甲基對硫磷免疫親和電化學檢測技術(shù)

1甲基對硫磷免疫親和電化學檢測技術(shù)本標準規(guī)定了甲基對硫磷農(nóng)藥的免疫親和電化學檢測技術(shù)的原理、試劑與材料、儀器與設(shè)備、試樣制備、測定、結(jié)果計算與表述、重復性、檢測限與特異性。本標準適用于農(nóng)產(chǎn)品中甲基對硫磷農(nóng)藥的在線篩查和快速監(jiān)測。2規(guī)范性引用文件下列文件對于本文件的應(yīng)用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。GB2763-2019食品安全國家標準食品中農(nóng)藥最大殘留限量GB/T6682分析實驗室用水規(guī)格和實驗方法NY/T789-2004農(nóng)藥殘留分析樣本的采樣方法3原理試樣中甲基對硫磷農(nóng)藥分子與免疫親和柱中固定相上抗體發(fā)生特異性結(jié)合，其他與抗體不發(fā)生免疫親和反應(yīng)的成分隨流動相流出，利用醋酸緩沖液使固定相上抗體變性，將固定相上抗體結(jié)合的甲基對硫磷洗脫，進行電化學檢測。4試劑與材料除另有規(guī)定外，所有試劑均為分析純；實驗室用水符合GB/T6682中規(guī)定的二級水，標準溶液和流動相用水為一級水。4.1甲醇：色譜純4.2醋酸緩沖液：pH=5.05儀器與設(shè)備實驗室常規(guī)儀器、設(shè)備、材料及下列各項。5.1甲基對硫磷免疫親和柱，柱容量≥300ng。5.2普通化學濾紙5.3容量瓶25.4電化學工作站5.5電化學反應(yīng)池，其中包括1根玻碳電極、1根Ag/AgCl參比電極和1根鉑絲電極。反應(yīng)池內(nèi)可包含4mL樣品液。6試樣制備6.1提取取試樣可食部分，切碎后，稱取10g±0.1g，加入5mL甲醇-水（80:20）溶液渦旋5min，靜置30min。隨后將樣品溶液在濾紙上進行固液分離。濾液轉(zhuǎn)移至10mL容量瓶并定容至10mL（甲醇-水溶液沖洗濾紙中的樣品）。樣品濾液由純水進行5倍稀釋，待檢測用。6.2凈化將免疫親和柱連接于10.0mL玻璃定量管下。準確移取10.0mL樣品提取液注入玻璃定量管中，將空氣壓力泵與玻璃定量管連接，調(diào)節(jié)壓力使溶液以不超過2mL/min流速緩慢通過免疫親和柱，待溶液全部流出后，以10.0mL純水清洗柱子2次，棄去全部流出液。準確加入2.0mL醋酸緩沖液洗脫，流速不超過1mL/min，收集全部洗脫液于玻璃試管中，加醋酸緩沖液定容為4.0mL，供電化學檢測用。7測定7.1檢測步驟在電化學反應(yīng)池內(nèi)施加開路電壓，維持120s；在電化學反應(yīng)池內(nèi)進行方波掃描，掃描范圍（-0.2V，-1.0V），步進電壓4mV，振幅25mV，頻率25Hz；在電化學反應(yīng)池內(nèi)施加同一開路電壓，維持240s；在電化學反應(yīng)池內(nèi)進行方波掃描，掃描范圍（-0.6V，0.3V），步進電壓4mV，振幅25mV，頻率25Hz。7.2檢測條件上述步驟中的電化學反應(yīng)池，內(nèi)含有4mLpH=5.0的醋酸緩沖液；整個電化學檢測方法是在室溫條件下進行的；甲基對硫磷的定量依據(jù)是電化學反應(yīng)中最后一步方波掃描后氧化峰大小。8結(jié)果計算與表述試樣中甲基對硫磷含量以質(zhì)量分數(shù)X計，單位為微克每千克(μg/kg），按式（1）計算：式中：3Pi：檢測溶液中甲基對硫磷組分的氧化峰高值；Vi：電化學反應(yīng)池中檢測溶液體積，單位為毫升（mL）；Ci：甲基對硫磷標準溶液濃度，單位為納克每毫升（ng/mLVs：標準溶液的檢測體積（mL）；Ps：甲基對硫磷標準溶液氧化峰高平均值（系列濃度M：試樣質(zhì)量，單位為克（g）。測定結(jié)果用平行測定的算術(shù)平均值表示，計算結(jié)果表示到小數(shù)點后一位。9重復性在重復實驗條件下，獲得的兩次獨立測試結(jié)果的絕對差值不大于其算術(shù)平均值的15%。10檢測限與特異性甲基對硫磷的檢測限為0.02mg/kg（GB