脫落細(xì)胞學(xué)檢查技術(shù)及基本知識(shí).ppt

1、2020/8/9/1，脫落細(xì)胞學(xué)，梁松河，哈爾濱醫(yī)科大學(xué)大慶校區(qū)臨床基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)室部，2020/8/9/2，第1章，脫落細(xì)胞學(xué)檢查技術(shù)及臨床應(yīng)用的評價(jià)，脫落細(xì)胞學(xué)：對人體各部位的脫落細(xì)胞，特別是腔管器官表面的脫落細(xì)胞，或通過細(xì)針吸取病變組織獲得的細(xì)胞進(jìn)行染色，并在顯微鏡下觀察和診斷，也稱為診斷細(xì)胞學(xué)。標(biāo)本來源：自然滲出物體腔抽吸液，細(xì)針抽吸液，2020年8月9日3。第1節(jié)標(biāo)本采集和涂片制備，1。標(biāo)本采集原則：盡量減少受檢者的痛苦，獲得合作；該方法簡單、實(shí)用、經(jīng)濟(jì)。嘗試獲取足夠的細(xì)胞成分進(jìn)行診斷；及時(shí)快速的檢查和即時(shí)生產(chǎn)；絕對避免污染；標(biāo)本編號有清晰的標(biāo)記。方法：細(xì)針穿刺；脫落細(xì)胞學(xué)檢查，2020年

2、8月至9月，常用方法：直視采集：用刮刀刮，用吸管吸，用自然分泌物刷；痰涂片、尿涂片、前列腺液涂片、乳頭分泌物涂片灌洗；盆腔器官、骨盆或腹部摩擦；鼻咽、食道和胃的針吸；漿膜關(guān)節(jié)腔積液。漿膜腔積液的處理：提取后應(yīng)立即送檢(4份保存，標(biāo)本在24小時(shí)內(nèi)處理)。過多的成熟紅細(xì)胞和標(biāo)本嚴(yán)重凝固，需要治療。紅細(xì)胞可以通過淋巴細(xì)胞分離液或低滲法去除。凝結(jié)的滲出液將吸出凝塊，剩余的液體將被離心涂抹。2020/8/9，6，2。涂片制作：(1)要求：1標(biāo)本新鮮，2操作溫和，細(xì)胞分布均勻；不要擠壓和摩擦，以免細(xì)胞損傷和變形；3片載玻片應(yīng)清潔，4片涂片應(yīng)牢固，5片涂片編號和6個(gè)標(biāo)簽應(yīng)準(zhǔn)確，2020/8/9，7，(2)涂

3、片制備法，推涂法，吸管推涂法和噴射印刷法，2020/8/9，8，(3)涂片固定，目的是保持細(xì)胞形態(tài)和結(jié)構(gòu)，防止其自溶。固定溶液：優(yōu)選95%乙醇、乙醇乙醚和氯仿乙醇。注意：巴氏染色，涂片不應(yīng)在空氣中干燥后染色；固定時(shí)間不少于15分鐘(巴氏染色在48小時(shí)內(nèi)進(jìn)行)；固定解應(yīng)達(dá)到90以上；液體樣本應(yīng)在離心后涂抹，然后在濕式干燥后固定。刮刀片、痰涂片、網(wǎng)涂片、內(nèi)鏡刷涂片和宮頸針吸涂片應(yīng)立即固定。2020/8/9/9，固定方法：濕固定和干固定時(shí)間：1530分鐘(4)涂片染色目的：使細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰顯示；用各種染色劑使細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核適當(dāng)?shù)爻尸F(xiàn)不同的顏色。使單元格結(jié)構(gòu)透明清晰。方法：常規(guī)染色為巴氏染色，結(jié)合蘇木精

4、-伊紅、姬姆薩和特殊染色。2020/8/9/10/1巴氏染色水合作用：固定涂片用乙醇蒸餾水染色，每次1分鐘；蘇木精染色35分鐘；分色：1在鹽酸中幾秒鐘；水洗發(fā)藍(lán)：放入飽和碳酸鋰溶液中1分鐘。水洗脫水：50、70、80、95乙醇各1分鐘；在橙色溶液中染色24分鐘；在EA36染料溶液中用95%乙醇洗滌兩次，每次45分鐘；脫水：95，無水乙醇各12分鐘；二甲苯透明23分鐘；2封：中性膠封，2020年8月9日；結(jié)果表明，細(xì)胞核呈紫藍(lán)色，核仁呈紅色。適用于上皮細(xì)胞染色和陰道涂片觀察女性激素的影響。優(yōu)點(diǎn)：細(xì)胞是多色的。缺點(diǎn)：染色程序復(fù)雜，2020年8月9日。注意事項(xiàng)：染料溶液應(yīng)充分溶解，蘇木精應(yīng)在染色前數(shù)

5、月準(zhǔn)備好。應(yīng)該每天過濾一次，并添加新的溶液。在低室溫下不易染色，因此在分化前可在顯微鏡下觀察，用50鹽酸加熱以確定分化時(shí)間。涂片在橙色溶液中不應(yīng)過長。EA36染料溶液配制和使用前，應(yīng)使用濾紙進(jìn)行調(diào)試。在2020/8/9，13，2 HE染色中，透明度好，核漿對比鮮明，染色效果穩(wěn)定，核呈紫藍(lán)色，果肉呈淺玫瑰紅。該程序簡單，適用于痰涂片。3德國國會(huì)大廈姬姆薩染色：主要用于血液和骨髓的細(xì)胞學(xué)檢查，2020年8月14日。與液基薄層細(xì)胞學(xué)相比，2020年8月15日，I. Wrights染色(Wrights)的特點(diǎn)是：固定和染色在一起，該方法操作簡單，染色時(shí)間短，對白細(xì)胞特異性顆粒染色好。通常，它是氯化物鹽

6、，即亞甲藍(lán)氯化物，其有色部分是陽離子，無色部分是陰離子。亞甲藍(lán)很容易被氧化成二級染料，如單-、二-和三甲基硫堇。一些市售的亞甲藍(lán)已經(jīng)被氧化成天藍(lán)色。曙紅(E-)通常是鈉鹽，曙紅鈉的有色部分是陰離子，無色部分是陽離子，有色部分是酸。當(dāng)曙紅和亞甲藍(lán)混合時(shí)，產(chǎn)生疏液膠體曙紅亞甲藍(lán)中性沉淀(ME)，即瑞德染料(溶解在甲醇中，即瑞德染料溶液)。ME(弗氏染料)M E -，2020/8/9，16，2。甲醇的作用：甲醇用作弗氏染料的溶劑，稱為弗氏染液。甲醇是萊特染料的良好溶劑，它有兩個(gè)作用：(1)33，360甲醇的溶解使亞甲基藍(lán)和曙紅在溶液中解離，使細(xì)胞組分選擇性吸附其中的有色物質(zhì)而顯色。在制備好的弗氏染料

7、溶液中，亞甲藍(lán)可以被氧化并含有天青。亞甲藍(lán)和曙紅的化合物能把細(xì)胞核染成紫紅色，但不能把細(xì)胞質(zhì)染成藍(lán)色。過量的亞甲藍(lán)會(huì)將細(xì)胞質(zhì)染成藍(lán)色。染色主要是一種化學(xué)作用，是離子相互結(jié)合的反應(yīng)。(2)固定，加熱：甲醇具有很強(qiáng)的脫水能力，可以將細(xì)胞固定在一定的形狀，增加細(xì)胞結(jié)構(gòu)的表面積，提高細(xì)胞對染料的吸收。同時(shí)，由于甲醇吸收了染液中的水分，染液被加熱，加速了染色反應(yīng)。2020/8/9，17，3。染色原理：細(xì)胞具有物理吸附和化學(xué)親和力。各種細(xì)胞成分的化學(xué)性質(zhì)不同，它們對各種染料的親和力也不同。血紅蛋白、嗜酸性顆粒是堿性蛋白質(zhì)，它與酸性染料曙紅結(jié)合并染成紅色，稱為嗜酸性物質(zhì)；核蛋白和淋巴細(xì)胞胞質(zhì)是酸性蛋白，與堿

8、性染料亞甲藍(lán)或天藍(lán)色結(jié)合并染成藍(lán)色，稱為嗜堿性物質(zhì)；中性粒子處于等電狀態(tài)，可與曙紅和美藍(lán)結(jié)合，并被染成淺紫紅，稱為中性物質(zhì)。2020/8/9，18，4。細(xì)胞染色的影響因素：細(xì)胞的所有成分都是不同的蛋白質(zhì)。因?yàn)榈鞍踪|(zhì)是兩性電解質(zhì)，電荷取決于溶液的酸堿度。在微酸性環(huán)境中，電荷增加，易與曙紅結(jié)合，呈紅色；在堿性環(huán)境中，負(fù)電荷增加，易與亞甲藍(lán)或天青結(jié)合，染色呈藍(lán)色。因此，細(xì)胞染色對氫離子濃度非常敏感，染色片必須干凈，無酸堿污染。必須用優(yōu)質(zhì)甲醇配制瑞特溶液，必須用緩沖液稀釋染料溶液，沖洗水應(yīng)接近中性，否則可能導(dǎo)致各種細(xì)胞的異常染色反應(yīng)，造成鑒定困難甚至錯(cuò)誤?？諝庋趸盒轮苽涞娜玖铣嗜鯄A性，必須在室溫或3

9、7下儲(chǔ)存一段時(shí)間。當(dāng)染料成熟時(shí)，只有在亞甲基藍(lán)逐漸轉(zhuǎn)化為天青b后才能使用，儲(chǔ)存時(shí)間越長，染色效果越好。在儲(chǔ)存揮發(fā)性：瑞德染液的過程中，必須將其緊密堵塞，以防止甲醇揮發(fā)和氧化成甲酸。有人主張?jiān)谂浞街屑尤?0毫升甘油，以防止甲醇揮發(fā)，使細(xì)胞染色清晰。甲醇必須是純的(氬級)。例如，甲醇中的丙酮含量太高，并且染色是酸性的，這使得白細(xì)胞著色不良。，2020/8/9/19/5。弗氏染料溶液的制備：(1)弗氏染料溶液：830毫克弗氏染料或500毫升1克甲醇或15毫升600毫升甘油。首先，將干燥的弗氏染料(在培養(yǎng)箱中干燥一夜)放入研缽中，用牛奶棒輕輕將染料打碎成粉末，并研磨至聽不見為止。加入少量甲醇溶解并研磨

10、，使染料在牛奶罐中呈現(xiàn)“一面鏡子”的光澤，而不會(huì)有染料粉末沉淀。加入更多的甲醇進(jìn)行研磨，使其像鏡子一樣發(fā)亮，靜置一段時(shí)間，將上層液體倒入干凈的儲(chǔ)存瓶中(最好是一個(gè)裝滿甲醇的空瓶)，然后加入甲醇進(jìn)行研磨，重復(fù)幾次，直到研缽中的染料和甲醇用完，搖勻，用甘油封住瓶口，并在室溫下避光保存一段時(shí)間。2020年8月9日，(2)瑞特染料溶液緩沖液：1)緩沖功能：染色對氫離子濃度非常敏感。觀察到酸堿度的變化會(huì)使蛋白質(zhì)和染料形成的化合物再次解離。緩沖液必須保持一定的酸堿度以穩(wěn)定染色，酸堿度一般為6.46.8。堿性染料可以中和緩沖液中的酸性基團(tuán)，而酸性染料可以中和緩沖液中的堿以保持酸堿度恒定。2)緩沖液制備(pH

11、6.46.8，弱酸性):配方1:配方2: KH _ 2 PO _ 4 0.3克Na2 HPO _ 4 0.2克(1%磷酸二氫鉀30毫升加1%磷酸氫二鈉20毫升)將H2O(新鮮)加入到1000毫升中，并在室溫下置于黑暗的地方。瓶口是密封的，以防止霉菌污染。如果有污染，應(yīng)該丟棄，2020/8/9/21/6。染色： a。取干血涂片，用蠟筆在血膜的兩端畫線。將血液涂片平放(放在染色架上)，用滴管將3-5滴染料溶液滴在片上，用滴管或吸球分散染料溶液，使其覆蓋全血膜，放置約30秒鐘。c、加入等量的緩沖溶液，用吸球輕輕吹，將染料溶液和緩沖溶液充分混合，靜置染色約5-10分鐘。然后用少量的自來水沖洗紙張末端的

12、染料溶液。不要先傾倒染料溶液，然后用水沖洗。切片在自然干燥后可以用顯微鏡檢查。2020/8/9/22，第2節(jié)顯微鏡檢查，1。讀片要求：檢查檢驗(yàn)單和涂片的數(shù)量；了解病史、臨床情況和檢查目的；涂片應(yīng)密封；首先，用低倍鏡一張一張地仔細(xì)閱讀膠片，每個(gè)視場部分重疊以避免遺漏；要找到具有診斷意義或值得討論的細(xì)胞，標(biāo)記它們。觀察項(xiàng)目：涂片中的細(xì)胞成分；細(xì)胞的排列；一組細(xì)胞的鄰接；單細(xì)胞的特征；芯與漿的比率；細(xì)胞退化；涂片背景中的細(xì)胞和非細(xì)胞成分。2020/8/9/23，診斷報(bào)告，分級診斷和描述性診斷。改良巴氏五級分類：分級：見異常細(xì)胞：有異型性但無惡性腫瘤的細(xì)胞：疑似惡性腫瘤但證據(jù)不足：高度提示惡性腫瘤：明

13、確惡性腫瘤，2020/8/9/24，細(xì)胞學(xué)診斷質(zhì)量管理體系，標(biāo)本采集和制備過程中定期隨訪，診斷理論研究和復(fù)習(xí)咨詢，2020/8/9/25，脫落細(xì)胞學(xué)檢查第三節(jié)優(yōu)點(diǎn)：安全、簡便、快速、準(zhǔn)確，檢查范圍廣。(1)癌癥預(yù)防概況；(2)腫瘤治療后隨訪觀察；(4)癌前病變的隨訪觀察；(5)監(jiān)測指標(biāo)作為一定的處理方法；(5)評估卵巢功能和指導(dǎo)內(nèi)分泌治療，2020年8月9日，26，細(xì)胞診斷學(xué)的應(yīng)用價(jià)值；(1)初步篩選實(shí)現(xiàn)早期診斷(3)具有廣泛應(yīng)用的基礎(chǔ)(4)當(dāng)難以獲得組織學(xué)診斷材料時(shí)，細(xì)胞學(xué)診斷可以彌補(bǔ)形態(tài)學(xué)診斷的空白。2020/8/9/27，細(xì)胞學(xué)診斷的局限性和片面性是由以下原因造成的：(1)取材不良；(2

14、)制劑質(zhì)量差；(3)病理情況：腫瘤大小、腫瘤性質(zhì)、腫瘤分化程度、腫瘤組織類型、腫瘤的早晚、腫瘤與周圍組織的關(guān)系等。，2020年8月，2020年9月28日。缺點(diǎn)：1 .有一定的誤診率：細(xì)針穿刺假陰性10例，痰涂片假陰性2例，痰涂片假陰性2例。具體位置很難確定。很難對腫瘤進(jìn)行分類。非腫瘤疾病的診斷研究；細(xì)胞學(xué)診斷的準(zhǔn)確性低于組織病理學(xué)診斷，因此細(xì)胞學(xué)診斷依賴于組織病理學(xué)診斷的確認(rèn)。2020/8/9/29，輔助檢查，組織化學(xué)免疫組織化學(xué)，流式細(xì)胞術(shù)，DNA分析，染色體倍性分析，電子顯微鏡，2020/8/9/30，第2章，脫落細(xì)胞檢查的基本知識(shí)，第1節(jié)，細(xì)胞診斷的基本概念，活性細(xì)胞增殖，細(xì)胞體積增加，

15、細(xì)胞核明顯增大，核染色質(zhì)增多，顆粒變粗，核仁增多。第二，在組織損傷或修復(fù)過程中從新上皮脫落的細(xì)胞的特征：細(xì)胞像合胞體細(xì)胞一樣以碎片形式出現(xiàn)，并且排列規(guī)則；細(xì)胞略有增大，細(xì)胞核也增大，細(xì)胞核不深染，細(xì)胞質(zhì)仍豐富且深染；核仁明顯增大或增多；可能有有絲分裂圖像。2020/8/9/31，組織修復(fù)細(xì)胞，2020/8/9/32，3。未成熟鱗狀化生細(xì)胞的特征：細(xì)胞大小類似于正常上皮外底層；它成組出現(xiàn)，可以以砌磚的方式排列；細(xì)胞呈圓形或橢圓形，邊緣有小突起。細(xì)胞質(zhì)中通常有小液泡，使細(xì)胞質(zhì)透明。成熟鱗狀化生細(xì)胞的特征：細(xì)胞大小與正常鱗狀上皮中層細(xì)胞相似；有許多組，細(xì)胞是多邊形的，有銳角突起和各種形狀；小液泡在細(xì)

16、胞質(zhì)中很常見。細(xì)胞質(zhì)少，排列緊密，無細(xì)胞間橋。2020/8/9，33，鱗狀化生，2020/8/9，34，2020/8/9，35，2020/8/9，36。第四，儲(chǔ)備細(xì)胞的增殖是柱狀上皮細(xì)胞下一層具有分化潛能的未成熟細(xì)胞(或未分化細(xì)胞)。形態(tài)特征：細(xì)胞小，類似于鱗狀上皮內(nèi)底細(xì)胞的大?。粓A形或橢圓形，細(xì)胞質(zhì)中有小突起；胞漿內(nèi)可見小液泡，淡染；核偏離可能在大小上稍有不一致；細(xì)胞核染色質(zhì)均勻而薄，可見核仁和幾個(gè)大小相同的核仁，細(xì)胞常聚集在一起，有時(shí)相互連接；它經(jīng)常伴隨著化生細(xì)胞。2020/8/9/37，聚集的增生基底細(xì)胞，支氣管粘膜，2020/8/9/38，5。細(xì)胞增殖，細(xì)胞分裂增強(qiáng)，數(shù)量增加，體積增大

17、，形狀異常。細(xì)胞大，細(xì)胞核大，核染色質(zhì)增多增厚，雙核或多核，核仁明顯，核膜增厚甚至稍有不規(guī)則。可分為輕度增生和重度增生。6.細(xì)胞從未成熟細(xì)胞分化為具有完整結(jié)構(gòu)和功能的成熟細(xì)胞的過程。上皮細(xì)胞分化的形態(tài)學(xué)表現(xiàn)：1 .細(xì)胞體積從小到大；2.細(xì)胞質(zhì)數(shù)量從小到大；3.核質(zhì)從大到小的比率；5.染色質(zhì)排列從松散到緊密；6.核仁由大到小，由大到小，2020/8/9，39，柱狀上皮增生混有杯狀細(xì)胞；2020/8/9，40，7。核分裂的病理有絲分裂圖像應(yīng)與核分裂1相關(guān)。人為退化的原因：標(biāo)本放置時(shí)間過長，細(xì)胞自溶；將細(xì)胞置于高滲或低滲溶液中；固定液濃度或時(shí)間不當(dāng)，過濕或過干等形態(tài)學(xué)特征：細(xì)胞大，結(jié)構(gòu)不清，所有細(xì)胞均增大或縮小，細(xì)胞質(zhì)多為紅色，各類細(xì)胞的變性形式一致。2020/8/9，41，有絲分裂像，2020/8/9，42，2。自然細(xì)胞變