第三章實驗室生物安全幻燈片

1、,微生物學檢驗,第三章 實驗室生物安全,3,本 章 內(nèi) 容,4,學習目標,學習目標： 1.掌握：實驗室生物安全和實驗室生物安全保障的概念； BSL-2實驗室安全操作技術(shù)規(guī)范； BSL-1、BSL-2在安全設(shè)備、個體防護方面的不同。 2.熟悉：病原微生物危害程度分類等級和實驗室生物安全防護水平分級；感染性物質(zhì)的操作與處理。 3.了解：臨床微生物實驗室布局及設(shè)計和建造要求。,本章重點： 實驗室生物安全的概念，BSL-2實驗室生物安全設(shè)備要求、實驗室分布及安全防護措施。 實驗室生物安全防護水平分級。感染性物質(zhì)的操作與處理。,5,第一節(jié) 實驗室生物安全概述,一、實驗室生物安全與保障,（一）實驗室生物安

2、全的概念和防護措施,1實驗室生物安全的概念 ：實驗室生物安全是指用以防止實驗室發(fā)生病原體或毒素意外暴露及釋放的防護原則、技術(shù)及實踐。,6,第一節(jié) 實驗室生物安全概述,安全設(shè)備和個人防護,（一）實驗室生物安全的概念和防護措施,2實驗室生物安全防護措施,實驗室設(shè)計與建造,實驗室生物安全管理規(guī)章制度,安全操作規(guī)程,生物安全柜,7,第一節(jié) 實驗室生物安全概述,1.概念：即單位和個人為防止病原體或毒素丟失、被竊、濫用、轉(zhuǎn)移或有意釋放而采取的安全措施。 2.措施： 病原體和毒素的貯存位置、接觸人員資料、使用記錄、運送記錄、對材料進行滅活和（或）丟棄等情況的最新調(diào)查結(jié)果； 相關(guān)人員的作用和責任； 必要時公共

3、衛(wèi)生和安全保障管理部門在發(fā)生違反安全保障事件時的介入程度、作用和責任等； 調(diào)查并糾正違規(guī)行為。,（二）實驗室生物安全保障的概念和措施,8,二、微生物危害評估 進行微生物危害度評估最有用的工具之一就是列出微生物的危險度等級。適當時還應(yīng)考慮以下因素： 病原微生物的致病性和感染量； 暴露的潛在后果； 自然傳播途徑； 實驗室操作所致的其他感染途徑； 病原微生物在環(huán)境中的穩(wěn)定性；,第一節(jié) 實驗室生物安全概述,9,所操作病原微生物的濃度； 病原微生物的宿主； 從動物研究和實驗室感染報告或臨床報告中得到的信息； 擬進行的實驗操作（如超聲處理、離心等）； 可能會擴大微生物的宿主范圍或改變病原微生物對于已知有效

4、治療方案敏感性的所有基因技術(shù)； 當?shù)厥欠衲苓M行有效的預(yù)防或治療。,第一節(jié) 實驗室生物安全概述,10,三、病原微生物的分類管理,第一節(jié) 實驗室生物安全概述,國內(nèi)外病原微生物危害程度分類比較,11,管理條例 通用要求 WHO安全手冊,第一節(jié) 實驗室生物安全概述,12,管理條例 通用要求 WHO安全手冊,第一節(jié) 實驗室生物安全概述,13,管理條例 通用要求 WHO安全手冊,第一節(jié) 實驗室生物安全概述,14,四 、實驗室生物安全的重要意義,第一節(jié) 實驗室生物安全概述,是建立病原微生物研究安全平臺的需要 是生物防護（國防）的需要 是出入境檢驗檢疫的需要 是動物防疫的需要 是傳染病的預(yù)防與控制的需要 是醫(yī)

5、院感染控制的需要 GOARN監(jiān)測網(wǎng)絡(luò)離不開生物安全實驗室,15,第二節(jié) 生物安全實驗室與設(shè)備要求,一、實驗室生物安全防護水平分級 實驗室生物安全通用要求（GB19489-2008）根據(jù)生物安全實驗室所操作的生物因子的危害程度及采取的防護措施，將生物安全實驗室的生物安全防護水平分為4級。,16,第二節(jié) 生物安全實驗室與設(shè)備要求,一、實驗室生物安全防護水平分級,與病原微生物危害等級相對應(yīng)的生物安全水平、實驗室類型、 實驗室操作以及主要安全設(shè)備的要求。,17,第二節(jié) 生物安全實驗室與設(shè)備要求,1.清潔區(qū)：為未被病原微生物污染的區(qū)域，包括辦公室、休息室、培養(yǎng)基配制室與試劑儲藏室等，此區(qū)域禁止帶入細菌檢

6、驗標本。 2.半污染區(qū)：為可能被病原微生物污染的區(qū)域如緩沖間、工作服放置室、走廊等。 3.污染區(qū)（操作區(qū)）：為已被病原微生物污染的區(qū)域，用于接收臨床標本，進一步接種、分離培養(yǎng)、鑒定和藥敏試驗及結(jié)果報告等工作。,（一）臨床微生物實驗室布局,二、臨床微生物實驗室布局與基本要求,18,第二節(jié) 生物安全實驗室與設(shè)備要求,1BSL-1和BSL-2實驗室設(shè)計的安全原則 在設(shè)計實驗室時應(yīng)考慮可能造成實驗室安全問題的情況，主要包括： 氣溶膠形成 處理高濃度微生物 節(jié)肢動物和嚙齒動物的侵擾 儀器設(shè)備過多和過度擁擠 無關(guān)人員未經(jīng)允許進入實驗室 一些特殊樣品和試劑使用的工作流程,（二）實驗室設(shè)計和建造的特殊要求,1

7、9,第二節(jié) 生物安全實驗室與設(shè)備要求,2BSL-1設(shè)計和建造要求 無需特殊選址 每個實驗室應(yīng)設(shè)洗手池，宜設(shè)置在靠近出口處 實驗室的墻壁、天花板和地面應(yīng)平整 實驗臺面應(yīng)防水，耐腐蝕、耐熱 實驗室中的櫥柜和實驗臺應(yīng)牢固 實驗室如有可開啟的窗戶，應(yīng)設(shè)置紗窗 在實驗室工作區(qū)外應(yīng)有存放外衣和私人物品的設(shè)施 實驗室門應(yīng)設(shè)有門禁系統(tǒng)，能控制進入 實驗室內(nèi)應(yīng)保證工作照明，避免不必要的反光和強光 應(yīng)有適當?shù)南驹O(shè)備,（二）實驗室設(shè)計和建造的特殊要求,20,第二節(jié) 生物安全實驗室與設(shè)備要求,3BSL-2設(shè)計和建造要求 除了具備BSL-1實驗室的設(shè)計和建造要求之外，還有如下要求： 應(yīng)設(shè)置實施各種消毒方法的設(shè)施，如高

8、壓滅菌器 安全系統(tǒng)應(yīng)當包括消防、應(yīng)急供電、洗眼器以及應(yīng)急噴淋裝置 實驗室門宜帶鎖、可自動關(guān)閉。實驗室的門應(yīng)有可視窗 實驗室出口應(yīng)有發(fā)光指示標志 不需特殊的通風設(shè)備，可采取窗戶自然通風，同時安裝紗窗 應(yīng)有足夠的儲存空間擺放物品以方便使用 有可靠和充足的電力供應(yīng)和應(yīng)急照明,（二）實驗室設(shè)計和建造的特殊要求,21,第二節(jié) 生物安全實驗室與設(shè)備要求,一級生物安全水平實驗室示意圖,二級生物安全水平實驗室示意圖,22,BSL-1實驗室與BSL-2實驗室安全設(shè)備和個體防護的要求區(qū)別：,三、安全設(shè)備和個體防護,第二節(jié) 生物安全實驗室與設(shè)備要求,23,第三節(jié) 生物安全實驗室操作技術(shù)規(guī)范,一、實驗室準入要求 1.

9、禁止非工作人員進入實驗室。參觀實驗室等特殊情況須經(jīng)實驗室負責人批準后方可進入。 2.實驗室的門應(yīng)保持關(guān)閉。 3.BSL-2實驗室入口處應(yīng)貼有國際通用的生物危害警告標志，其下部應(yīng)注明實驗室的生物安全等級、實驗室名稱、負責人姓名和聯(lián)系電話等有關(guān)信息 4.進入動物房應(yīng)當經(jīng)過特殊批準，禁止將無關(guān)動物帶入實驗室。,24,第三節(jié) 生物安全實驗室操作技術(shù)規(guī)范,二、實驗室操作要求 1.所有實驗操作要按盡量減少微小液滴和氣溶膠產(chǎn)生的方式來進行。 2.以移液器吸取液體，禁止舔標簽。 3.應(yīng)限制使用皮下注射針頭和注射器。 4.盡可能應(yīng)用一次性注射器，用過的針頭禁止折彎、剪斷、折斷、重新蓋帽，禁止用手從注射器上取下針

10、頭。用過的針頭必須放入防穿透的銳器盒中。非一次性利器必須放入銳器盒中并運送到特定區(qū)域進行高壓滅菌。 5.禁止用手處理破碎的玻璃器具。裝有污染針、利器及破碎玻璃的容器在丟棄之前必須高壓滅菌。,25,第三節(jié) 生物安全實驗室操作技術(shù)規(guī)范,二、實驗室操作要求 6.實驗室必須制定并嚴格執(zhí)行處理溢出物的標準操作規(guī)程。 7.在處理完感染性實驗材料和動物以及其他有害物質(zhì)后，脫掉手套后及離開實驗室前，都必須洗手。 8.禁止在實驗室工作區(qū)進食、飲水、吸煙、處理隱形眼鏡、化妝及儲存食物。 9.每天工作結(jié)束后應(yīng)消毒工作臺面，具有潛在危害性的材料濺出后要隨時消毒。,26,第三節(jié) 生物安全實驗室操作技術(shù)規(guī)范,二、實驗室操

11、作要求 10.所有培養(yǎng)物、廢棄物在運出實驗室之前必須進行高壓滅菌。需運出實驗室滅菌的物品必須放在專用密閉防漏的容器內(nèi)儲存、運輸。 11.實驗室的文件紙張只有保證未受到污染才可帶出。 12.將生物安全程序納入標準操作規(guī)范或生物安全手冊，由實驗室負責人專門保管，工作人員在進入實驗室之前要閱讀規(guī)范并按照規(guī)范要求操作。 13.工作人員要接受有關(guān)的潛在危險知識的培訓，掌握預(yù)防暴露以及暴露后的處理程序。每年要接受一次最新的培訓。,27,第三節(jié) 生物安全實驗室操作技術(shù)規(guī)范,三、感染性物質(zhì)的操作與處理 （一）感染性物質(zhì)的操作 1.標本采集：必須有掌握相關(guān)職業(yè)知識和操作技能的工作人員進行采集，并根據(jù)采集的標本中

12、可能含有病原微生物的危害程度而采取相應(yīng)的個人防護。 2.標本運送：采集的標本應(yīng)采取防止污染工作人員、患者及環(huán)境的方式在醫(yī)療機構(gòu)內(nèi)運送。,28,第三節(jié) 生物安全實驗室操作技術(shù)規(guī)范,（一）感染性物質(zhì)的操作 3.標本接收和打開：需要接收大量標本的實驗室應(yīng)當設(shè)專門的房間或空間。標本的內(nèi)層容器應(yīng)在生物安全柜內(nèi)打開，并備好消毒劑。,29,第三節(jié) 生物安全實驗室操作技術(shù)規(guī)范,（一）感染性物質(zhì)的操作 4.血清分離：操作時應(yīng)戴手套并注意眼睛和黏膜的防護。 5.感染性物質(zhì)凍干管的開啟和儲存： 凍干管的開啟應(yīng)在生物安全柜中進行。 首先清潔外表面，在管上靠近棉花或纖維塞的中部銼一痕跡，用一團酒精浸泡的棉花將管包起來以

13、保護雙手，然后從銼痕處打開。將頂部小心移去并按污染材料處理。 緩慢向管中加入液體重懸凍干物，避免出現(xiàn)泡沫。,30,第三節(jié) 生物安全實驗室操作技術(shù)規(guī)范,（二）暴露的處理 1銳器傷及其他損傷： 受傷人員應(yīng)立即停止工作，脫防護服； 清洗雙手和受傷部位，如有傷口，應(yīng)當在傷口旁端輕輕擠壓，盡可能擠出損傷處的血液，再用洗手液和流動水沖洗，禁止進行傷口的局部擠壓； 受傷部位的傷口沖洗后，使用皮膚消毒劑，如75%乙醇或者0.5%碘伏進行消毒，必要時進行醫(yī)學處理； 應(yīng)記錄受傷原因及相關(guān)微生物，并保留完整的醫(yī)療記錄。,31,第三節(jié) 生物安全實驗室操作技術(shù)規(guī)范,（二）暴露的處理 2潛在感染性物質(zhì)的食入 ：應(yīng)立即脫防

14、護服并進行醫(yī)學處理，要報告食入材料的特性和暴露細節(jié)，并保留完整的醫(yī)療記錄。 3潛在危險性氣溶膠釋放：所有人員必須立即撤離現(xiàn)場，并及時通知實驗室負責人和生物安全負責人，暴露者接受醫(yī)學咨詢。應(yīng)張貼“禁止進入”的標志，待氣溶膠排出、粒子沉降（約1小時）后方可入內(nèi)。清除污染時應(yīng)穿戴適當?shù)姆雷o裝備。,32,第三節(jié) 生物安全實驗室操作技術(shù)規(guī)范,（二）暴露的處理 4. 潛在感染性物質(zhì)溢出： 處理溢出的人員必須穿防護服，戴手套，必要時需對面部和眼睛進行保護。 首先用布或紙巾覆蓋，由外圍向中心傾倒消毒劑，作用一定時間（約30分鐘）后，將布、紙巾以及破損物品清理掉，玻璃碎片應(yīng)用鑷子或硬的厚紙板等工具清理并置于銳器

15、盒中，切勿直接用手，以免刺破皮膚。 再用消毒劑擦拭污染區(qū)域。 用于清理的布、紙巾、抹布及厚紙板應(yīng)放在盛放污染性廢棄物的容器內(nèi)，污染的文件（包括記錄）復(fù)制后，將原件丟入放污染物廢棄物的容器。,33,第三節(jié) 生物安全實驗室操作技術(shù)規(guī)范,（二）暴露的處理 5離心管破碎： 如果正在運行時非封閉離心桶的離心機內(nèi)盛有潛在感染性物質(zhì)的離心管發(fā)生破裂，應(yīng)關(guān)閉機器電源，停止后密閉離心桶約30分鐘，待氣溶膠沉降后開蓋。 若離心機停止時發(fā)現(xiàn)離心管破碎，應(yīng)立即蓋上離心機，密閉30分鐘。隨后操作都應(yīng)戴結(jié)實手套。 玻璃碎片用鑷子等工具清除，所有破碎的離心管、玻璃碎片、離心桶、十字軸和轉(zhuǎn)子都應(yīng)放在無腐蝕性、已知對相關(guān)微生物具有殺滅活性的消毒劑內(nèi)，消毒30分鐘。 未破損的帶蓋離心管應(yīng)放在另一裝有消毒劑的容器內(nèi)，然后回收。離心機內(nèi)腔應(yīng)用適當濃度的同種消毒劑反復(fù)擦拭，然后用水沖洗并干燥。,34,第三節(jié) 生物安全實驗室操作技術(shù)規(guī)范,（三）感染性物質(zhì)的運輸,感染性物質(zhì)運輸要求按內(nèi)層、中層、外層三層進行包裝。,35,第三節(jié) 生物安全實驗室操作技術(shù)規(guī)范,（四）感染性廢棄物的處理,感染性廢棄物處理的首要原則是必須在實驗室內(nèi)清除污染后丟棄。高壓蒸汽滅菌是清除污染時首選的方法。所有感染性廢棄物都應(yīng)裝入可高壓滅菌的黃色塑料袋，并置于防滲