DBS61 0012-2016 食品安全地方標準 蜂蜜中16種激素殘留的測定 液相色譜-質譜質譜法

西 省 食 品 安 全 地 方 標 準 012 2016 食品安全地方標準 蜂蜜中 16 種激素殘留的測定 液相色譜 質譜法 2016施 2016布 陜西省衛(wèi)生和計劃生育委員會 發(fā)布 012 2016 I 前 言 本標準按照 本標準由中華人民共和國陜西出入境檢驗檢疫局提出。 本標準由中華人民共和國陜西出入境檢驗檢疫局負責起草。 本標準主要起草人：張璐，李瑩，何強，王菡，孔祥虹，鄒陽，付騁宇。 本標準屬首次發(fā)布。 012 2016 1 食品安全地方標準 蜂蜜中 16 種激素殘留的測定 液相色譜 質譜法 1 范圍 本標準規(guī)定了蜂蜜中 16種激素殘留的 液相色譜 質譜（ S）的檢測方法。 本標準適用于蜂蜜中糖皮質激素（曲安西龍、潑尼松龍、氫化可的松、甲基潑尼松龍、地塞米松、氟米松、曲安奈德、醋酸氟氫松、氟氫可的松、醋酸可的松、醋酸地塞米松、醋酸潑尼松）、雄性激素（甲睪酮、睪酮）、孕激素（孕酮）、腎上腺皮質激素（羥基醋酸去皮質酮） 16種激素 殘留定性和定量測定。 2 規(guī)范性引用文件 下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。 準化工作導則 第 1部分：標準的結構和編寫規(guī)則 6682 分析實驗室用水規(guī)格和試驗方法 3 原理 試樣經酶解，用乙腈提取目標化合物后，經固相萃取富集凈化，液相色譜 質譜儀測定，外標法定量。 4 試劑與材料 除非另有說明，在分析中僅使用確認為分析純的試劑和 6682中規(guī)定的一級水。 乙腈 ：色譜純。 甲醇 ：色譜純。 甲酸 ：色譜純。 二氯甲烷。 乙酸銨。 乙酸。 芳香基硫酸酯酶（ 含有 34600 U/基硫酸酯酶 5200 U/ 無水硫酸鈉： 650 灼燒 4 h，在干燥器中冷卻至室溫，貯于密封瓶中備用。 乙酸銨溶液（ 0.2 ）： 稱取 15.4 g 乙酸銨，加入 1000 溶解，用乙酸調節(jié) 012 2016 2 二氯甲烷 6+4，體積比）： 60 氯己烷和 40 醇混合 。 甲酸水溶液： 準確量取 1 酸加水稀釋至 1000 乙腈 1+9，體積比）： 10 腈和 90 混合。 標準品 ：曲安西龍、潑尼松龍、氫化可的松、甲基潑尼松龍、地塞米松、氟米松、曲安奈德、醋酸氟氫松、氟氫可的松、醋酸可的松、醋酸地塞米松、醋酸潑尼松龍、甲睪酮、睪酮、孕酮、醋酸去氧皮質酮，純度均大于 97 %，物質英文名稱及 見附錄 A。 標準儲備液（ 1 mg/：分別準確稱 10.0 標準品于 10 量瓶中，用甲醇溶解，搖勻， 避光保存，可保存 12 個月。 混合標準中間溶液（ 1 g/： 分別準確量取 1 mg/準儲備液各 25 量瓶中，用水溶解， 0 4 避光保存，可保存 6 個月。 混合標準使用溶液 ： 根據需要，臨時吸取一定量的混合標準中間溶液（ 水稀釋，配制成適當濃度的標準工作溶液 0 4 避光保存，可保存 6 個月 。 60 3 ：使用前依次用 6 甲醇（ 6 6 氨基固相萃取柱 （ 60 3 ：使用前用 6 甲醇（ 化。 5 儀器與設備 液相色譜 配電噴霧離子源 。 分析天平： 感量 天平： 感量 g。 振蕩器 渦旋混勻器 高速離心機 固相萃取裝置 氮吹儀 旋轉蒸發(fā)儀 離心管： 50 有機系濾膜： m。 6 試 樣制備與保存 對無結晶的實驗室樣品，將其攪拌均勻。對有結晶的樣品，在封閉情況下，置于不超過 60的水浴中溫熱，震蕩，待樣品全部融化后攪勻，迅速冷卻至室溫，分出 0.5 備好的樣品置于樣品瓶中，密封，并做上標記。 012 2016 3 7 測定步驟 提取 準確稱取試樣 5 g（精確至 g），于 50 入 20 .2 乙酸銨溶液（ 渦旋混合，再加入 芳香基硫酸酯酶 100 L，于 37 1震蕩酶解 12 h。取出冷卻至室溫，加入 20 5 4500 r/ 乙腈層過無水硫酸鈉漏斗。再加入 15 復上述提取過程。合并乙腈層， 40下旋轉蒸發(fā)至近干，用 10 .2 乙酸銨溶液（ 解，待凈化。 凈化 提取液（ 1.5 mL/將小柱減壓抽干。再將活化過的氨基柱（ 聯在 8 甲醇（ 脫并收集洗脫液，取下 用 2 甲醇（ 氨基柱，合并洗脫液，于 40 氮氣吹干，用 1 水（ 解殘渣，渦旋混勻，濾膜（ 濾，供液相色譜 測定 液相色譜條件 色譜柱： 00 m） , 或相當者； 柱溫： 40 ； 流速： 0.3 mL/ 進樣量： L; 流動相：乙腈 甲酸水，梯度洗脫，洗脫條件參見附錄 B； 糖皮質激素質譜條件 a）電離源：電噴霧離子源； b）離子化方式：負離子模式； c）檢測模式：選擇離子反應監(jiān)測； d）噴霧電壓： 2500 V； e）氣化溫度： 300 ； f）鞘氣（ ； g）輔助氣（ : ； h）離子傳輸管溫度： 300 ； i）去簇電壓： ； j）碰撞氣（ k）特征離子參見附錄 雄性激素、孕激素、腎上腺皮質 激素質譜條件 a）電離源：電噴霧離子源； b）離子化方式：正離子模式； c）檢測模式：選擇離子反應監(jiān)測； d）噴霧電壓： 3300 V； e）氣化溫度： 300 ； f）鞘氣（ ； 012 2016 4 g）輔助氣（ : ； h）離子傳輸管溫度： 300 ； i）去簇電壓： ； j）碰撞氣（ pa k）特征離子參數見附錄 C. 2。 測定法 性測定 通過試樣色譜圖的保留時間與相應標準品的保留時間、各色譜峰的特征離子與響應濃度標準溶液各色譜峰的特征離子相對照定性，試樣與標準品保留時間的相對偏差不大于 5 %；試樣特征離子的相對豐度與濃度相當混合標準溶液的相對豐度一致，相對豐度允許偏差不超過表 1的規(guī)定，則可判斷試樣中存在相應的被測物。 表 1 試樣溶液中離子相對豐度的允許偏差范圍 相對豐度 （ %） 50 20 50 10 20 10 允許偏差 （ %） 20 25 30 50 量測定 根據試樣中被測樣液的含量情況，按外標法，以峰面積定量。選取待測物的響應值在儀器線性響應范圍內的濃度進行測定，如果超出儀器線性響應范圍應進行稀釋。在上述條件下，標準溶液中各目標化合物的特征離子流色譜圖見附錄 D。 行試驗 按照 白試驗 除不稱取試樣外， 均按 8 結果計算和表達 試樣中各目標化合物殘留量（ g/按式 （ 1） 計算： (1) 式中： X 供試試樣中各目標化合物殘留量，單位為微克每千克（ g/ A 試樣溶液中各目標化合物的峰面積； 標準工作溶液中各目標化合物的濃度，單位為微克每升（ g/L）； V 樣液最終定容體積，單位為毫升（ 標準工作溶液中各目標化合物的濃度，單位為微克每升（ g/L）； m 試樣質量，單位為克（ g）。 注：計算結果需扣除空白值，測定結果用平行測定的算術平均值表示，保留兩位有效數字。 9 定量限、回收率和精密度 檢出限 012 2016 5 本方法 曲安西龍、潑尼松龍、氫化可的松、甲基潑尼松龍、地塞米松、氟米松、曲安奈德、醋酸氟氫松、氟氫可的松、醋酸可的松、醋酸地塞米松、甲睪酮、睪酮、孕酮、醋酸去氧皮質酮 檢出限均為 g /酸潑尼松檢出限為 g / 回 收率 蜂蜜中各種激素 的回收率試驗數據見附錄 E，在 g/。 精密度 本方法的相對標準偏差 15 %。 012 2016 6 附 錄 A （規(guī)范性附錄） 16 種激素物