毒理學(xué)水生毒性試驗(yàn)設(shè)計(jì).doc

某化合物A,在水中溶解度10%,在丙酮中的溶解度為100%,不揮發(fā).在pH5.4mg/L,pH值為6.4-7.0，水溫(222)?？傆捕?25250mg/L(以CaCO3計(jì))。自然光照，實(shí)驗(yàn)周期96h，實(shí)驗(yàn)方式采用靜水式，96h之內(nèi)不更換試液。1.4 實(shí)驗(yàn)生物 受試斑馬魚購于上海市楊浦區(qū)花鳥蟲魚市場(chǎng)，體長(zhǎng)為(30.000.75)mm，體重量為（0.200.01）g.行為活潑，反應(yīng)靈敏，無畸形，逆水性強(qiáng)。魚苗經(jīng)w=5%食鹽水消毒后進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室，用曝氣48h的自然脫氮自來水在實(shí)驗(yàn)室經(jīng)過馴養(yǎng)710d后方可實(shí)驗(yàn)，馴養(yǎng)期間死亡率應(yīng)小于3%。實(shí)驗(yàn)前24h停止喂飼，實(shí)驗(yàn)期間不喂食，每天清除糞便及食物殘?jiān)?保證每天實(shí)驗(yàn)期間光照12h。2 實(shí)驗(yàn)方法 先做預(yù)實(shí)驗(yàn)，以確定化合物A對(duì)斑馬魚24h100%致死的最低濃度和96h不引起死亡的最高濃度。實(shí)驗(yàn)在2L的燒杯中進(jìn)行，設(shè)置間隔較大的濃度梯度，盡可能使LC50在設(shè)置的濃度范圍內(nèi)，每個(gè)濃度設(shè)平行。實(shí)驗(yàn)開始后每隔一段時(shí)間觀察記錄，整理24h、48h，72h，96h觀察記錄，需要統(tǒng)計(jì)各容器試驗(yàn)魚的存活情況和行為特征，實(shí)驗(yàn)觀察時(shí)發(fā)現(xiàn)死魚需要及時(shí)撈出。濃度/(mg/l)014.55.07.010死亡率/%00080100100從預(yù)實(shí)驗(yàn)得到的無死亡濃度和100%死亡濃度之間，以實(shí)驗(yàn)配置好的母液以及稀釋水，按照一定的間隔設(shè)置6個(gè)實(shí)驗(yàn)濃度組（4.5mg/L, 5.0mg/L, 5.5mg/L, 6.0mg/L, 6.5mg/L, 7.0mg/L）和一個(gè)空白對(duì)照組（曝氣自來水）以及助溶劑（丙酮）對(duì)照組，每組設(shè)三個(gè)平行。每組10條斑馬魚，以96h為一個(gè)實(shí)驗(yàn)周期，采用靜水流的方式，在24h，48h，72h，96h后分別觀察斑馬魚存活狀況，并記錄溶解氧、pH、溫度情況，魚的死亡情況及行為變化等等，還要及時(shí)撈出死魚。最終確定魚死亡50%時(shí)受試物的濃度，半數(shù)致死濃度用24h-LC50、48h-LC50、72h-LC50、96h-LC50來表示，判斷斑馬魚死亡需要用玻璃棒輕輕按壓斑馬魚的尾部，如果沒有反應(yīng)即認(rèn)為斑馬魚已經(jīng)死亡。死亡率濃度（mg/L）24h48h72h96hX1x2x3平均值x1x2x3平均值x1x2X3平均值x1x2x3平均值自來水空白丙酮空白4.55.05.56.06.57.0 根據(jù)化合物A對(duì)斑馬魚的致死數(shù)據(jù)計(jì)算出其平均死亡率，再轉(zhuǎn)化為概率單位，求出概率單位與化合物A濃度對(duì)數(shù)的回歸方程，計(jì)算出化合物A的LC50，具體結(jié)果見表3. 污染物實(shí)驗(yàn)時(shí)間/h相關(guān)系數(shù)LC50（mg/L）化合物A24487296根據(jù)魚類毒性分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)，LC5010000mg/L為微毒或無毒。再以此判斷含該化合物的廢水的毒性.關(guān)于含化合物A的廢水毒性實(shí)驗(yàn),實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)廢水濃度100、50、40、20、10、5和0(CK)7個(gè)處理，3次重復(fù)。每組廢水中均放入10尾斑馬魚,實(shí)驗(yàn)周期為96h,開始暴露前,試驗(yàn)魚逐條測(cè)量全長(zhǎng)和體重,各組之間試驗(yàn)魚的全長(zhǎng)和體重均無顯著性差異.采用自然光照,對(duì)照組和實(shí)驗(yàn)組同時(shí)進(jìn)行試驗(yàn),試驗(yàn)期間每24h更換一次試液.為防止餌料影響,試驗(yàn)期間不喂食.每?jī)尚r(shí)觀察記錄1次斑馬魚的生活作息;分別于4h,8h,12h,24h,48h,96h時(shí)統(tǒng)計(jì)斑馬魚的死亡率.廢水濃度(%)不同實(shí)驗(yàn)時(shí)間魚的死亡率(%)4h8h12h24h48h96h0510204050100根據(jù)斑馬魚在各觀察時(shí)間段的死亡率,計(jì)算出LC50, SC,MAC和Tua急性毒性特征參數(shù)。（1） 半致死濃度（LC50）：采用概率單位-質(zhì)量濃度直線回歸計(jì)算。（2） 安全濃度(SC):SC=0.1各觀察時(shí)段的半致死濃度。（3） 毒性累積程度（MAC）:MAC=某觀察時(shí)段的半致死濃度差值/最初觀察點(diǎn)與實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)的半致死濃度差值100%。分析斑馬魚對(duì)含A廢水的蓄積與降減動(dòng)態(tài)。（4） 急性毒性單位(Tua)=100%/LC50 總結(jié)：在上環(huán)境毒理學(xué)的時(shí)候，老師講到，對(duì)于水生生物的毒性試驗(yàn)的一般程序：1，實(shí)驗(yàn)條件的準(zhǔn)備。2，實(shí)驗(yàn)生物的選擇與準(zhǔn)備。3，稀釋水。4，毒物準(zhǔn)備。5，測(cè)試方法選擇與測(cè)試重點(diǎn)的確定。6，實(shí)驗(yàn)濃度的選擇與設(shè)計(jì)。7，指標(biāo)觀測(cè)。8，數(shù)據(jù)分析與統(tǒng)計(jì)。9，得出相應(yīng)結(jié)論。綜合比較來看，我還是緊緊圍繞著這條主線走。當(dāng)然此次設(shè)計(jì)試驗(yàn)，除了結(jié)合平時(shí)尹老師課堂上所講的知識(shí)之外，本人也查閱了大量的相關(guān)毒性實(shí)驗(yàn)文獻(xiàn)，其中還有向劉樹深老師請(qǐng)教，與同學(xué)們的交流的過程，個(gè)人感覺是學(xué)到了很多課本以外的東西，也體會(huì)到了實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的難度。如同平常所做的實(shí)驗(yàn)，那些都