性傳播疾病的實(shí)驗診斷.ppt

性傳播疾病的實(shí)驗診斷 第一節(jié)概述 一 概述二 重點(diǎn)介紹艾滋病 梅毒 淋病 非淋菌性尿道炎 生殖器皰疹 尖銳濕疣 軟下疳 性病性淋巴肉芽腫的臨床檢測方法及臨床意義 2個概念 性病 VD 是指通過性交傳染的 具有明顯生殖器損害癥狀的全身性疾病 4種性傳播疾病 STD 是指通過性接觸可以傳染的一組傳染病 在我國 人們簡稱為性病 包容20余種 概述 歷史上 傳統(tǒng) 把通過性活動傳染的疾病稱為性病 Venerealdiseases VD 主要指 梅毒 syphilis 淋病 gonorrhea 性病肉芽腫軟性下疳四種又稱 經(jīng)典性病 概念更新 上世紀(jì) 年代以來發(fā)現(xiàn) 許多病原體也可以通過性生活傳播迄今為止大約已發(fā)現(xiàn) 余種性病同時 四種性病大都有了明確診斷手段及治療方法 明顯地得到了抑制1970年 世界衛(wèi)生組織把舊名稱 性病 改為 性傳播疾病 Sexuallytransmitteddiseases STD 我國重點(diǎn)防治的性病 艾滋病 AIDS 獲得性免疫缺陷綜合癥 HIV梅毒 syphilis 由梅毒螺旋體梅毒亞種所致慢性性傳播疾病尖銳濕疣 condylomaacuminatum 由人乳頭瘤狀病毒 hpv 引起淋病 Gonorrhea 淋病奈瑟菌生殖器皰疹 genitalherpes 由單純皰疹病毒感染非淋菌性尿道炎 NGU 沙眼衣原體和解脲脲原體軟下疳 chancroid 杜克嗜血桿菌所致生殖器部位性病性淋巴肉芽腫 lymphogranulomaVenereum 由沙眼衣原體引起 第四性病 STD的診斷 病史 接觸史臨床表現(xiàn)實(shí)驗室檢查STD監(jiān)測和療效判斷的重要依據(jù) 實(shí)驗室檢查 一 艾滋病的實(shí)驗室診斷 理論依據(jù) 大量血清學(xué)流行病學(xué)資料 V 幾周 IgM抗體出現(xiàn)很快 IgG抗體出現(xiàn)并一直存在 無免疫源性 實(shí)驗?zāi)康?檢測抗 HIV抗體 IgG主 用于診斷實(shí)驗 HIV血清學(xué)初篩試驗HIV血清學(xué)確證試驗 HIV血清學(xué)初篩試驗 一 酶聯(lián)免疫吸附試驗ELISA法的基本原理是免疫反應(yīng)物通過化學(xué)或免疫學(xué)的方法形成酶結(jié)合物 酶結(jié)合物能與待檢樣品中相應(yīng)的抗原或抗體結(jié)合成為免疫復(fù)合物 然后加入酶底物 經(jīng)酶的催化或水解作用 無色底物產(chǎn)生顏色 用肉眼 分光光度計觀察結(jié)果 初篩實(shí)驗方法 明膠顆粒凝集試驗 PA 雙抗原夾心法 p24抗原免疫熒光試驗 IFA 標(biāo)本要求 新鮮全血2ml 無抗凝 確證實(shí)驗方法 二 免疫印跡試驗基本原理 HIV全病毒抗原經(jīng)過PAGE電泳 將分子量大小不等的蛋白帶分離開來 然后再把這些已經(jīng)分離的不同蛋白帶電轉(zhuǎn)移到硝酸纖維素膜上 將此膜切割成條狀 每一條硝酸纖維素膜上均含有經(jīng)電泳分離過的HIV病毒抗原 將待檢血清樣品用稀釋液稀釋成1 100 再把它直接加到硝酸纖維素膜上 恒溫震蕩 使其充分接觸反應(yīng) 血清中若含有抗HIV抗體 就會與膜條上的抗原帶相結(jié)合 加入抗人IgG酶結(jié)合物和底物后 抗體結(jié)合帶呈現(xiàn)紫褐色 臨床意義 初篩試驗 陰性結(jié)果 基本可排除HIV感染 必要時2 3月復(fù)查陽性結(jié)果 其它初篩方法重復(fù)試驗 陽性報告HIV抗體待查 進(jìn)一步做確證試驗確診試驗 結(jié)果陽性的標(biāo)本可報告HIV抗體陽性 其它相關(guān)試驗 用于預(yù)后及抗病毒治療療效觀察實(shí)驗室指標(biāo)的檢測 1CD4 細(xì)胞和CD8 細(xì)胞計數(shù)CD4 淋巴細(xì)胞正常值為500 1600個 ul CD4 CD8 的正常比值為 1 5 1 7 12病毒載量測定 viralload VL 實(shí)際上 體內(nèi)復(fù)制的病毒的數(shù)量是不能直接測量的 一般用血漿中HIVRNA的拷貝數(shù)代表HIV的病毒載量 HIV病毒載量與疾病進(jìn)展速率和預(yù)后有強(qiáng)相關(guān)關(guān)系 其它相關(guān)試驗 P3實(shí)驗室 病毒分離培養(yǎng)相關(guān)抗原檢測 二 梅毒的臨床分期 后天梅毒 一期梅毒二期梅毒三期梅毒 晚期梅毒 先天梅毒 梅毒一期皮損 硬下疳 梅毒二期皮損 梅毒晚期損害 二 梅毒的實(shí)驗室診斷 梅毒 由梅毒螺旋體梅毒亞種所致慢性性傳播疾病 檢查病原體的試驗測抗體 血清學(xué)檢查 檢查病原體的試驗 暗視野顯微鏡檢查法 WHO推薦 臨床意義 直接檢查到梅毒螺旋體 可確證梅毒 是早期梅毒檢測最好的方法 梅毒螺旋體抗體檢測 兩組試驗 1 非密螺旋體抗原試驗 初篩 2 密螺旋體抗原試驗 確證 兩組試驗的目的都是檢測抗體非密螺旋體抗原試驗 抗 脂質(zhì)抗體 非特異性 密螺旋體抗原試驗 抗 梅毒螺旋體抗體 特異性 非密螺旋體抗原血清學(xué)試驗 方法 1 性病研究實(shí)驗室試驗 VDRL2 不加熱血清反應(yīng)素試驗 USR3 快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗 RPR4 甲苯胺紅試驗 TRUST 四種初篩方法 原理 當(dāng)人體感染梅毒螺旋體4周 10周左右后 血清中可產(chǎn)生一定數(shù)量的抗類脂質(zhì)抗原的非特異性反應(yīng)素抗體 主要是IgM和IgG 目的 抗 脂質(zhì)抗體 四種初試驗篩方法的比較 密螺旋體抗原血清學(xué)試驗 原理 人體感染梅毒螺旋體后會產(chǎn)生特異性梅毒螺旋體抗體 可通過檢測該抗體對梅毒進(jìn)行診斷 密螺旋體抗原血清學(xué)試驗 1 梅毒螺旋體血球凝集試驗 TPHA 2 梅毒螺旋體明膠凝集試驗 TPPA 快速 簡便 準(zhǔn)確而青睞3 熒光梅毒螺旋體抗體吸收試驗 FTA ABS 4 梅毒螺旋體抗體酶聯(lián)免疫吸附試驗 TP Ab 它用雙抗原夾心法 同時檢測IgM IgG抗體 故可用于早期診斷 并避免了單片段抗原混合干擾 其他實(shí)驗 免疫印跡法 是一種診斷梅毒感染的特異性實(shí)驗 PCR試驗 多聚酶鏈反應(yīng)檢測梅毒螺旋體DNA 三 淋病 gonorrhea 淋病 由淋病奈瑟菌引起的泌尿生殖系統(tǒng)化膿性炎癥 是八種性病中發(fā)病人數(shù)最多的一種 可入侵泌尿生殖道其他部位 附睪 前列腺炎 輸卵管炎及盆腔炎甚至經(jīng)血液傳播全身其他部位淋菌性關(guān)節(jié)炎 心內(nèi)膜炎及腦膜炎等 淋菌性尿道炎 淋病的實(shí)驗室檢查 1 涂片染色革蘭陰性卵圓形或腎形 成雙排列 有些膿細(xì)胞內(nèi)可有許多淋球菌2 分離培養(yǎng)及鑒定 新生兒淋菌性結(jié)膜炎 實(shí)驗室診斷步驟 淋菌感染男性患者女性患者尿頻 尿急 尿道分泌物膿性宮頸分泌物 無癥狀 膿性分泌物涂片G 染色拒絕做 G 雙球菌細(xì)胞內(nèi)取宮頸分泌物 初步診斷 MTM培養(yǎng)基培養(yǎng) 治療典型菌落形態(tài)G 雙球菌 OX 糖發(fā)酵試驗 確診 培養(yǎng)標(biāo)本采集 關(guān)鍵是深度一定要夠男性取材 拭子深入尿道2cm 4cm處并轉(zhuǎn)動蘸取少量粘膜女性取材 子插入宮頸1 2厘米處稍轉(zhuǎn)動并停留10秒 30秒 以獲得上皮細(xì)胞 取出棉拭子時不要碰到陰道壁避免受陰道分泌物污染 其他相關(guān)試驗 1 直接免疫銀光染色2 SPA協(xié)同實(shí)驗3 酶反應(yīng)4 固相酶免疫試驗 四 非淋菌性尿道炎 NGU 病因 沙眼衣原體CT D K 40 50 支原體 UU MH 20 30 陰道滴蟲 白念和 10 20 NGU CT檢測 血清學(xué)試驗對診斷衣原體感染價值有限1 迄今止尚無哪一種試驗完全適合所有種類的CT的檢測2 CT感染輕微 潛伏期長 影響急性期采血時間配對血清難以得到3 血清抗體持續(xù)時間長 單一血清標(biāo)本只能顯示曾經(jīng)感以前染過CT4 雙份血清效價比有4被增高才有臨床意義 NGU CT檢測方法 1 細(xì)胞涂片的吉姆薩染色 發(fā)現(xiàn)一定數(shù)量的包涵體 原體呈紫色 包涵體呈金黃色 NGU CT檢測方法 2 涂片碘染色法 包涵體中有糖原遇碘呈棕色 敏感性差 不適用于NGU3 直接免疫熒光法染色 敏感性93 特異性96與培養(yǎng)并列為金標(biāo)準(zhǔn)對試劑 顯微鏡質(zhì)量要求很高 操作人員技術(shù)要求高 價格昂貴4 衣原體酶免疫測定EIA 抗CT單抗包被固相載體 標(biāo)本再 多克隆抗體 IgG酶標(biāo)抗體 酶標(biāo)儀檢測適用于批量篩查NGU衣原體感染5 衣原體分離培養(yǎng) McCoy Hela BHK 21細(xì)胞培養(yǎng) NGU CT檢測方法 6 PCR7 立明 Clearview 衣原體快速免疫測定法 原理 沙眼衣原體檢測試劑盒采用高特異性的抗體抗原反應(yīng)及免疫層析分析技術(shù)來定性檢測臨床標(biāo)本中是否含有沙眼衣原體抗原 該試驗是目前診斷NGU衣原體感染普遍采用的方法 沙眼衣原體膠體金法 檢驗原理 用抗衣原體脂多糖單克隆抗體和羊抗鼠IgG多克隆抗體分別固定于固相硝酸纖維素膜 并和膠體金標(biāo)記的另一抗衣原體脂多糖單克隆抗體及其他試劑 應(yīng)用膠體金免疫層析技術(shù) 采用雙抗體夾心的形式建立的衣原體檢測方法 Colloidalgoldimmunochromatographystrip 9 檢驗結(jié)果的解釋 陰性結(jié)果 僅質(zhì)控線 C 有一條紅線 陽性結(jié)果 C和T都有一條紅線 無效結(jié)果 質(zhì)控線不出現(xiàn)紅線 注意 檢測線很強(qiáng)時 質(zhì)控線可能相對減弱 屬正?，F(xiàn)象 注意事項 1試驗敏感性87 特異性98 8 但標(biāo)本中需要有一定的抗原量 量低于敏感性可出現(xiàn)假陰性 2 檢測試劑盒僅證明標(biāo)本中存在沙眼衣原體抗原 不能區(qū)別是衣原體感染還是攜帶者 也不能區(qū)別衣原體死活 不能作為判愈試驗 3 標(biāo)本采集是關(guān)鍵 NGU 支原體感染 非淋支原體感染 UU為主 MH次之我國報道7個地區(qū)健康人攜帶率解脲支原體 UU 占10 59 人型支原體 MH 占5 34 正常菌群的組成部分 支原體檢測方法 1 分離培養(yǎng)2 聚合酶鏈反應(yīng) PCR DNA探針技術(shù)診斷3 血清學(xué)檢測 代謝抑制試驗 ELISA 間接免疫熒光都僅用于科研和流行病學(xué)調(diào)查上 不適于診斷用 支原體培養(yǎng) 固體培養(yǎng)基 生長耗時5天左右液體培養(yǎng)基 原理 UU 尿素 氨PH 含酚紅培養(yǎng)基由黃 紅MH 精氨酸 氨PH 含酚紅培養(yǎng)基由黃 紅 生殖道支原體 方法 R1 R2 運(yùn)送 溶解 R1 R2 接種試劑條 55 l 2滴礦物油 OUuMhUuMh 104 1044211410 1212 MycoplasmaIST2 37 C培養(yǎng)24 48h 紅色 陽性 黃色 陰性 五 生殖器皰疹實(shí)驗室檢查 病因 單純皰疹病毒HSVSHV 1主要感染上半身部位 15歲以下多 SHV 2主要感染腰以下部位 多見于青春期后 生殖器皰疹檢查方法 病原體檢查 1 病毒體外細(xì)胞培養(yǎng)和鑒定 技術(shù)條件要求較高 不宜用于臨床2 單純皰疹病毒抗原檢查 1 ELISA 3 DNA雜交 2 IFA 4 PCRPCR和DNA不能單獨(dú)作為確診指標(biāo)病原學(xué)檢查ELISA有敏感性高 特異性強(qiáng) 準(zhǔn)確率高應(yīng)用面廣 操作簡便等優(yōu)點(diǎn) 生殖器皰疹檢查方法 血清學(xué)檢查 抗體檢測 所有用于檢測抗原的方法經(jīng)適當(dāng)改良后 均可用于抗體檢查SHV感染個體中的不均一性和不穩(wěn)定性成年人群中有很高的HSV抗體檢出率 大多獲自隱性感染 且抗體的存在尚不能完全保護(hù)機(jī)體免受皰疹病毒的重復(fù)感染 HSV抗體檢測陽性對臨床診斷幫助不大 對新生兒 嬰幼兒感染診斷有一定意義 六 尖銳濕疣實(shí)驗室檢查 病因 人類乳頭瘤病毒 HPV發(fā)病率 持續(xù)增長 我國急劇上升 已占各種性病第二位 六 尖銳濕疣實(shí)驗室檢查 尖銳濕疣檢測 典型的尖銳濕疣通常不需作實(shí)驗室檢測便可作出診斷臨床醫(yī)生觀察為主醋酸白試驗有助于檢查不明顯的疣 尖銳濕疣檢查方法 1 細(xì)胞學(xué)檢查 病理皮損活檢 發(fā)現(xiàn)有HPV感染的特征性凹空細(xì)胞的組織病理變化特點(diǎn) 較可靠的辦法 2 組織病理 基本上為角化不完整 棘層深層肥厚 奶頭瘤樣增生 粒層和棘層上部細(xì)胞有顯著的空泡形成 棘細(xì)胞基底細(xì)胞有特別數(shù)量之核皴裂 很像癌變 但細(xì)胞排裂規(guī)則 且增生上皮和真皮之間規(guī)模清楚 尖銳濕疣檢查方法 3 核酸雜交試驗 PCR皮損活檢中用抗原或核酸檢測顯示有HPV感染 常見的是HPPV6 11型 陽性率可達(dá)80 左右 當(dāng)真性和假性尖銳濕疣鑒別困難時 可用HPV DNA原位分子雜交進(jìn)行鑒別 此法是目前一種敏感性和特異性很高的鑒別手段 陽性率可高達(dá)90 以上 七 軟下疳實(shí)驗室檢查 病因 杜克雷嗜血桿菌診斷標(biāo)準(zhǔn)1 有不潔性交史2 會陰部發(fā)生于1 2個潰瘍 周圍可發(fā)生多個衛(wèi)星狀小潰瘍 疼痛明顯 基底軟 上有膿性分泌物 腹股溝淋巴腫大 觸痛 化膿 軟下疳實(shí)驗室檢查 疾病特征 1 潛伏期1 30天 發(fā)病快進(jìn)展快感染道潰瘍4 6天2 初起一個或數(shù)個言行丘疹或結(jié)節(jié)周圍紅斑 24H糜爛或潰瘍圓形或橢圓形 相鄰的可融合成大潰瘍邊緣不整齊 病變周圍可發(fā)生衛(wèi)星狀病變 3 潰瘍有膿性分泌物或蠟樣膿苔 常有潛蝕性壞死和穿鑿性竇道 晚期基地肉芽增生 形成不規(guī)則瘢痕可自愈可再發(fā)4 潰瘍不形成硬韌基底 并變軟 明顯區(qū)別于硬下疳疾病初起都在生殖器也可見肛門 大腿上部 口腔和手 軟下疳 軟下疳實(shí)驗室檢查方法 1 涂片檢查 取軟下疳潰瘍邊緣下貯留膿汁或穿刺橫痃抽吸的膿汁涂片行革蘭染色 鏡下可見革蘭陰性短小桿菌 兩端鈍圓 有兩極濃染現(xiàn)象單個 成堆或鏈狀排列易產(chǎn)生假陽性假陰性不推薦用 軟下疳檢查方法 2 培養(yǎng)檢查 采用GCHGS或MHHb培養(yǎng)基培養(yǎng) 菌落常于接種后48小時形成 色灰黃而透明 直徑約1 2mm 菌落涂片革蘭染色呈陰性球桿菌 呈短鏈 團(tuán)塊或指紋狀排列過氧化酶試驗陰性 非卟嘛試驗陰性 硝酸鹽還原試驗陽性 堿性磷酸酶試驗陽性 典型的菌落和鏡檢典型的菌體形態(tài)鑒定結(jié)果符合標(biāo)準(zhǔn)結(jié)合臨床可作出確定診斷報告 軟下疳檢查方法 3 組織病理中央為潰瘍 潰瘍邊緣表皮增生 潰瘍下方可見三個炎癥帶 垂直排列 分別為 潰瘍基底層 多形核白細(xì)胞為主 混有紅細(xì)胞 有嗜中性白細(xì)胞 淋巴祖細(xì)胞及組織細(xì)胞浸泡 可見較多的纖維母細(xì)胞 深層 淋巴細(xì)胞 漿細(xì)胞彌漫性浸潤 血管周圍明顯 用Giemas及 Gram染色 有時可在淺表層或深層查見杜克雷嗜血桿菌組織病理對軟下疳有一定的意義 但也要結(jié)合臨床表現(xiàn) 八 性病淋巴肉芽腫LGV 病因 沙眼衣原體的L1 L2和L3主要侵犯淋巴組織流行病學(xué) 散發(fā)北美 歐洲 澳洲及南美 亞洲部分地區(qū)印度及部分東南亞國家 我國80