梁超綠康抗菌肽物質(zhì)與小豬下痢LC.ppt

抗菌肽物質(zhì)與預(yù)防小豬下痢 (文獻(xiàn)綜述),綠康生化股份有限公司 梁超博士 2019年6月20日 上海,1,報(bào)告人簡(jiǎn)介,姓名: 梁超 職務(wù): 質(zhì)量與法規(guī)總監(jiān) (綠康生化股份) 學(xué)歷: 博士(美國堪薩斯州立大學(xué)) 經(jīng)歷: 美國建明工業(yè)公司 （亞洲區(qū)技術(shù)總監(jiān)） 美國雅來大藥廠 （中國區(qū)總經(jīng)理） 泰國正大生化集團(tuán) （技術(shù)顧問 ） 美國微營養(yǎng)公司 (亞太區(qū)總經(jīng)理) 論文: 30多篇 專利: 5件,2,抗菌肽是有抗菌活性的肽類化合物(馬衛(wèi)明,2019)。已有1000多種抗菌肽物質(zhì)被研究。中文報(bào)告多達(dá)4-8000份,而英文論文則接近40萬份。 有報(bào)告指出我國仔豬全年平均發(fā)病率46.5%, 因下痢致死亡率為 10.3%, 是影響中國養(yǎng)豬業(yè)發(fā)展的重要因素之一 。 本文是抗菌肽物質(zhì)和小豬下痢有關(guān)的文獻(xiàn)綜述。,3,4,( 馬衛(wèi)明, 2019, 中國農(nóng)業(yè)大學(xué)博士論文),（ 同時(shí)具有抗菌特點(diǎn)及肽結(jié)構(gòu)這兩種性質(zhì)的物質(zhì) = “抗菌肽”,“肽結(jié)構(gòu)” = 幾至幾百個(gè)氨基酸呈線性或環(huán)狀聚合物,抗菌肽研究概述 (1000多種抗菌肽物質(zhì)),5,抗菌肽與小豬下痢,母豬奶水中的乳鐵蛋白 腸膜蛋白及其抗菌肽物質(zhì) 微生物源抗菌肽 桿菌肽 硫粘菌素 基因工程抗菌肽 溶菌酶 天蠶素 結(jié)論,6,Lactoferrin (乳鐵蛋白),1959年Groves用色譜得到純的紅色的含鐵的糖蛋白 乳鐵蛋白在人乳中的濃度為1.0-3.2mg/ml，是普通牛乳中的10倍（牛乳中含量為0.02-0.35mg/ml）,而人初乳中乳鐵蛋白可達(dá)6-14mg/ml. 一般推測(cè), 其他哺乳動(dòng)物的初乳中的乳鐵蛋白也很高 乳鐵蛋白對(duì)鐵離子的吸附性超強(qiáng), 一般認(rèn)為它可以奪走細(xì)菌生長所需的鐵質(zhì)而抑制細(xì)菌的生長，達(dá)到防治下痢的效果。,7,8,鐵離子對(duì)母豬奶水中下痢細(xì)菌生長的影響,Growth in 12 hrs (Colony forming units),O157 E. coli Clostridium perfringens Salmonella typhimurium,Klasing & Knight, 1979,10,( 盧蓉蓉 等, 2019),LF = 乳鐵蛋白,11,( 楊安樹 等, 2019),12,( 黎觀紅, 等, 2009 ),13,( 侯振平 等, 2019 ),Liang 等(1993) 報(bào)道了人 乳鐵蛋白在啤酒酵母中的表達(dá), 然后通過酵母轉(zhuǎn)化酶分泌信號(hào)序列將重組人乳鐵蛋白分泌至細(xì)胞外, 產(chǎn)率為 15 -20 mg/L。 Ward 等(1992)把合成乳鐵蛋白的遺傳信息轉(zhuǎn)移到曲霉菌中, 然后在適宜條件下進(jìn)行培養(yǎng), 從而實(shí)現(xiàn)了乳鐵蛋白的優(yōu)化生產(chǎn), 這是通過發(fā)酵大量生產(chǎn)乳鐵蛋白的重大突破。,14,乳鐵蛋白的轉(zhuǎn)基因表達(dá),圍產(chǎn)期中，提高母豬健康，保證乳鐵蛋白數(shù)量和質(zhì)量 在母豬產(chǎn)前14天至產(chǎn)后21天，母豬飼料中添加 250ppm MDAB(必恩迪), 能有效防治由產(chǎn)氣莢膜梭菌引起的乳豬腸炎 。（美國 FDA法規(guī) ， 21 CFR Ch. I 558.76, ),15,小結(jié) 1,豬母乳含有豐富的乳鐵蛋白, 是預(yù)防仔豬下痢的“抗菌肽”最佳來源 在母豬圍產(chǎn)期(產(chǎn)前-產(chǎn)后)的母豬飼料中使用抗菌肽產(chǎn)品能減少仔豬下痢現(xiàn)象, 有可能是母豬健康保證了奶水質(zhì)量和乳鐵蛋白抗菌肽含量的結(jié)果,16,抗菌肽與小豬下痢,母豬奶水中的乳鐵蛋白 腸膜蛋白及其抗菌肽物質(zhì) 微生物源抗菌肽 桿菌肽 硫粘菌素 基因工程抗菌肽 溶菌酶 天蠶素 結(jié)論,17,豬小腸中抗菌肽研究成果舉例,18,（馬衛(wèi)明， 2019,中國農(nóng)業(yè)大學(xué)博士論文),19,( 趙燕飛 等, 2019 ),20,( 王春維,2019 ),21,( 徐軍等, 2019 ),腸膜蛋白對(duì)教槽料的影響,22,腸膜蛋白,( 司馬博鋒 等, 2019),小結(jié) 2,豬腸膜抗菌肽開發(fā)還處于研究階段. 使用豬腸膜粉(加工后副產(chǎn)品)作為腸膜抗菌肽來源養(yǎng)豬對(duì)防治仔豬下痢有一定的效果 直接使用腸膜粉(抗菌肽)存在生物安全問題 通過基因工程菌生產(chǎn)腸膜抗菌肽仍需研究,23,抗菌肽與小豬下痢,母豬奶水中的乳鐵蛋白 腸膜蛋白及其抗菌肽物質(zhì) 微生物源抗菌肽 桿菌肽 硫粘菌素 基因工程抗菌肽 溶菌酶 天蠶素 結(jié)論,24,細(xì)菌源抗菌肽的比較,地衣芽孢菌是全球幾十個(gè)國家所批準(zhǔn)使用的益生菌（直飼微生物）,25,FDA法規(guī)尚未批準(zhǔn)硫粘，恩拉和那西肽作為飼料中長期添加的藥物,桿菌肽與硫粘菌素簡(jiǎn)介,26,桿菌肽的抑菌機(jī)理及其與其它抗菌素的區(qū)別,27,( Smith & Weinberg, 1962),桿菌肽對(duì)動(dòng)物結(jié)腸中產(chǎn)氣莢膜梭菌 的抑制作用,28,( Stutz, et al., 1983),29,( Nurmi & Rantala, 1974 ),兩種桿菌肽產(chǎn)品的理化差異,30,美國 FDA關(guān)于桿菌肽的法規(guī) ( 21 CFR Ch. I 558.76, ),31,亞甲基水楊酸桿菌肽,國家五類新獸藥 具有“生產(chǎn)許可證”、“獸藥添字文號(hào)” 成分確定，效果明確, 暫無耐藥菌株 商品名: “必恩迪”( 含量: 15% ) 該產(chǎn)品的研究報(bào)告有: 8000多份 scholar.google/scholar?hl=zh-CN&q=Bacitracin+methylene+disalicylate&btnG=&lr=,32,33,( 陳紹峰, 2019 ) ,南京農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士論文,硫粘菌素對(duì)內(nèi)毒素的中和作用,34,( Cooperstock, M. S., 1974),鱟試劑反應(yīng) 呈陰性,35,( 牛志強(qiáng), 2019 ),36,處理 1 組：60 ppm 鹽霉素，+ 20 ppm 進(jìn)口硫酸粘桿菌素 處理 2 組：60 ppm 鹽霉素，+ 20 ppm 國產(chǎn)硫酸粘桿菌素,（王寧， 2019 , 中國農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士論文）,37,（趙志杰等, 2019 ）,小結(jié) 3,桿肽和硫粘是最常使用在仔豬料中的抗菌肽獸藥添加劑, 效果明顯和安全 由于農(nóng)業(yè)部法規(guī)限制,目前在仔豬飼料中的使用受到影響. 需要研究更好的使用方式(如配伍等) 及探討申請(qǐng)預(yù)防仔豬下痢的”專用配方”,38,抗菌肽與小豬下痢,母豬奶水中的乳鐵蛋白 腸膜蛋白及其抗菌肽物質(zhì) 微生物源抗菌肽 桿菌肽 硫粘菌素 基因工程抗菌肽 溶菌酶 天蠶素 結(jié)論,39,40,( 朱伶俐, 2019 , 江南大學(xué)碩士論文 ),溶菌酶抗菌肽(Lys-Pe)對(duì)不同菌種的抑菌情況,41,( 朱伶俐, 2019 , 江南大學(xué)碩士論文 ),42,( 邵春榮 等, 2019 ),( 溶菌酶制劑由雞蛋清經(jīng)鹽析、凍干后制成,每毫克含溶菌酶1500單位。 ),43,( 邱偉海, 2019 ),44,( 朱軍英, 2009 ),45,( 張鋒,2019, 山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士論文),( 開食料中添加溶菌酶可溶性粉劑（5000IU/mg），每 100kg 飼料中添加 10、5.0、2.5g；傳統(tǒng)藥物對(duì)照組每 100kg 飼料中添加強(qiáng)力霉素 200g；空白對(duì)照組不添加任何藥物 ),46,( 網(wǎng)絡(luò)資訊 ),小結(jié) 4,1）轉(zhuǎn)基因溶菌酶的安全性如何保證？ 2）過多的溶菌酶是否干會(huì)擾內(nèi)源溶菌酶的產(chǎn)生和分泌？ 部分人體對(duì)溶菌酶有過敏現(xiàn)象(付 琴等, 2019) , 是否有部分仔豬也會(huì)有過敏問題 ?,47,天蠶素,1975 年瑞典科學(xué)家G.Boman 等人從惜古比天蠶(Hyatophoracecropia)蛹中誘導(dǎo)分離得到一種殺菌肽，并將其命名為cecropin（天蠶素）。目前已經(jīng)在多種生物中發(fā)現(xiàn)了大約有 90多 種天蠶素基因。 天蠶素抗菌肽 是根據(jù) cecropin A 和 cecropin6D 設(shè)計(jì)合成的含 37 個(gè)氨基酸殘基的雜合肽, 在枯草芽孢桿菌中成功表達(dá)的基因工程產(chǎn)物 ( 王阿榮, 2019, 內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士論文 ) 中國知識(shí)網(wǎng)上有270多篇關(guān)于天蠶素的研究論文,48,天蠶素抗菌肽 在斷奶仔豬飼糧中的應(yīng)用效果,49,（溫劉發(fā) 等， 2019 ）,天蠶素抗菌肽由華南農(nóng)業(yè)大學(xué)蠶業(yè)服裝系黃自然教授提供,其活性為4000單位/g。,50,溫劉發(fā)等， 2019。 廣東蠶業(yè) 41( 1) : 39- 42,抗菌肽組按 2ml/kg 飼料或 0.5ml/kg 飼料的劑量。抗生素組按強(qiáng)力霉素 150mg/kg 及阿散酸 100mg/kg 的劑量, 混合后飼喂仔豬。,51,( 黃亞東 等, 2019 ),“天蠶素抗菌肽”對(duì)斷奶仔豬生長性能和 免疫效果的影響,52,（ 戴求仲, 2019 ),53,( 李永新, 2009 ),54,( 王阿榮, 2019, 內(nèi)蒙古農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士論文 ),試驗(yàn) I 組: 180 g/t 的天蠶素抗菌肽 試驗(yàn) II 組: 250 g/t 的天蠶素抗菌肽 試驗(yàn) III 組: 320 g/t 的天蠶素抗菌肽,55,( 杜淑環(huán), 2019 ),小結(jié) 5,天蠶素抗菌肽的效果是明顯的, 但其產(chǎn)品定位尚不明確: 新獸藥? 新飼料原料 ? 轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的安全性問題 safehoo/Essay/food/201903/263364.shtml,56,抗菌肽與小豬下痢,母豬奶水中的乳鐵蛋白 腸膜蛋白及其抗菌肽物質(zhì) 微生物源抗菌肽 桿菌肽 硫粘菌素 基因工程抗菌肽 溶菌酶 天蠶素 結(jié)論,57,被用于防治小豬下痢的抗菌肽舉例,58,獲得免疫與固有免疫的比較 *,59,（Mukesh Pasupuleti, 2009, 瑞典 Lund 大學(xué)博士論文 ),( * 以下認(rèn)知截止到目前而已 ! ),基因工程抗菌肽的問題,活性：基因工程抗菌肽活性不穩(wěn)定 毒性：有強(qiáng)烈的腎毒性 功能與結(jié)構(gòu)：尚需要研究 體內(nèi)穩(wěn)定性：可能被胰蛋白酶水解 耐藥性：長期使用也會(huì)產(chǎn)生 法規(guī)：暫是還沒有被“正式批準(zhǔn)”作為飼料,60,（韓文瑜,孫長江， 2009 ）,61,gs.people/n/2019/0618/c183342-18882163.ht