土壤微生物的分離純化及鑒定

1、土壤微生物的分離純化及鑒定 一摘要：通過稀釋涂布、劃線分離等微生物的基本實(shí)驗(yàn)操作和步驟，對(duì)土壤中的微生物進(jìn)行分離與純化，再根據(jù)實(shí)驗(yàn)中菌落形態(tài)觀察、革蘭氏染色、生理生化試驗(yàn)等結(jié)果對(duì)所分離細(xì)菌和霉菌的分類進(jìn)行鑒定。二關(guān)鍵詞：土壤微生物，劃線分離，純化，芽孢染色，革蘭氏染色，鞭毛染色，穿刺，生理生化鑒定三前言：土壤微生物是構(gòu)成土壤肥力的重要因素。土壤中尤以細(xì)菌最多，約占土壤微生物總量的70-90%.土壤中不同類型的細(xì)菌有不同的作用。有的能夠固定空氣中的氮元素，合成細(xì)胞中的蛋白質(zhì)；有的能夠分解農(nóng)作物的秸桿，它們大多是異養(yǎng)菌。除了細(xì)菌以外，土壤中數(shù)量較多的其它微生物是放線菌和真菌，而藻類和原生動(dòng)物等較少

2、。土壤中的微生物混雜生活在一起，即使取很少量的樣品也是許多微生物共存的群體。要研究某種微生物的特性或要確定某些微生物菌株的分類地位，首先須使該微生物為純培養(yǎng)。也就是說(shuō)培養(yǎng)物中所有的細(xì)胞只是微生物的某一個(gè)或株，它們有著共同的來(lái)源，是同一細(xì)胞的后代。從復(fù)雜的微生物群體中獲得只含有一種或一株微生物的過程稱為微生物的分離純化。單細(xì)胞挑取法、稀釋涂布平板法、稀釋混合平板法和平板劃線法是分離純化微生物的常規(guī)方法。通過稀釋涂布平板法可以在平板上獲得單菌落，再通過挑取單菌落進(jìn)行平板劃線分離可獲得純培養(yǎng)。在稀釋涂布平板法中還可通過平板菌落計(jì)數(shù)，推算單位重量土壤樣品含有微生物的數(shù)量。對(duì)微生物分類的主要依據(jù)有形態(tài)特

3、征、生理生化特征性等。形態(tài)特征包括個(gè)體形態(tài)和培養(yǎng)形態(tài)。細(xì)胞形狀、大小、排列，革蘭氏染色反應(yīng)，運(yùn)動(dòng)性，鞭毛位置、數(shù)目，芽孢有無(wú)、形狀和部位都是個(gè)體形態(tài)的特點(diǎn)。培養(yǎng)形態(tài)指微生物在培養(yǎng)基（包括固體和液體培養(yǎng)）中生長(zhǎng)的形態(tài)特征。通過細(xì)菌的形態(tài)特征可以對(duì)微生物進(jìn)行分類鑒定。各種微生物在代謝類型上表現(xiàn)出很大的差異，如表現(xiàn)在對(duì)大分子糖類和蛋白質(zhì)的分解能力以及分解代謝的終產(chǎn)物的不同，反應(yīng)出它們具有不同的酶系和不同的生理特性，這些特性可被用作為細(xì)菌鑒定和分類的內(nèi)容。.四實(shí)驗(yàn)材料1.菌種：大腸桿菌，金黃色葡萄球菌。2.培養(yǎng)基：牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基，馬鈴薯培養(yǎng)基，固體油脂培養(yǎng)基，固體淀粉培養(yǎng)基，葡萄糖發(fā)酵培養(yǎng)基試管，

4、乳糖培養(yǎng)基試管（內(nèi)裝有倒置的德漢氏小管），蛋白胨水培養(yǎng)基，葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基。.3.溶液和試劑：50%乙醇，20%的甘油，硝酸銀染色液、香柏油、二甲苯、0.01美蘭水溶液，盧戈氏碘液，甲基紅指示劑，5%孔雀綠水溶液、0.5%番紅水溶液，革蘭氏染液，草酸銨結(jié)晶紫染液，盧戈式（Lugol）碘液，95%乙醇，番紅復(fù)染液，香柏油。4.土樣：于山東大學(xué)中心校區(qū)圖書館前光草坪內(nèi)地表10cm下取得土樣。.5.儀器和其他用品：普通光學(xué)顯微鏡，擦鏡紙，酒精燈，載玻片，雙層瓶，接種環(huán)，試管架，鑷子，滴管，二甲苯，香柏油，蒸餾水，蓋玻片，吸水紙，無(wú)菌平板，無(wú)菌試管，U型玻棒，解剖刀，無(wú)菌吸管等。.五操作步驟1培養(yǎng)

5、基的制備與分裝。1.稱量：按培養(yǎng)基配方比例依次準(zhǔn)確地稱取藥品。2.熔化：在沸水浴鍋中或電爐上加熱熔化。3.調(diào)pH ：用1mol/L NaOH或1mol/L HCl調(diào)pH至培養(yǎng)基所需pH。4.分裝：將溶化的固體培養(yǎng)基趁熱加至漏斗上，裝試管時(shí)，注意管口不要沾上培 養(yǎng)基。液體分裝裝量不超過試管的1/4，固體分裝裝量不超過試管的1/5，分裝三角瓶的量不超過三角瓶容積的一半，半固體分裝裝量為試管的1/3，滅菌后垂直待凝。5.加棉塞：培養(yǎng)基分裝完畢后，在試管口或三角瓶口塞上棉塞，以阻止外界微生物進(jìn)入培養(yǎng)基內(nèi)而造成污染，并保證有良好的通氣性能，然后包扎一層牛皮紙。試管應(yīng)先捆成一捆后再于棉塞外包扎牛皮紙，貼上

6、標(biāo)簽，注明培養(yǎng)基名稱、日期、組別。2無(wú)菌水的制備。（1）用量筒量取90ml水于帶玻璃珠三角瓶中，塞上棉塞，包扎牛皮紙。（2）用10ml吸管取9ml水于試管中，塞上棉塞，包扎牛皮紙。3器皿的準(zhǔn)備。（1）培養(yǎng)皿的包裝：每10套一包，用舊報(bào)紙或牛皮紙包扎（或放在特制鐵皮圓筒里，加蓋扣嚴(yán)）。（2）吸管的包裝：首先在吸管的上端塞上一小段棉花，用長(zhǎng)紙條包扎、打結(jié)。（3）玻璃涂布棒的包裝：方法同吸管的包裝。（4）槍尖的包裝：放入槍尖盒，牛皮紙包裝。4高壓滅菌。（1）將所要滅菌物品放入高壓蒸汽滅菌鍋內(nèi)，根據(jù)需要設(shè)定滅菌溫度和時(shí)間（一般121，20min滅菌，若培養(yǎng)基中含有葡萄糖等成分時(shí)，113 ，30min滅

7、菌）。如因特殊情況不能及時(shí)滅菌，則應(yīng)放入冰箱內(nèi)暫存。（2）滅菌完畢，將試管培養(yǎng)基擱成斜面，擱置的斜面長(zhǎng)度以不超過試管總長(zhǎng)度的一半為宜。培養(yǎng)基冷至50左右，倒平板。5微生物的分離與純化。（1） 制備土壤稀釋液：稱取10g土壤，放入滅好菌的無(wú)菌水中用玻璃珠打碎土壤，放置30min以上。然后取10mL土壤原液于1支試管中，再?gòu)脑撛嚬苤腥?mL浸液于裝有9mL無(wú)菌水的試管中，依次操作，分別將土壤浸液稀釋10倍、102倍、103倍、104倍、105倍、106倍，將7支試管按稀釋倍數(shù)分別記作0，-1，-2，-3，-4，-5，-6號(hào)試管。（2） 涂布平板：分別取各稀釋度試管中0.2mL浸液于準(zhǔn)備好的細(xì)菌培養(yǎng)

8、基平板上，用刮刀分別涂布。再分別取各稀釋度試管中0.2mL浸液于準(zhǔn)備好的霉菌培養(yǎng)基平板上，用刮刀分別涂布。每個(gè)稀釋度的浸液涂布3個(gè)平板。（3） 培養(yǎng)：將細(xì)菌培養(yǎng)基平板置于37恒溫箱培養(yǎng)24h，將霉菌培養(yǎng)基平板置于27恒溫箱培養(yǎng)3d。（4） 平板計(jì)數(shù)及菌落描述：將培養(yǎng)好的細(xì)菌進(jìn)行平板計(jì)數(shù)，計(jì)算1g土壤中細(xì)菌數(shù)；并觀察其菌落形態(tài)特征，記錄結(jié)果。（5） 平板劃線分離：分別將培養(yǎng)好的細(xì)菌、霉菌進(jìn)行平板劃線分離。分別在適宜溫度培養(yǎng)。（6） 菌種保藏（留作鑒定）：將分離得到的菌種進(jìn)行斜面保藏。每株菌保存3支斜面。6.分離菌株的鑒定。（1）記錄菌種的培養(yǎng)特征。（2） 細(xì)菌的革蘭氏染色，記錄菌體特征與染色特性

9、。制片：制片方法與簡(jiǎn)單染色相同。初染：加適量（以剛好覆蓋菌為宜）的結(jié)晶紫染色液染色1.5min，水洗。媒染：碘液媒染1min，水洗。脫色：連續(xù)滴加95%乙醇脫色2030s至流出液無(wú)色，立即水洗。復(fù)染：滴加番紅復(fù)染1.5min，水洗。鏡檢：干燥后，油鏡鏡檢觀察。（3）細(xì)菌的芽孢染色。制片：按常規(guī)方法涂片、干燥及固定。加熱染色：向載玻片滴加數(shù)滴5%孔雀綠水溶液覆蓋涂菌部位，用夾子夾住載玻片在微火上加熱染液冒蒸氣計(jì)時(shí)并維持5min，加熱時(shí)注意補(bǔ)充染液，切勿讓涂片干涸。脫色：待玻片冷卻后，用緩流自來(lái)水沖洗至流出水無(wú)色為止。復(fù)染：用0.5%番紅水溶液復(fù)染2min。水洗：用緩流自來(lái)水沖洗至流出水無(wú)色為止。

10、鏡檢：將載玻片晾干后油鏡鏡檢。（4）細(xì)菌的鞭毛染色。載玻片制備：將載玻片用洗滌劑清洗干凈，置于95%乙醇中浸泡5min，使用時(shí)用鑷子取出在火焰上燒去乙醇及可能殘留的油跡。制片：在載玻片一端滴一滴清水，用接種環(huán)從斜面培養(yǎng)物種蘸一兩下，再在清水中蘸一兩下，然后傾斜玻片，使液體緩慢流向載玻片另一端，用吸水紙洗去多余液體，自然干燥。染色：滴加硝酸銀染液A液覆蓋菌面35min后用蒸餾水充分洗去A液。用硝酸銀染液B液洗去殘留水分后，再滴加B液覆蓋菌面4050秒，其間可用微火加熱，當(dāng)菌面出現(xiàn)明顯褐色時(shí)，立即用蒸餾水沖洗，自然干燥。鏡檢：用油鏡鏡檢觀察。（5） 細(xì)菌的半固體穿刺試驗(yàn)。 培養(yǎng)基試管的制備：將半固

11、體培養(yǎng)基倒入試管中滅菌后，垂直放置待凝。 接種：將各菌種用接種針分別穿刺接種于半固體培養(yǎng)基中，37恒溫箱中培養(yǎng)24h。 觀察：觀察細(xì)菌生長(zhǎng)范圍并記錄，判斷細(xì)菌是否有運(yùn)動(dòng)性。（6） 查伯杰氏手冊(cè)，初步對(duì)細(xì)菌菌種進(jìn)行鑒定。（7） 進(jìn)行以下細(xì)菌的生理生化試驗(yàn)： 淀粉水解試驗(yàn) 將固體淀粉培養(yǎng)基溶化后冷卻至50左右，無(wú)菌操作制成平板。 用記號(hào)筆在平板底部劃成4個(gè)部分。 將選取的各菌分別在不同的部分點(diǎn)一下，在平板的反面分別在4個(gè)部分標(biāo)明所接種細(xì)菌。 將平板倒置在37溫箱中培養(yǎng)24h。 觀察各種細(xì)菌的生長(zhǎng)情況，打開平板蓋子，滴入少量盧戈氏碘液于平板中，輕輕旋轉(zhuǎn)平板，使碘液均勻鋪滿整個(gè)平板。如菌苔周圍出現(xiàn)無(wú)色

12、透明圈，說(shuō)明淀粉已被水解，為陽(yáng)性。根據(jù)透明圈的大小可初步判斷該菌水解淀粉能力的強(qiáng)弱，即產(chǎn)生胞外淀粉酶活力的高低。 油脂水解實(shí)驗(yàn) 將熔化的固體油脂培養(yǎng)基冷卻至50左右時(shí)，充分搖蕩，使油脂均勻分布，無(wú)菌操作倒入平板，待凝。 用記號(hào)筆在平板底部劃成4部分，分別在4部分標(biāo)明所接種細(xì)菌。 用無(wú)菌操作將選取的各菌分別劃十字線接種于平板的相對(duì)應(yīng)部分的中心。 將平板倒置，37溫箱中培養(yǎng)24h。 取出平板，觀察菌苔顏色。如出現(xiàn)紅色斑點(diǎn)，說(shuō)明脂肪水解，為陽(yáng)性反應(yīng)。 糖發(fā)酵試驗(yàn) 用記號(hào)筆在各試管外壁上分別標(biāo)明發(fā)酵培養(yǎng)基的名稱和所接種細(xì)菌。 取數(shù)支葡萄糖發(fā)酵培養(yǎng)基試管，分別接入所選菌種，另取一支葡萄糖發(fā)酵培養(yǎng)基試管不

13、接種，作為對(duì)照。取數(shù)支乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基試管，同樣分別接入所選菌種，另取一支乳糖發(fā)酵培養(yǎng)基試管不接種，作為對(duì)照。在接種后，輕緩搖動(dòng)試管，使其均勻，防止倒置的小管進(jìn)入氣泡。 將接過種和作為對(duì)照的試管均置37中培養(yǎng)2448h。 觀察各試管顏色變化及德漢氏小管中有無(wú)氣泡。 吲哚試驗(yàn) 將所選菌種分別接入數(shù)支蛋白胨水培養(yǎng)基中，置37培養(yǎng)48h。 向培養(yǎng)基內(nèi)加入34滴乙醚，搖動(dòng)數(shù)次，靜置1min，待乙醚上升后，沿試管壁徐徐加入2滴吲哚試劑。在乙醚和培養(yǎng)物之間產(chǎn)生紅色環(huán)狀物為陽(yáng)性反應(yīng)。 甲基紅試驗(yàn) 將所選菌種分別接入數(shù)支葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基中，置37培養(yǎng)48h。 將1支葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基培養(yǎng)物內(nèi)加入甲基紅試劑

14、2滴，培養(yǎng)基變?yōu)榧t色者為陽(yáng)性，變?yōu)辄S色者為陰性。（8）霉菌的形態(tài)觀察。 培養(yǎng)小室的滅菌：在平皿皿底鋪一張略小于皿底的圓濾紙片，再放一U形玻棒，其上放一潔凈載玻片和兩塊蓋玻片，蓋上皿蓋、包扎后于110滅菌2030min，烘干備用。 瓊脂塊制備：通過無(wú)菌操作，用解剖刀由馬鈴薯瓊脂薄層平板上切下1cm2左右的瓊脂塊，將其移至培養(yǎng)小室的載玻片上，每片兩塊。 接種：通過無(wú)菌操作，用接種針分別從各霉菌馬鈴薯瓊脂平板培養(yǎng)物中挑取很少量孢子，接種于小室中瓊脂塊邊緣上，將蓋玻片覆蓋在瓊脂塊上。 培養(yǎng)：通過無(wú)菌操作，在培養(yǎng)小室中圓濾紙片上加35mL滅菌的20%甘油（用于保持濕度），蓋上皿蓋，于28培養(yǎng)7天。 鏡檢

15、：取出載玻片用低倍鏡和高倍鏡鏡檢。（9） 對(duì)照霉菌圖譜，對(duì)霉菌菌種進(jìn)行鑒定。六、實(shí)驗(yàn)結(jié)果1細(xì)菌的平板計(jì)數(shù)：【表1 】細(xì)菌的平板計(jì)數(shù)結(jié)果菌液濃度原浸液10-4平板123平均菌落數(shù)13141313.31g土壤中細(xì)菌數(shù)：6.7106個(gè)1 細(xì)菌的形態(tài)觀察：【表2 】細(xì)菌菌落的形態(tài)特征記錄細(xì)菌編號(hào)形狀大小干濕顏色邊緣表面1圓形中等干白色不整齊隆起2圓形中等濕淡黃整齊隆起3圓形小濕白色透明整齊隆起4不規(guī)則大濕乳白透明不整齊不隆起5不規(guī)則大濕白色不整齊不隆起2 細(xì)菌的染色半固體穿刺實(shí)驗(yàn)結(jié)果（1） 表格：【表3】細(xì)菌的染色半固體穿刺實(shí)驗(yàn)結(jié)果記錄細(xì)菌編號(hào)形狀革蘭氏染色芽孢染色鞭毛染色半固體穿刺1長(zhǎng)桿狀G+有芽孢

16、有鞭毛運(yùn)動(dòng)2短桿狀G-無(wú)芽孢無(wú)鞭毛不運(yùn)動(dòng)3短桿狀G+有芽孢無(wú)鞭毛不運(yùn)動(dòng)4短桿狀G+有芽孢有鞭毛運(yùn)動(dòng)5短桿狀G+有芽孢有鞭毛運(yùn)動(dòng)（2）圖片：細(xì)菌的染色實(shí)驗(yàn)結(jié)果 革蘭氏染色 【圖1】 1號(hào)菌革蘭氏染色（10100） 【圖2】 2號(hào)菌革蘭氏染色（10100） 【圖3】3號(hào)菌革蘭氏染色（10100） 【圖4】4號(hào)革蘭氏染色（10100） 【圖5】5號(hào)菌革蘭氏染色（10100） 【圖6】金黃色葡萄球菌革蘭氏染色（10100）【圖7】大腸桿菌革蘭氏染色（10100） 芽孢染色 【圖8】1號(hào)菌芽孢染色（10100） 【圖9】2號(hào)菌芽孢染色（10100） 【圖10】3號(hào)菌芽孢染色（10100） 【圖11】4號(hào)

17、菌芽孢染色（10100）【圖12】5號(hào)菌芽孢染色（10100） 鞭毛染色 【圖13】1號(hào)菌鞭毛染色（10100） 【圖14】2號(hào)菌鞭毛染色（10100無(wú)鞭毛） 【圖15】3號(hào)菌鞭毛染色（10100無(wú)鞭毛） 【圖16】4號(hào)菌鞭毛染色（10100）【圖17】5號(hào)菌鞭毛染色（10100）半固體穿刺 【圖18】1號(hào)菌半固體穿刺 （有運(yùn)動(dòng)性） 【圖19】2號(hào)菌半固體穿刺（無(wú)運(yùn)動(dòng)性） 【圖20】3號(hào)菌半固體穿刺（無(wú)運(yùn)動(dòng)性） 【圖21】4號(hào)菌半固體穿刺（有運(yùn)動(dòng)性）【圖22】5號(hào)菌半固體穿刺（有運(yùn)動(dòng)性）【表4】各菌所屬類群菌種編號(hào)所屬類群（屬）該屬主要特征1芽孢桿菌屬菌體桿狀，直或接近直，0.3-2.21.2

18、-7.0微米，多數(shù)運(yùn)動(dòng)，鞭毛典型側(cè)生。形成抗熱內(nèi)生孢子，在一個(gè)孢子囊細(xì)胞中，孢子不多于1個(gè)。暴露與空氣中時(shí)，不妨礙孢子的形成。革蘭氏反應(yīng)為：陽(yáng)性、僅在生長(zhǎng)早期為陽(yáng)性、陰性。有機(jī)化能營(yíng)養(yǎng)，利用多種底物進(jìn)行嚴(yán)格呼吸代謝，嚴(yán)格發(fā)酵代謝或呼吸和發(fā)酵二者兼有的代謝。在呼吸代謝中，最終的電子受體是分子氧，在一些種種可疑用硝酸鹽代替氧，大多數(shù)種產(chǎn)接觸酶。嚴(yán)格好氧或兼性厭氧。2不動(dòng)桿菌屬桿菌，通常非常短粗，對(duì)數(shù)期典型菌為1.0-1.51.5-2.5微米，靜止期近乎球狀，排列以成對(duì)和短鏈占優(yōu)勢(shì)，在所有的培養(yǎng)物中有少量的大而不規(guī)則的細(xì)菌和絲狀體，但也可占優(yōu)勢(shì)，不形成芽孢無(wú)鞭毛。有些菌株在固體的表面在特殊情況下顯示

19、“抽搐”式的運(yùn)動(dòng)。莢膜和纖毛可能有或沒有。不產(chǎn)生聚-羥基丁酸鹽細(xì)胞內(nèi)含物。革蘭氏染色陰性。具氧化代謝的化能異養(yǎng)菌。作為碳和能源而利用的有機(jī)物通常是多樣化的。無(wú)特殊的生長(zhǎng)需要，從糖類可能或不能產(chǎn)酸。氧化酶陰性，接觸酶陽(yáng)性。不產(chǎn)生乙酰甲基甲醇、吲哚和H2S。專性好氧菌，最適溫度為30-32，最適pH約為7。抗青霉素。3，4梭菌屬桿狀，一般以周生鞭毛運(yùn)動(dòng)，很少不運(yùn)動(dòng)。形成卵園到球形孢子，一般孢子使桿狀菌體膨大，通常為革蘭氏陽(yáng)性，至少在生長(zhǎng)的早期如此。有機(jī)化能營(yíng)養(yǎng)。有些種是解糖的，有些是解朊的，有的兩者兼?zhèn)洌械膬烧呓苑?，發(fā)酵糖，多元醇、氨基酸、有機(jī)酸、嘌呤和其他有機(jī)化合物。有些種固定N，都不還原 硫

20、酸鹽。雖然有些種可在大氣壓下，在存在空氣的情況下生長(zhǎng)，但絕大多數(shù)菌株是嚴(yán)格厭氧的。一般不產(chǎn)生接觸酶，即使產(chǎn)生，數(shù)量也少。5芽孢乳桿菌屬細(xì)胞直桿狀，0.7-0.83-5微米，單個(gè)、成對(duì)、很少呈短鏈，僅為數(shù)不多的長(zhǎng)周生鞭毛運(yùn)動(dòng)。形成內(nèi)生孢子。革蘭氏陽(yáng)性。有機(jī)化能營(yíng)養(yǎng)，發(fā)酵代謝己糖是通過僅僅產(chǎn)生乳酸的典型的同型發(fā)酵途徑。不含有血紅素化合物，如接觸酶或細(xì)胞色素。微好氧。3 細(xì)菌的生理生化試驗(yàn)：【表5 】細(xì)菌的生理生化試驗(yàn)結(jié)果記錄（注：“+”表示在淀粉水解試驗(yàn)、油脂水解試驗(yàn)、甲基紅試驗(yàn)、吲哚試驗(yàn)中呈陽(yáng)性以及在葡萄糖發(fā)酵試驗(yàn)、乳糖發(fā)酵試驗(yàn)中產(chǎn)酸或產(chǎn)氣；“-”表示在淀粉水解試驗(yàn)、油脂水解試驗(yàn)、甲基紅試驗(yàn)、吲

21、哚試驗(yàn)中呈陰性以及在葡萄糖發(fā)酵試驗(yàn)、乳糖發(fā)酵試驗(yàn)中不產(chǎn)酸不產(chǎn)氣）細(xì)菌編號(hào)淀粉水解試驗(yàn)油脂水解試驗(yàn)葡萄糖發(fā)酵試驗(yàn)乳糖發(fā)酵試驗(yàn)甲基紅試驗(yàn)吲哚試驗(yàn)1-+-+-2-3-+-+-4-5+-+-+-空白-5. 霉菌的形態(tài)觀察：（1） 形態(tài)特征：【表6】霉菌形態(tài)特征霉菌編號(hào)形態(tài)特征1，2菌絲有隔，分生孢子梗亦有隔，頂端不膨大，無(wú)頂囊，其分生孢子梗多次分枝，產(chǎn)生對(duì)稱或不對(duì)稱的小梗，小頂端有孢子，形如掃帚，稱為帚狀體。（2） 圖片： 【圖23】1號(hào)霉菌（1040） 【圖24】2號(hào)霉菌（1040） 【圖25】1號(hào)霉菌孢子梗 【圖26】2號(hào)霉菌孢子梗（3） 對(duì)照霉菌圖譜，得知：1號(hào)菌和2號(hào)菌均屬于青霉屬。七、附：本實(shí)驗(yàn)用到的各種培養(yǎng)基配方。（注：半固體培養(yǎng)基中瓊脂用量減半）1. 牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基牛肉膏 1.5g蛋白胨 5gNaCl 2.5g瓊脂 10g水 500mLpH 7.07.2121C滅菌20min2.