微生物檢驗(yàn)理論課 18支原體 學(xué)習(xí)資料

支原體

（Mycoplasma）

南方醫(yī)科大學(xué)第三附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科陳佑明電話62784781

郵箱cym38432@163.com教學(xué)內(nèi)容與要求支原體的生物學(xué)概念與生物學(xué)特性支原體的分類支原體對(duì)人致病的主要疾病支原體感染患者的標(biāo)本采集及微生物檢驗(yàn)支原體和L型細(xì)菌的區(qū)別支原體定義：是一類缺乏細(xì)胞壁、呈高度多形性、介于細(xì)菌與病毒之間、能通過除菌濾器、在無(wú)生命培養(yǎng)基中能生長(zhǎng)繁殖的最小原核細(xì)胞型微生物。生物學(xué)特點(diǎn)能在人工培養(yǎng)基中生長(zhǎng)能獨(dú)立生活最小的原核細(xì)胞型微生物無(wú)細(xì)胞壁二分裂繁殖多形態(tài)性，“油煎蛋樣”菌落

分類

原核生物界（Procaryotae）

硬壁菌門(Firmicutes)

柔膜體綱(Mollicutes)

支原體目

(Mycoplsmatales)支原體科（Mycoplasmataceae)支原體屬(Mycoplasma)脲原體屬(Ureaplasma)所致疾病：原發(fā)性非典型肺炎

非淋球菌性尿道炎等血蟲體屬(Eperythrozoon)血巴爾通氏體屬(Haemobartonella)人類支原體的常見棲居場(chǎng)所和致病性種類棲居場(chǎng)所致病性

口咽部泌尿生殖道唾液支原體+-_口腔支原體+-_頰支原體+-_咽支原體+-_嗜脂支原體+-_肺炎支原體+-+人型支原體+++生殖道支原體±++發(fā)酵支原體++±靈長(zhǎng)支原體_+_嗜精子支原體-+_滲透支原體-+±解脲脲原體++＋萊氏無(wú)膽甾原體+-_目無(wú)膽甾原體?-_支原體與細(xì)菌L型比較性狀支原體細(xì)菌L型濾過性有有細(xì)胞壁無(wú)無(wú)油煎蛋狀菌落形成形成對(duì)青霉素抵抗抵抗對(duì)膽固醇需要生長(zhǎng)需要不一定需要來(lái)源自然界、人與動(dòng)物由細(xì)菌在環(huán)境條件下誘導(dǎo)形成回復(fù)變成細(xì)菌不能能遺傳性與細(xì)菌無(wú)關(guān)與原細(xì)菌相同人類支原體的生化反應(yīng)支原體需要膽固醇分解葡萄糖水解還原四氮唑吸附血細(xì)胞精氨酸尿素發(fā)酵支原體+++———肺炎支原體++——++解脲脲原體+——+—+人型支原體+—+———唾液支原體+—+———穿通支原體+++—？+生殖支原體++———+一、肺炎支原體形態(tài)與結(jié)構(gòu)

大小:可通過濾器,光鏡下可觀察細(xì)胞壁:無(wú)形態(tài):球形、球桿形、分枝絲狀或念珠狀等細(xì)胞膜:三層:1.蛋白質(zhì)2.脂質(zhì)(膽固醇較多)

3.蛋白質(zhì)染色:姬姆薩染色法:淡紫色或藍(lán)色核酸:二種(DNA和RNA)生長(zhǎng)繁殖繁殖方式:

二分裂方式球體延伸、分節(jié)斷裂、出芽、分枝繁殖周期:3小時(shí)營(yíng)養(yǎng)要求:較高,含動(dòng)物血清、酵母浸液酸堿度:pH7.8～8．0氣體環(huán)境:5％CO2溫度與時(shí)間:35℃,2d～3d菌落特征:“油煎蛋”狀菌落抗原構(gòu)造主要抗原成分:1.蛋白質(zhì)

P1蛋白抗原:表面抗原致病:粘附2.脂質(zhì)中的糖脂抗體:產(chǎn)生補(bǔ)體結(jié)合抗體生長(zhǎng)抑制抗體代謝抑制抗體抵抗力理化因素:比細(xì)菌敏感(因無(wú)細(xì)胞壁)熱:弱,50℃經(jīng)30min死亡－20℃可長(zhǎng)期保存耐堿酸和有機(jī)溶劑:較敏感(消毒劑、清潔劑)四環(huán)素族、紅霉素、卡那霉素、氯霉素:敏感青霉素、頭孢菌素:不敏感致病性外源性感染上呼吸道感染:感冒、咽炎、氣管炎支原體性肺炎原發(fā)性非典型肺炎世界各地,密集人群,兒童及青少年多見秋冬季發(fā)病率高,每隔3～5年出現(xiàn)一次流行飛沫傳播潛伏期2W～3W,感染起病緩慢臨床主要癥狀:發(fā)熱（約39℃）、頭痛、持續(xù)性頑固咳嗽、胸痛等。病人帶菌、排菌狀態(tài)可持續(xù)6W～8W肺外合并癥（神經(jīng)系統(tǒng)、消化系統(tǒng)及心臟等）發(fā)病率高，嚴(yán)重者可致死致病性:粘附是先決條件也和超敏反應(yīng)有關(guān)(共同抗原)免疫性抗體：多種(CF抗體、生長(zhǎng)抑制抗體、殺支原體抗體等)

呼吸道sIgA:有一定作用非特異冷凝集素:

1.和自身免疫有關(guān)

2.患者陽(yáng)性率為50％常用于輔助診斷病原菌分離特異核酸的檢測(cè)血清學(xué)診斷抗原檢測(cè)冷凝集試驗(yàn)

微生物檢測(cè)方法病原菌分離標(biāo)本：咽拭子或痰液培養(yǎng)基：雙相培養(yǎng)基（含馬血清、酵母浸液）

SP-4培養(yǎng)基（提高分離率30％～40％）氣體環(huán)境：5％～10％CO2溫度與時(shí)間：35℃，l～2W可疑菌落：

1.糖發(fā)酵2.溶血性3.血細(xì)胞吸附4.特異抗血清生長(zhǎng)抑制試驗(yàn)和代謝抑制試驗(yàn)

病原菌分離標(biāo)本：咽拭子或痰液培養(yǎng)基：液體顯色培養(yǎng)基+藥敏一體化氣體環(huán)境：普通溫度與時(shí)間：37℃，24-72小時(shí)特異性核酸的檢測(cè)（1）聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)：優(yōu)點(diǎn)：特異性好、敏感性高、快速、簡(jiǎn)便。（2）基因探針特異性強(qiáng)，敏感性不如PCR技術(shù)。血清學(xué)診斷（1）補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)（CFT）：（2）間接血凝試驗(yàn)（IHA）：

明膠顆粒凝集試驗(yàn)（MPPA）（3）酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)：（4）間接免疫熒光試驗(yàn)（IFA）：抗原檢測(cè)

方法1:間接法或直接法方法2:雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)方法3:酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)捕獲法方法4：免疫層析法方法5：免疫熒光法

冷凝集試驗(yàn)輔助診斷非典型肺炎針對(duì)紅細(xì)胞膜Ⅰ抗原冷凝集素屬IgM5d～10d出現(xiàn)，2W～3W高峰輔助診斷效價(jià):64～128倍以上

雙份效價(jià)升高4倍以上特異性和敏感性較低防冶藥物:四環(huán)素類(近年來(lái)耐藥性增加)

大環(huán)內(nèi)酯類:首選

(紅霉素、克拉霉素、阿奇霉素)

喹諾酮類疫苗:減毒活疫苗基因工程疫苗二、泌尿生殖道支原體種類：

人型支原體、生殖道支原體、解脲脲原體傳播途徑：

性傳播

垂直傳播所致疾?。?/p>

非淋病性尿道炎

早產(chǎn)、流產(chǎn)解脲脲原體生物學(xué)性狀形態(tài):球形、球桿狀、桿型及長(zhǎng)絲形染色:革蘭染色陰性，姬姆薩染色呈紫藍(lán)色溫度、酸堿度和時(shí)間:35℃,pH6.3，2d～3d菌落:細(xì)小(10μm～40μm),油煎蛋樣菌落

（顯微鏡低倍鏡觀察）抗生素敏感性:

敏感:四環(huán)素類、大環(huán)內(nèi)脂類、林可霉素類及喹諾酮類不敏感:青霉素生化特性:水解尿素產(chǎn)氨致病性存在:人和動(dòng)物的口腔、呼吸道、泌尿生殖道血清型:解脲脲原體(Uu)有16個(gè)血清型傳播途徑:性接觸傳播、母嬰傳播所致疾病(STD)泌尿生殖道感染:NGU、盆腔感染、宮頸炎、陰道炎、輸卵管炎、慢性前列腺炎、附睪炎、男女不孕癥、反復(fù)流產(chǎn)、早產(chǎn)、死胎新生兒疾病:呼吸道病變、肺炎、腦膜炎解脲支原體、人型支原體標(biāo)本的采集：分泌物、精液、中段尿等。分離培養(yǎng)：培養(yǎng)基：基本同肺炎支原體，培養(yǎng)基含0.05%尿素（精氨酸）、酚紅等。

pH：6.3培養(yǎng)條件：35℃，有氧條件下生長(zhǎng)良好。培養(yǎng)時(shí)間：24～48h檢驗(yàn)程序：液體—固體二步培養(yǎng)法標(biāo)本液體培養(yǎng)基（黃色，37℃，Uu8—24小時(shí),Mh1～3d）液體澄清透亮變紅0.1ml轉(zhuǎn)種于固體培養(yǎng)基（37℃，5%CO2Uu1--3天,Mh3～7天）肉眼觀察無(wú)菌落(人型支原體菌落較大），培養(yǎng)基變紅低倍鏡下觀察（油煎蛋或顆粒樣菌落）。

解脲脲原體：棕色或深棕色“海膽”樣菌落

人型支原體：淺黃色“油煎蛋”樣菌落多功能超高倍顯微鏡分析儀MDI◆是一種綜合相差對(duì)比、暗視野及偏振光的可變投影顯微鏡，是在高清晰度的情況下連續(xù)放大40～