（高清版）DB51∕T 1079-2010 飼料中嘔吐毒素的測(cè)定 高效液相色譜法

DB51/T1079—2010飼料中嘔吐毒素的測(cè)定高效液相色譜法2010-06-01發(fā)布2010-07-01I前言 Ⅱ1范圍 12規(guī)范性引用文件 13原理 14試劑和溶液 1 1 27分析步驟 28結(jié)果計(jì)算 29精密度 2附錄A(資料性附錄) 3Ⅱ本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A為資料性附錄。本標(biāo)準(zhǔn)由四川省畜牧食品局提出并歸口。本標(biāo)準(zhǔn)由四川省質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局批準(zhǔn)。本標(biāo)準(zhǔn)由四川省飼料工作總站負(fù)責(zé)起草。本標(biāo)準(zhǔn)起草人：柏凡、張靜、李云、馮婭、魏敏、趙立軍。1DB51/T1079-2010飼料中嘔吐毒素的測(cè)定高效液相色譜法本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了測(cè)飼料中嘔吐毒素的含量的高效液相色譜法(HPLC)。本標(biāo)準(zhǔn)適用于配合飼料、濃縮飼料及飼料原料的測(cè)定。本標(biāo)準(zhǔn)中檢出限為0.3mg/kg。下列文件對(duì)于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本(包括所有的修改單)適用于本文件。GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法GB/T14699.1飼料采樣GB/T20195動(dòng)物飼料試樣的制備試樣經(jīng)純水提取，離心、過濾后，取濾液經(jīng)過免疫親和柱凈化，濃縮，用高效液相色譜儀-紫外檢測(cè)器檢測(cè)，外標(biāo)法計(jì)算嘔吐毒素含量。除特殊說明外，所有試劑均為分析純，色譜用水符合GB/T6682一級(jí)用水的規(guī)定。4.3聚乙二醇8000(PEG8000)。4.4嘔吐毒素標(biāo)準(zhǔn)品：含量大于98%。4.4.1標(biāo)準(zhǔn)貯備液：精密稱取10mg嘔吐毒素標(biāo)準(zhǔn)品，用乙腈溶解、定容至100mL,此貯備液濃度為100μg/mL,置于冰箱中2℃~8℃保存，有效期6個(gè)月。4.4.2標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：分別準(zhǔn)確移取嘔吐毒素貯備液，用流動(dòng)相配制成標(biāo)準(zhǔn)工作溶液：0.3μg/mL、1.0μg/mL,2.0μg/mL,5.0μg/mL,10.0μg/mL。置于冰箱中2℃~8℃保存，有效期1個(gè)月。4.5嘔吐毒素免疫親和柱。5.4超純水處理器。5.5渦旋混合器。5.6高效液相色譜儀：配備紫外檢測(cè)器。5.80.45μm濾膜。26試樣制備按GB/T14699.1規(guī)定采集試樣后，按GB/T20195規(guī)定，選取具有代表性的實(shí)驗(yàn)室樣品1kg,四分法縮減分取200g左右，粉碎過1mm孔篩，混勻裝入磨口瓶中備用。7分析步驟7.1試樣溶液的制備7.1.1提取稱取25g試樣(精確至0.01g)于錐形瓶中，加入5g聚乙二醇8000(4.3),100mL水，振蕩提取30min,離心，取上清液過濾，濾液待凈化(濃度較高時(shí)濾液應(yīng)用水稀釋后待凈化，以免小柱超載)。7.1.2凈化將免疫親和柱中緩沖液排出，用1mL水過柱，準(zhǔn)確吸取2.0mL提取液以1滴/秒的速度通過免疫親和柱，用5mL水淋洗，抽干柱子，用2mL甲醇(4.2)洗脫。洗脫液60℃氮?dú)獯蹈?，?zhǔn)確加入流動(dòng)相(7.2.3)500μL,渦旋30s,過0.45μm濾膜，上機(jī)測(cè)定。7.2色譜條件7.2.1色譜柱：C?8柱，柱長250mm,內(nèi)徑4.6mm,粒度5μm;或性能相當(dāng)?shù)纳V柱。7.2.2柱溫：30℃。7.2.3。7.2.5檢測(cè)器：紫外檢測(cè)器(或二極管陣列檢測(cè)器),檢測(cè)波長220nm。7.2.6進(jìn)樣量：40μL。7.3測(cè)定按上述色譜條件，分別將標(biāo)準(zhǔn)溶液和試樣溶液上級(jí)測(cè)定，按照保留時(shí)間進(jìn)行定性，單點(diǎn)或多點(diǎn)校正外標(biāo)法定量。8結(jié)果計(jì)算試樣中嘔吐毒素的含量X,以質(zhì)量分?jǐn)?shù)毫克每千克(mg/kg)表示，單點(diǎn)校正按式(1)計(jì)算：V——上機(jī)定容體積，單位為毫升(mL);As——嘔吐毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液對(duì)應(yīng)的色譜峰面積；A——試樣溶液對(duì)應(yīng)的色譜峰面積；Cs——嘔吐毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，單位為微克每毫升(μg/mL);m——試樣質(zhì)量，單位為克(g)