LY-T1283-1998木材防腐劑對腐朽菌毒性實驗室試驗方法.pdf

L Y / r 1 2 8 3 -1 9 9 8前言 本標(biāo)準(zhǔn)參考了美國木材防腐者協(xié)會標(biāo)準(zhǔn)“ 實驗室土壤一 木塊培養(yǎng)測定木材防腐劑的標(biāo)準(zhǔn)方法”( A m e r i c a n Wo o d P r e s e r v e r s A s s o c i a t i o n S t a n d a r d E 1 0 - 9 1 S t a n d a r d m e t h o d o f t e s t i n g w o o d p r e s e t -v a t i v e s b y l a b o r a t o r y s o i l - b l o c k c u lt u r e s ) ， 采用了該標(biāo)準(zhǔn)中的試菌、 培養(yǎng)和試驗時間、 重量損失的 計算、 試驗結(jié)果的評價等。本標(biāo)準(zhǔn)的主要特點是可操作性強、 準(zhǔn)確、 快速、 簡便易行。 本標(biāo)準(zhǔn)的附錄A是標(biāo)準(zhǔn)的附錄。 本標(biāo)準(zhǔn)由中國木材標(biāo)準(zhǔn)化技術(shù)委員會歸口。 本標(biāo)準(zhǔn)起草單位: 南京林業(yè)大學(xué)化工學(xué)院。 本標(biāo)準(zhǔn)起草人: 金重為、 趙桂華、 何文龍。免費標(biāo)準(zhǔn)網(wǎng)( w w w . f r e e b z . n e t ) 標(biāo)準(zhǔn)最全面免費標(biāo)準(zhǔn)網(wǎng)( w w w . f r e e b z . n e t ) 無需注冊 即可下載中華 人 民 共 和 國林 業(yè)行 業(yè) 標(biāo) 準(zhǔn)木材防腐劑對腐朽菌毒性實驗室 試 驗 方 法L Y / T 1 2 8 3 -1 9 9 8Me t h o d o f l a b o r a t o r y t e s t f o r t o x i c i t y o f w o o d p r e s e r v a t i v e s t o d e c a y f u n g i1 范圍 本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了在最適宜的實驗室條件下， 通過測定經(jīng)防腐劑處理的木材受腐朽菌侵染后造成木材重量損失. 確定該防腐劑毒效的試驗方法。 本標(biāo)準(zhǔn)適用于測定木材防腐劑對腐朽菌毒性極限。2 定義 本標(biāo)準(zhǔn)采用下列定義。2 . 1木材重量損失 百分率 w e i g h t l o s s p e r c e n t a g e o f w o o d 在室內(nèi)毒性試驗中， 經(jīng)防腐劑處理的木材受腐朽菌侵染后的重量損失百分率。2 . 2 木材中防腐劑的保持量 p r e s e r v a t i v e r e t e n t i o n i n w o o d 每立方米處理木材所吸收的防腐劑干鹽( 水溶性防腐劑) 或有效成分( 水不溶防腐劑) 的千克數(shù)。2 . 3 木材防腐劑毒性極限 t o x i c l i m i t o f w o o d p r e s e r v a t i v e s 木材防腐劑有效抑制腐朽菌腐朽木材的最低保持量。3 試驗設(shè)備3 . 1 培菌室或電 熱恒溫培養(yǎng)箱: 溫度3 0 士2 C， 相對濕度7 5 a a -8 5 a/ o o3 . 2 鼓風(fēng)干燥烘箱: 溫度1 0 5 士2 C o3 . 3 蒸汽滅菌器: 壓力。 . 2 5 MP a 4A度1 3 8 0C ,3 . 4 無菌接種室或超凈工作臺。3 . 5 分析天平: 感量。 . 0 1 g .3 . 6 真空泵: 真空度。 . 1 MP a ,3 . 7 培養(yǎng)皿: 玻璃， 直徑9 c m,3 . 8 波美計: 波美度1 . 0 0 1 . 1 0 ,3 . 9 培養(yǎng)瓶: 5 0 0 mL廣口玻璃錐形瓶。3 . 1 0 防腐劑浸注試樣裝置， 見圖1 ,國家林業(yè)局1 9 9 8 一 0 9 一 2 2 批準(zhǔn)1 9 9 8 一 1 2 一 0 1 實施免費標(biāo)準(zhǔn)網(wǎng)( w w w . f r e e b z . n e t ) 標(biāo)準(zhǔn)最全面免費標(biāo)準(zhǔn)網(wǎng)( w w w . f r e e b z . n e t ) 無需注冊 即可下載L Y / r 1 2 8 3 一 1 9 9 8I 一 聚乙 烯管沼 一 錐形瓶悶一防腐劑溶液過 一旋塞, 5 一橡皮塞; s -真空接管; 7 一真空干操器; 8 一玻璃燒杯; 9 一壓試樣玻璃重物; 1 。 一試樣 圖 1 真空浸注裝置4 試樣與飼木4 門 試材: 供試驗用樹種， 針葉材選用馬尾松( P i n u s m a s s o n i a n a L a m b . ) ， 闊葉材選用毛白楊( P o p u l u st o m e n t o s a C a r r . ) 或擬赤楊 A l n i p h y l l u m f o r t u n e i ( H e m s h . ) P e r k ) 。 每種樹各2 - 3 株， 胸徑2 0 0 m m 一3 0 0 m m， 每株在胸高部位向上截取長l m的試材一段。4 . 2 試樣: 試樣均等取自2 -3 株試材段橫截面邊材均勻分布處。 各面均應(yīng)平整， 不允許有可見的缺陷，未經(jīng)任何化學(xué)藥劑處理。尺寸為 2 0 m m X 2 0 m m X 1 0 m m 順紋方向) ， 逐一稱重， 并將重量相近的相同樹種的試樣分在同一組， 編號， 備用。針葉材試樣用于褐腐菌試驗， 闊葉材試樣用于白腐菌試驗。4 . 3 飼木: 飼木應(yīng)與試樣取自同一樹種的邊材， 尺寸為2 2 m mX 2 2 m mX3 m m( 順紋方向) 。5 試菌5 . 1 褐腐菌5 . 1 . 1 密粘褶菌 G l o e o p h y l l u m t r a b e u m ( P e t s . e x F r . ) M u r r . 。5 . 1 . 2 綿腐臥孔菌C P o s t i a p l a c e n t a ( F r i e s ) M. L a r s e n e t L o m b a r d ) o5 . 2 白腐菌5 . 2 . 1 彩絨革蓋菌 T r a m e t e : 二 。 r s i c o l o r ( L . e x F r . ) P i l a t ) ,5 . 2 . 2 乳白 耙菌U r p e z l a c t e u s ) ,5 . 3 除以上標(biāo)準(zhǔn)試菌外， 增加對試驗防腐劑有抗藥性和處理木材使用場合特別普遍的菌種是可取的。例如用煤雜酚油處理鐵道枕木時， 應(yīng)增加試菌潔麗香菇 N e o l e n t i n u s l e p i d e u s ( F r . ; F r . ) 。 在測定含銅的木材防 腐劑的抗腐力時， 應(yīng)增加試菌粉抱革菌 C o n i o p h o r a p u t e a n a ( F r . ) K a r s t ) ,6 試驗步驟6 . 1 培養(yǎng)基制備6 - 1 . 1 麥芽糖瓊脂培養(yǎng)基的配制: 在5 0 0 m L 細(xì)口 錐形瓶內(nèi)加入麥芽糖液( 波美度1 . 0 3 ) 1 0 0 m L 、 瓊脂1 . 5 寫-2 線( 重量) ， 在水浴鍋中加熱， 使瓊脂溶化。 在培養(yǎng)基中加0 . 0 0 5 %( 重量) 的酵母浸提物， 加速許多腐朽菌的生長。瓶口 塞棉塞并包防水紙， 置于蒸汽滅菌器中， 在壓力。 . 1 M P a , 溫度1 2 1 滅菌3 0 m i n 5 7 4免費標(biāo)準(zhǔn)網(wǎng)( w w w . f r e e b z . n e t ) 標(biāo)準(zhǔn)最全面免費標(biāo)準(zhǔn)網(wǎng)( w w w . f r e e b z . n e t ) 無需注冊 即可下載L Y / T 1 2 8 3 一 1 9 9 8后， 在無菌接種室或超凈工作臺上冷至不燙手時， 把培養(yǎng)基分別倒入 5 個已滅菌( 壓力。 . 1 MP a , 溫度1 2 1 C ) 的培養(yǎng)皿( 直徑9 c m ) 中， 等冷卻凝固后備用。6 . 1 . 2 如選用馬鈴薯、 葡萄糖培養(yǎng)基時， 取去皮洗凈馬鈴薯2 0 g ， 切成小塊， 加水1 0 0 m L , 煮沸3 0 m i n ,濾去馬鈴薯塊， 將濾液用水補足到1 0 0 m L ， 倒人5 0 0 m L 細(xì)口 錐形瓶中， 加葡萄糖2 g , 瓊脂1 . 5 g ， 加熱溶化， 瓶口 塞棉塞并包防水紙， 以下操作步驟同6 . 1 . 1 ,6 . 1 . 3 河砂鋸屑培養(yǎng)基的配制: 將紅塘、 玉米粉、 馬尾松邊材鋸屑( 0 . 4 - 0 . 7 5 m m) 、 洗凈干河砂( 0 . 4 -0 . 7 5 m m ) 按1 = 8 . 5 : 1 5 : 1 5 0 ( 重量) 的比 例拌勻， 倒入5 0 0 m L廣口 錐形瓶中， 每瓶為1 6 0 g 該種混合物， 待表面平整后， 在其表面放入 2 片飼木( 互相分開) ， 向瓶內(nèi)徐徐加人 9 0 m L麥芽糖液( 波美度1 . 0 3 ) , 塞棉塞并包防水紙， 在燕汽滅菌器中( 條件同6 . 1 . 1 ) 滅菌1 h 后， 取出， 置于無菌接種室或超凈工作臺上冷卻后備用。6 . 2 試菌的接種與培養(yǎng)6 . 2 . 1 麥芽糖( 或馬鈴薯、 葡萄糖) 瓊脂培養(yǎng)基的接種和培養(yǎng): 在無菌條件下， 將按 6 . 1 . 1 配制好的培養(yǎng)基接種試菌， 然后置于培菌室或培養(yǎng)箱中， 在溫度2 8 士2 *C ， 空氣相對濕度7 5 %-8 5 %的條件下培養(yǎng)7 - 1 0 d ， 備用。6 . 2 . 2 河砂鋸屑培養(yǎng)基的接種和培養(yǎng): 在無菌接種室或超凈工作臺上， 在按6 . 2 . 1 制得的菌絲前緣部分割取直徑5 m m的菌絲塊( 帶有瓊脂培養(yǎng)基) 放在與飼木相接的河砂鋸屑培養(yǎng)基( 6 . 1 . 3 ) 上( 每一片飼木接一塊菌絲塊) ， 塞棉塞并包防水紙， 放在培養(yǎng)室或培養(yǎng)箱中， 在與6 . 2 . 1 相同條件下培養(yǎng)， 直到飼木表面完全被菌絲筱蓋( 約2 周) ， 此時即可放人經(jīng)防腐劑處理過的試樣。6 . 3 試樣準(zhǔn)備及用防腐劑浸注6 . 3 . 1 試樣數(shù)量: 測定一種試驗防腐劑對每一種試菌的抗腐力需4 2 塊試樣。 其中防腐劑需配制5 個梯度濃度， 每一 個濃 度至 少需6 塊 試樣; 6 塊試樣只 用 溶劑或含。 % 有 效成分的 配方處理， 以確 定溶劑或配方中的非有效成分對試菌的抗腐力; 6 塊試樣未經(jīng)任何處理以確定所用試菌的活性。6 . 3 . 2 防腐劑處理溶液的配制: 將防腐劑配成5 個梯度濃度， 使得處理后的試樣中防腐劑保持量有2組低到足以使試菌能腐朽試樣造成明顯的重量損失。 水溶性防腐劑用燕餾水配制. 油類或有機溶劑防腐劑用甲苯或其他溶劑溶解和稀釋。 在測定新防腐劑的抗腐力時， 還應(yīng)包括3 組經(jīng)防腐劑處理的已 知抗腐力的試樣。6 . 3 . 3 試樣的防腐劑浸注( 見圖1 ) : 在行浸注前， 先將每一塊試樣放在4 0 的鼓風(fēng)干燥箱中烘至恒重，稱重， 準(zhǔn)確到。 . 0 1 g ， 該重量( T , ) 為試樣處理前重量。 將用同一濃度防腐劑處理的試樣， 在真空干燥器中真空( 0 . 0 1 M P a ) 浸注處理3 0 m i n ， 等試樣飽和下沉后， 取出， 用滅菌吸水紙吸去每塊試樣表面的浮液， 立即稱重， 準(zhǔn)確到。 . 0 1 g ， 得浸注后的試樣重量( T ) ,6 . 3 . 4 試樣中防腐劑保持量( R ) 的計算按式( 1 ) 進行:R 二D f。 cX 1 0” 。 . “. ” 。 “ “ 。 “ .。 (1)M =T , 一T , . . .。 ” 。 . “ . . ” (2): R 試樣中防腐劑的保持量, k g / m M 試樣吸收防 腐劑溶液重量， 9 ; V 試樣體積, C M , C -防腐劑溶液濃度， %( 重量) 。防腐劑的耐久性試驗， 水溶性防腐劑的流失試驗: 經(jīng)防腐劑處理后的試樣， 經(jīng)充分氣千后， 將同一組保持量的試樣放在中4車式6.6.6 0 0 m L燒杯中的不銹鋼或塑料網(wǎng)架上， 用玻璃壓塊壓住， 按每塊試樣加5 0 m L燕餾水的比例加入蒸餾水。 將燒杯放在真空干燥器中， 抽真空至真空度 9 0 k P a 以下， 保持 3 0 m i n ， 或直到?jīng)]有氣泡逸出液面為止。 消除真空， 在大氣壓下保持2 4 h ， 移去燒杯中的水， 用等量的新鮮蒸餾水取代。 以后， 每隔2 4 h 重復(fù)免費標(biāo)準(zhǔn)網(wǎng)( w w w . f r e e b z . n e t ) 標(biāo)準(zhǔn)最全面免費標(biāo)準(zhǔn)網(wǎng)( w w w . f r e e b z . n e t ) 無需注冊 即可下載L Y / T 1 2 8 3 一 1 9 9 8上述操作， 總共1 4 d 。 將每次取代水和洗滌燒杯壁的洗滌水加在一起， 如有需要， 可用于分析水溶防腐劑中各種成分的流失量。6 . 4 . 2 油類或有機溶劑防腐劑的耐久性試驗: 試樣用油類或有機溶劑防腐劑處理后三天， 開始耐久性試驗， 耐久性試驗是先流失， 后揮發(fā)。6 . 4 . 2 . 1 流失試驗: 將同一組保持量的試樣， 放在6 0 0 m L燒杯內(nèi)的不銹鋼或塑料網(wǎng)架上， 用玻璃重物壓住， 加蒸餾水充滿燒杯， 在室溫條件下保持2 h ， 傾去水， 取出壓塊， 繼續(xù)進行揮發(fā)試驗。6 . 4 - 2 . 2 揮發(fā)試驗: 將裝有試樣的燒杯放入鼓風(fēng)烘箱中， 在5 0 士2 下?lián)]發(fā)1 7 h ,6 . 4 . 3 耐久性試驗后試樣的恒重: 在耐久性試驗后， 將試樣放到鼓風(fēng)烘箱中， 在4 0 下干燥至恒重。 稱重( 每塊試樣準(zhǔn)確至0 . 0 1 g ) , 得試樣在腐朽前的重量( T 3 ) e6 . 5 試樣的滅菌及接種 將同一組保持量的試樣放到盛有用5 m L蒸餾水浸泡的濾紙的密閉容器內(nèi)， 或用多層紗布包好， 放在蒸汽滅菌器中， 在1 0 0 士2 下汽蒸3 0 m i n 。待冷卻后， 在無菌的條件下， 將試樣以寬面與培養(yǎng)瓶中被菌絲覆蓋的飼木相接觸， 放在飼木( 6 . 2 . 2 ) 上。每片飼木上放一塊試樣， 每一培養(yǎng)瓶中放2 塊試樣( 見圖 2 ) e 1 一防水紙; 2 -棉花塞; 3 -5 0 0 m L廣口 錐形瓶攤 一試樣瀝 一飼木; 6 一培養(yǎng)基 圖 2 培養(yǎng)瓶6 . 6 試樣的腐朽試驗 將盛有試樣的培養(yǎng)瓶放置于培養(yǎng)室或培養(yǎng)箱中， 保持溫度2 8 士2 C， 相對濕度7 5 % 8 5 %, 腐朽1 2 周。除檢查時必須開燈外， 其余時間不要開燈。6 . 7 試驗終了時試樣的稱重 經(jīng)1 2 周腐朽后， 將試樣從培養(yǎng)瓶中取出， 仔細(xì)地刮除試樣表面的菌絲和雜質(zhì)。 將試樣放到鼓風(fēng)烘箱中， 在4 0 下干燥至恒重， 逐個稱重， 準(zhǔn)確至。0 1 g 。腐朽后試樣恒重重量為T7 結(jié)果計算計算每塊試樣腐朽后的重量損失百分率( L ) ， 見式( 3 ) ; T，一 TI - = 一一 下 拼 r ， 一 x 1 0 0 1 ， . ”。 . . (3)式中: L 試樣重量損失率， %; T 3 試樣腐朽前恒重重量， 9 ， T d 試樣腐朽后恒重重量， g ,免費標(biāo)準(zhǔn)網(wǎng)( w w w . f r e e b z . n e t ) 標(biāo)準(zhǔn)最全面免費標(biāo)準(zhǔn)網(wǎng)( w w w . f r e e b z . n e t ) 無需注冊 即可下載L Y / T 1 2 8 3 一1 9 9 88 防腐劑棄性極限的評定8 . 1 防腐劑毒性極限值是按本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定的試驗方法所測定的能抑制試菌腐朽的最低保持量。 試樣失重率3 % 可忽略不計， 即腐朽后失重率3 ?/ o 的防腐劑保持量為防 腐劑對該試菌的毒性極限值. 防腐劑對一種試菌的毒性極限值愈小， 則說明 該種防腐劑對這種試菌的抗腐力愈大。 反之， 若防腐劑對一種試菌的毒性極限值愈大， 那么該種防腐劑對這種試菌的擾腐力愈小。82 應(yīng)該將溶劑( 或用。 0 0 有效成分的配方) 處理試樣的失重率和未處理對照試樣的失重率相比較以確定溶劑( 或配方中非有效成分) 對腐朽的影響。 未處理的對照試樣在腐朽后的失重率低于4 5 %的任何試驗都是無效的。9 毒性極限位的貢斷測定 如果由于所選擇的保持量間的間距太大而不能準(zhǔn)確地確定毒性極限值，