課件禽病學(xué)（完整版）禽病學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)

實(shí)驗(yàn)一新城疫血凝與血凝抑制試驗(yàn)?zāi)康囊饬x：掌握血凝試驗(yàn)〔HA〕與血凝抑制試驗(yàn)〔HAI〕的根本方法；體會(huì)HA與HAI在新城疫病毒及其它病毒診斷和鑒定中的應(yīng)用。根本原理：許多病毒外表具血凝素，具有凝集某些動(dòng)物或人紅細(xì)胞的特性，稱為血凝現(xiàn)象，可用于鑒定病毒。血凝現(xiàn)象可以被特異性抗體所抑制，稱為血凝抑制現(xiàn)象，利用這種特性可進(jìn)行血清學(xué)試驗(yàn)，稱為血凝抑制試驗(yàn)。〔一〕血凝試驗(yàn)〔HA〕：取96孔板，按以下步驟操作：1、第一排1-12孔各加生理鹽水50ul，第二排1-12孔加生理鹽水50ul為紅細(xì)胞對(duì)照；2、吸50ul病毒液于第一排第1孔，混勻后取50ul至第2孔，依次稀釋至第12孔，棄去50ul，各孔經(jīng)倍比稀釋后稀釋度依次為2-1~2-12。實(shí)驗(yàn)步驟3、第一排1-12孔及第二排1-12孔各加1%雞紅細(xì)胞50ul，微型震蕩器震蕩2min混勻。4、室溫靜置10-30分，觀察結(jié)果。5、結(jié)果判定：紅細(xì)胞對(duì)照組紅細(xì)胞完全沉降，以試驗(yàn)排中能使等量紅細(xì)胞發(fā)生完全凝集的病毒最高稀釋倍數(shù)，作為病毒的血凝價(jià)，即HI效價(jià)，用2n表示。血凝試驗(yàn)流程圖〔二〕血凝抑制試驗(yàn)〔HAI〕：取一96孔板，按以下步驟操作：1、4個(gè)單位抗原的制備：按HA試驗(yàn)測(cè)出的病毒血凝價(jià)除以4即為4個(gè)單位血凝素的稀釋度。2、待檢血清的稀釋：第一、二、三排1-12孔各加生理鹽水50ul，于第一排第1孔中參加50ul待檢血清，反復(fù)吹吸3-5次混勻后，取50ul至第2孔混勻，吸取50ul至第3孔……，依次稀釋至第12孔，棄去50ul，經(jīng)倍比稀釋，血清的稀釋倍數(shù)為21~212。3、第一、二排1-12孔各加4個(gè)單位血凝素50ul，微量震蕩器震蕩2min混勻；4、室溫靜置20min；5、第一、二、三排1-12孔各加1%雞紅細(xì)胞50ul，微量震蕩器震蕩2min混勻混勻。6、室溫靜置10-30分，觀察結(jié)果；7、結(jié)果判定：第二排為抗原對(duì)照，紅細(xì)胞應(yīng)全部凝集，第三排為紅細(xì)胞對(duì)照，紅細(xì)胞應(yīng)全部沉降。以待檢血清能完全抑制病毒凝集紅細(xì)胞的最高稀釋倍數(shù)為血清的HAI效價(jià)，用2n表示。血凝抑制試驗(yàn)流程卵黃囊羊膜囊絨毛尿囊腔氣室〔3〕接種病毒：用18mm針頭的1ml注射器吸取雞新城疫病毒，針頭通過(guò)打出的孔進(jìn)針，刺入尿囊腔，注入0.1ml。〔4〕用融化的石蠟封閉小孔，39℃孵化器中孵化72h。實(shí)驗(yàn)三雞白痢平板凝集試驗(yàn)?zāi)康囊饬x：了解平板凝集試驗(yàn)在雞白痢診斷及監(jiān)測(cè)中的應(yīng)用學(xué)習(xí)雞白痢平板凝集試驗(yàn)的操作方法。根本原理：細(xì)菌等顆粒性抗原與特異性抗體結(jié)合后，在有電解質(zhì)的情況下，會(huì)出現(xiàn)肉眼可見(jiàn)的凝集塊，稱為凝集反響。直接凝集反響可分為玻片凝集與試管凝集。凝集試驗(yàn)是疾病診斷及體內(nèi)抗體水平測(cè)定的常用方法。5.靜置3-4分，再拿起玻板輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)，按以下標(biāo)準(zhǔn)記反響結(jié)果：++++：出現(xiàn)大片凝集，液體完全透明，即100%凝集+++：有明顯凝集片和顆粒，液體幾乎完全透明，即75%凝集++：有可見(jiàn)的凝集片和顆粒，液體不甚透明，即50%凝集+：僅僅可以看見(jiàn)顆粒，液體混濁，即25%凝集-：液體均勻混濁，無(wú)凝集現(xiàn)象〔同時(shí)應(yīng)設(shè)陽(yáng)性、陰性血清及抗原對(duì)照〕6.結(jié)果判定：實(shí)驗(yàn)四雞傳染性法氏囊病瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)

器材及試劑:生理鹽水、瓊脂糖、硫柳汞、平皿、打孔器、移液器、吸頭等。實(shí)驗(yàn)步驟:1、制板:加融化的1%瓊脂于潔凈玻片或培養(yǎng)皿內(nèi)，厚。2、打孔：待瓊脂凝固后打孔，多為梅花形，一般孔徑3-4mm，孔距4-5mm。3、加樣：于中央孔參加標(biāo)準(zhǔn)沉淀抗原，周圍1、4孔內(nèi)加陽(yáng)性血清對(duì)照，2、3、5、6孔為待檢血清。4、加樣完后，將瓊脂板置于濕盒中，37℃擴(kuò)散24-48h。5、結(jié)果判定：假設(shè)待檢血清與抗原孔之間出現(xiàn)白色沉淀線，那么表示陽(yáng)性，假設(shè)不出現(xiàn)沉淀線，為陰性。假設(shè)用于檢測(cè)血清效價(jià)，那么以出現(xiàn)沉淀線的血清最高稀釋倍數(shù)表示〔2n〕。用于兩種抗原比較時(shí)，沉淀線有多種情形，應(yīng)具體分析。制板打孔封底加樣置濕盒中擴(kuò)散瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)流程圖實(shí)驗(yàn)五禽霍亂的診斷目的意義：認(rèn)識(shí)禽霍亂病原巴氏桿菌兩極染色的特性熟悉禽霍亂的診斷方法和步驟認(rèn)識(shí)病原菌別離鑒定在禽病診斷中的作用根本原理：禽巴氏桿菌病又稱為禽霍亂，主要表現(xiàn)為敗血癥，即實(shí)質(zhì)器官的出血、腫大與壞死。巴氏桿菌在病禽組織內(nèi)呈典型的兩極著色，純培養(yǎng)物呈卵圓形或短桿狀；在血或血清瓊脂上生長(zhǎng)良好，呈露珠樣小菌落并有不同顏色的熒光；能發(fā)酵多種糖；多殺性巴氏桿菌能致死小白鼠、家兔等。故常依據(jù)形態(tài)特征、培養(yǎng)特性、生化特性和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)等來(lái)鑒定。器材及試劑:病料：患病鴨組織〔肝、脾、肺〕或體液〔血、胸腹腔滲出液〕；培養(yǎng)基：5-10%兔血瓊脂平板；動(dòng)物：小白鼠或成年健康家兔；無(wú)菌生理鹽水、吸管、注射器、針頭、酒精燈等。實(shí)驗(yàn)步驟:〔一〕形態(tài)學(xué)檢查：病料或心血涂片，瑞氏染色?！捕撑囵B(yǎng)特性檢查：將病料接種于血瓊脂平板37℃培養(yǎng)24h。〔三〕生化鑒定：

鴨霍亂心血涂片中的多殺性巴氏桿菌〔四〕動(dòng)物回歸實(shí)驗(yàn)：將病料剪碎并研磨，用滅菌生理鹽水制成1:10懸液，也可將血瓊脂平板培養(yǎng)物制成懸液，皮下注射小白鼠，只。注意觀察小鼠的表現(xiàn)，待發(fā)病死亡后，即行解剖，觀