脂質(zhì)體制備及其在醫(yī)藥中的應(yīng)用(重醫(yī)大選修課試題).doc

脂質(zhì)體制備及其在醫(yī)藥中的應(yīng)用一、脂質(zhì)體脂質(zhì)體（liposome）是一種人工膜。在水中磷脂分子親水頭部插入水中，脂質(zhì)體疏水尾部伸向空氣，攪動(dòng)后形成雙層脂分子的球形脂質(zhì)體，直徑251000nm不等。脂質(zhì)體可用于轉(zhuǎn)基因，或制備的藥物，利用脂質(zhì)體可以和細(xì)胞膜融合的特點(diǎn)，將藥物送入細(xì)胞內(nèi)部。、生物學(xué)定義：當(dāng)兩性分子如磷脂和鞘脂分散于水相時(shí)，分子的疏水尾部傾向于聚集在一起，避開水相，而親水頭部暴露在水相，形成具有雙分子層結(jié)構(gòu)的的封閉囊泡，稱為脂質(zhì)體。 、藥劑學(xué)定義：系指將藥物包封于類脂質(zhì)雙分子層內(nèi)而形成的微型泡囊體。 二、脂質(zhì)體的制備一般脂質(zhì)體的制備都包括以下幾個(gè)主要步驟：、脂質(zhì)體原料的溶解、水合和非均質(zhì)囊泡的形成；、囊泡均質(zhì)化； 、脂質(zhì)體囊泡分離或分散到某種介質(zhì)中。脂質(zhì)體制備常用的方法（含舉例）主要有下列幾種： （一）、設(shè)備強(qiáng)化法1超聲波分散法將水溶性藥物溶于磷酸鹽緩沖液中，然后加入磷脂、膽固醇與脂溶性藥物，共溶于有機(jī)溶劑的溶液中。攪拌蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑，將殘液經(jīng)超聲波處理，分離出脂質(zhì)體，再混懸于磷酸鹽緩沖液中，制成脂質(zhì)體混懸型注射劑。 例如，氨基酸脂質(zhì)體的制備，取氨基酸50mg溶于pH為71的磷酸鹽緩沖液中，加入到由磷脂25mg、膽固醇42mg、磷酸二鯨蠟脂28mg，溶于55ml氯仿環(huán)己烷制成的溶液中，蒸發(fā)除去環(huán)己烷，殘液經(jīng)超聲分散，分離出脂質(zhì)體，重新混懸于磷酸鹽緩沖液中。該脂質(zhì)體在4能貯存一個(gè)月，可供口服或注射給藥，具緩釋作用。 2冷凍干燥法 將磷脂經(jīng)超聲處理，然后高度分散于緩沖鹽溶液中，并加入凍結(jié)保護(hù)劑(如甘露醇、葡萄糖、海藻酸等)，冷凍干燥后，將干燥物分散到含藥物的緩沖鹽溶液或其他水性介質(zhì)中，即可形成脂質(zhì)體。 例如，維生素B。脂質(zhì)體的制備，取卵磷脂289分散于100mmolL磷酸鹽緩沖液(pH為7)與09氯化鈉溶液(1：1)的混合液中，超聲處理后與甘露醇混合，于真空下冷凍干燥，隨即用含l25mg維生素Bt。的上述緩沖鹽溶液進(jìn)行分散，進(jìn)一步超聲處理，即可得到均勻脂質(zhì)體混懸液。 （二）、物理法 1薄膜分散法 將磷脂、膽固醇等類脂質(zhì)及脂溶性藥物溶于環(huán)己烷(或其他有機(jī)溶劑)中，然后將環(huán)己烷溶液在玻璃瓶中旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)，使在燒瓶內(nèi)壁上形成薄膜；，將水溶性藥物溶于磷酸鹽緩沖液中，加入燒瓶中不斷攪拌，即得脂質(zhì)體。 例如，氟尿嘧啶脂質(zhì)體，就是用磷脂(卵磷脂或腦磷脂)和膽固醇與磷酸二鯨蠟脂，按摩爾比7：2：1或48：28：1配成氯仿溶液，真空蒸發(fā)除去氯仿，使在器壁上形成的薄膜加入等滲的緩沖液(pH為60，001molL磷酸鹽)，其中含氟尿嘧啶77 mmolL，類脂質(zhì)在緩沖液中的濃度為5070mmolL，加玻璃珠數(shù)枚，攪拌2min，在25放置2h，使薄膜吸脹；再在25攪拌2h，得到脂質(zhì)體，粒徑為055m。 2逆相蒸發(fā)法 將磷脂等膜材溶于有機(jī)溶劑如氯仿、乙醚中，加入待包封藥物的水溶液水溶液：有機(jī)溶劑=(1：3)(1：6)進(jìn)行短時(shí)超聲，直到形成穩(wěn)定的wo型乳劑，然后減壓蒸發(fā)除去有機(jī)溶劑，達(dá)到膠態(tài)后，滴加緩沖液，旋轉(zhuǎn)使器壁上的凝膠脫落，在減壓下繼續(xù)蒸發(fā)，制得水性混懸液，通過凝膠色譜法或超速離心法，除去未包入的藥物，即得大單室脂質(zhì)體。 例如：超氧化物歧化酶(SOD)脂質(zhì)體的制備，將卵磷脂lOOmg和膽固醇50mg溶于乙醚中，加入用4mmolL磷酸鹽緩沖溶液(PBS)配成的SOD溶液，超聲處理2min(每處理05min，間歇05min)，立即在水浴中減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)至呈現(xiàn)凝膠狀，旋渦振蕩使凝膠轉(zhuǎn)相，再繼續(xù)蒸發(fā)除盡乙醚，超速離心(35000rmin，30min)分離除去未包人的SOD，沉淀用水洗2次，離心，得沉淀，用10mmolL PBS稀釋即得。 3注入法 將磷脂與膽固醇等類脂質(zhì)及脂溶性藥物共溶于有機(jī)溶劑中(一般多采用乙醚)，然后將此藥液經(jīng)注射器緩緩注入加熱至5060(并用磁力攪拌)的磷酸鹽緩沖液(可含有水溶性藥物)中，加完后，不斷攪拌至乙醚除盡為止，即制得脂質(zhì)體，其粒徑較大，不適宜靜脈注射。再將脂質(zhì)體混懸液通過高壓乳勻機(jī)2次，則所得的成品，大多為單室脂質(zhì)體，少數(shù)為多室脂質(zhì)體，粒徑絕大多數(shù)在2m以下。 例如：亞油酸脂質(zhì)體，取磷酸鹽緩沖液100ml，在磁力攪拌器上攪拌加熱至約60；再稱取1g精制大豆磷脂、1g膽固醇、1g亞油酸及2g油酸山梨坦溶于30ml乙醚中，然后滴注于上述60緩沖鹽溶液中，繼續(xù)攪拌，加適量緩沖鹽溶液至100ml即得。 隨著對脂質(zhì)體表面活性劑的研究和新型表面活性劑的開發(fā)，脂質(zhì)體的制備方法還會(huì)改進(jìn)，相信將有更為簡單有效的制備方法出現(xiàn)。三、脂質(zhì)體在醫(yī)藥中的應(yīng)用（一）、作為抗腫瘤藥物的載體1、脂質(zhì)體用作化療藥物載體的特點(diǎn)脂質(zhì)體劑型可以在某種程度上提高化療藥物的靶向性，并大幅度地降低化療藥物的毒副作用，從幾種途徑提高化療藥物的治療指數(shù)。與目前其它的抗癌藥物劑型相比較，脂質(zhì)體具有獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn)，脂質(zhì)體用于抗癌化療的最主要優(yōu)點(diǎn)是降低毒性而繼續(xù)保持細(xì)胞毒作用。將細(xì)胞生長抑制劑如阿霉素或柔紅霉素包在脂質(zhì)體中可明顯地降低心臟毒性和皮膚毒性，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的存活率比游離藥物對照組高。阿霉素及柔紅霉素脂質(zhì)體的這種優(yōu)點(diǎn)在許多脂質(zhì)體制劑中都觀察到，而與它們所用的脂質(zhì)組成無關(guān)。但是改變脂質(zhì)組成如增加膽固醇量或使用高相變溫度的磷脂有助于包裹藥物的脂質(zhì)體在血液中保持完整性。2、化療藥物脂質(zhì)體的現(xiàn)狀迄今為止，國內(nèi)外報(bào)道的已經(jīng)包封成脂質(zhì)體的各種抗癌藥物很多，如阿霉素、放線菌素D、卡氮芥、順鉑、爭光霉素、阿糖胞苷、甲氨蝶呤、6-巰基嘌呤、氮芥、三尖杉酯堿等。Hunt等以成膜法制備了阿糖胞苷的多室脂質(zhì)體，又通過超聲得到小單層脂質(zhì)體，并研究了阿糖胞苷在不同類型脂質(zhì)體中的包封率和通透性。臨床研究揭示，阿霉素脂質(zhì)體對轉(zhuǎn)移性乳房腫瘤有明顯的活性而無明顯的心臟毒性。而且可將阿霉素脂質(zhì)體用于原來使用游離藥物時(shí)由于毒性太大而被限制使用的其它癌癥。（二）、作為抗網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)疾病藥物的載體脂質(zhì)體作為網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)疾病治療藥物的載體是其最成功的應(yīng)用之一。由于脂質(zhì)體的天然靶向性，使網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的器官和細(xì)胞成為包封藥物脂質(zhì)體的靶向區(qū)，定向地將治療藥物有效地運(yùn)送到網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)患病細(xì)胞中釋放藥物。1、抗寄生蟲病 有些寄生蟲病，如利什曼病和瘧疾是某種寄生蟲侵入網(wǎng)狀內(nèi)皮細(xì)胞引起病變。過去治療這些疾病需使用毒性很大的藥物殺死寄生蟲，同時(shí)這些藥物對人的毒性也很大。例如治療利什曼病的含五價(jià)銻的藥物的中毒劑量和治療有效劑量相當(dāng)接近，而且這些藥物又能引起心肌炎和腎炎的發(fā)生。如果將這些藥物包封成脂質(zhì)體不僅能有效地殺死寄生蟲，同時(shí)也極大地降低了藥物的毒性。在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中，脂質(zhì)體藥物以游離藥物11000的劑量即可治愈利什曼病，脂質(zhì)體劑型的治療指數(shù)是游離藥物的3040倍。尤其是對那些使用游離藥物治療已無效的晚期患者。使用脂質(zhì)體藥物治療也有效。Carl等用含銻劑脂質(zhì)體治療金黃色田鼠利什曼病時(shí)，療效可增加350700倍，只用原劑量的0.15即顯效，且明顯降低了急性心肌病理性變化及中毒性腎炎等毒副作用。Alving等也介紹了制備含銻藥物和8-氨基喹啉衍生物脂質(zhì)體的方法和結(jié)果。目前這兩種治療利什曼病脂質(zhì)體的效果已經(jīng)得到大量的臨床驗(yàn)證。同樣，利用脂質(zhì)體包封抗瘧藥物，如奎寧或核糖脂類藥物也可以比游離藥物更有效地抑制瘧疾發(fā)作。 2、對酶系統(tǒng)疾病的治療脂質(zhì)體既有保護(hù)藥酶防止失活的作用，又有天然靶向性使包封的酶主要被肝攝取，所以脂質(zhì)體是治療酶原貯積病藥物的最好載體。實(shí)驗(yàn)已證明葡萄糖腦苷酶-葡萄糖苷酶脂質(zhì)體可有效地治療溶酶體貯積病，Raman及Gergoriadis等先后曾治療數(shù)例高歇(Gancheris)病，治療后肝區(qū)疼痛減輕，病情停止惡化，據(jù)認(rèn)為是酶脂質(zhì)體易為網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)所內(nèi)吞而定位于酶體。脂質(zhì)體也用于治療其它酶系統(tǒng)疾病，并取得很好效果。例如應(yīng)用包封淀粉 - 葡萄糖酶的多層脂質(zhì)體治療型糖原貯積病(Pompe病)，可使患者肝大明顯縮小。又如過去使用游離的葡萄糖腦苷脂酶治療溶血酶原貯積病，由于酶在體內(nèi)的破壞失活和缺少靶向性，服藥后患者的臨床指標(biāo)很少或沒有改變。如果將酶包封在脂質(zhì)體中給患者靜脈注射，直到注射后48h仍然有效。（三）、作為解毒劑的載體 重金屬如鉛、钚等進(jìn)入體內(nèi)在肝等器官中累積而造成中毒，引起某些疾病。使用某些螯合物如EDTA或DTPA可以溶解金屬，治療金屬貯積病，但這些螯合物不能通過細(xì)胞膜而影響了它們的體內(nèi)效果。將螯合物制成脂質(zhì)體劑型，可將螯合物轉(zhuǎn)運(yùn)到貯積金屬的細(xì)胞中。例如DTPA脂質(zhì)體即可有效地從肝中除去钚，從腎中除去汞和促進(jìn)膠體金從糞便排出。將螯合藥物去鐵敏包封在脂質(zhì)體中，比游離藥物能更有效地除去肝中累積的重金屬。（四）、作為免疫激活劑用于抗腫瘤轉(zhuǎn)移和防疫 實(shí)驗(yàn)證明，脂質(zhì)體是將免疫調(diào)節(jié)如MAF和MDP運(yùn)送到巨噬細(xì)胞并活化巨噬細(xì)胞的理想載體。同時(shí)各種脂質(zhì)體包括空脂質(zhì)體進(jìn)入體內(nèi)后，都將被巨噬細(xì)胞吞噬，使巨噬細(xì)胞的活性增強(qiáng)。因此空脂質(zhì)體本身也是一種有效的免疫增強(qiáng)劑。通過對細(xì)菌、病毒、原生動(dòng)物、腫瘤和其它抗原進(jìn)行廣泛研究后確認(rèn)脂質(zhì)體是目前極少數(shù)可能用于人類的無毒性免疫激活劑之一。在免疫學(xué)試驗(yàn)中，一些非腸道給藥或經(jīng)腸道給藥的脂質(zhì)體能夠有效地將抗原引入細(xì)胞從而保護(hù)動(dòng)物抵抗疾病。脂質(zhì)體與抗原的物理連結(jié)是其有效性的必要條件。此外，脂質(zhì)體本身的結(jié)構(gòu)，主要可能是它的類脂樣性質(zhì)起到抗原貯庫的作用。脂質(zhì)體的一些結(jié)構(gòu)特征如大小、雙層膜流動(dòng)性、表面電荷以及抗原處置于脂質(zhì)體中的式樣和脂質(zhì)與抗原的質(zhì)量比等因素也都可影響其激活性能，但其處方組成因所用的抗原和使用的途徑而異。 （五）、作為抗菌和抗病毒藥物的載體 許多試驗(yàn)證明，脂質(zhì)體劑型優(yōu)于游離抗菌藥，既能到達(dá)相應(yīng)的細(xì)胞內(nèi)部又能起到治療效果。例如目前對免疫缺陷病人(如艾滋病患者)的治療，由于分支桿菌“avinm”(MAC)復(fù)合物大部分存在單核細(xì)胞內(nèi)，使用一般抗生素劑型治療無效，而脂質(zhì)體為將藥物引入細(xì)胞內(nèi)提供了有效的手段。美國FDA的情況調(diào)查表明，對治療艾滋病患者M(jìn)AC的期臨床顯示慶大霉素脂質(zhì)體不僅耐受性好且活性高。此外，用氨芐西林脂質(zhì)體對抗小鼠的單核細(xì)胞增多性李斯特菌；用苯基青霉素脂質(zhì)體治療小鼠金黃色葡萄球菌感染等也獲得成功。 另一個(gè)具代表性的藥物是兩性霉素B