儀器分析實驗作業(yè)

1、實驗4 混合苯系物分析實驗（氣相色譜法）一、實驗?zāi)康?.通過本實驗了解氣相色譜儀的基本結(jié)構(gòu)及操作方法；2.掌握用保留時間定性，歸一化法定量測定法；3.加深對理論塔板數(shù)、理論塔板高度及分離度等概念的理解及計算方法。二、實驗原理苯、甲苯、乙苯的混合物都是苯系物，這三種物質(zhì)都帶有苯環(huán)結(jié)構(gòu)，它們的沸點分別是80.10、110.63、136.19，用一般的方法較難分離及測定，用氣相色譜法分析既快速又準(zhǔn)確。 混合苯系物在一定的色譜條件下被分離后，進(jìn)入氫火焰 (或熱導(dǎo)) 檢測器，得到每一組分的色譜峰，用標(biāo)樣對照，根據(jù)保留時間進(jìn)行定性。把所有出峰組分的含量之和按100%計的定量方法稱為歸一化法。使用歸一化法定

2、量，要求試樣中的各個組分均流出，且在檢測器上有信號響應(yīng)。樣品中各組分的百分含量可用峰面積歸一化法進(jìn)行計算。式中 wi 表示 i 組分的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，Ai 表示 i 的組分的峰面積。fi為i 組分的相對校正因子。歸一法的特點是定量結(jié)果與進(jìn)樣量無關(guān)，不受操作條件影響；要求全出峰，某些不需要定量的組分也必須測出其峰面積及fi值，計算較麻煩；不需要標(biāo)準(zhǔn)樣；測量低含量尤其是微量雜質(zhì)時，誤差較大。三、儀器與試劑氣相色譜儀（帶FID檢測器）；色譜工作站；微量進(jìn)樣器（1uL）；色譜柱：不銹鋼柱，內(nèi)徑2mm，長1.5m，內(nèi)裝3%OV-101/Chromosorb W AW DMCS 80目100目；氮氣鋼瓶，空氣壓

3、縮機(jī)，氫氣發(fā)生器；試劑：苯、甲苯、乙苯和正已烷（均為分析純）四、實驗條件1、固定相：不銹鋼填充柱，內(nèi)徑2mm，長0.5m，內(nèi)裝3%OV-101 /Chromosorb W AW DMCS 80目100目2、溫度：進(jìn)樣口溫度150；柱溫50左右；檢測器溫度1503、氣體流量：載氣為氮氣30 mL/min，空氣300 mL/min，氫氣30 mL/min4、檢測器：FID，靈敏度（根據(jù)儀器調(diào)整到最佳）5、進(jìn)樣量：0.2uL左右五、實驗步驟1、標(biāo)樣配制：取一個稱量瓶在天平上準(zhǔn)確稱重，分別滴入苯、甲苯、乙苯和環(huán)已烷各0.5克左右，每加一種試劑后準(zhǔn)確稱重，記下各組分的重量，算出百分含量。2、進(jìn)標(biāo)樣開啟色

4、譜儀，按實驗條件設(shè)置色譜參數(shù)，待基線平穩(wěn)后，用標(biāo)樣把1uL微量進(jìn)樣器洗3-5次，然后往色譜儀內(nèi)注射0.2 uL標(biāo)樣，采集色譜數(shù)據(jù)。3、進(jìn)待測樣用待測樣把1uL微量進(jìn)樣器洗3-5次，然后往色譜儀內(nèi)注射0.2 uL標(biāo)樣。采集色譜數(shù)據(jù)。4、結(jié)果計算（1）對比苯、甲苯、乙苯和正已烷標(biāo)樣和混合物的保留時間，在圖譜上標(biāo)出各峰的名稱；（2）以苯為內(nèi)標(biāo)，計算苯、甲苯、乙苯的相對較正因子；計算苯、甲苯、乙苯各自的理論塔板數(shù)；（3）計算待測樣中苯、甲苯、乙苯的百分含量；（4）計算苯和甲苯、甲苯和乙苯的分離度。六、注意事項1.吸取標(biāo)樣和樣品溶液的微量注射器必須專用。不得將針芯拉出，否則會造成損壞。2.進(jìn)樣速度盡量快

5、，以防色譜峰展寬。3.進(jìn)樣的同時按下數(shù)據(jù)采集鍵，以保證計時準(zhǔn)確。七、思考題1. 氣相色譜儀的基本設(shè)備包括哪幾部分?（用線路連接方框圖表示，并注明實際所用儀器的型號）。2. 同樣的實驗條件下，同一色譜柱對不同化合物的理論塔板數(shù)是否相同？3. 氣相色譜定量分析中的歸一化法有什么特點？在應(yīng)用上要注意些什么問題？實驗5 高效液相色譜法測定甲硝唑片的含量一、實驗?zāi)康?.學(xué)習(xí)高效液相色譜儀的操作。2.掌握高效液相色法測定甲硝唑片含量的基本原理和操作方法。二、實驗原理甲硝唑(Metronidazole)為合成咪唑類抗阿米巴病及滴蟲病藥，口服吸收迅速而完全，生物利用度80以上。體內(nèi)代謝主要與葡萄糖醛酸結(jié)合，少

6、量發(fā)生側(cè)鏈氧化，代謝物與原型藥物(約20)自尿中排出，亦可通過其它體液排出體外。 甲硝唑在乙醇中略溶，在水或氯仿中微溶，在乙醚中極微溶解。采用高效液相色譜法測定甲硝唑片的含量。根據(jù)含量與峰面積成正比的關(guān)系，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，測定未知的甲硝唑含量。甲硝唑為抗阿米巴病及滴蟲藥,用于各種阿米巴病及滴蟲病,也可用于厭氧菌感染,并作為抗厭氧菌的首選藥而廣泛應(yīng)用于臨床。1978年世界衛(wèi)生組織將本品定為抗厭氧菌感染的基本藥物。我國1985年版藥典收載甲硝唑為抗原蟲和抗厭氧菌藥物。甲硝唑的化學(xué)名稱為2-甲基-5-硝基咪唑-1-乙醇，分子式C6H9N3O3，結(jié)構(gòu)式為（如右圖）：甲硝唑片一般規(guī)格為0.2 g，為白色或

7、類白色片。三、儀器和試劑1.島津LC-10A高效液相色譜儀(包括SPD-10A紫外檢測器,CR-7A數(shù)據(jù)處理器)2.甲硝唑?qū)φ掌?3.甲硝唑片樣品:河南華鑫制藥廠四、實驗步驟1.對照品溶液的制備精確稱取甲硝唑?qū)φ掌芳s12 mg置25 mL容量瓶中,用適量流動相溶解后稀釋至刻度,搖勻,即得。2.色譜條件流動相:水-甲醇( 80:20)，流速1.0 mL/min,檢測波長254 nm,進(jìn)樣量20 L,理論板數(shù)9629。3.樣品溶液的制備取樣品10片,研細(xì),精確稱取適量(約相當(dāng)于甲硝唑500 mg) 置50 mL量瓶中,用適量甲醇溶解后,用流動相定容,靜置30 min。精密量取5 mL上清液置100

8、 mL量瓶中,用流動相定容,混勻, 過濾。4.標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精確稱取甲硝唑?qū)φ掌愤m量（約12 mg）置25 mL容量瓶中,用適量甲醇溶解后,用流動相定容,稀釋使成每1 mL含對照品480、240、120、60、30 g溶液系列,按上述色譜條件操作,以甲硝唑濃度(C,mg/L)為橫坐標(biāo),峰面積(A)為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程。5.精密度精密吸取甲硝唑?qū)φ掌啡芤?0 L注入色譜儀,重復(fù)測定5次,測定其RSD值。6.樣品測定用上述3中配制好的樣品進(jìn)行測定，并記錄保留時間；同時另以中國藥典法進(jìn)行測定比較。五、數(shù)據(jù)及處理1.計算系列甲硝唑?qū)φ掌泛痛郎y甲硝唑的峰面積(3次平均值)。2.以對照品的峰面積對相應(yīng)濃度作標(biāo)準(zhǔn)曲線。3.從標(biāo)準(zhǔn)曲線上求得甲硝唑片中甲硝唑的含量。序號