DB11 T 150.2-2002 奶牛飼養(yǎng)管理技術規(guī)范第2部分 繁殖

奶牛飼養(yǎng)管理技術規(guī)范第2部分：繁殖北京市質量技術監(jiān)督局發(fā)布I前言 Ⅱ 12規(guī)范性引用文件 13術語和定義 14人工授精 34.1種公牛 34.1.1對種公牛的基本要求 34.1.2種公牛的營養(yǎng) 34.1.3種公牛生殖器官的檢查 34.1.4種公牛的保健 44.1.5采精 44.1.6精液冷凍 44.1.7精液質量標準 44.2母牛 44.2.1繁殖指標 44.2.2發(fā)情和發(fā)情鑒定 54.2.3配種 54.2.4妊娠和妊娠診斷 64.2.5繁殖障礙牛的管理 64.2.6產科管理 64.2.7記錄 75胚胎移植 75.1供體牛的選擇標準 75.2超數(shù)排卵 85.3胚胎的冷凍保存與解凍 85.4受體牛的選擇與準備 5.6胚胎移植記錄 附錄A(規(guī)范性附錄)繁殖指標計算方法 附錄B(規(guī)范性附錄)人工授精記錄表格 附錄C(規(guī)范性附錄)胚胎移植記錄表格 18IDB11/T150《奶牛飼養(yǎng)管理技術規(guī)范》為北京市地方系列標準。本標準分為四個部分：—第1部分：育種；——第2部分：繁殖；——第3部分：飼養(yǎng)與飼料；——第4部分：衛(wèi)生保健。本部分為DB11/T150的第2部分。DB11/T150的本部分依據(jù)的主要文件和參考文獻：《北京奶牛場管理與技術規(guī)范》(1990年)、GB4143-1984《牛冷凍精液》、《畜牧名詞術語標準》(中華人民共和國農牧漁業(yè)部畜牧局組織編寫、農業(yè)出版社出版，1987年)、中國奶牛協(xié)會《奶牛繁殖技術管理規(guī)范》(1993年)。本部分的附錄A、附錄B、附錄C為規(guī)范性附錄。本部分由北京三元集團總公司提出。本部分由北京市質量技術監(jiān)督信息研究所歸口。本部分起草單位：北京奶牛中心。本部分主要起草人：于德洪、呂奇、張曉霞、宣柏華、張新慧。1奶牛飼養(yǎng)管理技術規(guī)范第2部分：繁殖修改單(不包括勘誤的內容)或修訂版均不適用于本標準，然而，鼓勵根據(jù)本標準達成協(xié)議的各方研究2形精子比例如超過一定限度，就會降低受胎率。?；尉硬坏陀?0%。指未經配種母畜，兩次發(fā)情間隔的天數(shù)。母牛的平均發(fā)情周期為21天。3受精卵移植指將供體母畜體內、外生產的胚胎移植到受體母畜子宮角內，使其繼續(xù)發(fā)育成正常個體的一項繁殖技術。胚胎移植的一個重要技術環(huán)節(jié)。指在一定時期，給母畜注射(或施用)某種激素類藥物，使卵巢有更多的成熟卵泡，排出更多的卵子的技術。指在胚胎移植中，提供胚胎或卵母細胞的母畜。一般選用生產性能較高或具有某種遺傳特性，體質健康，繁殖機能正常的母畜作供體。指接受移植胚胎的母畜。一般選用生產性能較低，但健康并繁殖機能正常的母畜作受體。4人工授精4.1種公牛4.1.1對種公牛的基本要求4.1.1.1種公牛系譜至少三代清楚，并經后裔測定或其他方法證明為良種者。4.1.1.2種公牛必須體質健壯，生殖器官(睪丸、副性腺、交媾器官等)發(fā)育正常，無繁殖障礙和法規(guī)規(guī)定的傳染病。4.1.1.3全年凍精合格率不低于60%,年生產量不低于1萬個劑量。4.1.1.4年第一次授精的情期受胎率不低于55%(至少需要100頭牛的輸精數(shù)據(jù))。4.1.2種公牛的營養(yǎng)4.1.2.1按種公牛的發(fā)育階段和營養(yǎng)需要做好日糧配合。4.1.2.2犢種公牛哺乳期不少于4個月，哺乳量不低于600kg。4.1.2.3初情期階段蛋白質給量一般應高于成年公牛需要量的10%。4.1.2.4性成熟階段蛋白質給量一般應高于成年公牛需要量的5%。4.1.3種公牛生殖器官的檢查4.1.3.1對生殖器官應進行全面檢查，包括睪丸形態(tài)、大小、質地以及副睪、副性腺等。4.1.3.2檢查時間和次數(shù)青年牛在首次采精前檢查一次，成年公牛每年檢查一次。4.1.3.3在檢查中發(fā)現(xiàn)異常問題時要及時查明原因并酌情進行治療或淘汰。4.1.4種公牛的保健4.1.4.1每年定期兩次檢疫，平時做好防疫衛(wèi)生保健和安全工作。44.1.4.2必須保證種公牛每天有適量的運動，做好護蹄、修蹄工作。4.1.4.3平時注意對種公牛生殖器官的護理，防止各種因素造成的傷害。4.1.5.1開始采精年齡不得低于14月齡，體重不得低于400kg。4.1.5.2采精場所必須整潔、防塵、防滑和地面平坦，并設有采精墊和安全欄。4.1.5.3成年公牛采精一般每周不得超過2次，每次不得超過2回，采精前做到空爬1次～2次。4.1.5.4做好采精牛平時的陰毛修剪和采精時的包皮清洗、消毒以及公牛后軀的衛(wèi)生工作。4.1.5.5所有采精器具每次使用前均需嚴格消毒，未經消毒不得重復使用，采精時要求假陰道溫度在37℃~40℃,松緊適宜，潤滑劑涂抹深度不得超過二分之一。4.1.5.6采精時要做到人牛固定，操作不得粗暴，要膽大心細，充分掌握公牛個體習性，做到誘導采精。由公牛將陰莖自行伸入假陰道，射精后隨公牛下落，讓陰莖慢慢回縮，自動脫落。精液冷凍遵照GB4143。4.1.7精液質量標準精液質量標準見表1。表1精液質量標準冷凍精液(解凍后)——%萬個/ml%%精子在37℃下存活時間小時個億個/ml4.2.1.1年總受胎率≥95%。4.2.1.2年情期受胎率≥58%。4.2.1.3年空懷率≤5%。4.2.1.4年綜合受胎指數(shù)≥0.55。54.2.1.7產后第一次配種受胎率≥65%。4.2.1.8胎間距≤385天。4.2.1.9初產月齡≤30月齡。4.2.1.10產犢后50天內出現(xiàn)第一次發(fā)情的母牛比率≥80%。4.2.1.12產后第一次配種的平均天數(shù)在70天～90天之間。4.2.1.13配種三次以下(含三次)即孕母牛比率≥94%。4.2.1.15母牛每受孕一次的平均精液耗量≤3個劑量。4.2.2發(fā)情和發(fā)情鑒定4.2.2.1對逾15月齡未見初情的育成母牛，須進行母畜科和營養(yǎng)學檢查。4.2.2.2發(fā)情鑒定采用觀察法，每天不少于3次~4次，主要觀察母牛是否接受其他母牛爬跨、粘液4.2.3.1育成母牛16月齡~17月齡、體重達380kg開始配種。4.2.3.2成年母牛產后應有60天的休整期，第一次配種應在休整期以后。4.2.3.3配前要進行母畜科檢查，對患有生殖疾病的牛只不予配種，應及時治療。4.2.3.4.1細管凍精用38℃±2℃溫水直接浸泡解凍。4.2.3.4.2顆粒凍精用38℃±2℃,1.5ml解凍液解凍，每次解凍一粒，多于兩粒時，應分別解凍。4.2.3.4.3解凍液配制a)二水檸檬酸鈉2.9g、雙蒸餾水100ml。b)二水檸檬酸鈉1.0g、蔗糖4.0g、乙二胺乙酸二鈉0.1g、雙蒸餾水100ml。細管精液≤1小時，顆粒精液≤1小時。若需外運，應該采用4.2.3.4.3中列項b),解凍后用塑料袋包裝在4℃~5℃貯存，存放時間≤6小時。4.2.3.6輸精前應進行精液品質檢查，符合4.1.7所列質量標準方可輸精。64.2.3.7采用直腸把握法輸精。輸精時機掌握在發(fā)情中、后期。一個發(fā)情期輸精1次~2次，每次用14.2.3.8用卡蘇槍或玻璃輸精器輸精。玻璃輸精器每牛每次一支，不經消毒不得重復使用，用畢要及時清洗干凈，放入干燥箱內經170℃消毒2小時。4.2.3.9配種全過程要保證無污染操作。4.2.4妊娠和妊娠診斷4.2.4.1母牛輸精后進行兩次妊娠診斷，第一次在配后2個月～3個月，第二次在停奶前。4.2.4.2妊娠診斷采用直腸檢查法、腹壁觸診法、超聲診斷法等。4.2.4.3對妊娠母牛要加強飼養(yǎng)管理，做好保胎工作。4.2.5繁殖障礙牛的管理4.2.5.1對產后60天未發(fā)情的牛只、發(fā)情間隔在40天以上的未配牛只、妊檢發(fā)現(xiàn)的未妊牛只，要查明原因，進行誘導發(fā)情或對癥處理。4.2.5.2對輸精兩次以上仍未妊的牛只，要進行母畜科檢查，發(fā)現(xiàn)病癥及時處理。4.2.5.3對產后半年以上的未妊成母牛和24月齡以上的未妊青年牛要組織會診。4.2.5.4對早期胚胎死亡、流產、早產的牛只，要分析原因，必要時進行流行病學調查。對傳染性流產要采取相應的衛(wèi)生、防疫措施。4.2.6產科管理4.2.6.1.1分娩母牛在預產期前15天進產房，產后15天左右出產房。產房每周消毒一次，產床(或產間)每天消毒一次，并經常更換墊草，防止生殖道感染。4.2.6.1.2母牛應以自然分娩為主，需要接產或助產時應嚴格按產科要求進行。4.2.6.1.3對產后母牛要加強飼養(yǎng)管理，促進母牛生殖機能恢復。4.2.6.2產后的一般監(jiān)護4.2.6.2.1產后6小時內，觀察母牛產道有無損傷，發(fā)現(xiàn)損傷要及時處理。產后12小時內觀察母牛的努責狀態(tài)。母牛努責強烈時，要注意子宮內是否還有胎兒和有無子宮脫征兆，發(fā)現(xiàn)子宮脫要及時處置。4.2.6.2.2產后三天內，觀察胎衣排出情況及產道和外陰部有無感染。同時觀察母牛有無生產癱瘓癥狀，發(fā)現(xiàn)有此癥狀時要及時診治。4.2.6.2.3產后7天內，監(jiān)視惡露。一旦發(fā)現(xiàn)惡露異?；蚣毙匝装Y表現(xiàn)要立即診治。4.2.6.2.4產后14天，進行第一次產科檢查。主要檢查陰道粘液的潔凈程度。發(fā)現(xiàn)粘液不潔時，嚴重的進行治療，較輕微的可先行記錄，暫不處理。4.2.6.2.5產后30天~35天，進行第二次產科檢查，主要通過直腸檢查子宮恢復程度和卵巢機能狀況，同時對第一次檢查做先行記錄的牛只進行復查。此次檢查發(fā)現(xiàn)的子宮疾病，不論輕重均要治療。4.2.6.2.6產后50天~60天，對一檢、二檢的治療牛只進行復查，如未愈，繼續(xù)治療。對卵巢靜止或發(fā)情不明顯的牛只，通過誘導發(fā)情方法催情。74.2.6.3.1產后5小時胎衣仍未下時，需進行處理。處理方法：肌注催產素或前列腺素。4.2.6.3.2產后24小時胎衣仍未下時，行手術剝離或保守療法。4.2.6.3.3胎衣脫落后檢查胎膜是否完整，尤其要注意對空角尖端的檢查。如發(fā)現(xiàn)有部分絨毛膜或尿用4%苛性鈉液2ml,取等量子宮粘液混合于試管內加熱至沸點，冷卻產后2周內。牛群產后子宮隱性感染率<30%。b)體積和形狀：子宮體積不再縮小，兩角基本對稱，間溝明顯，宮縮反應靈敏；c)子宮供血：恢復正常(無明顯特異性搏動)。產后30天～35天進行第一次檢查。產后6周進行復查。4.2.6.5.4子宮復舊的正常時間范圍為4周~6周。4.2.7.1對母牛的發(fā)情、配種、妊檢、產犢(包括流產)等情況需用專門的表格給予記錄。表格格式見附錄B。4.2.7.2牛場應根據(jù)產后監(jiān)控內容設立母牛產后監(jiān)控卡，把產后監(jiān)控作為技術管理的一項常規(guī)措施。產后監(jiān)控卡格式見附錄B。5.1.1遺傳性能優(yōu)良，其質量標準見表2。8預期傳遞力(PTA)%%%%5.2.1.1兩次超排的間隔天數(shù)為70天~90天；5.2.1.2連續(xù)超排4次~5次后，應自身妊娠一次；采用FSH和氯前列烯醇(以下簡稱PG)注射程序。5.2.2.1FSH的總劑量為9.0mg~9.8mg,于供體牛發(fā)情周期的9天~13天開始劑量遞減注射，注射期為4.5天，每日上、下午各一次，共9次。5.2.2.2PG的總劑量為1.0mg,于注射FSH的第三天分二次注射，上午0.6mg,下午0.4mg。5.2.3.1供體牛發(fā)情后精，第二天上午進行第二次輸精。輸精劑量為通常的2倍~3倍。兩次輸精應使用同一頭公牛的精液。5.2.3.2在注射PG前開始發(fā)情的，應立即停止注射FSH,不要配種。5.2.3.3在注射PG后不到30小時發(fā)情的，應在發(fā)情后停止注射FSH并配種。5.2.3.4對遲于PG注射后56小時發(fā)情的，應按方案注射完藥物，等待發(fā)情后輸精。5.2.4.1供體牛超排發(fā)情后的第7天用二路或三路式采卵管進行非手術采卵。沖卵液總量為1000ml,每測子宮角各500ml。5.2.4.2為保證供體牛安靜，便于操作，采卵前需注射靜松靈1ml～1.5ml。5.2.4.3先沖超排效果較好的一側子宮角，后沖另一側子宮角。量為18ml～20ml。5.2.4.6沖卵時，進液速度應慢，出液速度應快；先少量進液，再逐漸加大進液量，每次進液量范圍在30ml~50ml之間。要防止沖卵液的丟失。95.2.4.7采卵后，供體牛應肌注PG0.4mg~0.6mg,子宮灌注抗菌素。把集卵杯內的回收液在室溫18℃~22℃下靜置20分鐘~30分鐘，然后將上清液通過集卵漏斗慢慢清除，最后集卵杯內剩下30ml~50ml回收液，搖動集卵杯將其倒入100mm培養(yǎng)皿內。用PBS液沖洗集卵杯壁2次~3次，清洗液倒入集卵漏斗。另一側子宮角回收液做同樣處理。集卵漏斗最后保留的20ml左右液體倒入另一?100mm培養(yǎng)皿中。上述培養(yǎng)皿待鏡檢。a)桑椹胚(M):卵裂球隱約可見，細胞團體積幾乎占滿卵周間隙。b)致密桑椹胚(CM):卵裂球進一步分裂，看不清細胞之間的界線，細胞團收縮變緊，占卵周間隙的60%-70%。c)早期囊胚(EB):出現(xiàn)透亮的囊胚腔，此時的滋養(yǎng)層和內細胞團尚難于區(qū)分，細胞團占卵周間隙的70%-80%。d)囊胚(BL):囊胚腔擴大，滋養(yǎng)層細胞分離，細胞團充滿卵周間隙。e)擴張囊胚(EXB):囊胚腔充分擴張，體積增至1.2倍~1.5倍，透明帶變薄，相當于原厚度的各級胚胎的標準見表3。5.2.6.4對于較難判定的胚胎，可以在體外培養(yǎng)4小時～6小時后，觀察胚胎的發(fā)育能力，以此來判胚胎形態(tài)完整，處于正常的發(fā)育階段，外形勻稱，胚胞呈球形。分裂球大小均勻，結構緊湊，透明度適中，沒有或有少量游離細胞(少于10%發(fā)育稍緩慢，胚胎有小的破損，有少量游離細胞(少于20%),內細胞團完發(fā)育遲緩1~2天，卵裂球大小不均勻，透明度變化明顯(太明或太暗),胚胞破損較大(大于30%,小于50%),細胞連結不夠緊密，但胚胞仍呈球形，有明顯的細胞團結發(fā)育遲緩(2天以上),比C級胚胎的缺損更大。未受精a)保存液：含有0.4%牛血清蛋白的PBS液。c)1.5M乙二醇冷凍液(含0.1M蔗糖):用保存液配制。注：溶液在使用時，先用細菌濾器過濾。a)用10%甘油/保存液做冷凍劑胚胎→保存液洗10次→10%甘油/保存液→裝管約15分鐘~20分鐘→冷凍儀(-6.0℃)→-6.0℃平衡5分鐘→植冰(7秒～10秒)→繼續(xù)平衡5分種→以(0.4℃~0.6℃)/分鐘的速率下降→-32℃→平衡5分鐘→投入液氮。b)用M乙二醇(含0.1M蔗糖)/保存液做冷凍劑胚胎→保存液洗10次→1.5M乙二醇/保存液→裝管約15分鐘~20分鐘→冷凍儀(-7.0℃)→在-7.0℃平衡5分鐘→植冰(7秒~10秒)→繼續(xù)平衡5分鐘→以(0.4℃~0.6℃)/分的速率下降→-35℃→平衡5分種→投入液氮。a)保存液：含0.4%牛血清白蛋白的PBS液；裝胚細管→空氣浴(18℃~25℃)10秒→32℃水浴10秒→揩干細管→剪去細管塞→推出胚胎→解凍液4分鐘→保存液，沖洗5次～6次→鏡檢→裝管→細管裝入移植槍→移植(胚胎解凍后30分鐘~45分鐘內移入受體)。b)1.5M乙二醇/保存液(含0.1蔗糖)冷凍胚胎的解凍(直接解凍移植法):裝胚細管→32℃水浴10秒→揩干細管→用70%酒精棉球擦拭細管，晾干→剪去細管塞→把細管裝入移植槍→移植(胚胎解凍后5分～8分鐘內移入受體)。5.4.1.2身體健康，營養(yǎng)狀況正常，沒有全身或生殖器官感染，5.4.1.418月齡～21月齡、體重380kg~400kg的青年?；虺赡昴概！２捎米匀话l(fā)情的受體牛時，受體牛的數(shù)量應按供體牛的5倍準備。若沒有足夠數(shù)量的同期受體牛，可用PG或孕激素陰道栓對備用受體牛進行同期發(fā)情處胚胎移植時，為了達到最佳的受胎結果，優(yōu)良胚胎應該移植給具有優(yōu)良黃體的受體。5.5.2.1受體牛自處理的前三周至移植后的一個月內，都不應受到應激作用(如：改變飼料、免疫接種，驅蟲等)。清洗消毒外陰，扒開外陰唇→插入移植器至子宮頸外口→一只手進直腸，采用直腸把握法導入移植器→過子宮頸→至移植側子宮角(黃體側)→至移植部位(小彎或稍后)→慢慢推出胚胎→移植器退回0.5cm,轉一下移植器(防止胚胎丟失)→退出移植器。注意整個操作，手法要輕緩。門的記錄表詳細記錄。記錄表見附錄C。繁殖指標計算方法A.1年總受胎率指年內受胎母?？倲?shù)與受配母牛總數(shù)的百分比。A.2年情期受胎率指年內受胎母?？倲?shù)與受配情期總數(shù)的百分比。指年內平均空懷頭數(shù)與平均飼養(yǎng)頭數(shù)的百分比。注：年平均空懷頭數(shù)的計算方法為：年內年滿18月齡以上母牛的總空懷天數(shù)除以365。年平均飼養(yǎng)頭數(shù)的計算方法為：年內年滿18月齡以上母牛的總飼養(yǎng)日數(shù)除以365。A.4年綜合受胎指數(shù)是以總受胎率、情期受胎率、空懷率為基礎數(shù)據(jù)的牛群繁殖力綜合指標。式中所得Q值越大，表示總體受胎水平越高。A.5年漏情率指年內大于正常發(fā)情周期天數(shù)一倍以上的發(fā)情周期期數(shù)占總發(fā)情周期期數(shù)的百分比。A.6初配受胎率指青年母牛首次配種的受胎率。A.7產后第一次配種受胎率指成年母牛產后第一配種情期的受胎率。指牛群中全部母牛兩次產犢之間的平均間隔天數(shù)?！铺ラg距一參加統(tǒng)計母牛兩次產犢之間間隔天數(shù)的總和A.9初產月齡指牛群中全部青年母牛首次產犢的平均年齡，即由青年牛轉為成母牛的平均年齡。A.10產犢后50天內出現(xiàn)第一次發(fā)情的母牛比率指成母牛群中產后50天內出現(xiàn)發(fā)情母牛占同期分娩母牛的百分比。指全群母牛出現(xiàn)的發(fā)情周期總數(shù)中，屬于18天~24天正常發(fā)情周期所占的百分比。A.12產后第一次配種的平均天數(shù)指分娩日(0天)到產后首次配種日的平均間隔天數(shù)。A.13配種三次以下即孕母牛比率指全群母牛在三個受配情期以下(含三個情期)即配孕的母牛占同期所有參加配種母牛的百分比。指年內產后半年以