第二章 食用菌三級(jí)菌種制作技術(shù)

1、.,第二章 食用菌制種技術(shù),關(guān)于制種的幾個(gè)概念 第一節(jié) 制種場(chǎng)地、設(shè)備、用具及消毒藥品 第二節(jié) 三級(jí)菌種制作技術(shù) 本章重點(diǎn),4.5學(xué)時(shí),.,有關(guān)概念,菌種：由人工方法培育出來(lái)的純雙核菌絲體。 母種：由孢子或者組織分離而得到的最初菌種。 原種：將母種擴(kuò)大到新培養(yǎng)基上培育出來(lái)的菌絲體。 栽培種：由原種再擴(kuò)大接種一次培養(yǎng)而得。直接應(yīng)用于生產(chǎn)。 消毒和滅菌。,栽培種,.,第一節(jié) 制種場(chǎng)地、設(shè)備等,一、制種場(chǎng)地 二、常用設(shè)備 三、制種用具 四、消毒藥品,.,一、制種場(chǎng)地,閑散房屋均可用。新建時(shí)選擇場(chǎng)地要注意：交通方便，水電齊全，周圍環(huán)境要衛(wèi)生。 建造可參照 “”字型房，以方便生產(chǎn)。包括：配料室、滅菌室、

2、冷卻室、接種室、菌種培養(yǎng)室、銷售室以及庫(kù)房等。,.,二、常用設(shè)備,（一）拌料和裝料設(shè)備 （二）滅菌設(shè)備 （三）接種設(shè)備 （四）培養(yǎng)設(shè)備,.,（一）拌料和裝料設(shè)備,拌料設(shè)備：可人工拌料，也可用拌料機(jī)，有桶式和開放式兩種。 裝料設(shè)備：人工裝料或用裝瓶裝袋兩用機(jī)。關(guān)鍵是料的松緊度，可3-5人合作，約1000袋/h。,.,（二）滅菌設(shè)備,根據(jù)滅菌壓力：高壓滅菌設(shè)備和常壓滅菌設(shè)備。 高壓滅菌特點(diǎn)：溫度高，滅菌速度快，滅菌徹底，但每次滅菌量小，投資較大。 高壓滅菌設(shè)備：手提式高壓滅菌鍋。立式高壓滅菌鍋。臥式高壓滅菌鍋。,.,常壓滅菌特點(diǎn)：容量大(0.5-1噸料/次)，投資小，但時(shí)間長(zhǎng)，滅菌效果較差。 常壓

3、滅菌設(shè)備：常壓滅菌灶、滅菌室或滅菌包（可利用節(jié)能型多功能蒸汽爐或普通鍋爐）。,.,（三）接種設(shè)備,潔凈工作臺(tái)：適合接母種和少量原種。 接種箱：成本低，容量較大，適合各級(jí)菌種。 接種帳：適于接栽培袋，但效果稍差。 接種室：與接種帳類似。 電爐和蒸汽接種：簡(jiǎn)易，成功率80%以上。,.,（四）培養(yǎng)設(shè)備,培養(yǎng)室：要清潔衛(wèi)生，有調(diào)溫設(shè)備?？捎糜谠N、栽培種培養(yǎng)，要做一些培養(yǎng)架，便于菌種檢查和提高空間利用率。 電熱恒溫培養(yǎng)箱：溫度可調(diào)，容積小。,.,三、制種用具,、酒精燈； 、托盤天平； 、地泵； 、水桶、盆、鋁鍋； 、鑷子； 、接種鉤和接種鏟； 、試管、菌種瓶和菌種袋； 、漏斗； 、電爐或煤爐； 另外，

4、還需溫度計(jì)、濕度計(jì)、量筒和量杯、磨口瓶、塑料繩、報(bào)紙以及pH試紙等。,.,四、消毒藥品,1. 75%酒精 2. 40%甲醛高錳酸鉀 3. 汽霧消毒劑 4. 高錳酸鉀（0.1%-0.2%） 5. 5%石炭酸(苯酚) 6. 1%-2%來(lái)蘇兒 7. 2%-5%漂白粉 8. 硫磺 各種藥品最好輪換使用，以防產(chǎn)生抗藥性。,.,第二節(jié) 三級(jí)菌種制作技術(shù),一、母種制作技術(shù) （一）母種培養(yǎng)基制備 （二）組織分離法 （三）母種的擴(kuò)大 二、原種制作技術(shù) （一）原種培養(yǎng)基的制備 （二）原種的制作 三、栽培種制作技術(shù) （一）栽培種培養(yǎng)基制備 （二）栽培種的制作 四、菌種污染的原因及防止措施,.,一、母種制作技術(shù),培養(yǎng)

5、基的概念 常用的母種培養(yǎng)基配方 母種培養(yǎng)基的制作,（一）母種培養(yǎng)基的制備,.,1.培養(yǎng)基的概念,培養(yǎng)基是按照食用菌生長(zhǎng)繁殖所需要的各種營(yíng)養(yǎng)，用人工方法配制而成的營(yíng)養(yǎng)基質(zhì)。,2. 母種培養(yǎng)基配方(g/1000ml),除配方1，其它均需加入KH2PO43克，MgSO41.5克，VB12片。,.,3.母種培養(yǎng)基的制作,PDA培養(yǎng)基的制作過(guò)程： 煮土豆，取濾液。開鍋后，文火煮30min，適當(dāng)攪拌，使?fàn)I養(yǎng)充分溶出。 補(bǔ)足水，加藥品溶化。瓊脂溶解較慢并易溢鍋，燒開后減小火力并攪拌1min左右。,.,分裝試管。常用試管為18mm180mm，每管約裝培養(yǎng)基8-10ml。加棉塞后3個(gè)一把綁好。 高壓滅菌。在1.

6、1-1.2kg/cm2壓力下滅菌30-40min。滅菌程序：放入物品，擰緊鍋蓋加熱，當(dāng)壓力達(dá)到0.5kg/cm2時(shí)，排出冷空氣，關(guān)閉放氣閥。壓力上去后記時(shí)，維持所需時(shí)間。,.,擺斜面。滅完菌后，鍋體自然冷涼，壓力降到0.5kg/cm2以下時(shí)，緩慢放氣，氣排盡后取出試管，趁熱擺斜面，40以下即可凝固。,母種培養(yǎng)基制作流程,.,（二）菌種組織分離法,組織分離的概念、種類和特點(diǎn) 組織分離的方法,.,1.組織分離的概念、種類和特點(diǎn),概念：是指在雙核菌絲的組織上切取一塊組織，使其在培養(yǎng)基上萌發(fā)而獲得純雙核菌絲體的方法。稱作原始母種。 種類：據(jù)切取組織的來(lái)源，分為子實(shí)體組織分離、菌核、菌索組織分離和基內(nèi)菌

7、絲組織分離。 特點(diǎn)：簡(jiǎn)單易行；為無(wú)性繁殖。,.,2.平菇子實(shí)體組織分離方法,培養(yǎng)基制備。 種菇選擇：是指用來(lái)進(jìn)行組織分離的子實(shí)體。要選擇適宜出菇期出菇早、出菇整齊、形態(tài)正常、無(wú)病蟲害、產(chǎn)量高的栽培袋，從上選擇肥大、肉厚、6成熟的幼嫩子實(shí)體，切去多余菌柄。 接種場(chǎng)地消毒。,.,種菇處理：表面消毒。 接種過(guò)程：雙手表面消毒，把種菇帶入接種箱，點(diǎn)燃酒精燈，種菇表面消毒后從中間縱向撕開，用無(wú)菌小鑷子夾取菌柄、菌蓋交界處的菌肉，迅速放入培養(yǎng)基上，塞上棉塞。特殊種類：靈芝、金針菇、雞腿菇等。,.,培養(yǎng)。適宜條件下，2-3天組織塊上即萌發(fā)出菌絲，8-10天可長(zhǎng)滿。期間要檢查，從中選留無(wú)污染、菌絲潔白濃密、長(zhǎng)

8、速正常的菌種。 基內(nèi)菌絲組織分離以及菌核和菌索的組織分離過(guò)程類似，只是所取部位不同。 原始母種還可轉(zhuǎn)接擴(kuò)繁3-4次，以增加母種量。 長(zhǎng)滿后暫時(shí)不用的母種要置于2-5下冷藏。,.,（三）母種的擴(kuò)大,培養(yǎng)基的制備（同前） 接種場(chǎng)地的消毒滅菌（同前） 母種的擴(kuò)大 培養(yǎng),.,3.母種的擴(kuò)大,要嚴(yán)格無(wú)菌操作。母種試管表面消毒，然后靠近燈焰用接種鉤將母種橫切成若干份，再用接種鏟將橫切的母種分成2-3份，取一份帶12mm厚的培養(yǎng)基放入新的培養(yǎng)基斜面上。,.,4.培 養(yǎng),在適宜條件下培養(yǎng)。2-3天后，檢查菌絲的生長(zhǎng)及雜菌污染情況，若在接種塊或培養(yǎng)基表面上出現(xiàn)獨(dú)立的小菌落或奶油狀小點(diǎn)，即為污染，應(yīng)立即淘汰。,.

9、,二、原種制作技術(shù),（一）原種培養(yǎng)基的制備 （二）原種的制作,（一）原種培養(yǎng)基的制備1.常用原種培養(yǎng)基配方(%),麥粒預(yù)處理：冷水浸泡12小時(shí)后水煮，開鍋后文火20min左右，麥粒煮透，脹而不破，用水冷卻后瀝干表面水分，拌入石膏即可。,.,2.原種培養(yǎng)基制備,選定配方。分別稱取各物質(zhì)。 加水拌料。含水量約60%65%，料水比約1:1.31.5。關(guān)鍵是拌勻，用量少的水溶性物質(zhì)要先溶于水，再拌入料中。,.,裝瓶。常用容器為750ml罐頭瓶或菌種瓶，每瓶裝干料2.53兩。料要裝勻，松緊適度，裝至瓶肩下1cm處，料面壓平。 打洞封口。擦凈瓶口，中央打直徑2cm的孔至瓶底。用兩層報(bào)紙和一層聚丙烯膜封口。

10、打洞可增加料底透氣性。,滅菌：高壓滅菌或常壓滅菌。 常壓滅菌：視滅菌量，需810h以上。注意：一是培養(yǎng)料量要適中，物品排列合理，保證蒸汽流通。二是大火猛燒，防止壓力忽高忽低。三是滅菌后悶46h再出鍋。 高壓滅菌：1.41.5kg/cm2壓力下滅1.52h，壓力不穩(wěn)或壓力低時(shí)要延時(shí)。高壓滅菌應(yīng)注意：,滅菌鍋內(nèi)冷空氣必須排盡。否則會(huì)產(chǎn)生假蒸汽壓。 培養(yǎng)基必須排放有序，蒸汽暢通。 滅菌完畢應(yīng)緩慢減壓。自然降溫或緩慢排氣，防止液體突然沸騰弄臟瓶塞，或瓶、袋脹破。 棉塞防濕。滅菌時(shí)棉塞不能接觸鍋壁，并蓋報(bào)紙或防水紙，防止冷凝水打濕棉塞。,.,（二）原種的制作,場(chǎng)地消毒：將料瓶和用具放入接種箱熏0.52h

11、。 接種：母種表面消毒后帶入接種箱，點(diǎn)燃酒精燈，再次對(duì)試管外壁消毒。在燈焰范圍內(nèi)，用接種鉤將母種分成46份，取一份放入料面中部，封口。兩人合作既好又快。 培養(yǎng)：在適宜條件下培養(yǎng)。定期檢查。菌絲長(zhǎng)滿后，再繼續(xù)培養(yǎng)35天。,.,三、栽培種制作技術(shù),（一）栽培種培養(yǎng)基的制備 培養(yǎng)基配方：與原種培養(yǎng)基可以相同。 菌種袋規(guī)格：選用聚丙烯或高密度聚乙烯塑料袋。1732cm，一端開口，每袋裝干料6兩。1740cm，兩端開口，每袋裝干料1斤。,拌料裝袋，注意： 料松緊度適宜；袋壁光滑。 料面要平，中間打孔，以利通氣。 繩要綁緊，盡量排除袋內(nèi)空氣，防止?jié)q袋。 滅菌：與原種相同。,.,（二）栽培種的制作,場(chǎng)地消毒

12、：同前。 接種方法：雙手表面消毒后進(jìn)入接種箱；原種表面消毒，放于三角架或空瓶上，瓶口表面消毒、火焰滅菌；用鑷子把菌種扒成1-2cm小塊，均勻接于料面，綁口。,接種時(shí)注意： 接種過(guò)程應(yīng)在酒精燈旁進(jìn)行。 每瓶原種接栽培種1015袋(兩頭接種)或50瓶左右。 接種用具使用前表面消毒，火焰滅菌。 接完種后，據(jù)接種量確定封口松緊度。 培養(yǎng)：同原種。,.,三級(jí)菌種生產(chǎn)的工藝流程,.,四、菌種污染原因及防止措施,（一）常見雜菌種類：細(xì)菌、酵母菌、放線菌和霉菌。,.,（二）污染原因及防止措施,培養(yǎng)基滅菌不徹底。表現(xiàn)為瓶壁和袋壁上出現(xiàn)雜菌菌落。原因：滅菌壓力或時(shí)間不足，或者高壓滅菌時(shí)鍋內(nèi)空氣沒(méi)有排盡。 措施：鍋內(nèi)空氣排盡；保證滅菌壓力和時(shí)間。,.,菌種帶雜菌。表現(xiàn)為菌種塊周圍首先污染。 措施：選用純正菌種。 接種操作中污染。污染點(diǎn)常分散在培養(yǎng)基表面。原因：接種時(shí)無(wú)菌操作不嚴(yán)格。 措施：接種場(chǎng)所及工具消毒、滅菌要徹底，接種操作在燈焰形成的無(wú)菌區(qū)進(jìn)行，并要敏捷迅速。,培養(yǎng)室環(huán)境污染。培養(yǎng)室環(huán)境不衛(wèi)生，或通風(fēng)不良、潮濕等導(dǎo)致棉塞等封口材料受潮而污染。 措施：選擇清潔、高燥的場(chǎng)地作菌種培養(yǎng)室。 破口污染。滅菌操作或運(yùn)輸中不小心，使容器破裂或出現(xiàn)