T-SATA 082-2024 食品中米酵菌酸的快速檢測(cè)膠體金免疫層析法

ICS67.050CCSX04RapidDetectionofBongkrekicAcidinFoods-ColloidalGoldImmunochromatographiIT/SATA082—2024本文件按照GB/T1.1—2020《標(biāo)準(zhǔn)化工作導(dǎo)則第1部分：標(biāo)準(zhǔn)化文件的結(jié)構(gòu)和起草規(guī)則》的規(guī)定起草。本文件由華南農(nóng)業(yè)大學(xué)提出。本文件由深圳市分析測(cè)試協(xié)會(huì)歸口。本文件起草單位：華南農(nóng)業(yè)大學(xué)，深圳市計(jì)量質(zhì)量檢測(cè)研究院，汕頭海關(guān)技術(shù)中心，廣東省食品檢驗(yàn)所，廣州萬聯(lián)生物科技有限公司，深圳容金科技有限公司，嶺南現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科學(xué)與技術(shù)省實(shí)驗(yàn)室河源分中心，廣州市食品檢驗(yàn)所，廣州檢驗(yàn)檢測(cè)認(rèn)證集團(tuán)，深圳市易瑞生物技術(shù)股份有限公司，廣東達(dá)元綠洲食品安全科技股份有限公司。本文件主要起草人：徐振林，張世偉，陸奕娜，雷紅濤，雷毅，江林峰，李斌，沈興，曹雪銘，吳會(huì)玲、王宇、錢振杰，劉海虹，張俊浩，陳子鍵，梁志森，王炳志，梁科，肖劍，鐘玉心。1T/SATA082—2024食品中米酵菌酸的快速檢測(cè)膠體金免疫層析法本文件規(guī)定了食品中米酵菌酸的膠體金免疫層析快速檢測(cè)方法。本文件適用于谷物粉類制成品（發(fā)酵玉米面、糯玉米湯圓粉、涼粉、濕米粉、河粉、馬木耳及其制品和銀耳及其制品的快速定性測(cè)定。2規(guī)范性引用文件下列文件中的內(nèi)容通過文中的規(guī)范性引用而構(gòu)成本文件必不可少的條款。其中，注日期的引用文件，僅該日期對(duì)應(yīng)的版本適用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB7096－2014食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食用菌及其制品GB5009.189－2023食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中米酵菌酸的測(cè)定GB/T6682分析實(shí)驗(yàn)室用水規(guī)格和試驗(yàn)方法3術(shù)語(yǔ)和定義本文件沒有需要界定的術(shù)語(yǔ)和定義。4原理本方法采用競(jìng)爭(zhēng)抑制免疫層析原理。樣品中的米酵菌酸經(jīng)提取后與膠體金標(biāo)記的特異性抗體結(jié)合，抑制了抗體和試紙條中檢測(cè)線（T線）上抗原的結(jié)合，從而導(dǎo)致檢測(cè)線（T線）顏色深淺的變化。通過檢測(cè)線（T線）與質(zhì)控線（C線）顏色深淺比較，對(duì)樣品中米酵菌酸進(jìn)行定性分析。5試劑與材料除另有說明外，所有試劑均為分析純，實(shí)驗(yàn)室用水應(yīng)符合GB/T6682中二級(jí)水的要求。5.1試劑5.1.1氯化鈉（NaCl）。5.1.2十二水合磷酸氫二鈉（Na2HPO4·12H2O）。5.1.3二水合磷酸二氫鈉（NaH2PO4·2H2O）。5.1.4甲醇（CH3OH）。5.1.5乙酸乙酯（CH3COOC2H5）。5.1.6稀釋液：稱取9g氯化鈉（4.1.1）、6g十二水合磷酸氫二鈉（4.1.2）、0.4g二水合磷酸二氫鈉（4.1.3），用容量瓶定容至100mL，搖勻備用。5.2參考物質(zhì)米酵菌酸中文名稱、英文名稱、CAS登錄號(hào)、分子式、相對(duì)分子量見表1，純度≥95%。表1參考物質(zhì)信息表2T/SATA082—2024CHO注：或等同可溯源物質(zhì)。5.3標(biāo)準(zhǔn)溶液配制5.3.1米酵菌酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（100μg/mL）：稱取米酵菌酸標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（4.3）1mg（精確至0.1mg置于10mL容量瓶中，再用甲醇（4.14）定容至10mL，搖勻，制成濃度為100μg/mL的米酵菌酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液?；蚩芍苯淤?gòu)買米酵菌酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液。－18℃及以下條件避光保存，有效期6個(gè)月。5.3.2米酵菌酸標(biāo)準(zhǔn)中間溶液（10μg/mL量取1mL米酵菌酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（100μg/mL）（4.4.1置于10mL容量瓶中，用甲醇（4.14）稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為10μg/mL的米酵菌酸標(biāo)準(zhǔn)中間溶液。2℃~8℃避光保存，有效期3個(gè)月。5.3.3米酵菌酸標(biāo)準(zhǔn)工作溶液（1μg/mL量取1mL米酵菌酸標(biāo)準(zhǔn)中間溶液（10μg/mL）（4.4.2置于10mL容量瓶中，用甲醇（4.1.4）稀釋至刻度，搖勻，制成濃度為1μg/mL的米酵菌酸標(biāo)準(zhǔn)工作溶液?，F(xiàn)配現(xiàn)用。5.4米酵菌酸試劑盒米酵菌酸膠體金快速檢測(cè)試劑盒，應(yīng)在陰涼、干燥、避光條件下保存。5.4.1金標(biāo)微孔（含膠體金標(biāo)記的特異性抗體）。5.4.2試紙條或檢測(cè)卡。6儀器與設(shè)備6.1移液器：10μL、100μL、200μL、1mL、5mL。6.2電子天平：感量為0.1mg和0.1g。6.3渦旋振蕩器。6.4離心機(jī)：轉(zhuǎn)速≥4000r/min。6.5樣品濃縮儀。6.6膠體金讀數(shù)儀（可選）。7環(huán)境條件溫度15℃~35℃,相對(duì)濕度≤80%。8分析步驟8.1試樣制備銀耳、木耳需去蒂。將樣品用粉碎機(jī)充分粉碎后，準(zhǔn)確稱取1g（精確至0.1g）樣品兩份，分別裝入潔凈容器作為試樣和留樣，密封，標(biāo)記。留樣置于－20℃保存。將試樣放入15mL離心管中，加入3mL乙酸乙酯（4.1.5）提取液，渦旋或上下振蕩1min，室溫下4000r/min離心3min。靜置1min，取全部上層有機(jī)相，樣品濃縮儀50℃吹干，準(zhǔn)確加入0.2mL磷酸鹽緩沖液（4.1.6）渦旋溶解殘?jiān)?，混合液即為待測(cè)液。注：試樣提取建議按照試劑盒說明書。8.2測(cè)定步驟8.2.1測(cè)試前，將未開封的檢測(cè)卡或試紙條恢復(fù)至室溫。8.2.2吸取待測(cè)液200μL加入金標(biāo)微孔中，緩慢抽吸5次～10次至待測(cè)液與金標(biāo)微孔試劑充分混勻，20℃~30℃反應(yīng)3min。3T/SATA082—20248.2.3將試紙條插入到金標(biāo)微孔中（或?qū)⒔饦?biāo)微孔溶液滴加到檢測(cè)卡中），反應(yīng)5min。8.2.4從金標(biāo)微孔中取出試紙條（檢測(cè)卡直接結(jié)果判讀），進(jìn)行結(jié)果判定。注2：結(jié)果判定可使用膠體金讀數(shù)儀，讀數(shù)儀的具體使用參8.3質(zhì)控試驗(yàn)8.3.1空白試驗(yàn)：稱取空白試樣，按照7.1和7.2步驟與試樣同法操作。8.3.2加標(biāo)質(zhì)控試驗(yàn)：準(zhǔn)確稱取1g（精確至0.1g）空白試樣置于15mL離心管中，制備米酵菌酸濃度達(dá)到最低檢測(cè)限5μg/kg，按照7.1和7.2步驟與試樣同法操作。注：更換快檢試劑品牌、批次時(shí)，均應(yīng)進(jìn)行空白試驗(yàn)和加標(biāo)質(zhì)控試驗(yàn)。9結(jié)果判定通過對(duì)比控制線（C線）和檢測(cè)線（T線）的顏色深淺進(jìn)行結(jié)果判定，見圖1目視判定示意圖。注：也可使用膠體金讀數(shù)儀判讀，讀數(shù)儀的具體操作與判讀原則參照讀數(shù)儀的使用說明書。9.1陰性結(jié)果質(zhì)控線（C線）顯色，檢測(cè)線（T線）顏色深于或等于質(zhì)控線（C線），判定為陰性結(jié)果。9.2陽(yáng)性結(jié)果質(zhì)控線（C線）顯色，檢測(cè)線（T線）不顯色或顏色淺于質(zhì)控線（C線），判定為陽(yáng)性結(jié)果。9.3無效質(zhì)控線（C線）不顯色，無論檢測(cè)線（T線）是否顯色，判定為無效結(jié)果。質(zhì)控試驗(yàn)結(jié)果不符合要求時(shí)，同批次所有檢測(cè)結(jié)果判定為無效結(jié)果。若出現(xiàn)無效結(jié)果，需對(duì)同批次樣品進(jìn)行重新檢測(cè)。9.4質(zhì)控試驗(yàn)結(jié)果空白試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果應(yīng)為陰性，加標(biāo)質(zhì)控試驗(yàn)測(cè)定結(jié)果應(yīng)為陽(yáng)性。圖1目視判定示意圖（試紙條結(jié)果）注：T線為檢測(cè)線，C線為質(zhì)控線。4T/SATA082—2024圖2目視判定示意圖（檢測(cè)卡結(jié)果）注：T線為檢測(cè)線，C線為質(zhì)控線。10結(jié)果確認(rèn)當(dāng)檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性時(shí)，采用參比方法進(jìn)行確證。11方法性能指標(biāo)11.1檢出限檢出限：5μg/kg。11.2靈敏度靈敏度≥95%。11.3特異性特異性≥85%。11.4假陰性率假陰性率≤5%。11.5假陽(yáng)性率假陽(yáng)性率≤15%。注：性能指標(biāo)計(jì)算方法見附錄A。本方法所述試劑、試劑盒信息及操作步驟是為給方法使用者提供方便，在使用本方法時(shí)不作限定。方法使用者在使用試劑、試劑盒或操作步驟之前，應(yīng)對(duì)其進(jìn)行考察，性能指標(biāo)應(yīng)滿足本方法規(guī)定的各項(xiàng)性能指標(biāo)。本方法參比標(biāo)準(zhǔn)為GB5009.189－2023《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)食品中米酵菌酸的測(cè)定》第2法。5T/SATA082—2024快速