血脂檢測(cè)方法及臨床意義1

血脂檢測(cè)方法及臨床意義 血脂概述血脂是血漿中的中性脂肪 甘油三酯和膽固醇 和類脂 磷脂 糖脂 固醇 類固醇 的總稱 廣泛存在于人體中 它們是生命細(xì)胞的基礎(chǔ)代謝必需物質(zhì) 一般說(shuō)來(lái) 血脂中的主要成份是甘油三酯和膽固醇 其中甘油三酯參與人體內(nèi)能量代謝 而膽固醇則主要用于合成細(xì)胞漿膜 類固醇激素和膽汁酸 2020 4 12 1 血漿脂蛋白的分類 超速離心法1 乳糜微粒 CM 2 極低密度脂蛋白 VLDL 3 中間密度脂蛋白 IDL 4 低密度脂蛋白 LDL 5 脂蛋白 a LP a 6 高密度脂蛋白 HDL 2020 4 12 2 血漿脂蛋白的分類 電泳法分為乳糜微粒 前 脂蛋白 脂蛋白和 脂蛋白四條脂蛋白區(qū)帶 2020 4 12 3 血漿脂蛋白的組成與結(jié)構(gòu) 2020 4 12 4 血漿脂蛋白的組成與結(jié)構(gòu) 大致為球形顆粒 由兩大部分組成 即疏水性的內(nèi)核和親水性的外殼 內(nèi)核由不同量的CE和TG組成 表層由載脂蛋白 PL和FC組成 FC及PL的極性基團(tuán)向外暴露在血漿中 載脂蛋白是兼性化合物 它的疏水部分掩蔽在脂蛋白中 而親水部分突出于脂蛋白顆粒的表面 2020 4 12 5 載脂蛋白 血漿脂蛋白中的蛋白質(zhì)部分稱為載脂蛋白 主要分A B C D E五類 主要在肝 部分在小腸 合成 載脂蛋白是構(gòu)成血漿脂蛋白的重要組分 基本功能是運(yùn)載脂類物質(zhì)及穩(wěn)定脂蛋白的結(jié)構(gòu) 某些載脂蛋白還有激活脂蛋白代謝酶 識(shí)別受體等功能 主要在肝 部分在小腸 合成 按ABC系統(tǒng)命名 各類又可細(xì)分幾個(gè)亞類 以羅馬數(shù)字表示 2020 4 12 6 高脂蛋白血癥WHO分型 2020 4 12 7 引起繼發(fā)性高脂血癥的病因 1 糖尿病常表現(xiàn)為IV型高脂蛋白血癥 胰島素的缺乏 不僅促使肝臟生成VLDL增加 而且因LPL活性降低 導(dǎo)致VLDL清除減少 主要表現(xiàn)為血清TG VLDL水平升高 TG嚴(yán)重升高者有發(fā)生急性胰腺炎的危險(xiǎn)性 2 甲減常表現(xiàn)為IIa或IIb型高脂蛋白血癥患者血TC水平升高可同時(shí)血TG水平升高 LPL活力降低 IDL代謝障礙 LDL受體功能下降 血漿LDL清除減慢等 3 腎臟疾病腎病綜合征時(shí)的高脂蛋白血癥由脂蛋白降解障礙和合成過(guò)多雙重機(jī)制引起 2020 4 12 8 高脂蛋白血癥的因素 4 藥物 降壓藥 利尿劑 受體阻滯劑可TG和HDL長(zhǎng)期應(yīng)用糖皮質(zhì)激素治療可使TG TC升高5 其他 肝膽系統(tǒng)疾病 胰腺炎 長(zhǎng)期過(guò)量飲酒 2020 4 12 9 低脂蛋白血癥表現(xiàn) 1 家族性低 脂蛋白血癥 肝臟LDL受體上調(diào) 伴膽汁酸過(guò)度合成 使血漿中VLDL在轉(zhuǎn)化為L(zhǎng)DL前已被肝臟分解代謝 2 脂蛋白缺乏血癥 ApoB合成分泌缺陷 使含ApoB的脂蛋白如CM VLDL LDL合成代謝障礙 伴隨脂肪吸收和代謝紊亂 血漿TC也非常低 2020 4 12 10 血脂檢測(cè)方法及臨床意義 總膽固醇 TC 甘油三酯 TG 高密度脂蛋白膽固醇 HDL C 低密度脂蛋白膽固醇 LDL C 載脂蛋白A1 ApoA1 載脂蛋白B ApoB 2020 4 12 11 總膽固醇 TC 測(cè)定 化學(xué)法 酶法 化學(xué)測(cè)定法 化學(xué)測(cè)定法通常需抽提純化 顯色劑主要有兩類 醋酸 醋酐 硫酸 高鐵硫酸 這些顯色反應(yīng)須用強(qiáng)酸試劑 干擾因素多 準(zhǔn)確測(cè)定有賴于從標(biāo)本中抽提 皂化 純化過(guò)程 因而操作較繁 不適于分析大批量標(biāo)本 且不適于自動(dòng)分析 特點(diǎn) 1 Liberman Burchard反應(yīng) 1885年Liberman發(fā)現(xiàn)膽固醇在硫酸 醋酐溶液中顯色 1890年Burchard用此反應(yīng)測(cè)定膽固醇稱為L(zhǎng) B反應(yīng) 1953年Zak提出用硫酸 醋酸和Fe3 等與膽固醇作用生成紫紅色化合物來(lái)測(cè)定膽固醇 稱為Zak反應(yīng) 2 Zak反應(yīng) 酶測(cè)定法 特點(diǎn) 常規(guī)測(cè)定中現(xiàn)已廣泛應(yīng)用酶法 酶法具有特異性好 精密度和靈敏度都能很好地滿足臨床實(shí)驗(yàn)室的要求 既可以手工操作 也適合自動(dòng)分析 但酶法測(cè)定中出現(xiàn)了不同程度的基質(zhì)效應(yīng) 采用酶反應(yīng)原理的干化學(xué)法頗為實(shí)用 其缺點(diǎn)是價(jià)格高 精密度差 膽固醇的酶測(cè)定法始于70年代 由于操作簡(jiǎn)便 試劑無(wú)腐蝕性 特別適用于自動(dòng)生化分析 目前已成為測(cè)定膽固醇的主要方法 CHE CHO PAP法原理 用膽固醇酯酶水解膽固醇酯生成脂肪酸和膽固醇 膽固醇被膽固醇氧化酶氧化生成 4 膽淄烯酮和過(guò)氧化氫 然后在過(guò)氧化物酶催化下 H2O2與4 氨基安替比林及酚結(jié)合 生成紅色醌亞胺 醌亞胺的最大吸收峰在500nm左右 吸光度與標(biāo)本中的膽固醇含量成正比 反應(yīng)方程式如下 膽固醇酯 H2O膽固醇 游離脂肪酸膽固醇 O2 4 膽甾烯酮 H2O22H2O2 4 氨基安替比林 酚 醌亞胺 CHE CHO POD 評(píng)價(jià) 主要缺點(diǎn)是 優(yōu)點(diǎn) 本法靈敏度高 準(zhǔn)確度高 精密度好 線性范圍寬 某些膽固醇酯酶對(duì)膽固醇酯的水解不完全 不能用純膽固醇結(jié)晶以有機(jī)溶劑配制的溶液作為TC分析的校準(zhǔn)液 而應(yīng)以準(zhǔn)確定值的血清作為標(biāo)準(zhǔn) 此校準(zhǔn)液 品 相當(dāng)于三級(jí)標(biāo)準(zhǔn) 表面活性劑 如吐溫 40可以干擾膽固醇酯酶的作用 而聚乙烯醇6000可使結(jié)果提高1 2 本法具有氧化酶反應(yīng)途徑的共同缺陷 易受到一些還原性物質(zhì)如尿酸 膽紅素 維生素C和谷胱甘肽等的干擾 參考值 血清總膽固醇合適范圍 5 22mmol L 200mg dl 邊緣升高 5 23 5 69mmol L 201 219mg dl 升高 5 72mmol L 220mg dl 影響TC水平的因素 年齡與性別 長(zhǎng)期的高膽固醇 高飽和脂肪酸和高熱量飲食可使TC增高 遺傳因素 其它 如缺少運(yùn)動(dòng) 腦力勞動(dòng) 精神緊張等可能使TC升高 TC除了作為高膽固醇血癥的診斷指標(biāo)之外 不能作為其它任何疾病的診斷指標(biāo) 對(duì)于動(dòng)脈粥樣硬化和冠心病而言 TC是一個(gè)明確的危險(xiǎn)因子 與冠心病的發(fā)病率呈正相關(guān) 臨床意義 高TC血癥 原發(fā)和繼發(fā) 低TC血癥 原發(fā)和繼發(fā) 相關(guān)疾病 高TC血癥有原發(fā)和繼發(fā)兩類 原發(fā)的如家族性高膽固醇血癥 家族性apoB缺陷癥 多源性高TC 混合性高脂蛋白血癥等 繼發(fā)的見于腎病綜合征 甲減 糖尿病 妊娠等 低TC血癥原發(fā)和繼發(fā) 原發(fā)如家族性無(wú) 或低 脂蛋白血癥 繼發(fā)如甲亢 營(yíng)養(yǎng)不良 慢性消耗性疾病等 2020 4 12 20 血清 漿 甘油三酯測(cè)定 化學(xué)法 酶法 基本操作 化學(xué)測(cè)定法 1 抽提 關(guān)鍵是選用合適的抽提劑 既要使甘油三酯提取完全 又要消除磷脂 游離甘油和葡萄糖等干擾物質(zhì)的影響 2 皂化 甘油三酯水解生成甘油 這一步大都采用KOH作皂化劑3 氧化 過(guò)碘酸在酸性溶液中將甘油氧化成甲醛和甲酸4 顯色 甲醛的定量主要有兩種方法 甲醛與變色酸 4 5 二羥 2 7 萘二磺酸 在硫酸溶液中加熱生成紫色化合物 甲醛與乙酰丙酮在銨離子 NH4 存在下生成黃色的二乙酰二氫二甲基吡啶 磷酸甘油氧化酶法原理 用脂蛋白酯酶 LPL 使血清中TG水解成脂肪酸和甘油 甘油激酶 GK 及三磷酸腺苷 ATP 將甘油磷酸化 以磷酸甘油氧化酶 GPO 氧化3 磷酸甘油 G 3 P 產(chǎn)生H2O2 最后以Trinder反應(yīng)顯色 A500nm的值與TG濃度成正比 TG H2O 甘油 脂肪酸甘油 ATP G 3 P ADPG 3 P O2 磷酸二羥丙酮 H2O2H202 4 AAP 4 氯酚 苯醌亞胺非那腙 H2O2 2020 4 12 23 去除FG干擾可用下列方法 1 外空白法 同時(shí)用不含LPL的酶試劑測(cè)定FG作空白 2 內(nèi)空白法 又稱兩步法或雙試劑法 將LPL和4 AAP組成試劑2 其余部分為試劑1 乳酸脫氫酶法 原理 TG 3H2OLPLGlycerol 3RCOOHGlycerol ATPGK Mg2 G 3 P ADPADP 磷酸烯醇式丙酮酸丙酮酸激酶丙酮酸 ATP丙酮酸 NADHLDHNAD 乳酸 由于反應(yīng)消耗NADH 故可利用NADH在340nm吸光度降低來(lái)測(cè)定甘油三脂的濃度 評(píng)價(jià) 本法結(jié)果準(zhǔn)確 但靈敏度較低 試劑也不太穩(wěn)定 由于血清本身存在游離甘油和丙酮酸等干擾物質(zhì) 所以測(cè)定時(shí)除了要做試劑空白外 還要做標(biāo)本空白 甘油氧化酶法 第一步 FG O2甘油氧化酶甘油醛 H2O2H2O2 EMAEPOD無(wú)色物質(zhì)消除游離甘油的影響 3 5min后進(jìn)行第二步反應(yīng) TG 3H2OLPLGlycerol 3RCOOHFG O2甘油氧化酶甘油醛 H2O2H2O2 4 AAP EMAEPOD有色化合物注 EMAE作用與酚相似 是還原劑 但靈敏度比酚高 原理 該法分兩步完成 甘油三酯臨床意義 原發(fā)性高TG血癥多有遺傳因素 包括家族性高TG血癥與家族性型高脂蛋白血癥等 繼發(fā)性高TG血癥見于糖尿病 糖原累積病 甲減 腎病綜合征 妊娠 口服避孕藥 酗酒等 富含TG的脂蛋白是冠心病的獨(dú)立的危險(xiǎn)因子 TG增加表明患者存在代謝綜合征 需進(jìn)行治療 甘油三酯降低很少見 甲亢 腎上腺皮質(zhì)功能減退和肝功能嚴(yán)重?fù)p傷時(shí)可以見到甘油三酯降低 2020 4 12 28 甘油三酯的參考范圍 TG0 56 1 70mmol L升高 1 70mmol L 2020 4 12 29 高密度脂蛋白測(cè)定 常以測(cè)定HDL C含量代表HDL水平 參考方法 超速離心分離HDL 然后用化學(xué)法 ALKB法 或酶法測(cè)定其膽固醇含量 此法需特殊設(shè)備 而且不易常握 常規(guī)方法 1 磷鎢酸 鎂法 2 HDL直接測(cè)定法 HDL直接測(cè)定法大致分三類 分別是 聚乙二醇 抗體包裹法酶修飾法選擇性抑制法 又稱掩蔽法 選擇性抑制法原理 分兩步 第一試劑用聚陰離子及分散型表面活性劑 反應(yīng)抑制劑 后者與LDL VLDL CM表面的疏水基團(tuán)有高度親和力 吸附在這些脂蛋白表面形成掩蔽層 但不發(fā)生沉淀 能抑制這類脂蛋白中的膽固醇與酶試劑反應(yīng) 第二試劑含膽固醇測(cè)定酶及具有對(duì)HDL表面的親水基團(tuán)有親和力的表面活性劑 反應(yīng)促進(jìn)劑 使酶與HDL中的膽固醇起反應(yīng) 2020 4 12 32 HDL C合適范圍 1 04mmol L 40mg dl 0 91mmol L 35mg dl 為減低 參考值 臨床意義 流行病學(xué)與臨床研究證明 HDL C與冠心病發(fā)病呈負(fù)相關(guān) HDL C低于0 9mmol L是冠心病危險(xiǎn)因素 HDL C大于1 55mmol L被認(rèn)為是冠心病的 負(fù) 危險(xiǎn)因素 HDL C下降還多見于腦血管病 糖尿病 肝炎 肝硬化病人 高TG血癥往往伴以低HDL C 肥胖者的HDL C也多偏低 吸煙可使HDL C下降 適量飲酒 長(zhǎng)期體力勞動(dòng)和運(yùn)動(dòng)會(huì)使HDL C升高 低密度脂蛋白測(cè)定 1 Friedewald公式法LDL C TC HDL C TG 5 以mg dl為單位時(shí) 或LDL C TC HDL C TG 2 2 以mmol L為單位時(shí) 2 聚乙烯硫酸鹽沉淀法本法并非對(duì)LDL C作直接測(cè)定 而是用聚乙烯硫酸 PVS 選擇性沉淀血清中LDL 再以血清TC減去上清液 含HDL與VLDL 膽固醇即得LDL C值 3 直接測(cè)定法 兩類 目前各類方法測(cè)定的LDL C值都包括IDL和LP a 的chol在內(nèi) LDL C合適范圍 3 12mmol L 120mg dl 邊緣升高 3 15 3 61mmol L 121 139mg dl 升高 3 64mmol L 140mg dl 參考值 臨床意義 LDL C增高是動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展的主要脂類危險(xiǎn)因素 由于TC水平同時(shí)也受HDL C水平的影響 所以最好以LDL C代替TC作為冠心病危險(xiǎn)因素指標(biāo) 美國(guó)國(guó)家膽固醇教育計(jì)劃成人治療專業(yè)組規(guī)定以LDL C水平作高脂蛋白血癥的治療決策及其需要達(dá)到的治療目標(biāo) 脂蛋白 a 測(cè)定 Lp a 測(cè)定有兩類方法 一是以免疫化學(xué)原理測(cè)定其所含Apo a 結(jié)果以Lp a 質(zhì)量表示 也有以Lp a 顆粒數(shù)mmol L表示的 另一類方法測(cè)定其所含的膽固醇 結(jié)果以Lp a C表示 目前大都用免疫學(xué)方法測(cè)定 正常人群的Lp a 水平呈明顯的正偏態(tài)分布 大多在200mg L以下 平均數(shù)在120 180mg L 中位數(shù)約100mg L Lp a 水平高于醫(yī)學(xué)決定水平 300mg L 冠心病危險(xiǎn)性明顯增高 參考值 臨床意義 血清Lp a 水平是動(dòng)脈粥樣硬化性疾病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素 與動(dòng)脈粥樣硬化成正相關(guān) 血清載脂蛋白測(cè)定 免疫化學(xué)法 單向免疫擴(kuò)散 RID 電免疫分析 如火箭電泳法 放射免疫分析 RIA 酶聯(lián)免疫吸附分析 ELISA 等 早期 目前 目前比較適合于臨床實(shí)驗(yàn)室的是免疫濁度法 包括免疫散射比濁法 INA 和免疫透射比濁法 ITA 參考值 ApoAI 1 00 1 60g L ApoB 0 60 1 10g L 臨床意義 ApoAI是HDL的主要結(jié)構(gòu)蛋白 ApoB是LDL的主要結(jié)構(gòu)蛋白 因此 ApoAI和ApoB可直接反映HDL和LDL的含量 在某些病理情況下 ApoAI與HDL和ApoB與LDL并非成正相關(guān) 因此 同時(shí)測(cè)定載脂蛋白及脂蛋白HDL和LDL對(duì)病理發(fā)生狀態(tài)的分析很有幫助 冠心病 腎病綜合征和糖尿病等都有ApoAI下降和ApoB升高 臨床上常將ApoAI和ApoB比值作為冠心病的危險(xiǎn)指標(biāo) 載脂蛋白參考值 ApoA1 1 00 1 5g LApoB 0 8 1 00g L 2020 4 12 40 糖的來(lái)源與去路 2020 4 12 41 葡萄糖的測(cè)定 葡萄糖氧化酶法 首選方法 己糖激酶法葡萄糖脫氫酶法 2020 4 12 42 葡萄糖氧化酶法原理 葡萄糖氧化酶 GOD 將葡萄糖水解為葡萄糖酸和過(guò)氧化氫 后者在過(guò)氧化物酶 POD 和色素原性氧受體存在下 將過(guò)氧化氫分解為水和氧 同時(shí)使色素原性氧受體4 氨基安替比林和酚去氫縮合為紅色醌類化合物 即Trider反應(yīng) 其色澤深淺在一定范圍內(nèi)與葡萄糖濃度成正比 葡萄糖 O2 H2O 葡萄糖酸內(nèi)酯 H2O22H2O2 4 氨基安替比林 酚 紅色醌類化合物 2020 4 12 43 血糖的臨床意義 生理性或暫時(shí)性增高 餐后 攝入高糖飲食 情緒激動(dòng)等病理性高血糖 糖尿病 甲亢 腎上腺皮質(zhì)功能亢進(jìn)等 應(yīng)激性高血糖 如顱腦損傷 顱內(nèi)壓增高等 脫水引起的血液濃縮 如嘔吐 腹瀉 高熱等 嚴(yán)重的肝硬化不能