重組DNA技術(shù)的基本工具（教學(xué)課件）高二生物（人教版2019選擇性必修3）

第三章

基因工程第1節(jié)

重組DNA技術(shù)的基本工具【本節(jié)聚焦】1.重組DNA技術(shù)所需的三種基本工具是什么？它們的作用分別是什么？2.基因工程載體需要具備什么條件？科技探索之路：基因工程的誕生和發(fā)展1944年艾弗里等人通過肺炎鏈球菌的轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)，不僅證明了遺傳物質(zhì)是DNA，還證明了DNA可以在同種生物個(gè)體間轉(zhuǎn)移。1961年尼倫伯格和馬太破譯了第一個(gè)編碼氨基酸的密碼子。截至1966年，64個(gè)密碼子均被破譯成功。1970年科學(xué)家在細(xì)菌中發(fā)現(xiàn)了第一個(gè)限制性內(nèi)切核酸酶（簡(jiǎn)稱限制酶）1972年，伯格首先在體外進(jìn)行了DNA的改造，成功構(gòu)建了第一個(gè)體外重組DNA分子。1982年，第一個(gè)基因工程藥物-重組人胰島素被批準(zhǔn)上市。基因工程藥物成為世界各國(guó)研究和投資開發(fā)的熱點(diǎn)。1953年沃森和克里克建立DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)模型并提出了遺傳物質(zhì)自我復(fù)制的假說。1967年，科學(xué)家發(fā)現(xiàn)，在細(xì)菌擬核DNA之外的質(zhì)粒有自我復(fù)制能力，并可以在細(xì)菌細(xì)胞間轉(zhuǎn)移。20世紀(jì)70年代初，多種限制酶、DNA連接酶和逆轉(zhuǎn)錄酶被相繼發(fā)現(xiàn)。這些發(fā)現(xiàn)為DNA的切割、連接以及功能基因的獲得創(chuàng)造了條件。1973年，科學(xué)家證明了質(zhì)粒可以作為基因工程的載體，并實(shí)現(xiàn)了物種間的基因交流。至此，基因工程正式問世。1985年，穆里斯等人發(fā)明PCR,為獲取目的基因提供了有效手段。從社會(huì)中來

番木瓜容易受番木瓜環(huán)斑病毒的侵襲。當(dāng)番木瓜被這種病毒感染后，產(chǎn)量會(huì)大大下降。思考：如何培育出抵御番木瓜環(huán)斑病毒的木瓜呢?雜交育種？同種生物之間進(jìn)行誘變育種？在原有基因上發(fā)生基因突變，產(chǎn)生新基因——等位基因不定向科學(xué)家通過精心設(shè)計(jì)，用“分子工具”培育出了轉(zhuǎn)基因番木瓜那么，科學(xué)家究竟用到了哪些“分子工具”？這些“分子工具”各具有什么特征呢？一、基因工程的概述1.基因工程的概念：指按照人們的愿望,進(jìn)行嚴(yán)格的設(shè)計(jì)并通過體外DNA重組和轉(zhuǎn)基因等技術(shù)，賦予生物以新的遺傳特性,創(chuàng)造出更符合人們需要的新的生物類型和生物產(chǎn)品。由于基因工程是在DNA分子水平上進(jìn)行設(shè)計(jì)和施工的，因此又叫作DNA重組技術(shù)?！練w納定義】工程別名：操作對(duì)象：操作水平：

工程實(shí)質(zhì)：DNA重組技術(shù)基因DNA分子水平基因重組一、基因工程的概述2.圖解“基因工程實(shí)質(zhì)”轉(zhuǎn)移A生物B生物螢火蟲普通動(dòng)植物發(fā)光基因一、基因工程的概述【問題1】為什么不同生物的DNA分子能拼接起來？①DNA分子的基本組成單位相同，都是4種脫氧核苷酸；②空間結(jié)構(gòu)相同，都是規(guī)則的雙螺旋結(jié)構(gòu)。③都遵循堿基互補(bǔ)配對(duì)原則脫氧核糖含氮堿基磷酸DNA平面結(jié)構(gòu)DNA立體結(jié)構(gòu)一、基因工程的概述【問題2】為什么一種生物的基因可以在另一種生物細(xì)胞內(nèi)表達(dá)？①基因是控制生物性狀的獨(dú)立遺傳單位。②遺傳信息的傳遞都遵循中心法則。③生物界共用一套遺傳密碼。相同的遺傳信息在不同生物體內(nèi)表達(dá)出相同的蛋白質(zhì)。一、基因工程的概述思考：

DNA雙螺旋的直徑只有2nm,對(duì)如此微小的分子進(jìn)行操作，是一項(xiàng)非常精細(xì)的工作，更需要專門的“分子工具”。“分子手術(shù)刀”準(zhǔn)確切割DNA分子“分子縫合針”“分子運(yùn)輸車”將DNA片段連接起來將體外重組好的DNA分子導(dǎo)入受體細(xì)胞二、限制性內(nèi)切核酸酶——“分子手術(shù)刀”

能識(shí)別

的特定核苷酸序列，并使每一條鏈中特定部位的磷酸二酯鍵斷開。切割DNA分子的工具是限制性內(nèi)切核酸酶，又稱

。限制酶1.來源：2.種類：主要來自原核生物數(shù)千種限制酶不是一種酶，而是一類酶。3.作用特點(diǎn)：專一性作用部位一般為4~8個(gè)或其他數(shù)量的核苷酸，最常見的為6個(gè)核苷酸。雙鏈DNA分子二、限制性內(nèi)切核酸酶——“分子手術(shù)刀”【問題3】

你能根據(jù)所掌握的知識(shí)，推測(cè)限制酶存在于原核生物中的主要作用是什么嗎？原核生物容易受到自然界外源DNA的入侵，所以它在長(zhǎng)期的進(jìn)化過程中形成了套完善的防御機(jī)制。限制酶就是它的一種防御性工具。當(dāng)外源DNA入侵時(shí)，它會(huì)利用限制酶來切割外源DNA，使之失效，以保證自身的安全。為什么限制酶不切割細(xì)菌本身的DNA分子？含某種限制酶的細(xì)菌的DNA分子不具備這種限制酶的識(shí)別序列，或者甲基化酶將甲基轉(zhuǎn)移到了限制酶所識(shí)別序列的堿基上，使限制酶不能將其切開。二、限制性內(nèi)切核酸酶——“分子手術(shù)刀”1’2’3’4’5’

G限制酶1’2’3’4’5’

A磷酸二酯鍵TGCCGTAA5'3'5'3'二、限制性內(nèi)切核酸酶——“分子手術(shù)刀”4.識(shí)別序列EcoRⅠ5’…G-A-A-T-T-C…3’3’…C-T-T-A-A-G…5’SmaⅠ5’…C-C-C-G-G-G…3’3’…G-G-G-C-C-C…5’BamHⅠ5’…G-G-A-T-C-C…3’3’…C-C-T-A-G-G…5’TaqⅠ5’……T-C-G-A……3’3’……A-G-C-T……5’限制酶所識(shí)別的序列的特點(diǎn)是：

呈現(xiàn)堿基互補(bǔ)對(duì)稱，無論是6個(gè)堿基還是4個(gè)堿基，都可以找到一條中心軸線，中軸線兩側(cè)的雙鏈DNA上的堿基是反向?qū)ΨQ重復(fù)排列的，稱為回文序列。在切割部位，一條鏈正向讀的堿基順序與另一條鏈反向讀的順序完全一致。二、限制性內(nèi)切核酸酶——“分子手術(shù)刀”拓展——限制酶的命名：閱讀72頁資料卡“限制酶的命名”，說說EcoRⅠ各個(gè)字母的代表含義。EcoRⅠ屬名Escherichia首字母種名coli前兩個(gè)字母R型菌株從中分離的第一個(gè)限制酶二、限制性內(nèi)切核酸酶——“分子手術(shù)刀”（1）實(shí)例1——EcoRⅠ限制酶切割

*EcoRⅠ識(shí)別序列為GAATTC*EcoRⅠ切割部位為GA之間的磷酸二酯鍵黏性末端黏性末端（2）實(shí)例2——SmaⅠ限制酶切割*SmaⅠ識(shí)別序列為CCCGGG*SmaⅠ切割部位為CG之間的磷酸二酯鍵平末端5.切割結(jié)果:DNA兩條單鏈的切口處，伸出幾個(gè)核苷酸，剛好能互補(bǔ)配對(duì)，這樣的切口叫黏性末端。切口處是平整的，這樣的切口叫平末端。課堂練習(xí)1.寫出下列限制酶切割形成的黏性末端BamHⅠ________EcoRⅠ________HindⅢ________BglⅡ________

GATCAATTAGCTGATC思考：同種限制酶切割的黏性末端一定相同嗎？不同種限制酶切出的黏性末端一定不同嗎？①不同DNA分子用同一種限制酶切割形成的黏性末端都相同?！窘馕觯好妇哂袑Ｒ恍裕R(shí)別的序列相同】②不同的限制酶切割可能產(chǎn)生相同的黏性末端。（比如BamHⅠ、BglⅡ）不能，限制酶只能識(shí)別并切開雙鏈DNA分子。（2）限制酶切一次可斷開

個(gè)磷酸二酯鍵，產(chǎn)生

個(gè)游離的磷酸基團(tuán)，產(chǎn)生

個(gè)黏性末端。要想獲得某個(gè)特定性狀的目的基因必須要用限制酶切幾個(gè)切口？可產(chǎn)生幾個(gè)黏性(平)末端？222（1）限制酶能切開RNA分子的磷酸二酯鍵嗎？2.請(qǐng)結(jié)合限制酶的作用特點(diǎn)，回答以下問題：要切2個(gè)切口，產(chǎn)生4個(gè)黏性(平)末端。課堂練習(xí)用同種限制酶切割(EcoRⅠ)TGAATTCGACTTAAGCAGAATTCTTCTTAAGA缺口怎么辦只能用同種酶切割嗎？完全互補(bǔ)的黏性末端能通過氫鍵暫時(shí)連接在一起，但并不穩(wěn)定。DNA連接酶—“分子縫合針”恢復(fù)被限制酶切開的磷酸二酯鍵3.把兩種來源不同的DNA分子進(jìn)行拼接，應(yīng)該怎樣處理呢？課堂練習(xí)三、DNA連接酶——“分子縫合針”2.作用：將兩個(gè)DNA片段連接起來，恢復(fù)被限制酶切開的兩個(gè)核苷酸之間的磷酸二酯鍵。5′3′TACGTACTGAAT5′3′5′3′CGCGCG5′3′CGCGCG切口切口切口CT5′3′5′3′TAGCAGATTA5′3′5′3′CGCGCGCGCGCG將兩個(gè)雙鏈DNA片段“連接”起來的酶1.概念：注意：1、DNA連接酶可連接雙鏈DNA中的兩條單鏈缺口，但不能連接單鏈DNA!2、DNA連接酶作用沒有特異性。三、DNA連接酶——“分子縫合針”5′5′5′5′3′3′5′5′3′3′5′5′5′5′5′5′T4DNA連接酶T4DNA連接酶E.coliDNA連接酶3.種類：⑴E.coliDNA連接酶：⑵T4DNA連接酶：只能連接具有互補(bǔ)黏性末端的DNA片段(1)可以連接具有互補(bǔ)黏性末端的DNA片段(2)可以連接平末端，但效率相對(duì)較低DNA連接酶與DNA聚合酶是一回事嗎？為什么？三、DNA連接酶——“分子縫合針”旁欄思考（P72）：DNA連接酶與DNA聚合酶是一回事嗎？為什么？DNA聚合酶相同點(diǎn)：不同點(diǎn)：都是催化磷酸二酯鍵形成的酶。DNA聚合酶連接的是游離的脫氧核苷酸，需要模板；DNA連接酶連接的是DNA片段，不需要模板。三、DNA連接酶——“分子縫合針”項(xiàng)目DNA連接酶限制酶DNA聚合酶解旋酶DNA酶作用部位作用對(duì)象作用結(jié)果磷酸二酯鍵將DNA片段水解為單個(gè)脫氧核苷酸磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵磷酸二酯鍵氫鍵DNA片段DNA單個(gè)的脫氧核苷酸DNADNA將兩個(gè)DNA片段連接成完整的DNA分子切割雙鏈DNA分子將單個(gè)的脫氧核苷酸連接到DNA單鏈末端將雙鏈DNA分子局部解旋為單鏈DNA連接酶、限制酶、DNA聚合酶、解旋酶、DNA酶的比較課堂練習(xí)1.以下是幾種不同限制酶切割DNA分子后形成的部分片段。下列敘述正確的是A.以上DNA片段是由4種限制酶切割后產(chǎn)生的B.②片段是在識(shí)別序列為

的限制酶作用下形成的C.①和④兩個(gè)片段在DNA聚合酶的作用下可形成重組DNA分子D.限制酶和DNA連接酶作用的部位都是磷酸二酯鍵√①和④相同DNA連接酶課堂練習(xí)2.DNA連接酶是重組DNA技術(shù)中常用的一種工具酶。下列相關(guān)敘述正確的是A.能連接DNA分子雙鏈堿基對(duì)之間的氫鍵B.能將單個(gè)脫氧核苷酸加到DNA片段的末端，形成磷酸二酯鍵C.能連接用同種限制酶切開的兩條DNA片段，重新形成磷酸二酯鍵D.DNA連接酶只能連接雙鏈DNA片段互補(bǔ)的黏性末端√磷酸二酯鍵DNA片段T4DNA連接酶能連接平末端四、基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體——“分子運(yùn)輸車”質(zhì)粒將外源基因送入受體細(xì)胞,

在受體細(xì)胞內(nèi)對(duì)目的基因進(jìn)行大量復(fù)制.

1.作用：動(dòng)植物病毒噬菌體2.種類：質(zhì)粒是一種裸露的、結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、獨(dú)立于真核細(xì)胞細(xì)胞核或原核細(xì)胞擬核DNA之外，并具有自我復(fù)制能力的環(huán)狀雙鏈DNA分子。四、基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體——“分子運(yùn)輸車”3.運(yùn)載體需具備的條件：條件①：具有一個(gè)或多個(gè)限制酶切割位點(diǎn)；條件②：能在受體細(xì)胞中進(jìn)行自我復(fù)制，或整合到受體DNA上，隨受體DNA同步復(fù)制；條件③：具有標(biāo)記基因，便于重組DNA分子的篩選。條件④：對(duì)受體細(xì)胞無害。問題3：我們用肉眼看不到載體是否進(jìn)入受體細(xì)胞，為了便于篩選重組DNA分子，載體需要具備什么條件？問題2：要使攜帶的外源基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，載體需要具備什么條件？問題1：載體要與外源基因連接，需要具備什么條件？供外源基因插入其中使外源基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在并復(fù)制，以擴(kuò)增外源基因的數(shù)量如四環(huán)素抗性基因、氨芐青霉素抗性基因等四、基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體——“分子運(yùn)輸車”有標(biāo)記基因的存在，可用含青霉素的培養(yǎng)基鑒別。不能被酶切破壞便于重組DNA篩選與鑒定DNA復(fù)制的起始位點(diǎn)，并帶著插入的目的基因一起復(fù)制有切割位點(diǎn)（酶切位點(diǎn)）4.最常用的載體——質(zhì)粒：真正被用作載體的質(zhì)粒，都是在天然質(zhì)粒的基礎(chǔ)上進(jìn)行過

改造的。人工終止子:

轉(zhuǎn)錄的終點(diǎn)，在轉(zhuǎn)錄過程中起調(diào)控作用。終止子:

轉(zhuǎn)錄的終點(diǎn)，在轉(zhuǎn)錄過程中起調(diào)控作用。質(zhì)粒DNA分子質(zhì)量一般為擬核的0.5%~3%四、基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體——“分子運(yùn)輸車”

載體上的標(biāo)記基因一般是某種抗生素的抗性基因，而受體細(xì)胞沒有抵抗該抗生素的能力。將含有某抗生素抗性基因的載體導(dǎo)入受體細(xì)胞，抗性基因在受體細(xì)胞內(nèi)表達(dá)，受體細(xì)胞對(duì)該抗生素產(chǎn)生抗性。在含有該抗生素的培養(yǎng)基上，導(dǎo)入了載體并成功表達(dá)了的受體細(xì)胞才能夠生存。如圖所示：拓展延伸：標(biāo)記基因的篩選原理四、基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體——“分子運(yùn)輸車”

思考·討論：

請(qǐng)你根據(jù)圖3-3中的相關(guān)信息找到兩條片段上EcoRI

的識(shí)別序列和切割位點(diǎn)。然后，用剪刀進(jìn)行“切割”。待切割位點(diǎn)全部切開后，將從下面那條DNA鏈上切下的片段重組到上面那條DNA鏈的切口處，并用透明膠條將切口粘連起來?！璗ATCGTACGATAGGTACTTAA…ATAGCATGCTATCCATGAATTCGGCATAC…GCCGTATG……TCCTAG…AGGATCTTAAGAGCCATACTTAAAATTCTCGGTATGAATTCCATAC…GGTATG…GAGCCATACTTAAAATTCTCGGTATG5′3′5′3′5′3′5′3′四、基因進(jìn)入受體細(xì)胞的載體——“分子運(yùn)輸車”1.剪刀和透明膠條分別代表哪種“分子工具”？剪刀代表限制酶；透明膠條代表DNA連接酶。2.你制作的黏性末端的堿基能不能互補(bǔ)配對(duì)?

如果不能，可能是什么原因造成的？

如果制作的黏性末端的堿基不能互補(bǔ)配對(duì)，可能是剪切位點(diǎn)或連接位點(diǎn)選得不對(duì)，也可能是其他原因。3.你插入的DNA片段能稱得上一個(gè)基因嗎？不能。因?yàn)榛虻拈L(zhǎng)度一般在100個(gè)堿基對(duì)以上。課堂練習(xí)1.圖甲是含有目的基因的外源DNA片段，圖乙是用于將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞的質(zhì)粒（陰影部分表示抗生素抗性基因），相關(guān)限制酶的作用部位如圖所示，現(xiàn)欲培養(yǎng)轉(zhuǎn)基因抗病植株，回答下列問題。（1）在基因工程的操作中，不宜選用SmaI，原因是SmaI會(huì)破壞_________和_______________________。（2）在基因工程的操作中，不宜選用EcoRI，原因是用EcoRI切割外源DNA片段后，___________________________________________________。目的基因質(zhì)粒上的抗生素抗性基因目的基因只有一側(cè)含有黏性末端，不能插入到質(zhì)粒中課堂練習(xí)（3）由于反應(yīng)體系中含有大量的外源DNA片段和質(zhì)粒，加入PstI一種限制酶后，會(huì)得到大量的目的基因片段和質(zhì)粒片段，再加入DNA連接酶后，除了會(huì)形成目的基因與質(zhì)粒連接的環(huán)狀產(chǎn)物外，還會(huì)形成______________________連接的環(huán)狀產(chǎn)物以及_____________________連接的環(huán)狀產(chǎn)物。此外，目的基因與質(zhì)粒的連接既可以是正向連接，也可以是____________，后者可能會(huì)導(dǎo)致目的基因無法正常表達(dá)。目的基因與目的基因質(zhì)粒片段與質(zhì)粒片段反向連接課堂小結(jié)限制酶作用部位：種類E.coliDNA連接酶運(yùn)載工具條件③

有一個(gè)至多個(gè)限制酶切割位點(diǎn)質(zhì)粒、噬菌體、動(dòng)植物病毒DNA連接酶作用部位：切開DNA分子的磷酸二酯鍵來源：主要存在于原核生物中特點(diǎn)：具有專一性（能識(shí)別雙鏈DNA分子的特定核苷酸序列）T4DNA連接酶①

對(duì)受體細(xì)胞無害②

能自我復(fù)制或整合到宿主DNA上。④

常有特殊的標(biāo)記基因種類：磷酸二酯鍵作用結(jié)果：產(chǎn)生黏性末端或平末端探究?實(shí)踐：DNA的粗提取與鑒定一、實(shí)驗(yàn)原理00.14NaCI濃度（mol/L）DNA溶解度

利用DNA與RNA、蛋白質(zhì)和脂質(zhì)等在物理和化學(xué)性質(zhì)方面的差異，提取DNA，去除其他成分。DNA不溶于酒精，但某些蛋白質(zhì)溶于酒精DNA能溶于物質(zhì)的量濃度為2mol/L的NaCl溶液在一定溫度下，DNA被二苯胺試劑染成藍(lán)色初步分離DNA和蛋白質(zhì)溶解DNA鑒定DNA探究?實(shí)踐：DNA的粗提取與鑒定DNA含量相對(duì)較高的生物組織，如新鮮洋蔥、香蕉、菠菜、菜花和豬肝等。1.選材：豬血（哺乳動(dòng)物的成熟紅細(xì)胞）無細(xì)胞核和線粒體，幾乎不含DNA，不適合；雞血中紅細(xì)胞有核DNA，且核DNA的量較多，適合。含DNA的生物材料都可以，選取DNA含量相對(duì)較高的生物組織，成功率更大。雞血中加入檸檬酸鈉，可防止血液凝固。二、材料用具

（1）選什么樣的材料實(shí)驗(yàn)更易成功？（2）豬血和雞血，哪個(gè)適合用作提取DNA的材料？操作時(shí)如何防止血液凝固？探究?實(shí)踐：DNA的粗提取與鑒定2.試劑：試劑研磨液體積分?jǐn)?shù)為95%的酒精二苯胺2mol/L的NaCl溶液

蒸餾水溶解并提取DNA析出DNA溶解DNA鑒定DNA，要現(xiàn)配現(xiàn)用研磨液成分作用SDS使蛋白質(zhì)變性EDTA抑制DNA酶Tris-HCl緩沖液穩(wěn)定DNA二、材料用具探究?實(shí)踐：DNA的粗提取與鑒定三、實(shí)驗(yàn)步驟探究?實(shí)踐：DNA的粗提取與鑒定1.破碎細(xì)胞——稱取

，切碎，放入研缽，倒入

，

研磨。洋蔥研磨液充分三、實(shí)驗(yàn)步驟目的：裂解細(xì)胞，釋放DNA2.過濾——在漏斗中墊上

過濾研磨液，4℃冰箱中靜置后取

；或?qū)⒀心ヒ旱谷胨芰想x心管中離心，取

。紗布上清液上清液思考:過濾能否用濾紙代替紗布？

不可以。因?yàn)镈NA會(huì)被吸附到濾紙上而大量損失，影響最終提取的DNA量。思考:此步驟獲得的上清液中可能含有哪些細(xì)胞成分？可能含有DNA、RNA以及蛋白質(zhì)、脂質(zhì)、糖類等。探究?實(shí)踐：DNA的粗提取與鑒定三、實(shí)驗(yàn)步驟3.DNA的粗提取——在上清液中加入體積相等的

溶液,靜置2~3min，溶液中出現(xiàn)的

就是粗提取的DNA。預(yù)冷的酒精白色絲狀物思考:此步驟的目的是？使蛋白質(zhì)等溶解在酒精中，DNA不溶于酒精而析出。預(yù)冷的酒精的優(yōu)點(diǎn)①可抑制核酸水解酶的活性，進(jìn)而抑制DNA降解；②抑制分子運(yùn)動(dòng)，使DNA易形成沉淀析出；③低溫有利于增加DNA分子的柔韌性，減少其斷裂。思考：酒精預(yù)冷的作用？用冷卻的酒精析出DNA探究?實(shí)踐：DNA的粗提取與鑒定用玻璃棒沿

攪拌，卷起

，并用濾紙吸去上面的水分：或?qū)⑷芤旱谷胨芰想x心管中離心，取

晾干。一個(gè)方向沉淀物絲狀物三、實(shí)驗(yàn)步驟3.DNA的粗提取——思考：攪拌時(shí)應(yīng)輕緩、并沿一個(gè)方向目的？減少DNA斷裂，以便獲得較完整的DNA分子析出DNA探究?實(shí)踐：DNA的粗提取與鑒定三、實(shí)驗(yàn)步驟4.DNA的鑒定——實(shí)驗(yàn)組對(duì)照組水浴加熱將絲狀物或沉淀物溶于

溶液中，加入

試劑，混合均勻后，將試管置于沸水中加熱5min二苯胺2mol/L的NaCl空白對(duì)照：

在等體積的NaCl溶液中加入二苯胺試劑，將試管置于同等沸水浴中加熱5min。評(píng)價(jià)結(jié)果：（1）DNA純度看提取物顏色（2）DNA的量看與二苯胺反應(yīng)顏色的深淺現(xiàn)配現(xiàn)用！探究?實(shí)踐：DNA的粗提取與鑒定四、結(jié)果分析與評(píng)價(jià)

二苯胺試劑鑒定呈現(xiàn)藍(lán)色說明實(shí)驗(yàn)基本成功；如果不呈現(xiàn)藍(lán)色，可能的原因有所提取的DNA含量低，或者在實(shí)驗(yàn)操作過程中出現(xiàn)了失誤等。1.你提取出白色絲狀物或沉淀物了嗎？用二苯胺試劑鑒定的結(jié)果如何？

觀察提取的DNA的顏色，如果不是白色絲狀物，說明DNA中的雜質(zhì)較多。探究?實(shí)踐：DNA的粗提取與鑒定①材料中的核物質(zhì)沒有充分釋放出來，如研磨不充分或蒸餾水的量不夠。②加入酒精后搖動(dòng)或攪拌時(shí)過猛，DNA被破壞。③二苯胺最好現(xiàn)用現(xiàn)配，否則二苯胺變成