微生物檢驗(yàn)理論課 12細(xì)菌耐藥和藥敏試驗(yàn) 學(xué)習(xí)資料

南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院細(xì)菌耐藥及藥敏試驗(yàn)

顏曉慧南方醫(yī)院臨床醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)研究中心南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院耐藥菌耐藥菌致嚴(yán)重感染截肢案例南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院從案例引出需要回答的問(wèn)題……

什么叫細(xì)菌耐藥?

細(xì)菌為什么會(huì)耐藥?細(xì)菌耐藥怎么辦?南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院主要內(nèi)容一、細(xì)菌耐藥現(xiàn)象二、抗菌藥物作用機(jī)制三、細(xì)菌耐藥產(chǎn)生機(jī)制四、體外抗菌藥物敏感試驗(yàn)五、細(xì)菌耐藥性檢測(cè)南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院一、細(xì)菌耐藥現(xiàn)象抗生素主要是指抗菌藥物，抗菌藥物的出現(xiàn)是人類征服細(xì)菌的開(kāi)始，抗生素的應(yīng)用和研究的不斷進(jìn)展是對(duì)上世紀(jì)醫(yī)學(xué)科學(xué)的最重大貢獻(xiàn)。上世紀(jì)30年代發(fā)現(xiàn)磺胺藥，40年代發(fā)現(xiàn)并使用青霉素，隨后新的抗生素不斷出現(xiàn)。人的平均壽命得以延長(zhǎng)，人類疾病譜從而發(fā)生了根本改變

正當(dāng)人們?yōu)楦腥拘约膊〉目刂贫鴼g欣鼓舞時(shí)，細(xì)菌的耐藥性卻給這種控制帶來(lái)了現(xiàn)實(shí)的和潛在的危機(jī)，對(duì)人類健康提出了又一次嚴(yán)峻挑戰(zhàn)抗生素發(fā)展史南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院一、細(xì)菌耐藥現(xiàn)象每年全世界有50%的抗生素被濫用，而我國(guó)甚至接近80%。藥物濫用使病菌迅速適應(yīng)了抗生素的環(huán)境，各種超級(jí)病菌相繼誕生。由于耐藥菌引起的感染，抗生素?zé)o法控制，最終導(dǎo)致病人死亡。在上世紀(jì)60年代，全世界每年死于感染性疾病的人數(shù)約為700萬(wàn)，而這一數(shù)字到了本世紀(jì)初上升到2000萬(wàn)。死于敗血癥的人數(shù)上升了89%，大部分人死于超級(jí)病菌帶來(lái)的用藥困難。濫用抗生素！觸目驚心的現(xiàn)實(shí)南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院細(xì)菌對(duì)抗菌藥物耐受或反應(yīng)降低的狀態(tài)細(xì)菌耐藥性分類（1）固有耐藥性（2）獲得性耐藥細(xì)菌耐藥性一、細(xì)菌耐藥現(xiàn)象

固有耐藥性又稱天然耐藥性，是由細(xì)菌染色體基因決定、代代相傳，不會(huì)改變的

獲得性耐藥性是由于細(xì)菌與抗生素接觸后，由質(zhì)粒介導(dǎo)，通過(guò)改變自身的代謝途徑產(chǎn)生的耐藥性。如金黃色葡萄球菌產(chǎn)生β-內(nèi)酰胺類抗生素耐藥。細(xì)菌的獲得性耐藥可因不再接觸抗生素而消失，也可由質(zhì)粒將耐藥基因轉(zhuǎn)移到染色體而代代相傳，成為固有耐藥

鏈球菌對(duì)氨基糖苷類抗生素天然耐藥

腸球菌屬PBPs不易與頭孢菌素類結(jié)合

腸道G-桿菌對(duì)青霉素天然耐藥

萬(wàn)古霉素不能穿透革蘭陰性桿菌的外膜進(jìn)入細(xì)菌體

銅綠假單胞菌對(duì)多數(shù)抗生素均不敏感RS一、細(xì)菌耐藥現(xiàn)象南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院耐藥現(xiàn)象產(chǎn)生的常見(jiàn)原因

細(xì)菌自身因素基因突變或獲得耐藥基因質(zhì)粒經(jīng)驗(yàn)性使用抗菌素，致使病菌產(chǎn)生耐藥或中度敏感對(duì)于未確診為細(xì)菌感染者使用抗菌素抗菌素用量不足,治療間隔時(shí)間太長(zhǎng)濫用廣譜抗菌素一、細(xì)菌耐藥現(xiàn)象不合理應(yīng)用抗菌藥物，導(dǎo)致細(xì)菌耐藥產(chǎn)生南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院臨床案例

患兒，3歲，咳嗽伴流涕2天就診，無(wú)發(fā)熱，無(wú)咳痰，無(wú)膿性鼻分泌物。臨床醫(yī)生開(kāi)出處方：

1.清毒飲，10ml,3次/d2.止咳糖漿，5ml,3次/d3.世福素顆粒，50mg，2次/d

請(qǐng)問(wèn)：醫(yī)生的處理正確嗎？南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院一般感冒需要服用抗菌素嗎？90%以上的感冒是由病毒引起，患者不需要服用抗菌藥物；當(dāng)感冒有發(fā)熱癥狀或出現(xiàn)黃膿鼻涕、血中性粒細(xì)胞增高等感染現(xiàn)象，應(yīng)及時(shí)就診，在明確細(xì)菌感染后，在醫(yī)生的指導(dǎo)下選擇合適的抗菌藥物使用。

抗菌藥物僅僅是用來(lái)抵抗細(xì)菌，它對(duì)病毒沒(méi)有任何作用，如果濫用抗菌藥物，除了增加抗藥性甚至產(chǎn)生毒副作用外，對(duì)治療病毒性感冒沒(méi)有任何效果。如何應(yīng)用抗菌藥物？首先了解抗菌藥物的基本知識(shí)南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院二、抗菌藥物作用機(jī)制抗菌藥物作用機(jī)制干擾細(xì)菌細(xì)胞壁的合成損傷細(xì)菌的細(xì)胞膜，破壞其屏障作用影響細(xì)菌蛋白質(zhì)的合成，使細(xì)菌喪失生長(zhǎng)繁殖的物質(zhì)基礎(chǔ)破壞核酸的代謝，阻礙遺傳信息的復(fù)制抑制細(xì)菌葉酸代謝等南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院三、細(xì)菌耐藥產(chǎn)生機(jī)制抗菌藥物的選擇性壓力，耐藥細(xì)菌的產(chǎn)生耐藥性可由位于染色體外的DNA上的耐藥基因所編碼，并通過(guò)接合、轉(zhuǎn)導(dǎo)、轉(zhuǎn)座和轉(zhuǎn)化等方式在細(xì)菌間傳播；其中以轉(zhuǎn)移接合為最主要。耐藥基因又可不斷重組，成為新的耐藥基因組，產(chǎn)生對(duì)多種結(jié)構(gòu)不同抗生素同時(shí)耐藥的多重耐藥株，使細(xì)菌耐藥日趨嚴(yán)重耐藥基因的轉(zhuǎn)移與重組三、細(xì)菌耐藥產(chǎn)生機(jī)制南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院三、細(xì)菌耐藥產(chǎn)生機(jī)制靶位結(jié)構(gòu)改變水解酶或修飾酶的產(chǎn)生膜通透性降低主動(dòng)外排泵生物膜的形成細(xì)菌耐藥機(jī)制南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院三、細(xì)菌耐藥產(chǎn)生機(jī)制1.靶位結(jié)構(gòu)改變

青霉素結(jié)合蛋白的改變（penicillinbindingprotein,PBP)PBP存在細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)膜，是-內(nèi)酰胺類抗菌素的作用靶位核糖體靶位親和力下降：氨基糖苷類、四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)酯類等DNA解旋酶或拓?fù)洚悩?gòu)酶IV結(jié)構(gòu)改變：喹諾酮類藥物耐藥南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院三、細(xì)菌耐藥產(chǎn)生機(jī)制PBP的結(jié)構(gòu)和功能的改變南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院三、細(xì)菌耐藥產(chǎn)生機(jī)制2.產(chǎn)生水解酶或修飾酶-內(nèi)酰胺酶紅霉素酶等滅活酶氨基糖苷類鈍化酶氯霉素乙酰轉(zhuǎn)移酶β-內(nèi)酰胺酶分類1.β-內(nèi)酰胺酶的功能學(xué)分類最新的分類方法是Bush于1995年提出，他將β內(nèi)酰胺酶分為四個(gè)大類（1－4）及六個(gè)亞類（a－f）。第1類

為耐頭孢菌素的β內(nèi)酰胺酶，但不被克拉維酸所抑制，

分子生物學(xué)分類屬于C類。

第2類

為耐青霉素酶、耐頭孢菌素酶，可以被克拉維酸所

抑制，分子生物學(xué)分類屬于A和D類第3類

為碳青霉烯酶，依賴鋅離子或金屬離子的β-內(nèi)酰胺酶，

分子生物學(xué)分類屬于B類。第4類不能被克拉維酸所抑制的耐青霉素酶，但目前在

分子生物學(xué)上沒(méi)有分類。β-內(nèi)酰胺酶分類2.β-內(nèi)酰胺酶的分子生物學(xué)分類

基于核酸及氨基酸的序列的差異。四種類型的β內(nèi)酰胺酶（A、B、C、D），其中A、C和D類β-內(nèi)酰胺酶是依賴絲氨酸發(fā)揮作用，而B(niǎo)類β內(nèi)酰胺酶是依賴鋅離子或金屬離子輔助下發(fā)揮作用的酶。

A類酶包括多種質(zhì)粒編碼的青霉素酶，活性部位為絲氨酸殘基

B類酶為金屬酶，由染色體或質(zhì)粒編碼，酶活性需鋅離子參與，可被乙二胺四乙酸（EDTA）抑制；C類酶的活性部位為絲氨酸殘基，其產(chǎn)生與誘導(dǎo)劑有關(guān)；D類酶又稱為OXA型（水解苯唑西林）β-內(nèi)酰胺酶。

絲氨酸β-內(nèi)酰胺酶金屬β-內(nèi)酰胺酶B組β-內(nèi)酰胺酶

（碳青霉烯酶）

[IMP-1]A組β-內(nèi)酰胺酶

（青霉素酶、超廣譜酶）[ESBLs]D組β-內(nèi)酰胺酶（苯唑西林酶）［甲氧西林酶］C組β-內(nèi)酰胺酶（頭孢菌素酶）[AmpC]β-內(nèi)酰胺酶分類β-內(nèi)酰胺酶分類BJM分類分子分類水解底物抑制劑代表酶CAEDTA1C頭孢菌素--AmpC22aA青霉素+-青霉素酶2bA青霉素、窄譜頭孢+-TEM1,2、SHV12beA青霉素、頭孢菌素+-TEM3-26,SHV2-6,CTX-M2brA青霉素+/--TEM30-362cA青霉素，羧芐西林+-PSE1,3,42dD青霉素素，苯唑西林+/--OXA1-11,PSE22eA頭孢菌素+-誘導(dǎo)頭孢菌素酶2fA青霉素、頭孢、碳青霉烯+-KPC3B碳青霉烯類-+IMP、VIM、NDM4ND青霉素--洋蔥假單胞菌青霉素酶β-內(nèi)酰胺酶青霉素1st頭孢2nd頭孢3rd頭孢4th頭孢碳青霉烯類青霉素酶廣譜β-內(nèi)酰胺酶超廣譜β-內(nèi)酰胺酶碳青霉烯酶南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院三、細(xì)菌耐藥產(chǎn)生機(jī)制3.膜通透性降低抗菌藥物通過(guò)革蘭氏陰性桿菌外膜孔蛋白（porin)進(jìn)入菌體南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院三、細(xì)菌耐藥產(chǎn)生機(jī)制亞胺培南需通過(guò)細(xì)菌外膜孔蛋白OprD2進(jìn)入菌體如OprD2突變可導(dǎo)致細(xì)菌耐藥南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院三、細(xì)菌耐藥產(chǎn)生機(jī)制4.主動(dòng)外排泵機(jī)制銅綠假單胞菌通過(guò)MexAB-OprM把β-內(nèi)酰胺類抗菌素泵出菌體南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院三、細(xì)菌耐藥產(chǎn)生機(jī)制5.生物膜形成生物膜：細(xì)菌分泌的多聚物質(zhì)、吸收的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、代謝產(chǎn)物、細(xì)胞溶解產(chǎn)物及周圍環(huán)境微粒材料等組成的復(fù)合體耐藥機(jī)制：阻止藥物進(jìn)入菌體的屏障作用吸附抗菌藥物，有效減少藥物濃度南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院三、細(xì)菌耐藥產(chǎn)生機(jī)制南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院四、體外抗菌藥物敏感試驗(yàn)

定義、目的、方法培養(yǎng)基、接種菌量、培養(yǎng)條件結(jié)果閱讀判斷標(biāo)準(zhǔn)聯(lián)合藥物敏感試驗(yàn)體外藥物敏感試驗(yàn)?zāi)戏结t(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院四、體外抗菌藥物敏感試驗(yàn)抗菌藥物敏感試驗(yàn)：測(cè)定抗菌藥物在體外抑制病原微生物生長(zhǎng)的效力，稱抗菌藥物對(duì)細(xì)菌的抑菌試驗(yàn)，或稱細(xì)菌對(duì)藥物的敏感性試驗(yàn)什么是抗菌藥物敏感試驗(yàn)？南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院四、體外抗菌藥物敏感試驗(yàn)供臨床醫(yī)師選用抗菌藥物時(shí)的參考細(xì)菌耐藥性監(jiān)測(cè)和耐藥性變遷評(píng)價(jià)新抗菌藥物的藥效學(xué)特征對(duì)細(xì)菌耐藥譜分析和分型有助于某些菌種的鑒定作為醫(yī)院內(nèi)感染流行病學(xué)調(diào)查的手段之一為什么要做抗菌藥物敏感試驗(yàn)？南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院四、體外抗菌藥物敏感試驗(yàn)抗菌藥物敏感試驗(yàn)該怎么做？擴(kuò)散試驗(yàn)(diffusiontest)：K-B紙片法

(抑菌圈直徑)稀釋試驗(yàn)(dilutiontest):肉湯稀釋法、瓊脂稀釋法、(最小抑菌濃度minimuminhibitoryconcentration，MIC)E試驗(yàn)(E-test)自動(dòng)化儀器檢測(cè)南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院四、體外抗菌藥物敏感試驗(yàn)原理：以一定濃度的抗菌藥物與含有被測(cè)菌株的培養(yǎng)基進(jìn)行一系列的對(duì)倍稀釋，經(jīng)培養(yǎng)后肉眼觀察細(xì)菌生長(zhǎng)的情況最低抑菌濃度（MIC）：肉眼觀察能抑制細(xì)菌生長(zhǎng)的最低一管藥物濃度（Minimalinhibitoryconcentration，MIC）稀釋法結(jié)果以MIC（μg/ml）數(shù)值報(bào)告，數(shù)值越小越敏感，與K-B法相反；稀釋法南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院四、體外抗菌藥物敏感試驗(yàn)試管稀釋法MIC南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院四、體外抗菌藥物敏感試驗(yàn)微量肉湯稀釋法0.1ml/孔南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院四、體外抗菌藥物敏感試驗(yàn)平板稀釋法(瓊脂稀釋法)系列梯度濃度抗菌藥物平板，可同時(shí)觀察多種細(xì)菌的MIC南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院四、體外抗菌藥物敏感試驗(yàn)MIC(最低抑菌濃度minimalinhibitoryconcentration)在體外能夠抑制細(xì)菌生長(zhǎng)的最低藥物濃度MBC(最低殺菌濃度minimalbactericidalconcentration)在體外能夠使細(xì)菌總數(shù)減少(殺滅)99.9%以上的最低藥物濃度幾個(gè)重要的指標(biāo)南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院四、體外抗菌藥物敏感試驗(yàn)原理：將浸有抗菌藥物的紙片貼在涂有細(xì)菌的瓊脂平板上，抗菌藥物在瓊脂內(nèi)向四周擴(kuò)散，因此敏感細(xì)菌在紙片周圍一定距離內(nèi)的生長(zhǎng)受到抑制，根據(jù)抑菌圈的大小即可推知該藥物的最低抑菌濃度（MIC）K-B紙片法（Kirby-Bauerdiscagardiffusionmethod）南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院四、體外抗菌藥物敏感試驗(yàn)無(wú)菌棉簽蘸取菌液，在管壁內(nèi)將多余菌液旋轉(zhuǎn)擠去后，在瓊脂表面均勻涂布接種3次，每次旋轉(zhuǎn)平板60度，最后沿平板內(nèi)緣涂抹1周室溫干燥或35℃干燥5-15分鐘用紙片分配器或無(wú)菌鑷子將藥物紙片緊貼于瓊脂表面紙片間距20mm，紙片離平板內(nèi)緣15mmK-B紙片法操作步驟紙片擴(kuò)散法-培養(yǎng)基培養(yǎng)基：MH(重復(fù)性好，低抑制劑，營(yíng)養(yǎng)好)厚度：4mmpH：7.2～7.4pH低時(shí)，氨基糖苷、大環(huán)內(nèi)酯活性↓→假RpH高時(shí)，青霉素類的活性↑→假S離子濃度(Ca2+,Mg2+)

高時(shí)，抑菌圈↓→假R四、體外抗菌藥物敏感試驗(yàn)紙片擴(kuò)散法中應(yīng)注意的問(wèn)題培養(yǎng)基標(biāo)準(zhǔn)化：pH、離子濃度、厚度、硬度、表面濕度

特殊培養(yǎng)基：HTM、5%羊血M-H孵育條件：時(shí)間、溫度、氣體接種菌量：0.5Mcfarland（麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)管的保存及比濁儀的檢定）藥敏紙片的效價(jià)、質(zhì)量、保存、使用結(jié)果判讀：質(zhì)控菌株保存（低溫保存，避免反復(fù)傳代）、卡尺檢定四、體外抗菌藥物敏感試驗(yàn)?zāi)戏结t(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院四、體外抗菌藥物敏感試驗(yàn)工具：游標(biāo)卡尺，尺子光源：反射光、透射光閱讀：藥敏平皿背襯不反光的黑色背景，用肉眼觀察，也可用機(jī)器閱讀藥敏試驗(yàn)結(jié)果閱讀南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院四、體外抗菌藥物敏感試驗(yàn)原理：基本同擴(kuò)散法，即濃度呈連續(xù)梯度的抗菌藥物從塑料紙條中向藥敏瓊脂中擴(kuò)散，在試條周圍濃度范圍內(nèi)檢測(cè)菌的生長(zhǎng)被抑制，從而形成透明的抑菌圈E-test綜合了稀釋法和擴(kuò)散法的原理和特點(diǎn)，直接定量測(cè)出藥物對(duì)測(cè)試菌的最低抑菌濃度（MIC）菌液，藥敏平板要求同K-B法

E-Test條寬5mm，長(zhǎng)60mm。

150mm平皿貼6條、90mm平皿貼1條E-試驗(yàn)（E-Test）南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院四、體外抗菌藥物敏感試驗(yàn)E－test試驗(yàn)結(jié)果的判讀南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院四、體外抗菌藥物敏感試驗(yàn)忽略溶血，讀取生長(zhǎng)完全被抑制處MIC0.032ug/ml殺菌型藥物如氨基糖苷類產(chǎn)生“干脆利落”橢圓球，MIC0.064ug/ml試條兩邊產(chǎn)生不同的交界點(diǎn)，讀取較高數(shù)值側(cè)的MIC。如果兩側(cè)差＞1個(gè)稀釋度，則須重復(fù)試驗(yàn)MIC0.5ug/ml南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院四、體外抗菌藥物敏感試驗(yàn)高度敏感（S）：藥物常用劑量治療有效，細(xì)菌即對(duì)該藥物高度敏感，即常規(guī)用藥時(shí)達(dá)到的平均血濃度超過(guò)對(duì)細(xì)菌MIC的5

倍以上中介（I）：僅在應(yīng)用高劑量抗菌藥物時(shí)才有效，或者細(xì)菌處于體內(nèi)抗菌藥物的濃縮部位，如尿液、膽汁等才被抑制，這種細(xì)菌對(duì)該藥物中度敏感。常規(guī)用藥時(shí)達(dá)到的平均血濃度一般相當(dāng)于或略高于對(duì)細(xì)菌的MIC。耐藥（R）：藥物對(duì)某一細(xì)菌的MIC高于藥物在血或體液中可能達(dá)到的濃度，有時(shí)細(xì)菌能產(chǎn)生滅活抗菌藥物的酶，則不論其MIC值大小如何，均應(yīng)判定該菌為耐藥。細(xì)菌藥敏三級(jí)劃分制及臨床意義南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院四、體外抗菌藥物敏感試驗(yàn)聯(lián)合藥敏試驗(yàn)的目的擴(kuò)大抗菌譜，治療混合感染預(yù)防或推遲細(xì)菌耐藥性的產(chǎn)生減少藥物用量，避免毒副作用某些耐藥菌的嚴(yán)重感染，聯(lián)合用藥效果好聯(lián)合藥物敏感試驗(yàn)?zāi)戏结t(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院四、體外抗菌藥物敏感試驗(yàn)聯(lián)合用藥的4種結(jié)果無(wú)關(guān)作用拮抗作用累加作用協(xié)同作用無(wú)關(guān)作用拮抗作用累加作用協(xié)同作用南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院五、細(xì)菌耐藥性檢測(cè)耐藥表型檢測(cè)耐藥基因型檢測(cè)常見(jiàn)耐藥基因耐藥基因檢測(cè)方法β內(nèi)酰胺酶檢測(cè)超廣譜β內(nèi)酰胺酶檢測(cè)特殊耐藥菌的檢測(cè)南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院五、細(xì)菌耐藥性檢測(cè)β內(nèi)酰胺酶檢測(cè)將待測(cè)菌用接種環(huán)挑在頭孢硝噻吩紙片上，10min內(nèi)紙片由黃色變?yōu)榧t色，即為陽(yáng)性結(jié)果南方醫(yī)科大學(xué)南方醫(yī)院五、細(xì)菌耐藥性檢測(cè)超廣譜β內(nèi)酰胺酶（ESBLs)檢測(cè)由質(zhì)粒介導(dǎo)，能水解所有青霉素類、頭孢菌素類和單環(huán)β內(nèi)酰胺類氨曲南的一類酶ESBLs不能水解頭霉素類和碳青酶烯類藥物，能被克拉維酸、舒巴坦和他唑巴坦等酶抑制劑抑制

主要見(jiàn)于大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌，及其他腸桿菌科細(xì)菌、不動(dòng)桿菌、銅綠假單胞菌紙片法，出現(xiàn)以下一種情況即可懷疑該菌株產(chǎn)生ESBL（篩選陽(yáng)性）：頭孢泊肟≤17mm頭孢他啶≤22mm頭孢噻肟≤27mm頭孢曲松≤25mm氨曲南≤27mm五、細(xì)菌耐藥性檢測(cè)超廣譜β內(nèi)酰胺酶（ESBLs)檢測(cè)紙片法（表型確認(rèn)試驗(yàn)）頭孢他啶和頭孢他啶/克拉維酸、頭孢噻肟和頭孢噻肟/克拉維酸。任一復(fù)方制劑的抑菌圈直徑與相應(yīng)單藥抑菌圈直徑相差≥5mm時(shí)，即可判斷該菌產(chǎn)ESBL。超廣譜β內(nèi)酰胺酶（ESBLs)檢測(cè)五、細(xì)菌耐藥性檢測(cè)稀釋法，出現(xiàn)以下一種情況即可懷疑該菌株產(chǎn)生ESBL：頭孢他啶或頭孢噻肟或頭孢曲松或氨曲南MIC≥2mg/mL或頭孢泊肟MIC≥8mg/mL

五、細(xì)菌耐藥性檢測(cè)超廣譜β內(nèi)酰胺酶（ESBLs)檢測(cè)稀釋法（表型確認(rèn)試驗(yàn)）頭孢他啶和頭孢他啶/克拉維酸、頭孢噻肟和頭孢噻肟/克拉維酸。任何一組酶抑制劑復(fù)方制劑的MIC值比相應(yīng)單藥的MIC降低3個(gè)稀釋度者即可判定該菌為產(chǎn)ESBL菌株。

超廣譜β內(nèi)酰胺酶（ESBLs)檢測(cè)五、細(xì)菌耐藥性檢測(cè)碳青霉烯酶A類酶B類酶D類酶染色體編碼：SMENMCIMI質(zhì)粒編碼：KPCGES質(zhì)粒編碼OXA-23OXA-24OXA-51OXA-58OXA-55OXA-48OXA-50OXA-60OXA-62金屬酶，位于GMEs上，包括VIM，IMP，GIM，SPM，SIM等可以被酶抑制劑抑制可以被EDTA抑制碳青霉烯酶的檢測(cè)碳青霉烯酶表型檢測(cè)方法-改良hodge試驗(yàn)大腸埃希菌ATCC25922，0.5麥?zhǔn)希?:10稀釋涂M-H平板平皿中心貼10μg

厄他培南或亞胺培南紙片1μl環(huán)挑取3～5個(gè)待測(cè)菌落從平板中心紙片邊緣向平板邊緣劃線被測(cè)菌株與大腸埃希菌ATCC25922抑菌環(huán)交匯處大腸埃希菌生長(zhǎng)增強(qiáng)，即產(chǎn)碳青霉烯酶。改良hodge試驗(yàn)的結(jié)果判讀金屬酶表型檢測(cè)方法：EDTA協(xié)同試驗(yàn)用0.5麥?zhǔn)蠁挝坏拇郎y(cè)菌懸液涂布M-H平板。貼亞胺培南（IMP，10μg)紙片．距其1cm處貼EDTA紙片（0.5mol/L4μl）35℃過(guò)夜培養(yǎng)。亞胺培南抑菌圈在靠近加EDTA紙片側(cè)明顯擴(kuò)大者為產(chǎn)金屬酶菌株。亞胺培南EDTA10mm五、細(xì)菌耐藥性檢測(cè)耐甲氧西林金黃色葡萄球菌（MRSA）攜帶SCCmec基因盒。SCCmec基因盒中的MecA基因編碼修飾的青霉素結(jié)合蛋白PBP2a，這種蛋白對(duì)甲氧西林和其他的β-內(nèi)酰胺類抗生素親和力下降，從而導(dǎo)致對(duì)這些抗生素的耐藥。SCCmec主要由mec復(fù)合物和ccr復(fù)合物兩部分組成。根據(jù)不同mec復(fù)合物和ccr復(fù)合物的組合，可以將SCCmec分成不同的型別，目前已發(fā)現(xiàn)8種SCCmec型。耐甲氧西林葡萄球菌(MRSA)檢測(cè)五、細(xì)菌耐藥性檢測(cè)頭孢西丁紙片法、苯唑西林瓊脂稀釋法是目前檢測(cè)耐甲氧西林葡萄球菌最常用篩選方法。其他表型檢測(cè)：E-TEST,自動(dòng)化藥敏檢測(cè)

耐藥基因檢測(cè)：DNA探針雜交，PCR技術(shù)MRSA檢測(cè)五、細(xì)菌耐藥性檢測(cè)甲氧西林耐藥的葡萄球菌（MRS）MRS檢測(cè)藥物紙片法稀釋法金黃色葡萄球菌1mg苯唑西林√√路登葡萄球菌1mg苯唑西林×√金黃色葡萄球菌和路登葡萄球菌30mg頭孢西丁√√除路登以