感染性疾病實驗診斷PPT參考課件.ppt

1、感染性疾病實驗診斷,珠江醫(yī)院微生物室,1,主要學(xué)習內(nèi)容及要求,掌握： 感染性疾病的常用實驗檢測項目及其臨床 意義和評價；各系統(tǒng)病原體檢查的處理步驟； 熟悉： 各系統(tǒng)感染的常見病原體、常見疾病及病 原學(xué)檢測； 了解： 當今感染病特點與感染類型，常見醫(yī)院感 染病原體及特點。,2,第一節(jié) 概述,3,一、感染性疾病的定義,又稱感染病，是由微生物（細菌、病毒、 真菌）和寄生蟲感染人體后機體組織細胞受到 不同程度的損害并出現(xiàn)一系列的臨床癥狀和體 征。其中，有傳染性的感染性疾病稱為傳染病。,4,1、微生物變異所出現(xiàn)的新亞型、亞性、不典型株及耐藥株已成為當今主要的病原體； 2、感染患者多因免疫防御能力的下降感

2、染； 3、內(nèi)源性感染與條件致病菌的感染增加，其中腸道菌群和口咽部菌群是最重要的內(nèi)源性感染源。,二、感染病特點,5,1、按病原體分類：可分為細菌、病毒和真菌； 2、按病原體來源分類：可分為內(nèi)源性感染和外源性感染； 3、按疾病特征分類：A.隱性感染（亞臨床感染）、 B.潛伏感染、C.顯性感染（包括急性感染、慢性感染、局部感染、全身感染）、帶菌狀態(tài)、不感染。,三、感染類型,6,醫(yī)院感染的定義： 指來自醫(yī)院或醫(yī)療機構(gòu)的感染，包括在醫(yī)院獲 得出院后才發(fā)生的感染，但不包括入院前已存在的 感染 ，入院時已處于潛伏期的感染。 入院48小時后發(fā)生的感染通常認為是醫(yī)院感染。,四、醫(yī)院感染,7,院感的特點： 1、院

3、感的感染鏈由感染源、傳播途徑和易感宿主構(gòu)成，細菌是主要病原體，且多為異位菌和耐藥菌；為此，采集時要防止人體定值菌及環(huán)境污染菌對標本的污染；鑒定時要鑒定到種并提供藥物敏感性試驗結(jié)果； 2、所有分離自無菌部位的菌株、重要的耐藥株和流行病學(xué)重要的菌株都要保存35年；,四、醫(yī)院感染,8,四、醫(yī)院感染,院感的特點： 3、當院感發(fā)生率增加而超過該時期的預(yù)計值時就稱為爆發(fā)，爆發(fā)時應(yīng)當及時進行環(huán)境衛(wèi)生學(xué)檢測。,9,五、一般實驗檢測,感染病的實驗診斷包括一般實驗室檢查和 病原學(xué)實驗診斷，前者是感染病的首要 檢測項 目，具有初篩的作用 ，常見項目如下： 1、C反應(yīng)蛋白：鑒別診斷細菌或病毒感 染的首選指標，還可判斷

4、抗生素療效和預(yù)后； 2、前降鈣素原：PCT的升高程度與感染嚴 重度及預(yù)后相關(guān)，在全身性細菌感染和膿血癥 的診斷方面有很高的臨床價值；,10,五、一般實驗檢測,3、白細胞常規(guī)檢查： A.白細胞上升：急性細菌感染（如G+C）、 某些病毒感染（如傳單）； B.白細胞下降：G+b（如傷寒、副傷寒沙門 菌）、瘧疾、病毒感染； C.嗜酸性粒細胞：寄生蟲?。?D.單核細胞增多：亞急性心內(nèi)膜炎、瘧疾； E.淋巴細胞增多：病毒感染、某些桿（如 百日咳鮑特菌、結(jié)核桿菌、布氏桿菌）。,11,五、一般實驗檢測,4.器官功能改變的檢測：不同系統(tǒng)感染導(dǎo)致檢測其器官功能改變的項目不一，如診斷中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染的還需做腦脊液常

5、規(guī)檢測。,12,第二節(jié) 感染性疾病的病原檢測,13,一、標本采集和運輸,正確選擇、采集與運輸標本是病原學(xué)實驗 診斷的第一步，留取標本的質(zhì)量關(guān)系到實驗診 斷的結(jié)果正確與否。 錯誤的檢驗結(jié)果主要是發(fā)生在檢驗前，所 以對不合格的標本要拒收并及時和臨床溝通！,14,二、病原檢測的方法,根據(jù)對與病原體相關(guān)的不同成分的檢測， 可以分為以下幾種檢測方法： 直接顯微鏡檢測 病原體分離培養(yǎng)和鑒定 病原體抗原檢測 病原體抗體檢測 病原體核酸檢測 細菌毒素的檢測,15,1、直接顯微鏡檢查,包括以下四種方式：,16,2、病原體分離培養(yǎng)和鑒定,17,3、病原體抗原檢測,用已知抗體，借助金標免疫、熒光免疫、酶免 疫等技術(shù)

6、檢測未知的病原體抗原；,18,4、病原體抗體檢測,用已知抗原，借助ELISA、凝集試驗、膠體金 標記EIA等技術(shù)檢測病原體的抗體,19,5、病原體核酸檢測,病原體核酸檢測技術(shù)主要有PCR、實時熒 光定量PCR和DNA探針雜交技術(shù)； 評價：具有很高的敏感性，可用來判斷病 毒的活動性感染，細菌的鑒定、耐藥基因檢測 和細菌分子流行病學(xué)調(diào)查，但容易造成假陽性 或假陰性。,20,6、細菌毒素檢測,內(nèi)毒素檢測：鱟實驗是目前內(nèi)毒素檢測最敏 感、最常用的方法，有助于判斷細菌感染的 嚴重程度； 外毒素檢測：免疫法是檢測細菌外毒素最常 用的方法，可用來檢測艱難梭菌毒素A或B、 大腸埃希菌Vero細胞毒素、金葡的腸

7、毒素， 對抗生素相關(guān)性腸炎很有意義。,21,第三節(jié) 系統(tǒng)感染的實驗診斷,22,一、血流感染,血流感染的定義： 病原生物通過各種途徑進入血流，并通過血流 造成全身播散，引起各種臨床癥狀。 血流感染常見的病原菌包括： G+C如葡萄球菌、鏈球菌和腸球菌屬，G+b如腸 桿菌科細菌、銅綠假單胞菌和流感嗜血桿菌，白念 珠菌和脆弱桿菌也較常見。 檢測項目的選擇： 血常規(guī)+CRP+血培養(yǎng)鑒定,23,血流感染的標本采集和運送,血液標本：盡量在抗菌藥物使用前采集，發(fā)熱寒戰(zhàn) 者在寒戰(zhàn)或體溫高峰前0.51h采集，也可以在寒 戰(zhàn)發(fā)熱1h后采集；一般24h內(nèi)周期性地收集23次血 標本培養(yǎng)。 中心靜脈導(dǎo)管標本：剪下5cm導(dǎo)

8、管尖端或近心端，及 時送到細菌室進行半定量平板滾動培養(yǎng)或定量培養(yǎng),24,血流感染的細菌檢驗程序,25,血流感染的真菌檢驗程序,26,血流感染的寄生蟲檢驗,采血制作血涂片、固定與姬氏或瑞氏染色 可鏡檢找紅內(nèi)期階段的瘧原蟲；對絲蟲病、弓 形蟲病和錐蟲病的診斷也有價值。,27,血流感染檢查的臨床應(yīng)用,血培養(yǎng)陽性：可確診血流感染，要及時涂片、革蘭 染色和鏡檢，報告到臨床并分離培養(yǎng)鑒定到種； 血培養(yǎng)陰性：血培養(yǎng)5d后仍未報陽，可報告“培養(yǎng)5 天，未見細菌生長” 血培養(yǎng)應(yīng)注意假陽性和一過性菌血癥，對比前后 分離的菌株有助于判別； 另外，動態(tài)監(jiān)測BG的水平有助于判斷疾病的發(fā) 展和預(yù)后。,28,二、中樞神經(jīng)系

9、統(tǒng)感染,中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染的定義： 指病原微生物侵犯中樞神經(jīng)系統(tǒng)實質(zhì)、被膜及血 管等引起的急性或慢性炎癥性（或非炎癥）疾病，如 腦膜炎、病毒性腦炎和腦膿腫。 中樞感染的常見病原體： 腦膜炎奈瑟菌、肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌、新 生隱球菌、乙型腦炎病毒、單詞皰疹病毒等； 檢測項目選擇： 血常規(guī)+CRP+腦脊液生化項目+病原學(xué)檢測（涂片鏡檢、培養(yǎng)鑒定、PCR、血清學(xué)試驗等）,29,中樞感染的細菌和真菌檢驗程序,30,中樞系統(tǒng)病毒和寄生蟲檢測程序,病毒檢測程序：以血清學(xué)試驗、核酸分子雜交 及核酸擴增技術(shù)為主； 寄生蟲檢測程序：取腦脊液沉渣涂片鏡檢，對阿米巴 滋養(yǎng)體、弓形蟲、瘧原蟲、廣州管圓線蟲幼蟲有診斷

10、 意義。,31,中樞感染檢查臨床應(yīng)用,1、腦脊液分離培養(yǎng)陽性：可確診中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染。 抗酸染色查見抗酸桿菌，革蘭染色查見陰性雙球菌 ，墨汁染色查見透亮菌體和寬厚莢膜均可報告。 2、血清學(xué)有助于診斷，但要區(qū)分假陽性和假陰性； 3、PCR對腸道病毒引起的病毒性腦膜炎很有意義； 4、病毒性腦炎確診有賴于腦活檢病理發(fā)現(xiàn)細胞內(nèi)包 涵體、病毒核酸或腦脊液檢測病毒抗原或抗體。,32,三、呼吸系統(tǒng)感染,呼吸系統(tǒng)感染：包括急性上呼吸道感染、急性氣管 支氣管炎、慢性支氣管炎和肺炎。 常見病原體： 急性上呼吸道感染90%由病毒引起， 細菌則以溶血性鏈球菌多見；肺炎80%由細菌引起 ，以肺炎鏈球菌、金葡、肺炎克雷伯

11、菌、流感嗜血 桿菌、肺炎支原體和肺炎衣原體多見。 檢測項目選擇：血常規(guī)+CRP+痰培養(yǎng)鑒定+免疫學(xué) 及核酸檢測,33,呼吸道標本采集和運送,呼吸道的標本包括鼻咽拭子、痰、通過氣管收 集的標本（氣管內(nèi)吸出物、氣管鏡采集法），后者是 理想標本。 對于合格的痰標本才接收,當白細胞25個/LP， 鱗狀上皮細胞10個/LP,應(yīng)當拒收； 下呼吸道標本中一旦懷疑肺炎支原體、軍團菌、 雙相型真菌、結(jié)核分支桿菌等即可認為是合格標本而 直接進行病原鑒定。,34,呼吸系統(tǒng)細菌、真菌檢驗程序,35,呼吸系統(tǒng)病毒和寄生蟲檢驗,病毒檢驗：主要采用病毒培養(yǎng)、免疫學(xué)和分子生物 學(xué)檢測方法。在流感季節(jié)，應(yīng)對免疫力正常成人進 行

12、流感病毒的檢測；免疫力有缺陷的成人，應(yīng)采用 細胞培養(yǎng)和分子生物學(xué)方法檢測；小于2歲的嬰幼兒 應(yīng)進行呼吸道合胞病毒的檢測；小于10的兒童應(yīng)進 行流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒和腺病 毒的檢測； 寄生蟲檢驗：痰液鏡檢對溶組織內(nèi)阿米巴滋養(yǎng)體、 衛(wèi)氏并殖吸蟲、糞類圓線蟲幼蟲、蛔蚴、鉤蚴等檢 出有一定的意義。,36,呼吸系統(tǒng)感染檢查的臨床應(yīng)用,痰涂片抗酸染色：對結(jié)核分枝桿菌有診斷意義； 痰中有顆粒狀、菌塊和干酪樣物質(zhì)：對放線菌病和 曲霉菌有診斷意義； 檢測出肺炎支原體、軍團菌、雙相型真菌、結(jié)核分 枝桿菌：可認為是肺部感染的病原體； 檢出與正常菌相同的菌：涂片有大量中性粒細胞， 培養(yǎng)后涂片鏡檢也為優(yōu)

13、勢菌則由診斷意義； 有感染癥狀、膿臭痰但普通細菌培養(yǎng)為陰性：提示 厭氧菌感染。,37,四、胃腸系統(tǒng)感染,胃腸道感染：是以嘔吐、腹痛、腹瀉為臨床特征的 常見感染病，有食物中毒、霍亂、傷寒、細菌性痢 疾、結(jié)腸炎、胃炎與抗生素相關(guān)性腹瀉等。 常見病原菌：A.侵襲性細菌：沙門菌、志賀菌（A 群）、空場彎曲菌、大腸埃希菌（EPEC、EIEC） 、幽門螺桿菌等；B.細菌毒素性細菌：霍亂弧菌、 志賀菌（B、C、D群），大腸埃希菌（ETEC、 EHEC、EAggEC）等；C.病毒：輪狀病毒、杯狀 病毒等；D.真菌：白念珠菌、曲霉等。 檢測項目選擇：血常規(guī)+免疫學(xué)+PCR/RTPCR+病 原體的分離培養(yǎng)鑒定,3

14、8,胃腸道標本采集和運送,應(yīng)取膿血或粘液糞便置于清潔容器中盡快送檢 （不能超過2h），然后接種于選擇培養(yǎng)基上； 對于傳染性腹瀉患者需3次送檢糞便進行培養(yǎng)； 疑為寄生蟲感染者，要盡快運送水樣便以保持 原蟲滋養(yǎng)體活力，若不能及時送檢，應(yīng)用含10%甲 醛和聚乙烯醇的小螺口塑料容器保存。,39,胃腸道細菌檢驗程序,40,胃腸道病毒和寄生蟲檢驗,病毒檢驗：主要采用ELISA或乳交凝集試驗檢測病 毒抗原、用核酸雜交、PCR和RTPRC法檢測病毒 核酸；血清學(xué)多用于流行病學(xué)調(diào)查。 寄生蟲檢驗：通過檢測糞便中寄生蟲的蟲卵、幼蟲 、滋養(yǎng)體等對寄生蟲感染進行診斷。,41,胃腸道感染檢查的臨床應(yīng)用,糞便的直接鏡檢意

15、義不大，胃腸道感染的診斷 有賴于細菌分離與培養(yǎng)； 胃粘膜活檢標本直接鏡檢對幽門螺桿菌較大的 意義； 鏡檢觀察各菌落的數(shù)量與球菌與桿菌的比例對 診斷抗生素相關(guān)性腹瀉有診斷價值； 細胞毒素試驗檢測艱難梭菌的毒素是診斷引起 抗生素相關(guān)性腹瀉的金標準。,42,五、肝臟感染,肝臟感染：是由病毒、細菌和其他病原體引起的肝 臟炎性損傷，主要包括肝炎和肝膿腫。 常見病原體：肝炎主要由病毒和毒素所致，包括 HAV、HBV、HCB、HDV、HEV和CMV；肝膿腫以 細菌性多見，主要是化膿性細菌，阿米巴肝膿腫也 較為常見。 檢測項目選擇： 血、尿、便、常規(guī)+肝功能生化+PCR+病原體 涂片分離培養(yǎng)鑒定,43,肝臟感

16、染標本采集和運送,肝炎病毒是肝臟感染的主要病原體，血清是檢測 肝臟病毒的最常用標本； 細菌性肝膿腫多以兼性厭氧菌與厭氧菌混合感染 為主，應(yīng)注意厭氧菌的標本采集、運送和檢驗方法,44,肝臟感染的病毒檢驗程序,45,肝臟感染細菌和真菌檢驗,抽取肝膿腫的膿液，涂片、染色，顯微鏡檢查， 再根據(jù)鏡檢結(jié)果對標本中可能的細菌或真菌種類進行 初步估計；然后行病原體分離培養(yǎng)，根據(jù)菌落形態(tài)、 涂片染色鏡檢和生化反應(yīng)進行鑒定； 阿米巴肝膿腫可在肝膿腫的膿液中查見阿米巴包 囊和滋養(yǎng)體。,46,肝臟感染檢查的臨床應(yīng)用,病毒性肝炎 的診斷主要檢查病毒的抗原抗體， 免疫學(xué)檢測主要有ELISA、免疫膠體金法、免疫熒 光法等方

17、法； HAV和HEV的診斷都主要依賴lgM，HBV主要檢 查“乙肝兩對半”，HCV主要用ELISA初篩，用免 疫印跡法確診,HDV多用ELISA法檢測； 另外，PCR法也較常應(yīng)用，以熒光實時定量 PCR應(yīng)用最為廣泛。,47,六、泌尿系統(tǒng)感染,泌尿系統(tǒng)感染：是由于大量微生物在泌尿系統(tǒng)中生 長繁殖而引起的泌尿系統(tǒng)炎癥，分為上尿路感染和 下尿路感染。絕大多數(shù)是單一病原體感染，培養(yǎng)3 種細菌及念珠菌的多為污染所致。 常見病原體：大腸埃希菌、腸球菌屬、奇異變形桿 菌、銅綠假單胞菌和凝固酶陰性葡萄球菌。 檢測項目選擇：尿常規(guī)+尿沉渣鏡檢、分離培養(yǎng) 尿液標本采集和運送：多以中段尿為主，對于厭氧 菌可采用膀胱

18、穿刺法收集、無菌厭氧小瓶運送；若 是乳糜尿，需加等量乙醚震蕩再進行寄生蟲檢查。,48,泌尿系統(tǒng)細菌和真菌檢驗程序,49,泌尿系統(tǒng)感染檢查的臨床應(yīng)用,在臨床診斷的基礎(chǔ)上，符合以下4條中的1條即可診 斷為泌尿系統(tǒng)感染： 1、膀胱穿刺尿培養(yǎng)細菌數(shù)103CFU/ml； 2、清潔中段尿或?qū)蛄羧∧蛞号囵B(yǎng)G+C菌數(shù)104 CFU/ml、G+b菌數(shù)105CFU/ml； 3、尿沉渣用相差顯微鏡檢查（x400）在30個視野 中有過半都能見到細菌； 4、無癥狀性菌尿癥患者在近期（1w）有內(nèi)鏡檢查或留置導(dǎo)尿史的，尿液培養(yǎng)G+C菌數(shù)104 CFU/ml、G+b菌數(shù)105CFU/ml；,50,七、皮膚及軟組織感染,當皮

19、膚屏障受損，外界環(huán)境中的微生物即可通過 破損的皮膚侵入引起皮膚和軟組織感染，或發(fā)生全 身感染時，某些微生物也可以經(jīng)血液擴散至皮膚或 皮下組織引起感染。 常見病原體：包括金黃色葡萄球菌、化膿性鏈 球菌、肺炎鏈球菌、大腸埃希菌、銅綠假單胞菌和 皮膚念珠菌等。 檢測項目選擇：細菌感染多采用膿性分泌物涂 片染色和分離鑒定；病毒和寄生蟲則主要依賴臨床 表現(xiàn)。,51,皮膚及軟組織感染標本采集和運送,1、采集時，首先要對皮膚表面進行消毒； 2、開放性膿腫要用無菌棉拭采取膿液及病灶深部分泌物，封閉性膿腫則以無菌干燥注射器穿刺抽??； 3、懷疑是厭氧菌感染者，取膿液后要立即排凈注射器內(nèi)空氣，針頭插入無菌橡皮塞送檢； 4、用于病毒檢測的組織標本應(yīng)放在有滅菌鹽水紗布的培養(yǎng)皿內(nèi)或病毒運送培養(yǎng)基內(nèi)運送，勻漿、離心、過濾后做病毒分離鑒定。,52,皮膚及軟組織細菌真菌檢驗程序,53,皮膚及軟組織細菌真菌檢驗程序,54,皮膚及軟組織感染檢驗臨床應(yīng)用,1、鏡檢發(fā)現(xiàn)菌絲與孢子即可診斷真菌感染，若沒找到而臨床