（高清版）DB51∕T 1078-2010 飼料中∕T-2毒素的測(cè)定 高效液相色譜法

DB51/T1078—2010飼料中T-2毒素的測(cè)定高效液相色譜法I前言 1范圍 12規(guī)范性引用文件 13原理 14試劑和溶液 1 1 27分析步驟 28結(jié)果計(jì)算 29精密度 3附錄A(資料性附錄) 4Ⅱ本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A為資料性附錄。本標(biāo)準(zhǔn)由四川省畜牧食品局提出并歸口。本標(biāo)準(zhǔn)由四川省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局批準(zhǔn)。本標(biāo)準(zhǔn)由四川省飼料工作總站負(fù)責(zé)起草。本標(biāo)準(zhǔn)起草人：柏凡、李云、魏敏、王宇萍、張靜、趙立軍。1DB51/T1078-2010飼料中T-2毒素的測(cè)定高效液相色譜法本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了測(cè)飼料中T-2毒素的含量的高效液相色譜法(HPLC)。本標(biāo)準(zhǔn)適用于配合飼料、濃縮飼料及飼料原料的測(cè)定。本標(biāo)準(zhǔn)中檢出限為0.1mg/kg。下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法GB/T14699.1飼料采樣GB/T20195動(dòng)物飼料試樣的制備試樣經(jīng)甲醇-水提取，提取液經(jīng)過(guò)免疫親和柱凈化，濃縮，衍生后，用高效液相色譜儀-熒光檢測(cè)器檢測(cè)，外標(biāo)法計(jì)算T-2毒素含量。除特殊說(shuō)明外，所有試劑均為分析純，色譜用水符合GB/T6682一級(jí)用水的規(guī)定。4.2甲醇：色譜純。4.4甲醇-水(8+2)提取液：取80mL甲醇，加20mL水，混勻。4.54-二甲基氨基吡啶(DMAP)溶液：準(zhǔn)確稱取0.0325g于100mL容量瓶中，用甲苯稀釋至刻度。4.61-氰酸蒽(1-AN)溶液：準(zhǔn)確稱取0.030g于100mL容量瓶中，用甲苯稀釋至刻度。4.7T-2毒素標(biāo)準(zhǔn)品：含量大于98%。4.7.1標(biāo)準(zhǔn)貯備液：精密稱取10mgT-2毒素標(biāo)準(zhǔn)品，用乙腈溶解、定容至100mL,此貯備液濃度為100μg/mL,置于冰箱中-20℃保存，有效期6個(gè)月。μg/mL、0.50μg/mL、1.00μg/mL、2.00μg/mL,5.00μg/mL,置于冰箱中2℃~8℃保存，有效期1個(gè)4.8T-2毒素免疫親和柱。5.2超聲波清洗器。5.3離心機(jī)：轉(zhuǎn)速為5000r/min以上。5.4超純水處理器。25.6高效液相色譜儀：配備熒光外檢測(cè)器。5.7氮吹儀。6試樣制備按GB/T14699.1規(guī)定采集試樣后，按GB/T20195規(guī)定，選取具有代表性的實(shí)驗(yàn)室樣品1kg,四分法縮減分取200g左右，粉碎過(guò)1mm孔篩，混勻裝入磨口瓶中備用。7.1試樣溶液的制備7.1.1提取稱取25g試樣(精確至0.01g)于錐形瓶中，加入100mL甲醇-水(8+2)提取液(4.4),超聲提取7.1.2凈化用10mL水淋洗，抽干柱子，用2mL甲醇(4.2)洗脫。洗脫液50℃氮?dú)獯蹈桑苌?.1.3衍生溶液(4.6),渦旋混合1min,于50℃水浴中反應(yīng)15min,在冰水中冷卻10min。50℃以下氮?dú)獯蹈珊螅瑴?zhǔn)確加入流動(dòng)相(7.2.3)1.0mL,渦旋30s,過(guò)0.45μm濾膜，上機(jī)測(cè)定。7.2色譜條件7.2.2柱溫：30℃。7.2.37.2.5檢測(cè)器：熒光檢測(cè)器，Ex:381nm,Em:470nm。7.3測(cè)定按上述色譜條件，分別將標(biāo)準(zhǔn)溶液和試樣溶液上機(jī)測(cè)定，按照保留時(shí)間進(jìn)行定性，單點(diǎn)或多點(diǎn)校正外標(biāo)法定量。8結(jié)果計(jì)算V——上機(jī)定容體積，單位為毫升(mL);AsT-2毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液對(duì)應(yīng)的色譜峰面積；m——試樣質(zhì)量，單位為克(g);n——稀釋倍數(shù)。結(jié)果用