實驗室常用培養(yǎng)基

1、實驗用培養(yǎng)基配制 1 牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基（用于細菌培養(yǎng)） 牛肉膏 3g ，蛋白胨 10g ， NaCl 5g ，水 1000mL ， pH7.4 7.6 2. 高氏 1 號培養(yǎng)基 ( 用于放線菌培養(yǎng) ) 可溶性淀粉 20g ， KNO 3 1g ， NaCl 0.5g ， K 2 HPO 4- 3H 2 O 0.5g ， MgSO 4 7H 2 O 0.5g, ， FeSO4 7H 2 O 0.01g ，水 1000mL ， pH7.4 7.6 。 配制時注意，可溶性淀粉要先用冷水調勻后再加入到以上培養(yǎng)基中。 3 馬丁氏（ Martin ）培養(yǎng)基（用于從土壤中分離真菌） K 2 HPO 4 1

2、g ， MgSO 4 7H 2 O 0.5g ，蛋白胨 5g ，葡萄糖 10g ， 1/3000 孟加拉紅水溶液 100mL, 水 900mL ，自然 pH ， 121 濕熱滅菌 30min 。 待培養(yǎng)基融化后冷卻 55 60 時加入鏈霉素 ( 鏈霉素含量為 30 g/mL). 4. 馬鈴薯培養(yǎng)基 (PDA)( 用于霉菌或酵母菌培養(yǎng) ) 馬鈴薯 ( 去皮 )200g, 蔗糖 ( 或葡萄糖 ) 20g, 水 1000mL 配制方法如下 : 將馬鈴署去皮 , 切成約 2cm 2 的小塊 , 放入 1500mL 的燒杯中煮沸 30min, 注意用玻棒攪拌以防糊底 , 然后用雙層紗布過濾 , 取其濾液

3、加糖 , 再補足至 1000mL, 自然 pH. 霉菌用蔗糖 , 酵母菌用葡萄糖 . 5. 察氏培養(yǎng)基 ( 蔗糖硝酸鈉培養(yǎng)基 )( 用于霉菌培養(yǎng) ) 蔗糖 30g, NaNO 3 2g, K 2 HPO 4 1g, MgSO 4 7H 2 O 0.5g, KCl 0.5g, FeSO4 7H 2 O 0.1g, 水 1000mL, pH7.0 7.2 6. Hayflik 培養(yǎng)基 ( 用于支原體培養(yǎng) ) 牛心消化液 ( 或浸出液 )1000mL, 蛋白胨 10g, NaCl 5g, 瓊脂 15g, pH7.8 8.0, 分裝每瓶 70mL, 121 濕熱滅菌 15min, 待冷卻至 80 左右

4、 , 每 70mL 中加入馬血清 20mL,25% 鮮酵母浸出液 10mL, 15 醋酸鉈水溶液 2.5mL, 青霉素 G 鉀鹽水溶液 (20 萬單位以上 )0.5mL, 以上混合后傾注平板 . 注意 : 醋酸鉈是極毒的藥品 , 需特別注意安全操作 . 7 麥氏 (McCLary) 培養(yǎng)基 ( 醋酸鈉培養(yǎng)基 ) 葡萄糖 0.1g, KCl 0.18g ，酵母膏 0.25g ，醋酸鈉 0.82g, 瓊脂 l.5g ，蒸餾水 l00mL 。溶解后分裝試管， 1l5 濕熱滅菌 15min 。 8 葡萄糖蛋白胨水培養(yǎng)基 ( 用于 V.P 反應和甲基紅試驗 ) 蛋白胨 0.5g ，葡萄糖 0.5g ，

5、K 2 HPO 4 0.2g ，水 100mL, pH7.2, 1l5 濕熱滅菌 20min 。 9 蛋白胨水培養(yǎng)基 ( 用于吲哚試驗 ) 蛋白胨 10g, NaCl 5g, 水 1000mL ， pH7.2 7.4, 121 濕熱滅菌 20min 。 10 糖發(fā)酵培養(yǎng)基 ( 用于細菌糖發(fā)酵試驗 ) 蛋白胨 0.2g, NaCl 0.5g, K 2 HPO 4 0.02g ，水 100mL ，溴麝香草酚藍 ( 質量分數(shù) 1% 水溶液 ) 0.3mL ，糖類 lg 。分別稱取蛋白胨和 NaCl 溶于熱水中，調 pH 至 7.4 ，再加入溴麝香草酚藍 ( 先用少量質量分數(shù) 95% 乙醇溶解后，再加

6、水配成質量分數(shù) 1% 水溶液 ) ，加入糖類，分裝試管，裝量 4 5cm 高，并倒放入一杜氏小管 ( 管口向下，管內(nèi)充滿培養(yǎng)液 ) 。 115 濕熱滅菌 20min 。滅菌時注意適當延長煮沸時間，盡量把冷空氣排盡以使杜氏小管內(nèi)不殘存氣泡。常用的糖類，如葡萄糖、蔗糖、甘露糖、麥芽糖、乳糖、半乳糖等 ( 后兩種糖的用量常加大為質量分數(shù) 1.5%) 。 11. RCM 培養(yǎng)基 ( 強化梭菌培養(yǎng)基 ) ( 用于厭氧菌培養(yǎng) ) 酵母膏 3g ，牛肉膏 l0g ，蛋白胨 10g ，可溶性淀粉 lg ，葡萄糖 5g, 半胱氨酸鹽酸鹽 0.5g ， NaCl 3g ， NaAc 3g, 水 l000mL, p

7、H8.5 ，刃天青 3mg/L, l2l 濕熱滅菌 30min 。 12. TYA 培養(yǎng)基 ( 用于厭氧菌培養(yǎng) ) 葡萄糖 40g ，牛肉膏 2g ，酵母膏 2g ，胰蛋白胨 (bacto-typetone)6g ，醋酸銨 3g, KH 2 PO 4 0.5g ， MgSO 4 7H 2 O 0.2g ， FeSO 4 7H 2 O 0.01g ，水 1000mL, pH6.5, 121 濕熱滅菌 30min 。 13 玉米醪培養(yǎng)基 ( 用于厭氧菌培養(yǎng) ) 玉米粉 65g ，自來水 1000mL ，混勻，煮 10min 成糊狀，自然 pH, 121 濕熱滅菌 30min 。 14 中性紅培養(yǎng)基

8、 ( 用于厭氧菌培養(yǎng) ) 葡萄糖 40g ，胰蛋白胨 6g ，酵母膏 2g ，牛肉膏 2g ，醋酸銨 3g ， KH 2 PO 4 5g ，中性紅 0.2g, MgSO 4 7H 2 O 0.2g ， FeSO 4 7H 2 O 0.01g, 水 1000ml, pH6.2, 121 濕熱滅菌 30min 。 15 CaCO3 明膠麥芽汁培養(yǎng)基 ( 用于厭氧菌培養(yǎng) ) 麥芽汁 (6 波美 )1000mL ，水 1000mL ， CaCO 3 10g, 明膠 10g ， pH6.8, 121 濕熱滅菌 30min 。 16 BCG 牛乳培養(yǎng)基 ( 用于乳酸發(fā)酵 ) (A) 溶液：脫脂乳粉 100

9、g ，水 500mL ，加入質量分數(shù) 1.6% 溴甲酚綠 (B.C.G) 乙醇溶液 1mL ， 80 滅菌 20min 。 (B) 溶液：酵母膏 10g ，水 500mL ，瓊脂 20g , pH6.8, 121 濕熱滅菌 20min 。 以無菌操作趁熱將 (A) 、 (B) 溶液混合均勻后倒平板。 17 乳酸菌培養(yǎng)基 ( 用于乳酸發(fā)酵 ) 牛肉膏 5g ，酵母膏 5g ，蛋白胨 10g ，葡萄糖 10g ，乳糖 5g, NaCl 5g ，水 1000mL, pH6.8, 121 濕熱滅菌 20min 。 18 酒精發(fā)酵培養(yǎng)基 ( 用于酒精發(fā)酵 ) 蔗糖 10g, MgSO 4 7H 2 O

10、0.5g, NH 4 NO 3 0.5g, 質量分數(shù) 20% 豆芽汁 2mL, KH 2 PO 4 0.5g ，水 100mL ，自然 pH 。 19. 柯索夫培養(yǎng)基 ( 用于鉤端螺旋體培養(yǎng) ) 優(yōu)質蛋白胨 0.4g, NaCl 0.7g, KCl 0.02g, Na HCO 3 0.01g ， CaCl 0.02g, KH 2 PO 4 0.09g, NaH 2 PO 4 0.48g, 蒸餾水 500 mL ，無菌兔血清 40mL 。 制法：除兔血清外的其余各成分混合，加熱溶解，調 pH 至 7.2, 121 濕熱滅菌 20min ，待冷卻后，加入無菌兔血清，制成 8% 血清溶液，然后分裝試

11、管（ 5 10mL/ 管） , 56 水浴滅活 lh 后備用。 20 豆芽汁培養(yǎng)基 黃豆芽 500g ，加水 1000mL ，煮沸 lh ，過濾后補足水分， 121 濕熱滅菌后存放備用，此即質量分數(shù)為 50% 的豆芽汁， 用于細菌培養(yǎng)：質量分數(shù) 10% 豆芽汁 200mL ，葡萄糖 ( 或蔗糖 )50g ，水 800mL, pH7.2 7.4 。 用于霉菌或酵母菌培養(yǎng)：質量分數(shù) 10% 豆芽汁 200mL ，糖 50g ，水 800mL ，自然 pH 。霉菌用蔗糖，酵母菌用葡萄糖。 21 LB(LuriaBertani) 培養(yǎng)基 ( 細菌培養(yǎng)，常在分子生物學中應用 ) 雙蒸餾水 950mL ，

12、胰蛋白胨 l0g, NaCl l0g ，酵母提取物 (bacto- yeast extract)5g ，用 lmol/L NaOH ( 約 l mL) 調節(jié) pH 值至 7.0 ，加雙蒸餾水至總體積為 1L ， 121 濕熱滅菌 30min 。 含氨芐青霉素 LB 培養(yǎng)基 : 待 LB 培養(yǎng)基滅菌后冷至 50 左右加入抗生素，至終濃度為 80 100mg/L 。 22 復紅亞硫酸鈉培養(yǎng)基 ( 遠藤氏培養(yǎng)基 ) ( 用于水體中大腸菌群測定 ) 蛋白胨 10g ，牛肉浸膏 5g ，酵母浸膏 5g ，瓊脂 20g ，乳糖 10g, K 2 HPO 4 0.5g ，無水亞硫酸鈉 5g, 5% 堿性復紅

13、乙醇溶液 20mL ，蒸餾水 1000mL 。 制作過程：先將蛋白胨、牛肉浸膏、酵母浸膏和瓊脂加入到 900mL 水中，加熱溶解，再加入 K 2 PO 4 ，溶解后補充水至 l000mL ，調 pH 至 7.2 7.4 。隨后加入乳糖，混勻溶解后，于 115 濕熱滅菌 20min 。再稱取亞硫酸鈉至一無菌空試管中，用少許無菌水使其溶解，在水浴中煮沸 10min 后，立即滴加于 20mL 質量分數(shù) 5% 堿性復紅乙醇溶液中，直至深紅色轉變?yōu)榈奂t色為止。將此混合液全部加入到上述已滅菌的并仍保持融化狀態(tài)的培養(yǎng)基中，混勻后立即倒平板，待凝固后存放冰箱備用，若顏色由淡紅變?yōu)樯罴t，則不能再用。 23 乳

14、糖蛋白胨半固體培養(yǎng)基 ( 用于水體中大腸菌群測定 ) 蛋白胨 10g ，牛肉浸膏 5g ，酵母膏 5g ，乳糖 10g ，瓊脂 5g ，蒸餾水 1000mL ， pH7.2 7.4 ，分裝試管 (l0mL/ 管 ), 115 濕熱滅菌 20min 。 24 乳糖蛋白胨培養(yǎng)液 ( 用于多管發(fā)酵法檢測水體中大腸菌群 ) 蛋白胨 10g ，牛肉膏 3g ，乳糖 5g ， NaCl 5g ，蒸餾水 l000mL ，質量分數(shù) 1.6% 溴甲酚紫乙醇溶液 lmL 。調 pH 至 7.2 ，分裝試管 (l0mL/ 管 ) ，并放入倒置杜氏小管， l15 濕熱滅菌 20min 。 25 三倍濃乳糖蛋白胨培養(yǎng)液

15、 ( 用于水體中大腸菌群測定 ) 將乳糖蛋白胨培養(yǎng)液中各營養(yǎng)成分以擴大 3 倍加入到 l000mL 水中，制法同上，分裝于放有倒置杜氏小管的試管中，每管 5mL ， 1l5 濕熱滅菌 20min 。 26 伊紅美藍培養(yǎng)基 (EMB 培養(yǎng)基 )( 用于水體中大腸菌群測定和細菌轉導 ) 蛋白胨 l0g, 乳糖 10g, K 2 HPO 4 2g ，瓊脂 25g, 質量分數(shù) 2%/ 伊紅 Y( 曙紅 ) 水溶液 20mL, 質量分數(shù) 0.5% 美藍 ( 亞甲藍 ) 水溶液 l3mL ， pH7.4 。 制作過程：先將蛋白胨、乳糖、 K 2 HPO 4 和瓊脂混勻，加熱溶解后，調 pH 至 7.4,

16、1l5 濕熱滅菌 20min ，然后加入已分別滅菌的伊紅液和美藍液，充分混勻，防止產(chǎn)生氣泡。待培養(yǎng)基冷卻到 50 左右倒平皿。如培養(yǎng)基太熱會產(chǎn)生過多的凝集水，可在平板凝固后倒置存于冰箱備用。在細菌轉導實驗中用半乳糖代替乳糖，其余成分不變。 27 加倍肉湯培養(yǎng)基 ( 用于細菌轉導 ) 牛肉膏 6g ，蛋白胨 20g, NaCL 10g ，水 1000mL, pH7.4 7.6 。 28 半固體素瓊脂 ( 用于細菌轉導 ) 瓊脂 1g ，水 100mL, 121 濕熱滅菌 30min 。 29 豆餅斜面培養(yǎng)基 ( 用于產(chǎn)蛋白酶霉菌菌株篩選 ) 豆餅 100g 加水 5 6 倍，煮出濾汁 100mL

17、 ，汁內(nèi)加入 KH 2 PO 4 質量分數(shù)為 0.1%, MgSO 4 質量分數(shù)為 0.05%, (NH 4 ) 2 SO 4 質量分數(shù)為 0.05% ，可溶性淀粉質量分數(shù)為 2%, pH6 ，瓊脂質量分數(shù)為 2% 2.5% 。 30 酪素培養(yǎng)基 ( 用于蛋白酶菌株篩選 ) 分別配制 A 液和 B 液。 A 液：稱取 Na 2 HPO 4 7H 2 O 1.07g 。干酪素 4g ，加適量蒸餾水，并加熱溶解。 B 液：稱取 KH 2 PO 4 0.36g ，加水溶解。 A 、 B 液混合后，加入酪素水解液 0.3 mL, 加瓊脂 20g ，最后用蒸餾水定容至 1000mL 。 酪素水解液的配制

18、： 1g 酪蛋白溶于堿性緩沖液中，加入質量分數(shù) 1% 的枯草芽孢桿菌蛋白酶 25mL 加水至 100mL, 30 水解 lh 。用于配制培養(yǎng)基時，其用量為 1000mL 培養(yǎng)基中加入 100mL 以上水解液。 31 細菌基本培養(yǎng)基 ( 用于篩選營養(yǎng)缺陷型 ) Na 2 HPO 4 7H 2 O 1g ， MgSO 4 7H 2 O 0.2g , 葡萄糖 5g , NaCl 5g , K 2 HPO 4 lg ，水 l000mL, pH7.0, 1l 5 濕熱滅菌 30min 。 32. YEPD 培養(yǎng)基 ( 用于酵母原生質體融合 ) 酵母粉 10g, 蛋白胨 20g ，葡萄糖 20g ，蒸餾水 1000mL, pH6.0 ， 115 濕熱滅菌 20min 。 33. YEPD 高滲培養(yǎng)基 ( 用于酵母原生質體融合 ) 在 YEPD 培養(yǎng)基中加入 0.6mol/L 的 NaCL ，質量分數(shù) 3% 瓊脂。 34. YNB 基本培養(yǎng)基 ( 用于酵母原生質體融合 ) 質量分數(shù) 0.67