微生物細菌鑒定試驗匯總

1、.,常用細菌生化反應(yīng),觸酶試驗 凝固酶試驗 膽汁溶菌試驗 氧化/發(fā)酵試驗 氧化酶試驗 苯丙氨酸脫氨酶試驗 硝酸鹽還原試驗 糖發(fā)酵試驗 吲哚試驗（靛基質(zhì)試驗） 甲基紅試驗 v-p（voges-proskauer）試驗 枸櫞酸鹽（或檸檬酸鹽）利用試驗 克氏雙糖鐵（kia）復(fù)合試驗 動力、吲哚及脲酶（miu）復(fù)合試驗,.,原理： 有觸酶的細菌能催化過氧化氫生成水和初生態(tài)氧，繼而形成氧分子出現(xiàn)氣泡。,觸酶試驗,.,方法： 用接種環(huán)取備檢菌少許，置于潔凈的玻片上，滴加3%的過氧化氫12滴，觀察結(jié)果。 試管法：用潔凈的玻棒蘸取待檢菌少許，置于裝有3%過氧化氫的試管內(nèi)，觀察結(jié)果。,觸酶試驗方法,.,觸酶試驗

2、結(jié)果,應(yīng)用： 用于革蘭陽性球菌初步分屬。 注意事項：,.,血漿凝固酶試驗,原理： 有些細菌能產(chǎn)生血漿凝固酶，可以使人和動物血漿中的纖維蛋白原轉(zhuǎn)化成纖維蛋白，從而使血漿凝固。,.,方法： 玻片法：取潔凈玻片一張，加生理鹽水兩小滴于玻片兩端，用接種環(huán)挑取待檢菌落和對照菌均勻涂于鹽水中，制成濃菌液，加兔或人血漿一滴于菌液中，觀察結(jié)果。 試管法：于3支試管中分別加入1:4稀釋的血漿0.5ml，1支管加入待檢菌肉湯培養(yǎng)物0.5ml,另兩支分別加陰陽性對照菌肉湯培養(yǎng)物0.5ml，35培養(yǎng)34h后觀察結(jié)果。 應(yīng)用：主要用于金葡菌的鑒定。,血漿凝固酶試驗方法,.,(-)凝固酶(+),1）凝固酶試驗 玻片法測定

3、結(jié)合型凝固酶；試管法測定分泌型凝固酶。金黃色葡萄球菌、中間型葡萄球菌呈現(xiàn)陽性反應(yīng)。路鄧葡萄球菌產(chǎn)生結(jié)合型凝固酶而不分泌游離型凝固酶, 因而玻片凝固酶試驗陽性、試管凝固酶試驗陰性。 玻片法 少許菌落 + 兔血漿 10 s 內(nèi)出現(xiàn)凝集為陽性,陽性：金葡、中間葡 陰性：其它葡萄球菌,試管法: 試管2支，各加0.5 ml兔血漿，取被檢菌和陽性對照菌分別加血漿混勻，37 水浴34 h,（3）種的鑒定,(-)商品化的膠乳凝集試驗(+),.,原理： 膽鹽、去氧膽酸鈉和硫磺膽酸鈉能選擇性地溶解肺炎鏈球菌，膽汁降低細胞膜的張力-膜破損或裂解,膽汁溶菌試驗,.,方法： 平板法：取膽酸鈉溶液一環(huán)，放在平板的菌落上，

4、3530min觀察結(jié)果。 試管法：于0.9ml培養(yǎng)了1824小時的菌液中，加入取氧膽酸鈉試劑0.1ml或牛膽鹽0.2ml混勻，37水浴1030min，觀察結(jié)果。 應(yīng)用： 主要用于肺炎鏈球菌與甲型鏈球菌。,膽汁溶菌試驗方法,.,camp試驗,原理： b群鏈球菌能產(chǎn)生一種胞外因子 camp,它能增強金黃色葡萄球菌-溶血毒素的活性，因此，在兩菌交界處出現(xiàn)箭頭樣的溶血增強區(qū)。,.,方法： 取血平板一塊，用產(chǎn)生-溶血毒素的金葡菌在中央劃一道線，將待檢菌據(jù)此線0.5cm處垂直劃線。351824小時培養(yǎng)，觀察結(jié)果。 應(yīng)用： 用于鑒定b群鏈球菌。,camp試驗方法,3）camp試驗,無乳鏈球菌能產(chǎn)生camp因

5、子，它可促進金黃色葡萄球菌溶血能力，使其產(chǎn)生顯著的協(xié)同溶血作用。本法可作為無乳鏈球菌的初步鑒定試驗,.,13,涂片：g+c,觸酶試驗,鏈球菌 腸球菌,+,葡萄球菌、微球菌,標本,氧化酶(雙糖), (o),+ (f),微球菌,葡萄球菌,凝固酶試驗,鑒定流程,+,金葡,表葡、腐生,新生霉素,表葡,腐生,s,r,.,14,觸酶試驗：陰性,鏈球菌屬鑒定流程,觀察血平板上溶血環(huán),-溶血環(huán),非-溶血環(huán),optochin、桿菌肽、 膽七 、高鹽,桿菌肽 、camp、 膽七 、高鹽,非溶血鏈球菌鑒定,.,氧化-發(fā)酵試驗,又稱o/f試驗或hugh-ldifson（hl）試驗,.,原理： 細菌分解葡萄糖對o2需求

6、不同， 氧化型：細菌只在有氧環(huán)境中分解葡萄糖; 發(fā)酵型：細菌可在有氧、無氧環(huán)境中分解g; 產(chǎn)堿型：細菌在有氧、無氧環(huán)境中都不 分解葡萄糖;,葡萄糖氧化/發(fā)酵試驗,.,硝酸鹽還原試驗,某些細菌能還原培養(yǎng)基中的硝酸鹽-亞硝酸鹽、氨和氮。,原理：,.,原理： 使硝酸鹽還原的細菌能從硝酸鹽中獲得氧，使其成為亞硝酸鹽或其它還原物。培養(yǎng)基中的亞硝酸基能與-萘氨和苯磺酸形成紅色的n-萘氨偶氮苯磺酸。若出現(xiàn)紅色現(xiàn)象則說明該菌還原硝酸鹽。,硝酸鹽還原試驗,.,方法： 取一環(huán)待檢菌接種到硝酸鹽瓊脂斜面上，35培養(yǎng)1824小時，然后依次加入含-萘氨和對氨基苯磺酸的試劑各1ml，30s后觀察結(jié)果。,硝酸鹽還原試驗方法

7、,.,應(yīng)用： 有助于鑒別腸桿菌科、奈瑟菌屬、布蘭漢菌屬、假單胞菌屬等,.,氧化酶試驗,原理： 某些細菌具有細胞色素氧化酶，能將二甲基對苯二胺或四甲基對苯二胺試劑氧化成紫紅色醌類化合物,.,方法： 濾紙法：用潔凈濾紙蘸取菌落，加一滴試劑，觀察結(jié)果 菌落法：直接在菌落上加試劑，觀察結(jié)果 紙片法：使用試劑浸泡制成的試劑紙片，取足夠的菌落，觀察結(jié)果。 應(yīng)用：用于科別鑒定試驗。,氧化酶試驗方法,.,苯丙氨酸脫氨酶試驗,原理： 有苯丙氨酸脫氨酶的細菌，可以使苯丙氨酸脫氨形成苯丙酮酸，苯丙銅酸與三氯化鐵作用形成綠色化合物。,.,方法： 瓊脂斜面法：將待檢細菌接種到苯丙氨酸瓊脂斜面上， 35培養(yǎng)2448h，取

8、出，將三氯化鐵試劑45滴滴于斜面上，觀察結(jié)果。 快速紙片法：將待檢菌涂于苯丙氨酸紙片上，孵育15min，取出，滴加三氯化鐵試劑，立即觀察結(jié)果。,苯丙氨酸脫氨酶試驗方法,.,應(yīng)用：多用于腸桿菌科的鑒定。 變形桿菌屬、普羅威登斯菌屬和摩根菌屬為陽性。,.,1.糖發(fā)酵試驗,【原理】： 各種細菌含有不同的分解糖（苷、醇）的酶，對糖（苷、醇）分解能力也各不相同，有的不分解，有的分解后僅產(chǎn)酸，有的分解后產(chǎn)酸產(chǎn)氣，故可用來鑒別細菌。 【方法】： 將大腸埃希菌和傷寒沙門菌分別接種葡萄糖、乳糖發(fā)酵管，35c培養(yǎng)18-24h 觀察結(jié)果。,.,1.糖發(fā)酵試驗,【結(jié)果】： 首先確定細菌是否生長，細菌生長者培養(yǎng)基呈混濁

9、狀： 1）不分解糖，培養(yǎng)基顔色與接種前無變化，以“-”表示； 2）分解糖產(chǎn)酸不產(chǎn)氣，培養(yǎng)基由紫色變?yōu)辄S色，以“+”表示； 3）分解糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，除培養(yǎng)基顔色變化外，倒管中還有氣泡，以“”表示。,.,2.吲哚試驗（靛基質(zhì)試驗）,【原理】：有些細菌具有色氨酸酶，能分解蛋白胨中的色氨酸產(chǎn)生吲哚，與吲哚試劑形成紅色化合物。 【方法】：大腸埃希菌和傷寒沙門菌分別接種于蛋白胨水培養(yǎng)基中，35c18-24h后，加入吲哚試劑數(shù)滴，靜置分層，觀察結(jié)果。 【結(jié)果】：在培養(yǎng)物液面上層呈玫瑰紅色為陽性，不變色者為陰性。,.,.,3.甲基紅試驗,【原理】：某些細菌分解葡萄糖產(chǎn)生丙酮酸，丙酮酸可進一步分解為甲酸、乙酸等酸性

10、物質(zhì)，故培養(yǎng)基ph 在4.5以下，加入甲基紅指示劑后呈紅色（陽性）；有些細菌分解葡萄糖產(chǎn)生的酸進一步化為醇、酮等非酸性物質(zhì)，使培養(yǎng)基ph在6.2以上，加入甲基紅指示劑后呈黃色（陰性）。 【方法】：大腸埃希菌和產(chǎn)氣腸桿菌分別接種葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基中，35c18-24h，加入甲基紅指示劑2-3滴觀察結(jié)果。 【結(jié)果】：紅色為陽性，黃色為陰性。,.,4.v-p（voges-proskauer）試驗,【原理】：某些細菌分解葡萄糖生成丙酮酸，進一步脫羧生成乙酰甲基甲醇，在堿性環(huán)境下被氧化成二乙酰，后者與蛋白胨中的精氨酸所含的胍基起作用，生成紅色胍縮二乙酰，為vp試驗陽性。若培養(yǎng)基中胍基含量少，加入少量含

11、胍基的化合物如肌酐，以加速其反應(yīng)。 【方法】：大腸埃希菌和產(chǎn)氣腸桿菌分別接種于葡萄糖蛋白胨水中，35c，24-48h，加入vp試劑甲液和乙液各1滴，充分搖動，觀察。 【結(jié)果】：紅色為陽性，若為陰性應(yīng)再培養(yǎng)4h觀察，仍無紅色者為陰性。,.,5.枸櫞酸鹽（或檸檬酸鹽）利用試驗,【原理】：當(dāng)細菌可以利用銨鹽作為唯一氮源，同時檸檬酸鹽為惟一碳源時，可在檸檬酸鹽培養(yǎng)基上生長，分解檸檬酸鹽為碳酸鹽，使培養(yǎng)基變堿，指示劑溴麝香草酚藍由綠色變?yōu)樯钏{色為陽性，培養(yǎng)基不變色（綠色）為陰性。 【方法】：大腸埃希菌和產(chǎn)氣腸桿菌分別接種于檸檬酸鹽培養(yǎng)基中，35c，24-48h，觀察。 【結(jié)果】：菌苔出現(xiàn)，培養(yǎng)基變?yōu)樯钏{

12、色為陽性。細菌不能生長，培養(yǎng)基不變色（綠色）為陰性。,.,6.克氏雙糖鐵（kia）復(fù)合試驗,【原理】：該培養(yǎng)基用酚紅指示劑，在酸性時呈黃色，堿性時呈紅色。細菌如能發(fā)酵乳糖和葡萄糖而產(chǎn)酸產(chǎn)氣，則斜面與底層均呈黃色，且有氣泡。如只發(fā)酵葡萄糖不發(fā)酵乳糖，因葡萄糖含量少，斜面所生的少量酸可因接觸空氣而氧化揮發(fā)，從而使斜面部分保持原來的紅色；底層由于是在相對缺氧狀態(tài)下，細菌發(fā)酵葡萄糖所生成的酸類物質(zhì)不被氧化揮發(fā)而保持黃色。如細菌分解蛋白產(chǎn)生硫化氫，則與硫化亞鐵作用生成黑色的硫化鐵，使培養(yǎng)基變黑。,.,6.克氏雙糖鐵（kia）復(fù)合試驗,【方法】：將待檢菌接種于克氏雙糖鐵培養(yǎng)基（底層穿刺，上層斜面劃線），3

13、5c，24h，觀察。 【結(jié)果】：發(fā)酵乳糖和葡萄糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣，則上層和底層均呈黃色且有氣泡產(chǎn)生；只發(fā)酵葡萄糖而不發(fā)酵乳糖，則底層變黃，上層仍為紅色。如底層變黑，說明該菌產(chǎn)生硫化氫，生成黑色的硫化鐵沉淀。,.,7.動力、吲哚及脲酶（miu）復(fù)合試驗,【原理】：培養(yǎng)基為含尿素、蛋白胨的半固體培養(yǎng)基，指示劑為酚紅。具色氨酸酶的細菌能分解色氨酸產(chǎn)生吲哚，加入吲哚試劑后，培養(yǎng)基上層的吲哚會變紅；具脲酶的細菌能分解尿素產(chǎn)氨，使整個培養(yǎng)基變堿呈紅色；有動力的細菌沿穿刺線擴散生長。 【方法】：將大腸埃希菌和普通變形桿菌穿刺線接種于miu培養(yǎng)基，35c，18-24h，觀察動力和脲酶反應(yīng)后，再滴加吲哚試劑。 【結(jié)果】：擴散生長為動力陽性；滴加吲哚試劑后呈玫瑰紅色為陽性；培養(yǎng)基變紅脲酶