微生物標(biāo)本的采集方法ppt課件

.,微生物標(biāo)本采集技術(shù)臨床微生物環(huán)境微生物,感染辦張瑞芳,.,正確的微生物標(biāo)本采集和運送，是準(zhǔn)確的病原學(xué)診斷的前提,.,基本原則,1、及時采集微生物標(biāo)本作病原學(xué)檢查2、在抗菌藥物使用前采集標(biāo)本3、采樣時嚴(yán)格執(zhí)行無菌操作4、采樣后立即送檢5、棉拭子標(biāo)本宜用運送培養(yǎng)基6、標(biāo)本容器須滅菌處理，但不得使用消毒劑7、送檢標(biāo)本時應(yīng)注明來源和檢驗?zāi)康?、混有正常菌群的標(biāo)本，不可置肉湯培養(yǎng),.,如何提高細(xì)菌陽性檢出率,、標(biāo)本采集時機、標(biāo)本采集方法、標(biāo)本的質(zhì)與量、標(biāo)本的運送與保存、鏡檢篩選合格標(biāo)本、高質(zhì)量、多種分離培養(yǎng)基培養(yǎng)環(huán)境,.,一、痰標(biāo)本采集,關(guān)于咳痰標(biāo)本在抗菌素應(yīng)用前采集標(biāo)本標(biāo)本采集后12h內(nèi)必須立即進(jìn)行實驗室處理痰標(biāo)本應(yīng)用最早且廣泛，但也是最受爭議的標(biāo)本采集標(biāo)本過程中要有專業(yè)的醫(yī)務(wù)人員指導(dǎo),.,使下呼吸道感染病原診斷成為難題,細(xì)菌（包括防線菌與奴卡菌，厭氧菌與分枝桿菌）真菌（包括肺孢子菌）病毒支原體、衣原體與立克次體原蟲寄生蟲,.,痰標(biāo)本采集自然咳痰標(biāo)本患者清晨起床后，用清水或冷開水反復(fù)漱口去除過量的口腔細(xì)菌，有假牙者應(yīng)取下假牙先輕咳，咳出口腔中的痰液棄去，再用力深咳，從氣管咳出呼吸道深部的痰，直接吐入清潔、無菌的容器中無痰可用3%-5%NaCI5ml霧吸約5min導(dǎo)痰也可用物理療法。體位引流等法取痰,.,幾種下呼吸道直接采集的標(biāo)本,經(jīng)氣管穿刺吸引經(jīng)胸壁針刺吸引經(jīng)支氣管鏡采樣支氣管肺泡灌洗經(jīng)支氣管鏡直接吸引開胸肺活檢經(jīng)人工氣道吸引分泌物,.,痰標(biāo)本采集吸痰吸痰：無法咳痰或不合作者、人工氣道者，戴好無菌手套，無菌集痰器分別連接吸引器和無菌吸痰管。按吸痰法將痰吸入無菌集痰器內(nèi)，加蓋送檢經(jīng)支氣管鏡直接吸引：注意嚴(yán)格無菌操作,.,二、尿標(biāo)本的正確采集清潔中段尿標(biāo)本,應(yīng)保證尿液在膀胱內(nèi)至少停留4h以上。最好留取早晨清潔中段尿標(biāo)本方法：患者睡前少飲水，清晨起床后先用肥皂水清洗會陰部，女性應(yīng)用手分開大陰唇，男性上翻包皮，仔細(xì)清洗，再用清水沖洗尿道口周圍；開始排尿，將前段尿排出，棄去，不要停頓，直接將中段尿10-20ml直接排入專用的無菌容器中，立即送檢。容器內(nèi)是無菌的，所以打開容器蓋后，應(yīng)拿在手中，不要隨意亂放。記錄留取標(biāo)本的時間，保證在留取標(biāo)本后1小時內(nèi)送至檢驗科,.,尿標(biāo)本正確采集-留置導(dǎo)尿消毒導(dǎo)尿管外部（接頭上端近會陰部），按無菌操作方法用注射器穿刺導(dǎo)尿管吸取尿液10ml，操作時注意防止混入消毒劑（推薦用三步消毒法：75%酒精-2%碘酒-75%酒精脫碘待干）注意不能從收集袋中采集尿液,.,三、血培養(yǎng)標(biāo)本采集,1、手清潔：無明顯污染使用速干手消毒液進(jìn)行手衛(wèi)生2、血培養(yǎng)瓶口消毒：75%酒精消毒一遍，待干60s3、靜脈穿刺消毒：推薦用三步法用75%酒精消毒采集部位用2%碘酒從穿刺點向外畫圓消毒，至消毒區(qū)域直徑達(dá)5cm以上，涂擦穿刺皮膚2遍，待干75%酒精脫碘：用75%酒精由內(nèi)向外涂抹去碘酒液，待酒精揮發(fā)干燥后采血,.,操作注意事項：從靜脈采血，不建議從動脈采血用注射器無菌穿刺取血后，勿換針頭（如果行第二次穿刺，應(yīng)換針頭）直接注入消毒后的血培養(yǎng)瓶血抽到培養(yǎng)瓶后，輕輕顛倒混勻以防血液凝固，立即送檢，切勿冷藏！多次采血應(yīng)在不同部位的血管穿刺以排除皮膚菌叢污染的可能。除非無法作靜脈穿刺取血，否則不應(yīng)從留置導(dǎo)管內(nèi)取血。抽血前應(yīng)將標(biāo)簽貼于血培養(yǎng)瓶頸上，標(biāo)簽內(nèi)容包括病人基本信息、采血時間、采血部位。注意不要把標(biāo)簽貼在培養(yǎng)瓶條形碼上，否則儀器無法識別。,.,血培養(yǎng)次數(shù)和采血時間,采血培養(yǎng)應(yīng)該盡量在使用抗菌藥物之前進(jìn)行，在患者發(fā)熱期間越早越好，以發(fā)熱高峰前1h內(nèi)或病人寒戰(zhàn)和發(fā)熱開始時采集為宜。在10分鐘內(nèi)與不同部位采集外周血23份培養(yǎng)（有助于判斷是污染還是感染，提高檢出陽性率）注意報陽時間，陽性瓶數(shù)。在采取血培養(yǎng)后的2-5天內(nèi)，不需要再重復(fù)采取血培養(yǎng)，因為進(jìn)行治療后的2-5天血液中的感染細(xì)菌不會馬上消失。,.,四、對可疑中心靜脈導(dǎo)管相關(guān)血流感染,1、保留導(dǎo)管2、外周靜脈血一份，中心靜脈導(dǎo)管血1分，不用棄去導(dǎo)管起始部分的血液。3、拔除導(dǎo)管：4、2個外周靜脈血、導(dǎo)管尖端5cm(在進(jìn)行中心靜脈導(dǎo)管血和周圍靜脈血培養(yǎng)時應(yīng)記錄報陽時間）,.,血管內(nèi)導(dǎo)管尖段標(biāo)本的采集、送檢程序用75%酒精清潔導(dǎo)管周圍皮膚無菌操作移動導(dǎo)管，剪取尖端末端5cm,直接置入無菌試管內(nèi)或直接置入血平板內(nèi)。立即送檢（不超過15min),防止干燥如因懷疑CRBSI移除皮下埋置式靜脈輸液港，港內(nèi)容物及導(dǎo)管尖端作定量培養(yǎng)。,.,血培養(yǎng)常見錯誤,培養(yǎng)瓶放冰箱瓶橡膠塞上小蓋未打開直接穿刺抽血后未及時混勻血液凝固,.,五、如何正確運送標(biāo)本,1、運送培養(yǎng)基溫度應(yīng)適當(dāng)2、原則：保持細(xì)菌活力3、血培養(yǎng)、腦脊液標(biāo)本：應(yīng)及時送檢；不能及時送檢的標(biāo)本應(yīng)置溫箱或室溫中，切不能放入冰箱中保存（除病毒、霉菌、分支桿菌培養(yǎng)樣本置4)4、痰、尿等標(biāo)本：如不能及時送檢可置冰箱，以抑制細(xì)菌生長，但時間不能超過6h.,.,六、各種標(biāo)本儲存的環(huán)境,標(biāo)本采取后應(yīng)該立即送檢，如不能立即送檢，儲存的環(huán)境要求：儲存環(huán)境標(biāo)本來源4冰箱-痰、尿液、糞便、活檢組織、氣槍沖洗物、導(dǎo)尿管、心包積液、膿和傷口分泌物等室溫（25）-血液培養(yǎng)、腦脊液、泌尿生殖道、眼、耳、鼻、喉、血管導(dǎo)管尖、體液、厭氧菌培養(yǎng)標(biāo)本。,.,美國的理念,1970年以前，美國的醫(yī)院定期對空氣和環(huán)境表面（如地面、墻壁、臺面）進(jìn)行培養(yǎng)。到了1970年，CDC和美國醫(yī)院協(xié)會（AHA）主張停止對環(huán)境的常規(guī)培養(yǎng)，因為醫(yī)院感染發(fā)生率與空氣或環(huán)境表面中總的微生物污染水平不相關(guān)。且環(huán)境表面或空氣中微生物含量的允許水平也沒有有意義的標(biāo)準(zhǔn)。1970-1975年，美國有25%的醫(yī)院減少了這種常規(guī)的環(huán)境培養(yǎng)工作-一個已經(jīng)持續(xù)的趨勢。,.,什么情況下要求進(jìn)行環(huán)境采樣,四種狀況下要求進(jìn)行環(huán)境采樣：一、是當(dāng)環(huán)境中的宿主或媒介物被認(rèn)為在疾病傳播中有流行病學(xué)意義時，提供疾病或感染爆發(fā)的依據(jù)二、是在研究過程中進(jìn)行適當(dāng)?shù)沫h(huán)境采樣三、是為了監(jiān)測潛在的危險環(huán)境條件，確認(rèn)有害的化學(xué)或生物因素的存在，并驗證危險因素的成功消除四、是為了質(zhì)量保證（QA）而采樣，以評估改變感染控制措施取得的效果或是確保設(shè)施或系統(tǒng)按照規(guī)范或預(yù)期結(jié)果執(zhí)行。,.,一、物體表面采樣,物體表面細(xì)菌總數(shù)的檢測評價被污染程度主要依據(jù)消毒效果,.,物體表面采樣-涂抹法,涂抹法：將5cm5cm的標(biāo)準(zhǔn)滅菌規(guī)格板，放在被檢測物品表面，用浸有無菌生理鹽水的棉拭子在規(guī)格板內(nèi)來回均勻涂抹整個方格，并隨之轉(zhuǎn)動棉拭子，剪去手接觸部分，將棉拭子放入盛有10ml生理鹽水的試管中，充分振搖1min,作適量稀釋后，接種于普通營養(yǎng)瓊脂平板上進(jìn)行計數(shù)，然后根據(jù)平板上菌落數(shù)得出物品表面每平方厘米的細(xì)菌數(shù),.,.,物體表面采樣-斑貼法,斑貼法：按無菌操作方法將5cm5cm的無菌濾紙用滅菌生理鹽水浸濕，均勻貼附與物體表面，1min取下放入盛有25ml滅菌生理鹽水試管中，充分振搖1min，作適量稀釋后，接種于普通營養(yǎng)瓊脂平板上作菌落計數(shù)，同樣得出物品表面每平方厘米的細(xì)菌數(shù),.,二、消毒物品表面的監(jiān)測：,1、采樣時間：消毒處理后4小時內(nèi)進(jìn)行采樣2、采樣面積：被采面積100平方厘米，取全部表面；100平方厘米，取100平方厘米。3、采樣方法：用5cm*5cm的標(biāo)準(zhǔn)滅菌規(guī)格板放在被檢消毒物品表面，用含相應(yīng)中和劑無菌洗脫液（5ml)的棉拭子在規(guī)格板內(nèi)橫豎往返均勻涂擦各5次并隨之轉(zhuǎn)動采樣棉拭子，剪去手接觸部位，將棉拭子投入王景洗脫液中，立即送檢。小型物體表面的結(jié)果計算用cfu/件表示。,.,物表監(jiān)測結(jié)果范圍,1、類、類環(huán)境：5cfu/cm22、類、類環(huán)境：10cfu/cm2GB15982-2012醫(yī)院消毒衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)4.1.1,.,三、手消毒效果監(jiān)測,1、采樣時間：在接觸病人和從事醫(yī)療活動前進(jìn)行采樣或消毒后立即采樣2、采樣面積及方法（棉拭方法）被檢人五指并攏，用含相應(yīng)中和劑無菌洗脫液（5ml)的棉拭子在雙手指,.,手監(jiān)測標(biāo)準(zhǔn)范圍,1、外科手消毒：5cfu/cm22、衛(wèi)生手消毒：10cfu/cm2GB15982-2012醫(yī)院消毒衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)4.2,.,四、空氣消毒效果監(jiān)測,1、采樣時間段：在消毒處理后，操作前進(jìn)行采樣2、采樣方法：按面積定數(shù)、打開、蓋搭皿體邊緣3、采樣高度：距地面1.5米（80-150）4、布點方法：室內(nèi)面積30，設(shè)內(nèi)、中、外對角線三點;室內(nèi)面積30設(shè)4角及中央5點均距墻壁1米5、收取方法：由外往里逐一收取，避免穿過培養(yǎng)皿從里往外收取,.,1、監(jiān)測時間：每季度一次2、類環(huán)境、監(jiān)測標(biāo)準(zhǔn)：潔凈手術(shù)部(室)和其他潔凈場所，空氣中的細(xì)菌菌落總數(shù)要求應(yīng)遵循GB50333-2013醫(yī)院潔凈手術(shù)部建筑技術(shù)規(guī)范3.0.2-23、類環(huán)境監(jiān)、測標(biāo)準(zhǔn)：非潔凈手術(shù)部(室)、產(chǎn)房、重癥監(jiān)護(hù)病房，空氣中的細(xì)菌菌落總數(shù)4CFU(15min直徑9cm平皿)4、類環(huán)境、監(jiān)測標(biāo)準(zhǔn)：兒科病房、母嬰同室、婦產(chǎn)科檢查室、人流室、治療室、換藥室、消毒供應(yīng)中心、血液透析中心(室)、急診室、化驗室、各類普通病房、感染疾病科門診及其病房，空氣中的細(xì)菌菌落總數(shù)4CFU(5min直徑9cm平皿),.,GB50333-2013醫(yī)院潔凈手術(shù)部建筑技術(shù)規(guī)范3.0.2-2,類環(huán)境：潔凈手術(shù)室、級：級手術(shù)區(qū)0.2cfu/30min.90皿周邊區(qū)0.4cfu/30min.90皿（100級）6號手術(shù)間級手術(shù)區(qū)0.75cfu/30min.90皿周邊區(qū)1.5cfu/30min.90皿級手術(shù)區(qū)2cfu/30min.90皿周邊區(qū)4cfu/30min.90皿（10000級）5號手術(shù)間級6cfu/30min.90皿,.,五、消毒液監(jiān)測,1、采樣方法：用無菌注射器按無菌操作方法:10ml培養(yǎng)基吸取1ml被檢消毒液；5ml培養(yǎng)基吸取0.5ml被檢消毒液，加入培養(yǎng)劑中混勻。2、消毒液標(biāo)準(zhǔn)：使用中滅菌用消毒液：無菌生長使用中皮膚黏膜消毒液染菌量：10cfuml其他使用中消毒液染菌量：100cfuml,.,.,消毒液監(jiān)測標(biāo)準(zhǔn)范圍,1、使用中滅菌劑：無菌生長2、使用中皮膚黏膜消毒液：10cfu/ml3、其他使用中消毒液：100cfu/ml,.,六、紫外線強調(diào)監(jiān)測方法,1、日常記錄：使用后進(jìn)行消毒時間累積，使用超過1000小時的應(yīng)加強監(jiān)測或更換建立紫外線消毒使用登記本，每周用75%酒精擦拭燈管并記錄2、照射強調(diào)：普通30W直管型紫外線燈，新燈管的輻照強度90Wcm2為合格符合GB19258要求;使用中紫外線燈照射強度70Wcm2為合格；3、強調(diào)監(jiān)測：每半年一次監(jiān)測前用75%酒精清潔燈管表面，開燈，待其穩(wěn)定5分鐘后，放置強度監(jiān)測卡于燈管下垂直1米處，正面朝上，照射1分鐘，取卡，讀數(shù)。,.,4、注意事項：做好自身防護(hù)尤其是眼睛；檢測卡要閉光保存。,.,七、高度危險性醫(yī)療器械,手術(shù)器械、穿刺針等：無菌生長GB15982-2012醫(yī)院消毒衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)4.3不推薦醫(yī)院常規(guī)開展滅菌物品的無菌檢查,.,八、中度危險性醫(yī)療器械：,呼吸機管路、口表等：20cfu/件，不得檢出致病性微生物每季度監(jiān)測,.,九、低度危險性醫(yī)療器械,聽診器、血壓計袖帶等：20cfu/件，不得檢出致病性微生物每季度監(jiān)測,.,十、消毒內(nèi)鏡,胃鏡、腸鏡等：20cfu/件WS507-2016軟式內(nèi)鏡清洗消毒技術(shù)規(guī)范7.3每季度監(jiān)測,.,十一、透析用水,細(xì)菌：100cfu/ml每月監(jiān)測內(nèi)毒素：0.25EU/ml每季度監(jiān)測YY0572-2015血液透析及相關(guān)治療用水4.1,.,十二、透析液,細(xì)菌：100cfu/ml每月監(jiān)測內(nèi)毒素：0.5EU/ml每季度監(jiān)測YY0598-2015血液透析及相關(guān)治療用水53.54,.,每季度衛(wèi)生學(xué)監(jiān)測培養(yǎng)基統(tǒng)計表,.,十三、環(huán)境管理,凈化系統(tǒng)進(jìn)行：每天潔凈手術(shù)室的凈化系統(tǒng)應(yīng)在術(shù)前30min開啟，術(shù)后30min關(guān)閉。凈化系統(tǒng)應(yīng)連續(xù)運行至清潔消毒工作完成連臺手術(shù)的最短自凈時間要求：I級：15minII級：25minIII級：30minIV級：40min,.,環(huán)境管理,壓差控制潔凈手術(shù)室在手術(shù)中應(yīng)保持正壓裝態(tài)，潔凈區(qū)對非潔凈區(qū)的靜壓差為10pa.高潔凈室對低潔凈室應(yīng)保持正壓不同時開啟潔凈手術(shù)室（包括緩沖間）的兩道門手術(shù)過程中，應(yīng)保證門關(guān)閉：以避免頻繁的開關(guān)門時空氣流動污染，通向外走廊的門，術(shù)中禁止打開，按?？葡鄬潭ㄊ中g(shù)間，所有物品應(yīng)定位放置，減少進(jìn)出手術(shù)間的次數(shù),.,清潔、無塵、無污染維持無關(guān)物品不得進(jìn)入手術(shù)室，潔凈區(qū)的物品需經(jīng)清潔消毒處理方可進(jìn)入潔凈區(qū)物品如被服、床墊、清潔消毒工具等材質(zhì)選擇應(yīng)遵循產(chǎn)塵少的原則手術(shù)室墻、地光滑、無裂隙手術(shù)用房各種物體表面在每日術(shù)前和術(shù)后濕式擦拭清潔、消毒；手術(shù)過程中嚴(yán)格控制血跡、體液污染擴散（醫(yī)療廢物密閉收集和轉(zhuǎn)運），一旦污染立即消毒和局部清理，采用覆蓋消毒方法：蘸有消毒劑（不流淌為宜）的布類或多層紙巾覆蓋污物，或采用蘸有消毒劑（不流淌為宜）的布類或紙巾由污染物外四周2米處擦抹，消毒時間30min后，將布類或紙巾包裹污物丟棄不同區(qū)域及不同手術(shù)間清潔、消毒工具分開使用,.,醫(yī)院空氣凈化管理規(guī)范空氣潔凈技術(shù),維護(hù)與保養(yǎng)要求空氣處理機組、新風(fēng)機組應(yīng)定期檢查，保持清潔。新風(fēng)機組粗效濾網(wǎng)宜每2天清潔一次；粗效過濾器宜1月2月更換1次；中效過濾器宜每周檢查，3個月更換1次；亞高過濾器宜每年更換。發(fā)現(xiàn)污染和堵塞及時更換末端高效過濾器宜每年檢查一次，當(dāng)阻力超過設(shè)計初阻力160pa或已經(jīng)使用3年以上時宜更換排風(fēng)機組中的中效過濾器宜每年更換，發(fā)現(xiàn)污染和堵塞及時更換定期檢查回風(fēng)口過濾網(wǎng)，宜每周清潔一次，每年更換一次，如遇特殊污染，及時更換，并用消毒劑擦拭回風(fēng)口內(nèi)表面設(shè)專門維護(hù)管理人員，遵循設(shè)備的使用說明進(jìn)行維護(hù)保養(yǎng)；并制定運行手冊，有檢查和記錄,.,做好潔污控制,無菌手術(shù)與污染手術(shù)必須分室，如果不得不同室進(jìn)行，應(yīng)先行無菌術(shù)，后做污染手術(shù)接臺手術(shù)人員在2臺之間需嚴(yán)格進(jìn)行洗手