醫(yī)學交流課件：CD133+細胞治療糖尿病足臨床與基礎研究

1、CD133+細胞治療糖尿病足: 臨床與基礎研究,2016-12-24,提 綱,1. 糖尿病足（DF）概述 2. DF臨床療效評價-5年 3. 自體CD133+ EPCs治療DF I、II期臨床試驗結果 4. DF相關基礎與機理研究,http:/,1.1 DF 定義及發(fā)病機制,定義： 糖尿病足是神經(jīng)病變使下肢保護功能減退， 大血管和微血管病變使動脈灌注不足致微循環(huán)障礙， 發(fā)生潰瘍和壞疽的疾病狀態(tài)。分早、中、晚三期,1.2 現(xiàn)有治療方法及問題,A. 藥物治療 代謝控制 降糖藥物、胰島素 擴血管和活血化瘀 前列腺素E、西洛他唑、低右、丹參 神經(jīng)病變治療 維生素B族 抗生素使用 合并感染時,http:

2、/,Tang T, Ye M, Pei E, Li M. Genotype-guided dosing of coumarin anticoagulants: a meta-analysis of randomized controlled trials. J Cardiovasc Pharmacol Ther 2015 Jan 8. pii: 1074248414565666. PMID:25575537(IF, 3.9,1.2 現(xiàn)有治療方法及問題,B. 外科手術 切開取栓/內(nèi)膜切除 局限性腔內(nèi)血栓，完全閉塞 搭橋（Bypass） 長段/多發(fā)性血栓，完全閉塞 人造血管/自體血管（大隱靜脈）

3、截肢 不可挽回的肢體壞死，防止感染蔓延 清創(chuàng)及皮瓣移植,重建大血管循環(huán),http:/,1.2 現(xiàn)有治療方法及問題,C. 腔內(nèi)治療技術（介入治療） 球囊成形術 髂動脈膝下動脈足部 支架成形術 髂動脈腘動脈，部分脛腓干 血栓旋切 大血管 腔內(nèi)激光治療 大血管,http:/,提 綱,1. 糖尿病足（DF）概述 2. DF臨床療效評價-5年 3. 自體CD133+ EPCs治療DF I、II期臨床試驗結果 4. DF相關基礎與機理研究,http:/,2000年4月，首例PTA,DF臨床療效評價,同濟大學標準-指標,同濟大學“五點法皮溫” （髕骨下緣、外踝、足背、足底、額溫） ABI，TBI（正常、輕度

4、、中度、重度） CTA，主髂動脈、股腘動脈、膝下動脈 （單發(fā)，雙支病變、多發(fā)病變） 微泡造影（灌注指數(shù)、達峰時間、分布曲線等） 白介素水平（2,4,6,8,12） TFT，（趾/指氧飽和度比值,同濟大學標準-分型,0 期，正常（1.79%，4/223） I 期， 輕度（4.03%，9/223） II 期，中度（87.44%，195/223） IIa 期，35/223 IIb 期，76/223 IIc 期，84/223 III 期，重度（6.72%,15/223,時間：2009.01.01-2014.12.31（5年） 累計：223例 通暢率： 12月，18月，24月，36月，48月，60月，6

5、0月 89%， 81%，76%， 45%， 30.3%，19.1%，10.2% 治療次數(shù)：累計，426次， 平均：1.91次（1-7次） 死亡原因:感染/心衰，79例,DF臨床療效評價,糖尿病外周血管病介入治療的幾點認識（述評） 介入放射學雜志 2006：15（7）：391,II型糖尿病患者下肢動脈病變血管造影的特征 上海醫(yī)學 2007；30（12）：897,糖尿病膝下動脈病變經(jīng)皮腔內(nèi)血管成形術短期療效（通訊作者） 上海醫(yī)學 2010;33(3):287-289,糖尿病足早期診斷及其療效評價的研究進展 （通訊作者） 臨床放射學雜志 2014；33(11)；1783,DF臨床療效評價,越來越深，

6、越來越煩,1.2 現(xiàn)有治療方法及問題,技術問題：1.血栓脫落,http:/,1.2 現(xiàn)有治療方法及問題,技術問題： 2.近段再次狹窄 3.支架內(nèi)再狹窄,1.2 現(xiàn)有治療方法及問題,全身多發(fā)性血管狹窄閉塞,1.2 現(xiàn)有治療方法及問題,方法存在問題： 適應癥局限性 膝下動脈及足部動脈弓 高再狹窄率Eur. J Vasc. 45:673681 1 年再狹窄率: 9%12% 2 年再狹窄率: 15% 37,http:/,提 綱,1. 糖尿病足（DF）概述 2. DF臨床療效評價-5年 3. 自體CD133+ EPCs治療DF I、II期臨床試驗結果 4. DF相關基礎與機理研究,http:/,http

7、:/,3.1 Why CD133+ EPCs ,臨床實用性 取 材外周血管采血即可 細胞處理簡便高效， 磁珠分選獲得 免疫排異自體細胞無排異 醫(yī)學倫理國家法律、法規(guī),3.2 CD133+ EPC治療質(zhì)控,采血：無菌，輸血專業(yè)設備及儲存袋,100ml，動脈血 分選得到細胞量： 10.443.78107（ 5.20-15.20107） 細胞活性： 96.981.16%（ 95.00-98.70%） 細胞回輸過程中， 無副反應出現(xiàn) （皮膚瘙癢、心悸、喘息、血壓下降、意識改變,3.2 CD133+ EPC治療質(zhì)控,細胞分選與檢測：同澤和濟GMP認證實驗室 檢 測 標 準,3.2 CD133+ EPC治

8、療質(zhì)控,出具檢測報告,http:/,3.2 CD133+ EPC治療質(zhì)控,回輸：無菌操作，注射泵，30持續(xù)勻速,3.3 CD133+ EPC體外示蹤,動物模型：裸鼠下肢缺血模型 實驗細胞：hNIS基因標記人體CD133 細胞數(shù)量：約5X107 標記核素：131I 0.5mCi 顯像方法： 尾靜脈注射進裸鼠體內(nèi)， 2h后尾靜脈注射131I 0.5mCi, 2h后SPECT，131I特異性濃聚甲狀腺和下肢缺血損傷處,CD133+EPCs，能特異性附著在損傷血管和組織,3.4 期臨床安全性評價,時 間：2012.122013.06 病 例 數(shù)： 10例 不良反應：無 肝 功 能：ALT,Alb,Bi

9、l治療前后無差異 腎 功 能：Scr治療前后無差異 血液系統(tǒng)：RBC,WBC,PLT治療前后無差異,http:/,RBC,WBC,PLT,3.4 期臨床安全性評價,安全無副作用,肝腎功能：Alb，ALT，Tbil，Scr,3.4 期臨床安全性評價,安全無副作用,病例納入/排除標準,糖尿病史5年 年齡75歲 下肢缺血2Rutherford分級4 ABI 0.7 DSA明確患肢腘動脈遠端的脛前、脛后和腓動脈，其中1支或2支動脈狹窄超過50（含修復后,血紅蛋白10 mg/dl，肌酐清除率30 ml/min 曾經(jīng)接受過干細胞治療，患有精神疾病 治療隨訪期間，餐后2hr血糖監(jiān)測連續(xù)4周超過11.1mmo

10、l/L 治療隨訪期間，任何原因?qū)е陆K止糖尿病基礎治療 治療隨訪期間，心腦血管疾病，心功能III-IV級 治療隨訪期間，患肢外傷導致截肢 治療隨訪期間，終止常規(guī)抗血小板治療 治療隨訪期間，出現(xiàn)凝血功能障礙 患有或在治療隨訪期間，罹患惡性腫瘤,納入標準,排除標準,3.5 期臨床階段性結果,CRF表格/知情同意書,3.5 期臨床階段性結果,倫理委員會批件,3.5 期臨床階段性結果,基本情況：II型糖尿病，治療組25例，對照組27例 年齡：55-83歲；男：7例；女：7例 隨訪日前：2012.12.18-2014.12.30 平均年齡： 69.779.66歲 下肢疼痛緩解：24/25 Vs. 23/2

11、7 下肢寒冷好轉(zhuǎn)：23/25 Vs. 24/27 潰瘍愈合：2/2 Vs. 2/5 ABI提高：24/25 Vs. 21/27 保肢：25/25 Vs. 23/27,http:/,對照組， 南醫(yī)大南京醫(yī)院同期治療患者,保肢時間COX回歸分析： 細胞治療組優(yōu)于對照組 （OR 1.23，95%CI: 0.575-2.627，P=0.594,隨訪結果,3.4 期臨床階段性結果,隨訪結果,3.5 期臨床階段性結果,3.5 期臨床階段性結果-典型病例,DF，無主干病變： CD133+ EPCs only 女，68歲，糖尿病5年，拜糖平控制血糖在7.0mm/L，右下肢行走麻木1月；出現(xiàn)行走600米后出現(xiàn)右

12、足麻木 查體： 右足背動脈搏動稍減弱，雙足未見潰瘍 右足神經(jīng)感覺稍異常（10g尼龍絲檢查) ABI（踝肱指數(shù)）:0.8,3.5 期臨床階段性結果-典型病例,3.5 期臨床階段性結果-典型病例,術后八周： 患者ABI:0.9，右足行走500米無麻木跛行,術 前,術后6W,術后8W,術后5M,3.5 期臨床階段性結果-典型病例,3.5 期臨床階段性結果,Chenhui Lu1, Jianping Gu2, Wensheng Lou,2 Jia Qian,1 Xu He,2 Xiaoping zhang1,Georges Uzan3, Maoquan Li1 .Transcatheter infus

13、ion of arterial blood-sorted autologous CD133 positive cells in diabetic hindlimb ischemia: the results of 18 months follow-up. Circulation,2015, IF 15.202（under review,提 綱,1. 糖尿病足（DF）概述 2. DF臨床療效評價-5年 3. 自體CD133+ EPCs治療DF I、II期臨床試驗結果 4. DF相關基礎與機理研究,http:/,科研項目：累計經(jīng)費：584萬,1）內(nèi)皮細胞釋放器的設計及治療血管狹窄的運用 （06年上

14、海市自然科學基金No：06ZR14162，5萬） （2）糖尿病性下肢動脈病變的早期診斷和介入綜合干預 （07年上海市科委創(chuàng)新行動計劃No.07jc14054，8萬） （3）雷公藤紅素保護的內(nèi)皮前體細胞治療下肢外周動脈閉塞的研究 （07年國家自然科學基金 No.30770614，28萬） （4）雷公藤紅素聯(lián)合粘附因子的慢性外周動脈缺血分子影像診斷及治療 （08年上海市科委創(chuàng)新行動計劃，No.08jc1419700，15萬） （5）雷公藤紅素糾正內(nèi)皮前體細胞缺陷及分子機制研究 （10年國家自然科學基金，No.81071242，33萬） (6) iPS細胞技術誘導內(nèi)皮前體細胞移植治療糖尿病足 (10

15、年中美國家重大科技合作支撐計劃，2011DFB30010，140萬) （7）雷公藤紅素糾正內(nèi)皮前體細胞功能及其iPS細胞誘導研究 (11年上海市衛(wèi)生局新百人計劃，No.XBR2011048 100萬) （8）糖尿病足納米診斷及細胞移植治療技術合作研究 (12年中法國家科技合作支撐計劃，2013DFG32170，215萬) （9）自體內(nèi)皮前體細胞的功能恢復及治療糖尿病足的影像示蹤研究 (12年上海市優(yōu)秀學科帶頭人計劃12XD1403900，40萬,4.1 DF發(fā)病機制,發(fā)病機制,Erli Pei, Jue Li, Chenhui Lu, Maoquan Li. Effects of lipids

16、 and lipoproteins on diabetic foot in people with type 2 diabetes mellitus: a meta-analysis (通訊作者） J Dia 28(4):559-564 （IF,3.731,發(fā)現(xiàn)： 高密度脂蛋白,Erli Pei, Jue Li, Chenhui Lu, Maoquan Li. Effects of lipids and lipoproteins on diabetic foot in people with type 2 diabetes mellitus: a meta-analysis (通訊作者） J

17、Dia 28(4):559-564 （IF,3.731,4.1 DF發(fā)病機制,Figure Changes in high-density lipoprotein levels from fixed-effects model analysis (parallel analysis with random effects model) with overall weighted SMD and 95% CI,Table . Demographic characteristics of selected variables among three groups in male and femal

18、e,Abbreviations: PAD, patients with peripheral arterial disease; DFU, patients with a diabetic foot ulcer;BMI, body mass index; HbA1c, glycated haemoglobin; TC, total cholesterol; TG, triglyceride; LDL-C, low-density lipoprotein cholesterol; HDL-C,high-density lipoprotein cholesterol. *P 0.05, *P 0.

19、01, compared with the same gender with controls,http:/,Chenhui Lu, Georges Uzan, Maoquan Li. Endothelial progenitor cells in vascular repair: How can we clear the hurdles between bench and bedside? (通訊作者） Frontiers Bioscience 2014;19(01):34-48. (IF, 4.386,4.2 DF-EPCs 損害機制,http:/,Chenhui Lu, Georges

20、Uzan, Maoquan Li. Endothelial progenitor cells in vascular repair: How can we clear the hurdles between bench and bedside? (通訊作者） Frontiers Bioscience 2014;19(01):34-48. (IF, 4.386,4.2 DF-EPCs 損害機制,4.3 EPCs細胞功能異常,Lu C, Zhang X, Zhang D, Pei E, Xu J, Tang T, Ye M, Uzan G, Zhi K, Li M. Short time trip

21、terine treatment enhances endothelial progenitor cells functions via heat shock protein 32. J Cellular Physiol. 2015 ;230(5):1139-47 ( IF,4.218,適當濃度Tripterine處理后，受損EPC遷移能力、成管能力明顯改善,4.3 EPCs細胞功能異常,Lu C, Tang T, Han S, Zhang X, Zhang D, Uzan G, Li M. Tripterine treatment improves endothelial progenito

22、r cells functions via integrin-linked kinase in atherosclerosis mice. J Mol Cell Cardiol.2014. IF,5.218,Tripterine處理EPC自體植入檢測： 可明顯增強細胞活力，促進微血管生成和改善后肢缺血,Lu C, Tang T, Han S, Zhang X, Zhang D, Uzan G, Li M. Tripterine treatment improves endothelial progenitor cells functions via integrin-linked kinase

23、 in atherosclerosis mice. J Mol Cell Cardiol.2014. IF,5.218,4.3 EPCs細胞功能異常,機制： Tripterine上調(diào)HSP32表達量，抑制信號通路蛋白JNK表達，抑制EPCs凋亡，對其有保護作用,4.3 EPCs細胞功能異常機制,Lu C, Zhang X, Zhang D, Pei E, Xu J, Tang T, Ye M, Uzan G, Zhi K, Li M. Short time tripterine treatment enhances endothelial progenitor cells functions

24、via heat shock protein 32. J Cellular Physiol.2014. IF,4.218,發(fā)明專利： 1.編號： 201110038698.2，2011年 2.名稱： 雷公藤紅素對內(nèi)皮前體細胞功能的改善作用,4.5 內(nèi)皮前體細胞（EPCs,4.6 ADSC的研究,動物研究(功能調(diào)節(jié),Kangkang Zhi, Zhiwei Gao, Jun Bai,Maoquan Li, Lefeng Qu. Application of adipose-derived stem cells in critical limb ischemia（通訊作者) Frontiers Bioscience 2014;19(01): 768-776. (IF, 4.386,4.7 LPAM-1 Vs.動脈粥樣硬化,Zhi K, Gao Z, Bai J, Wu Y, Li M. 47 Integrin (LPAM-1) is upregulated at atherosclerotic lesions and is involved in athe