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1、熟悉水稻苗期稻瘟病的癥狀特征。 2、學(xué)習(xí)水稻苗期稻瘟病的鑒定方法。,一、目的,二、內(nèi)容說(shuō)明,水稻稻瘟?。≒yricularia oryzae)是水稻生產(chǎn)上的主要病害之一。它是一種真菌病害,分布范圍及廣,遍及世界及我國(guó)各個(gè)稻區(qū),流行速度極快,對(duì)水稻的危害極大。根據(jù)稻瘟病發(fā)生的時(shí)期和部位,可分為苗瘟、葉瘟、節(jié)瘟、頸瘟和粒瘟。以葉瘟發(fā)生最早,在秧苗時(shí)期就可以發(fā)生,并可以進(jìn)行鑒定。,雖然有些品種具有高度抗稻瘟病的特性,但是由于病源菌的生理小種變異頻繁,抗病品種的抗性容易喪失,很快會(huì)變?yōu)楦胁⌒?。這些并非是品種抗病性的改變,而是由于病源菌生理小種的頻繁變化所致。必須不斷了解病原菌的變化,并不斷選育出新的抗病品種用于生產(chǎn),才能有效地控制病害。,稻瘟病發(fā)生和流行的環(huán)境條件,溫度以25-28最為適宜,空氣相對(duì)濕度為96%以上最為適宜。這時(shí)菌絲發(fā)育和分生孢子形成均有利。分生孢子的萌發(fā)還要求有水滴存在。光照對(duì)孢子的形成、萌發(fā)、浸入都有抑制作用。分生孢子萌發(fā)后,浸入組織,經(jīng)四天的潛育期就可出現(xiàn)病班,稻株易感病的生育時(shí)期是四葉期、分蘗期和穗期。偏施氮肥和排灌不良易導(dǎo)至稻瘟病的發(fā)生和流行。稻瘟病的鑒定方法分為人工接種鑒定和自然鑒定兩種。前者常用于苗瘟和葉瘟的鑒定,后者可用于苗瘟、葉瘟、枝梗瘟和頸病等的鑒定。,三、所需用品和操作方法,(一)所需用品 1、材料: (1)抗感稻瘟病特性不同的水稻品種材料數(shù)個(gè)。 (2)供試稻瘟病菌種。從當(dāng)?shù)厥占植紡V、致病力強(qiáng)的主要稻瘟菌代表性生理小種,將不同小種分別進(jìn)行培養(yǎng)繁殖,接種時(shí)混合使用。,2、儀器和用品 高壓滅菌鍋、超凈工作臺(tái),酒精燈、恒溫培養(yǎng)箱,三角瓶、培養(yǎng)皿、接種環(huán)、搪瓷盤、顯微鏡、載玻片、蓋玻片、紗布、普通噴霧器或醫(yī)用噴頭噴霧器、注射器、橡膠管、保溫保濕遮陽(yáng)用品等。 3、藥品 可溶性淀粉、酵母、瓊脂、大麥或高梁種子、無(wú)菌水等。 本實(shí)驗(yàn)將涉及到以下的器具:,(二)操作方法,1、人工接種鑒定法 (1)制備菌種采用酵母淀粉瓊脂培養(yǎng)基 將瓊脂10-15g放入1000ml水中加熱溶化,再加入可容性淀粉(或蔗糖)10g,酵母2g,分裝入試管中,進(jìn)行高壓滅菌。取出后制成斜面,接入所采集的稻瘟菌菌種,放在26-28恒溫箱中培養(yǎng)3-4天后,搖動(dòng)三角瓶中的大麥粒,使菌絲均勻生長(zhǎng)。待菌絲體長(zhǎng)滿大麥粒并變黑時(shí),用自來(lái)水沖洗大麥粒上的菌絲,再將大麥粒薄攤于搪瓷盤中,用1-2層紗布覆蓋以保濕,置于25-28下培養(yǎng)48小時(shí),即可產(chǎn)生出大量孢子,可供接種之用。應(yīng)注意在擴(kuò)大繁殖時(shí)搪瓷盤內(nèi)的濕度不宜保持過(guò)高,否則只長(zhǎng)大量菌絲,而產(chǎn)孢子很少。,病原菌的一級(jí)培養(yǎng)繁殖,病原菌的二級(jí)培養(yǎng)繁殖,(2)育秧 將各供試水稻材料的種子進(jìn)行粒選,各取30-40粒種子,經(jīng)消毒、沖洗、催芽后,在盛有肥沃泥土的搪瓷盤中育秧。每個(gè)盤中最好同時(shí)安排有感病和抗病品種作對(duì)照。在幼苗2葉期定株,每個(gè)材料選留10株生長(zhǎng)一致的秧苗。定株后酌施2-3次氮肥,最后一次施氮肥應(yīng)在接種前3-4天施用,使幼苗生長(zhǎng)嫩綠。一般在3-4葉期接種。如采用注射接種鑒定法,可在秧田中育秧,移植于大田后進(jìn)行接種鑒定。 要注意以下幾點(diǎn):,適時(shí)播種 既要考慮到在自然條件下的濕度和溫度,最利于病菌的浸入,發(fā)病與流行,又要使供試材料正是最易感病的生育時(shí)期,一般在34葉期,日平均氣溫2528 和陰雨高濕,葉面長(zhǎng)時(shí)間(12小時(shí)以上)常有水珠的時(shí)期,最有利于發(fā)病。 育秧方式 采用育秧盤育秧,每盤中最好都安排感病品種對(duì)照,整個(gè)鑒定材料中還應(yīng)安排品種對(duì)照。采用注射接種方法,可以在秧田育秧,后移植于本田。 苗床要增施氮肥(接種前45天),以利于發(fā)病。,(3)接種 噴霧接種:當(dāng)秧苗達(dá)3-4葉期時(shí),先按病菌小種分別配制孢子懸浮液,用100倍顯微鏡檢孢子密度,平均每個(gè)視野應(yīng)有孢子20-25個(gè)(孢密度則為20-25萬(wàn)個(gè)/ml)。然后將不同生理小種的孢子懸浮液混合,用于接種。采用專用噴霧器噴霧接種。噴霧時(shí)要將葉片充分均勻濕潤(rùn)。接種后,在26-28下,用薄膜覆蓋保濕24小時(shí)。然后移至室外,在20-30下保持高濕,培養(yǎng)7天,進(jìn)行病情鑒定。,【孢子懸浮液的配制】將上述產(chǎn)生孢子的大麥粒放入盛有自來(lái)水的燒杯中經(jīng)攪拌制成孢子懸浮液,其孢子濃度在100倍顯微鏡下觀察,平均每個(gè)視野2025個(gè)ml,隨后將不同小種的孢子懸浮液混合成混合孢子懸浮液。 【接種】用專用的普通噴霧器或醫(yī)用喉頭噴霧器噴霧接種。噴霧時(shí)要使葉片上布滿均勻的霧點(diǎn)。接種最好是在專用接種室內(nèi)進(jìn)行,便于保濕保溫。 【保溫、保濕和遮強(qiáng)光 】噴霧接種后,秧苗應(yīng)在2628和保持葉片上有水珠的濕度條件下24小時(shí),而后移于室外,在2030下,經(jīng)4天左右即可見(jiàn)發(fā)病。,注射接種: 【孢子懸浮液的配制】與“噴霧接種”相同。 【接種】一般在水稻67葉期分蘗進(jìn)行,接種的分蘗必須有一張未展開(kāi)的嫩心葉,使用醫(yī)用皮下注射器從葉鞘外側(cè)注入孢子懸浮液,直到多余菌液從心葉中冒出為止。接種后7天調(diào)查植株的發(fā)病情況。 【注意】這種方法把菌液直接注射到葉鞘內(nèi),使心葉較長(zhǎng)時(shí)間處于浸漬狀態(tài),保證了濕度,因此,發(fā)病往往較噴霧法重,一般條件的情況下采用。,2、自然誘發(fā)法 選擇稻瘟病重病區(qū),在多霧天氣和陰雨的條件下,種植鑒定材料,采用自發(fā)誘發(fā)抗病鑒定。,將鑒定材料種植在重病區(qū)肥沃土壤上,施氮水平略高于當(dāng)?shù)刎S產(chǎn)田。如有必要可進(jìn)行人工田間接種,以誘導(dǎo)發(fā)病。每個(gè)鑒定材料一般栽植10-20叢,可移栽或直播,重復(fù)三次。以當(dāng)?shù)乜埂⒏衅贩N作對(duì)照。在鑒定區(qū)周圍應(yīng)種植若干行咸感病的品種作誘發(fā)行,以增加感染強(qiáng)度。保持高濕條件。,對(duì)于數(shù)量較大的世代材料,每個(gè)株系種植2-5行,每行10株(叢),每隔10個(gè)株系種植一個(gè)抗、感病品種作對(duì)照。當(dāng)感病品種達(dá)到高度發(fā)病時(shí),即可進(jìn)行病情鑒定。,3、病情鑒定 一般在接種后7天左右進(jìn)行病情鑒定。 病情鑒定的方法可按全國(guó)稻瘟病鑒定分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)(下表)逐株進(jìn)行,分別記錄每株鑒定的結(jié)果,然后計(jì)算各品種的病情指數(shù)。,也可供參考國(guó)際水稻所將稻瘟病的抗性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)分為10級(jí)(下表)。,苗瘟和葉瘟抗性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn),苗瘟和葉瘟抗性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)(IRRI),四、作業(yè),1.分組進(jìn)行稻瘟病
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