作為碳源。

.氮源：能為微生物的代謝提供氮元素的物質(zhì)。如此、NhNOs、NH；（無機氮源）蛋白質(zhì)、氨基

酸、尿素、牛肉膏、蛋白陳（有機氮源）等。只有固氮微生物才能運用N2。

?培養(yǎng)基還要滿足微生物生長對pH、特殊營養(yǎng)物質(zhì)以及銀氣的規(guī)定。例如，培養(yǎng)乳酸桿菌時需要

在培養(yǎng)基中添加維生素，培養(yǎng)霉菌時須將培養(yǎng)基H勺pH調(diào)至酸性，培養(yǎng)細菌是需要將pH調(diào)至中性或

微堿性，培養(yǎng)厭氧型微生物是則需要提供無氧的條件

?無菌技術?獲得純凈培養(yǎng)物H勺關鍵是防止外來雜菌口勺入侵，要注意如下幾種方面：

①對試驗操作H勺空間、操作者H勺衣著和手，進行清潔和消毒。

②將用于微生物培養(yǎng)的器皿、接種用品和培養(yǎng)基等器具進行滅菌。

③為防止周圍環(huán)境中微生物H勺污染，試驗操作應在酒精燈火焰附近進行。

④試驗操作時應防止已經(jīng)滅菌處理日勺材料用品與周圍口勺物品相接觸。

?無菌技術除了用來防止試驗室的培養(yǎng)物被其他外來微生物污染外，尚有什么目的?

答：無菌技術還能有效防止操作者自身被微生物感染。

?消毒與滅菌的區(qū)別

消毒指使用較為溫和II勺物理或化學措施僅殺死物體表面或內(nèi)部一部分對人體有害II勺微生物（不

包括芽抱和狗子）。消毒措施常用煮沸消毒法，巴氏消毒法（對「某些不耐高溫的液體）尚為化學

藥劑（如泗精、氯氣、石炭酸等）消毒、紫外線消毒。

滅菌則是指使用強烈H勺理化原因殺死物體內(nèi)外所有的微生物，包括芽抱和抱子。滅菌措施有炮

燒滅菌、干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌。

-滅菌措施：

①接種環(huán)、接種針、試管口等使用灼燒滅菌法：

②玻璃器皿、金屬用品等使用干熱滅菌法，所用器械是干熱滅菌箱；

③培養(yǎng)基、無菌水等使用高壓蒸汽滅菌法，所用器械是高壓蒸汽滅菌鍋。

④表面滅菌和空氣滅菌等使用紫外線滅菌法，所用器械是紫外燈。

?制作牛肉膏蛋白豚固體培養(yǎng)基

（1）措施環(huán)節(jié)：計算、稱量、溶化、滅菌、倒平板。

（2）倒平板操作的環(huán)節(jié)：

①將滅過菌H勺培養(yǎng)皿放在火焰旁H勺桌面上，右手拿裝有培養(yǎng)基的錐形瓶，左手拔出棉塞。

②右手拿錐形瓶，將瓶口迅速通過火焰。

③用左手日勺拇指和食指將培養(yǎng)皿打開一條梢不小于瓶口口勺縫隙，右手將錐形瓶中口勺培養(yǎng)基（約

10?20mL）倒入培養(yǎng)皿，左手立即蓋上培養(yǎng)皿的皿蓋。

④等待平板冷卻凝固，大概需5-lOmin.然后，將平板倒過來放置，使培養(yǎng)皿蓋在下、皿底

在上。

?倒平板操作的I討論

1.培養(yǎng)基滅菌后，需要冷卻到50℃左右時，才能用來倒平板。你用什么措施來估計培養(yǎng)基的

溫度？

提醒：可以用至觸摸盛有培養(yǎng)基於J錐形瓶，感覺錐形瓶的溫度下降到剛剛不燙手時，就可以進

行倒平板了。

2.為何需要使錐形瓶的瓶口通過火焰？

答：通過灼燒滅菌，防止瓶口口勺微生物污染培養(yǎng)基。

3.平板冷凝后，為何要將平板倒置？

答：平板冷凝后，皿蓋上會凝結水珠，凝固后日勺培養(yǎng)基表面日勺濕度也比較高，將平板倒置，既

可以使培養(yǎng)基表面U勺水分更好地揮發(fā)，又可以防止皿蓋上U勺水珠落入培養(yǎng)基，導致污染。

4.在倒平板的過程中，假如不小心將培養(yǎng)基濺在皿蓋與皿底之間的部位，這個平板還能用來培

養(yǎng)微生物嗎？為何？

答：空氣中的微生物也許在皿蓋與皿底之間的培養(yǎng)基上滋生，因此最佳不要用這個平板培養(yǎng)微

生物。

?純化大腸桿菌

（1）微生物接種的措施最常用的是平板劃線法和稀釋涂布平板法。

（2）平板劃線法是通過接種環(huán)在瓊脂固體培養(yǎng)基表面持續(xù)劃線的操作。將匯集H勺菌種逐漸稀釋分

散到培養(yǎng)基H勺表面。在多次劃線后培養(yǎng)，可以分離到由一種細胞繁殖而來的肉眼可見的子細胞群

體，這就是菌落。

（3）稀釋涂布平板法是將菌液進行一系列的梯度獨相，然后將不一樣稀釋度口勺菌液分別涂布到瓊

脂固體培養(yǎng)基II勺表面.，進行培養(yǎng)。分為系列稀釋操作和涂布平板操作兩步。

（4）用平板劃線法和稀釋涂布平板法接種的目的是：使匯集在一起的微生物分散成單個細胞，從

而能在培養(yǎng)基表面形成單個的菌落，以便于純化菌種。

（5）平板劃線法操作環(huán)節(jié)：

①將接種環(huán)放在火焰上灼燒,直到接種環(huán)燒紅。②在火焰旁冷卻接種環(huán),并打開棉塞。

③將試管口通過火焰。④將已冷卻的接種環(huán)伸入菌液中蘸取一環(huán)菌液。

⑤將試管通過火焰，并塞上棉塞。⑥左手將皿蓋打開條縫隙，右手將沾有菌種的接種環(huán)迅速

伸入平板內(nèi)，劃三至五條平行線，蓋上皿蓋。注意不要劃破培養(yǎng)皿。⑦灼燒接種環(huán)，待其冷卻后，

從第一區(qū)域劃線的末端開始往第二區(qū)域內(nèi)劃線。反復以上操作，在三、四、五區(qū)域內(nèi)劃線。注意不

要將最終一區(qū)的劃線與第一區(qū)相連，⑧將平板倒置.放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。

?平板劃線操作H勺討論

1.為何在操作的第一步以及每次劃線之前都要灼燒接種環(huán)？在劃線操作結束時，仍然需要

灼燒接種環(huán)嗎？為何？

答：操作H勺第一步灼燒接種環(huán)是為了防止接種環(huán)上也許存在的微生物污染培養(yǎng)物；每次劃線前

灼燒接種環(huán)是為了殺死上次劃線結束后，接種環(huán)上殘留的菌種，使下一次劃線時，接種環(huán)上的菌種

宜接來源于上次劃線的末端，從而通過劃線次數(shù)的增長，使每次劃線時菌種的數(shù)目逐漸減少，以便

得到菌落C劃紋結束后灼燒接種環(huán)，能及時殺死接種環(huán)上殘留的菌種，防止細菌污染環(huán)境和感染操

作者。

2.在灼燒接種環(huán)之后，為何要等其冷卻后再進行劃線？

答：以免接種環(huán)溫度太高，殺死菌種。

3.在作第二次以及其后的劃線操作時，為何總是從上一次劃線的末端開始劃線？

答：劃線后，線條末端細菌的數(shù)目比線條起始處要少，每次從上一次劃線的末端開始，能使細

菌的數(shù)目伴隨劃線次數(shù)的I增長而逐漸減少，展終能得到由單個細菌繁殖而來的菌落。

（6）涂布平板操作的環(huán)節(jié)：

①將涂布器浸在盛有酒精的燒杯中。②取少許菌液，滴加到培養(yǎng)基表面。

③將沾有少許酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃盡后，冷卻8?10s。④用涂布器將菌液均勻

地涂布在培養(yǎng)基表面。

?涂布平板操作的J討論

涂布平板的）所有操作都應在火焰附近進行。結合平板劃線與系列稀釋的無菌操作規(guī)定，想一

想，第2步應怎樣進行無菌操作？

提醒：應從操作的各個細節(jié)保證“無菌”。例如，酒精燈與培養(yǎng)皿H勺距離要合適、吸管頭不要

接觸任何其他物體、吸管要在酒精燈火焰周圍；等等。

菌種的保留

（1）對于頻繁使用的菌種，可以采用臨時保藏的措施。

①臨時保藏措施

將菌種接種到試管的固體斜面培養(yǎng)基上，在合適的I溫度卜.培養(yǎng)。當菌落長成后，將試管放入

4c的冰箱中保藏。后來每3?6個月，都要重新將菌種從舊的培養(yǎng)基上轉移到新鮮的培養(yǎng)基上。

②缺陷：這種措施保留的時間不長，菌種輕易被污染或產(chǎn)生變異。

(2)對于需要長期保留的菌種，可以采用甘油管藏的措施。

在3mLH勺甘油瓶中，裝入1mL甘油后滅菌。將1mL培養(yǎng)的J菌液轉移到甘油瓶中，與甘油充足混

勻后，放在一2(TC的冷凍箱中保留。

疑娘胡答

(1)生物H勺營養(yǎng)

人及動物的營養(yǎng)物質(zhì)：水、無機鹽、糖類、脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、維生素六類。

植物的營養(yǎng)物質(zhì)：礦質(zhì)元素、水、二氧化碳等三類。

微生物的營養(yǎng)物質(zhì)：水、無機鹽、碳源、氮源及特殊營養(yǎng)物質(zhì)五類。

<2)確定培養(yǎng)基制作與否合格日勺措施

將未接種U勺培養(yǎng)基在恒溫箱中保溫1~2天，無菌落生長，闡明培養(yǎng)基的制備是成功的，否則

需要重新制備。

課題二土壤中分解尿素的細菌的分離與計數(shù)

尿素是一種重要的農(nóng)業(yè)氮肥，尿素并不能直接被農(nóng)作物吸取C只有當土壤中的細菌將尿素分解

成氨之后，才能被植物運用。土壤中H勺細菌之因此能分解尿素，是由于他們能合成胭酶

尿素最初是從人的尿液中發(fā)現(xiàn)的

篩選菌株

(1)試驗室中微生物的篩選應用歐J原理

人為提供有助于目的菌株生長的條件(包括營養(yǎng)、溫度、pH等)，同步克制或制止其他微生

物生長。

(2)選擇性培養(yǎng)基

在微生物學中，將容許特定種類日勺微生物生長，同步克制或制止其他種類微生物生長的培養(yǎng)

基，稱作選擇培養(yǎng)基。

(3)配制選擇培養(yǎng)基的根據(jù)

根據(jù)選擇培養(yǎng)的菌種H勺生理代謝特點加入某種物質(zhì)以到達選擇的目的,例如，培養(yǎng)基中不加入

有機物可以選擇培養(yǎng)自養(yǎng)微生物：培養(yǎng)基中不加入氮元素，可以選擇培養(yǎng)能固氮的微生物；加入高

濃度的食鹽可選擇培養(yǎng)金黃色葡萄球菌等。

記錄菌落數(shù)目

(1)測定微生物數(shù)量的常用措施有稀釋涂布平板法和顯微鏡直接計數(shù),,

(2)稀釋涂布平板法記錄樣品中活菌的數(shù)目的原理

當樣品H勺稀釋度足夠高時，培養(yǎng)基表面生長日勺一種菌落，來源于樣品稀釋液中的一種活菌。通

過記錄平板上的菌落數(shù)，就能推測出樣品中大概具有多少活細菌。為了保證成果精確，一般設置

3?5個平板,選擇菌落數(shù)在30?300的平板進行計數(shù),并取平均值，記錄的菌落數(shù)往往比活菌的

實際數(shù)目低,因此，記錄成果一般用菌落數(shù)而不是活菌數(shù)來表達。

采用此措施的注意事項：1.一般選用菌落數(shù)在30^300之間的平板進行計數(shù)2.為了防止菌落蔓延，

影響計數(shù)，可在培養(yǎng)基中加入TTC3.本法僅限于?形成菌落的微生物

（1）土壤取樣：同其他生物環(huán)境相比，土壤中的微生物，數(shù)最最大，種類最多。在富具有機質(zhì)的

土壤表層，有更多的微生物生長。從富具有機物、潮濕、pH七7的土壤中取樣。鏟去表層土，在距

地表約3?8cm口勺土壤層取樣。

（2）樣品的稀釋：樣品的稀釋程度將直接影響平板上生長時菌落數(shù)目。在實際操作中，一般選用

一定稀釋范圍的樣品液進行培養(yǎng)，以保證獲得菌落數(shù)在30~300之間，適于計數(shù)的平板。

測定土壤中細菌的數(shù)量，一般選用IO,IO,i06

測定放線菌的數(shù)量，一般選用IO，io,io,

測定真菌的數(shù)量，一般選用IO?IO'10,

（3）微生物的培養(yǎng)與觀測

不?樣種類日勺微生物，往往需要不一樣的培養(yǎng)溫度和培養(yǎng)時間。細菌30~379「2天

放線菌25~28c5~7天霉菌25~28℃3~4天

每隔24小時記錄一次菌落數(shù)目,選用菌落數(shù)目穩(wěn)定期"勺記錄作為成果，這樣可以防止因培養(yǎng)時間

局限性而導致一樓菌落口勺數(shù)目。一般來說，在一定的培養(yǎng)條件下（相似口勺培養(yǎng)基、唯獨及培養(yǎng)時

間），同種微生物體現(xiàn)出穩(wěn)定的菌落特性（形狀、大小、隆起程度、顏色）

疑難解答

（1）怎樣從平板上H勺菌落數(shù)推測出每克樣品中的菌落數(shù)?

記錄某一稀釋度下平?板上H勺菌落數(shù)，最佳能記錄3個平板，計算出平板菌落數(shù)的平均值

每克樣品中的菌落數(shù)=（C/V）*M其中，C代表某一稀釋度下平板上生長的平均菌落數(shù)，、代表

涂布平板時所用的稀釋液的體積（ml）,M代表稀釋倍數(shù)

課題三分解纖維素的微生物日勺分離

纖維素，一種由鋪箱糖首尾相連而成||勺高分子化合物，是地球1:含量最豐富的多糖類物質(zhì)，

纖維素與纖維素酶

<1）棉花是白燃界中纖維素含量最高的天燃產(chǎn)物，木材,作物秸和:等也'富含纖維素”

（2）纖維素酶是一種復合酶,一般認為它至少包括三種組分，即G酶、Q酶和葡萄糖昔酶,前兩

種酶使纖維素分解成纖維二糖，第三:種酶將纖維二糖分解成葡萄糖。纖維素最終被水解成前萄糖，

為微生物的生長提供營養(yǎng)。

纖維素分解菌的篩選

（1）篩選措施：剛果紅染色法?？梢酝ㄟ^顏色反應直接對微生物進行篩選。

（2）剛果紅染色法篩選纖維素分解菌的原理

剛果紅是一種染料，它可以與像纖維素這樣H勺多糖物質(zhì)形成紅色復合物,但并不和水解后的纖

維二糖和葡萄糖發(fā)生這種反成。當我們在具有纖維素的培養(yǎng)基中加入剛果紅時，剛果紅能與培養(yǎng)基

中的纖維素形成紅色復合物。當纖維素被纖維素酶分解后，剛果紅一纖維素的復合物就無法形成，

培養(yǎng)基中會出現(xiàn)以纖維素分解菌為中心口勺透明圈。這樣，我們就可以通過與否產(chǎn)生透明圈來篩選纖

維素分解菌。

分離分解纖維素的微生物的試驗流程

土壤取樣一選擇培養(yǎng)（此步與否需要，應根據(jù)樣品中目H勺菌株數(shù)量的多少來確定）一梯度稀移一將

樣品涂布到鑒別纖維素分解菌歐I培養(yǎng)基上一挑選產(chǎn)生透明圈的菌落

（1）上壤采集選擇富含纖維素的環(huán)境。

(2)剛果紅染色法分離纖維素分解菌的I環(huán)節(jié)倒平板操作、制備菌懸液、涂布平板

(3)剛果紅染色法種類

?種是先培養(yǎng)微生物，再加入剛果紅進行顏色反應，另?種是在倒平板時就加入剛果紅。

課題延伸

對分解纖維素的微生物進行了初步的篩選后，只是分離純化的第一步，為確定得到H勺是纖維素

分解菌，還需要進行發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶H勺試驗，纖維素酶的發(fā)醉措施有液體發(fā)酵和固體發(fā)酵兩種。纖

維素酶的測定措施，一般是對纖維素酶分解濾紙等纖維素后所產(chǎn)生的葡萄糖進行定量的測定。

疑難解答

(1)為何要在富含纖維素口勺環(huán)境中尋找纖維素分解菌？

由于生物與環(huán)境口勺互相依存關系，在富含纖維素的環(huán)境中，纖維素分解菌的含最相對提高，因

此從這種土樣中獲得目的微生物的幾率要高于--般環(huán)境。

(2)將濾紙埋在土壤中有什么作用？你認為濾紙應當埋進土壤多深？

將漉紙埋在土壤中能使纖維素分解菌相對匯集，實際上是人工設置纖維素分解菌生存的合適環(huán)

境。一般應將紙埋于深約10cm左右腐殖土壤中。

(3)兩種剛果紅染色法H勺比較

措施一是老式的措施，缺陷是操作繁瑣，加入剛果紅溶液會使菌落之間發(fā)生混雜；其長處是這

樣顯示出H勺顏色反應基本上是纖維素分解菌的作用。措施二H勺長處是操作簡便，不存在菌落混雜問

題，缺陷是由于纖維素和瓊脂、土豆汁中都具有淀粉類物質(zhì)，可以使可以產(chǎn)生淀粉酶H勺微生物出現(xiàn)

假陽性反應。但這種只產(chǎn)生淀粉酶H勺微生物產(chǎn)生的透明圈較為模糊，由于培養(yǎng)基中纖維素占重要地

位，因此可以與纖維素酣產(chǎn)生的透明圈相辨別。措施一的另一缺陷是：有些微生物具有降解色素的

能力，它們在長時間培養(yǎng)過程中會降解剛果紅形成明顯的透明圈，與纖維素分解菌不易辨別。

（4）為何選擇培養(yǎng)可以“濃縮”所需的微生物?

在選擇培養(yǎng)的條件下，可以使那些可以適應這種營養(yǎng)條件口勺微生物得到迅速繁殖，而那些不適

應這種營養(yǎng)條件H勺微生物的繁殖被克制，因此可以起到“濃縮”的作用。

專題三植物日勺組織培養(yǎng)技術

課題一菊花日勺組織培養(yǎng)

植物組織培養(yǎng)的基本過程

細胞分化：在生物個體發(fā)育過程中，細胞在形態(tài)、構造和生理功能上出現(xiàn)穩(wěn)定性差異的過程。

離體的植物組織或細胞，在培養(yǎng)了一段時間后來，會通過細胞分裂，形成愈傷組織，愈傷組織的細

胞排列疏松而無規(guī)則，是一種高度液泡化的呈無定形狀態(tài)的薄壁細胞。由高，度分化的植物組織或細

胞產(chǎn)生愈傷組織的過程，稱為植物細胞FJ脫分化，或者叫做去分化。脫分化產(chǎn)生日勺愈傷組織繼續(xù)進

行培養(yǎng)，又可以重新分化成根或芽等器官，這個過程叫做再分化。再分化形成H勺試管苗，移栽到地

里，可以發(fā)育成完整口勺植物體。

植物細胞工程

具有某種生物全套遺傳信息的任何一種活細胞,都具有發(fā)育成完整個體的能力,即每個生物細胞都

具有全能性。但在生物體的生長發(fā)育過程中并不體現(xiàn)出來，這是由于在特定的時間和空間條件下,

通過基因的選擇性體現(xiàn),構成不一樣組織和器宜。

植物組織培養(yǎng)技術的J應用有：實現(xiàn)優(yōu)良品種時迅速繁殖;培育脫毒作物;制作人工種子;培育作物

新品種以及細胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn)等。

-細胞分化是一種持久性的變化，它有什么生理意義？

使多細胞生物體中細胞構造和功能趨向專門化，有助于提高多種生理功能的效率。

比較根尖分生組織和愈傷組織的異同

組織類型細胞來源紐胞形態(tài)細胞構造細胞排列細胞去向

根尖分化成多種

受精卵正方形無液泡緊密

分生組織細胞組織

影響植物組織培養(yǎng)H勺條件

愈傷組織高度分化細胞無定形高度液泡化疏松再分化成新個體

材料：不?樣的植物組織，培養(yǎng)日勺難易程度差異很人。植物材料的選擇直接關系到試驗的成敗。植

物陽陰屢、

確用腳解價褊1桿刷犍姆都會影響試驗成果。菊花組織培養(yǎng)一般選擇未開花植物

1睢m亳重觸照間則幽殺1型。一股米說，羥易進行尢性繁殖的植物羥易進仃組織培養(yǎng)。選用生長

旺盛嫩枝進行組培的是嫩枝生理狀態(tài)好，輕易誘導脫分化和再分化。

營養(yǎng)：離體FI勺植物組織和細胞，對營養(yǎng)、環(huán)境等條件的規(guī)定相對特殊，需要配制合適的培養(yǎng)基。

用的培養(yǎng)基是MS培養(yǎng)基，其中具有的大量元素是N、P、S、K、Ca、Mg,微量元素是Fe、Mn、B、

Zn、Cu、M。、I、C。，有機物有甘氨酸、煙酸、肌醇、維生素、蔗糖等。

激素：植物激素中生長素和細胞分裂素是啟動細胞分裂、脫分化和再分化的關鍵性激素。在生長素

存在的狀況下，細胞分裂素的作用展現(xiàn)加強趨勢。在培養(yǎng)基中需要添加生長素和細胞分裂素等植物

激素，其濃度、使用H勺先后次序、用量H勺比例等都影響成果。

生長素/細胞分裂素比值與成果

使用次序試驗成果

比值高時促根分化，抑芽形成

先生長素，后細胞分裂素有助于分裂但不分化

比值低時促芽分化，抑根形成

先細胞分裂素，后生長素細胞既分裂也分化

比值適中增進愈傷組織生長

同步使用分化頻率提高

環(huán)境條件：PH、溫度、光等環(huán)境條件。

不一樣的植物對多種條件的規(guī)定往往不一樣。進行菊花的組織培養(yǎng)，一般將pH控制在5.8左右,

溫度控制在18~22C,并且每日用日光燈照射12h.

4、操作流程

配制MS固體培養(yǎng)基：配制多種母液：將多種成分按配方比例配制成的濃縮液（培養(yǎng)基母液）。

?使用時根據(jù)母液H勺濃縮倍數(shù)，計算用量，并加蒸儲水稀釋。

?配制培養(yǎng)基：應加入的物質(zhì)有瓊脂、蔗糖、大量元素、微量元素、有機物和植物激素的母液,并

用蒸做水定容到1000毫升。

.在菊花組織培養(yǎng)中，可以不添加植物激素原因是菊花莖段組織培養(yǎng)比較輕易。

?滅菌：采用日勺滅菌措施是高壓蒸汽滅菌。

?MS培養(yǎng)基中多種營養(yǎng)物質(zhì)的作用是什么？與肉湯培養(yǎng)基相比，MS培養(yǎng)基有哪些特點？

大量元素和微量元素提供植物細胞所必需的無機鹽；蔗糖提供碳源，維持細胞滲透壓：甘氨酸、維

生素等物質(zhì)重要是為了滿足離體植物細胞在正常代謝途徑受到一定影響后所產(chǎn)生的J特殊營養(yǎng)需求。

微生物培養(yǎng)基以有機營養(yǎng)為主,MS培養(yǎng)基則需提供人半無機營養(yǎng)。

外植體的消毒外植體：用于離體培養(yǎng)H勺植物器官或組織片段。選用菊花莖段時，要取生長旺盛日勺

嫩枝。菊花莖段用流水沖洗后可加少許洗衣粉，用軟刷輕輕刷洗，刷洗后在流水下沖洗20min左

右。用無菌吸水紙吸干外植體表面的水分，放入體積分數(shù)為70%的酒精中搖動2?3次，持續(xù)6~7s,

立即將外植體取出，在無菌水中清洗。取出后仍用無菌吸水紙吸干外植體表面水分，放入質(zhì)量分數(shù)

為0.1%日勺氯化汞溶液中廣2min。取出后，在無菌水中至少清洗3次，漂洗消毒液。

注意：對外植體進行表面消毒時，就要考慮藥劑的消毒效果，又要考慮植物H勺耐受能力。

接種：接種過程中插入外植體時形態(tài)學上端朝上，每個錐形瓶接種7?8個外植體。外植體接種與

細菌接種相似，操作環(huán)節(jié)相似，并且都規(guī)定無菌操作。

培養(yǎng)：應當放在無菌箱中進行，并定期進行消毒，保持合適內(nèi)溫度（18~22C）和光照（12h）

移栽：栽前應先打開培養(yǎng)瓶的封口膜，讓其在培養(yǎng)間生長幾日，然后用流水清洗根部培養(yǎng)基。然后

將幼苗移植到消過毒的蛭石或珍珠巖等環(huán)境中生活一段時間，進行壯苗。最終進行露天栽培。

栽培

外植體在培養(yǎng)過程中也許會被污染，原因有外植體消毒不徹底；培養(yǎng)基滅菌不徹底；接種中被雜菌

污染；錐形瓶密封性差等。

專題二0冬日勺在名佶界

被子植物的花粉發(fā)育被子植物的雄蕊一般包括花絲、花藥兩部分?；ㄋ帪槟覡顦嬙?內(nèi)部具有許多

花粉?；ǚ凼怯苫ǚ勰讣毎ㄟ^減數(shù)分裂而形成日勺，因此，花粉是單倍體的生殖細胞，被子植物花

粉的發(fā)育要經(jīng)歷小抱子四分體時期、單核期和雙核期等階段。在小抱子四分體時期，4個單倍體細

胞連在一起，進入單核期時，四分體H勺4個單倍體細胞彼此分離，形成4個具有單細胞核口勺花粉

粒。這時日勺細胞含濃厚日勺原生質(zhì)，核位于細胞口勺中央（單核居中期）。伴隨細胞不停長大，細胞核

由中央移向細胞一側（單核靠邊期），并分裂成1個生殖細胞核和1個花粉管細胞核，進而形成兩

個細胞，一種是生殖細胞，一種是營養(yǎng)細胞。生殖細胞將在分裂一次，形成兩個精子。

注意：①成熟的花粉粒有兩類，一類是二核花粉粒，其花粉粒中只含花粉管細胞核和生殖細胞核，

二核花粉粒口勺精子是在花粉管中形成H勺；另一類是三核花粉粒，花粉在成熟前，生殖細胞就進行一

次有絲分裂，形成兩個精子，此花粉粒中具有兩個精子核和一種花粉管核（營養(yǎng)核）②花粉發(fā)育過

程中的四分體和動物細胞減數(shù)分裂的四分體不一樣。花粉發(fā)育過程中的四分體是花粉母細胞經(jīng)減數(shù)

分裂形成的4個連在一起歐I單倍體細胞；而動物細胞減數(shù)分裂過程中H勺四分體是聯(lián)會配對后H勺一對

同源染色體，由于具有四條染色單體而稱為四分體。③同畢生殖細胞形成U勺兩個精子，其基因構成

完全相似V

產(chǎn)生花粉植株的兩種途徑通過花藥培養(yǎng)產(chǎn)生花粉植株（即單倍體植株）一般有兩種途徑，一種是花

粉通過胚狀體階段發(fā)育為植物，另一種是花粉在誘導培養(yǎng)基上先形成愈傷組織，再將其誘導分化成

植迷「這兩種途徑之間并沒有絕對口勺界線，植要取決于培養(yǎng)基中激素的種類及其濃度配比。

注意；①無論哪種產(chǎn)生方式，都要先誘導生芽，再誘導生根②胚狀體:植物體細胞組織培養(yǎng)過程

中，誘導產(chǎn)生的形態(tài)與受精卵發(fā)育成日勺胚非常類似的構造，其發(fā)育也與受精卵發(fā)育成日勺胚類似，有

胚芽、胚根、胚軸等完整構造，就像一粒種子，乂稱為細胞胚。

影響花藥培養(yǎng)口勺原因誘導花粉能否成功及誘導成功率的高下，受多種原因影響，其中材料的選擇勺

培養(yǎng)基的構成是重要的影響原因

?親本的生理狀況：花粉初期是的花藥比后期的更輕易產(chǎn)生花粉植株，選擇月季的初花期.

?合適的花粉發(fā)育時期：一般來說，在單核期,細胞核由中央移向細胞一側的時期，花藥培養(yǎng)成功

率最高

?花蕾：選擇完全未開放的）花蕾

?親本植株的生長條件、材料的低溫預處理以及接種密度等對誘導成功率均有一定影響

?材料的選用：選擇花藥時，一般要通過鏡檢來確定其中U勺花粉與否處在合適"勺發(fā)育期。確定花粉

發(fā)育時期的最常用口勺措施是醋酸洋紅法.不過，某些植物的花粉細胞核不易著色，需采用焙花青-

絡桃法，這種措施能將花粉細胞核染成藍黑色

-材料的J消毒

?接種和培養(yǎng)：滅菌后日勺花蕾，要在無菌條件卜.除去萼片和花瓣，并立即將花藥接種到培養(yǎng)基上。

在剝離花藥時，要盡量丕損傷花藥（否則接種后輕易從受傷部位長生愈傷組織），同步還要:徹底清

除花絲,由于與花絲相連的I花藥不利于愈傷組織或胚狀體的形成，一般每瓶接種花藥7?10個，培

養(yǎng)溫度控制在25c左右,不需要光照.幼小植株形成后才需要光照.一股通過20?30天培養(yǎng)后，會發(fā)

現(xiàn)花藥無裂，長出愈傷組織或形成胚狀體。將愈傷組織及時轉移到分化培養(yǎng)基上，以便深入分化出

再生植株。假如花藥開裂釋放出胚狀體，則一種花藥內(nèi)就會產(chǎn)生大量幼小植株，必須在花藥開裂后

盡快將幼小植株分開，分別移植到新的培養(yǎng)基上，否則這些植株將很難分開。還需要對培養(yǎng)出來H勺

植株做深入的鑒定和篩選。

植物組織培養(yǎng)技術與花藥培養(yǎng)技術日勺相似之處是：培養(yǎng)基配制措施、無菌技術及接種操作等基本相

似。兩者H勺不一樣之處在于：花藥培養(yǎng)的選材非常重要，需事先探索時期合適的花蕾；花藥裂開后

釋放出的愈傷組織或胚狀體也要及時更換培養(yǎng)基；花藥培養(yǎng)對培養(yǎng)基配方H勺規(guī)定更為嚴格。這些都

使花藥培養(yǎng)的難度大為增長。

名麴ZDNA上曙&場技術

送蹌一DNA的粗成軀芻整定

?提取DNA的溶解性原理包括哪些方面？

DNA在不?樣濃度NaCl溶液中溶解度不?樣：DNA不溶于酒精。

?DNA在不一樣濃度NaCl溶液中溶解度有何特點？要使DNA溶解，需要使用什么

濃度？要使DNA析出，又需要使用什么濃度？

在0.14mol/L時溶解度及小;較高濃度可使DNA溶解；0.14mol/L可使DNA析

出。

?在溶解細胞中口勺DNA時，人們一般選用2mol/LNaCl溶液；將DNA分子析出的措施是向潘也四

“勺NaCl溶液中緩慢注入蒸儲水，以稀釋NaCl溶液。酒精是一種常用有機溶劑，但DNA卻不能溶于

酒精（尤其是95%冷卻酒精），但細胞中蛋白質(zhì)可溶于酒精。

從理論上分析，預冷日勺乙醇溶液具有如下長處。一是克制核酸水解酶活性，防止DNA降解：二是減

少分子運動，易于形成沉淀析出；三是低溫有助于增長DNA分子柔韌性，減少斷裂。

?采用DNA不溶于酒精的原理,可以到達什么目的?

將DNA和蛋白質(zhì)深入分離。

?提取DNA還可以運用DNA對酶、高溫和洗滌劑的耐受性原理。運用該原理時，應選用怎樣的能和

怎樣的溫度值？

蛋白酶，由于酶具有專一性，蛋白酶只水解蛋白質(zhì)而不會對DNA產(chǎn)生影響。溫度值為60?

80℃,由于該溫度值蛋白質(zhì)變性沉淀，而DNA不會變性。

補充：DNAR勺變性是指D"分子在高溫下解螺旋，其溫度在80C以上，如在PCR技術中DNA變

性溫度在95℃。

?洗滌劑在提取DNA中有何作用？

洗滌劑將細胞膜上的蛋白質(zhì)，從而瓦解細胞