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1、第一節(jié) 基因操作工具酶 第二節(jié) 核酸的分離純化第三節(jié) 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）第四節(jié) 凝膠電泳系統(tǒng)第五節(jié) 核酸的分子雜交第六節(jié) 載體系統(tǒng),第十章 分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù),第一節(jié) 基因操作工具酶,基因工程操作中最常用的工具酶,主要內(nèi)容,1 限制性核酸內(nèi)切酶 2 DNA連接酶 3 DNA聚合酶 4 修 飾 酶 5 小 結(jié),SUMMARY,Home,1 限制性核酸內(nèi)切酶,1.1 引 言 1.2 命 名 1.3 分 類 1.4 活性及影響因素,Home,核酸酶（Nuclease）： 通過切割相鄰兩個(gè)核苷酸殘基間磷酸二酯鍵，導(dǎo)致核酸分子多核苷酸鏈水解斷裂的蛋白酶。 （1）按作用對(duì)象分: DNAase 小牛腸

2、道: calf intestinal alkaline phosphatase (CIP)。,堿性磷酸酶的活性,注意：CIP的比活性比BAP高出10-20倍，且CIP在SDS中68就可完全失活，而BAP卻是熱抗性酶。,Back,來(lái)源: 前淋巴細(xì)胞和分化早期的類淋巴細(xì)胞。 功能：催化DNA進(jìn)行53方向的聚合作用, 逐個(gè)將dNTP分子加到線性DNA分子3-OH端。,4.2 末端轉(zhuǎn)移酶 (terminal transferase),末端轉(zhuǎn)移酶的催化作用,用途： (1) (主要)給外源DNA片段和及載體加互補(bǔ)同聚物尾巴； (2) 標(biāo)記DNA片段的3末端。,Back,4.3 T4多核苷酸激酶T4 pol

3、ynucleotide kinase (PNK),來(lái)源: T4噬菌體感染的大腸桿菌細(xì)胞。 功能：催化-磷酸從ATP分子轉(zhuǎn)移給DNA或RNA的5-OH末端（圖）。,T4 多核苷酸激酶的活性（正向反應(yīng)）,DNA/RNA（單鏈或雙鏈）,T4多核苷酸激酶的交換活性,過量,用途： （1）標(biāo)記DNA的5-末端； （2）使缺失5-P末端的DNA發(fā)生磷酸化作用。,Back,4.4 S1核酸酶,來(lái)源：來(lái)源于稻谷曲霉（Aspergillus oryzae） 功能：特異單鏈核酸內(nèi)切酶 注意：對(duì)雙鏈DNA、雙鏈RNA和DNA-RNA雜交體不敏感。,S1核酸酶的活性,用途： (1)測(cè)定真核基因中間隔子序列位置； (2)去除DNA片段中突出的

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