細胞組分的分離與鑒定.ppt_第1頁
細胞組分的分離與鑒定.ppt_第2頁
細胞組分的分離與鑒定.ppt_第3頁
細胞組分的分離與鑒定.ppt_第4頁
細胞組分的分離與鑒定.ppt_第5頁
已閱讀5頁，還剩3頁未讀， 繼續(xù)免費閱讀

下載本文檔

版權(quán)說明：本文檔由用戶提供并上傳，收益歸屬內(nèi)容提供方，若內(nèi)容存在侵權(quán)，請進行舉報或認領(lǐng)

文檔簡介

1、實驗六 細胞組分的分離與鑒定,一、實驗?zāi)康?了解用細胞勻漿和差速離心的方法分級分離 細胞組分的原理及過程。 熟悉離心機、勻漿器的使用方法,二、實驗內(nèi)容,實驗原理 細胞內(nèi)各種結(jié)構(gòu)的比重和大小都不相同，在同一離心場內(nèi)的沉降速度也不相同，根據(jù)這一原理，常用不同介質(zhì)和不同轉(zhuǎn)速的離心法，將細胞內(nèi)各種組分分級分離出來。 此法是通過組織細胞勻漿、分級分離（密度梯度離心或差速離心）和分析三個步驟完成的,在密度均一的介質(zhì)中由低速到高速逐級離心，用于分離不同大小的細胞和細胞器。 在差速離心中細胞器沉降的順序依次為：核、線粒體、溶酶體與過氧化物酶體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)與高爾基體、最后為核蛋白體,速度逐漸提高，樣品按大小先后沉淀

2、,1.差速離心（differential centrifugation,用一定的介質(zhì)在離心管內(nèi)形成一連續(xù)或不連續(xù)的密度梯度，將細胞混懸液或勻漿置于介質(zhì)的頂部，通過重力或離心力場的作用使細胞分層、分離。常用的介質(zhì)為氯化銫，蔗糖和多聚蔗糖,2.密度梯度離心(density gradient centrifugation,實驗方法,1. 處死家兔：耳緣靜脈空氣栓塞法,2. 制備肝細胞勻漿: 家兔處死后，立即剖腹取肝，迅速浸入預(yù)冷的 生理鹽水中洗去血污，用濾紙吸干。 按每克肝重加9ml冷的0.25mol/L蔗糖溶液勻漿 化。（20g9ml/g=180ml） 用八層紗布（先用少量蔗糖液濕潤），過濾勻 漿液于燒杯中。制備一張濾液涂片，做好標 記，自然干燥,每組取10ml濾液，3000r/min離心10min，制備一張上清液涂片，做好標記，自然干燥。 吸去上清，用10ml 0.25 mol/L 蔗糖液懸浮沉淀物，用吸管混勻，配平后以3000r/min離心10 min。吸去上清液，加入0.5ml蔗糖溶液，用吸管吹打成懸液，制備一張涂片，做好標記，自然干燥,3.差速離心法分離細胞器,低速離心分離細胞核,高速離心分離線粒體,4. 分析 將干燥后的三張涂片浸入95%乙醇5 min，晾干。在涂膜部分滴加數(shù)滴甲基綠-派洛寧染液染色20 min，再以純丙酮分化20s，蒸餾水漂洗，直立于吸水

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無特殊說明，都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等，如果需要附件，請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙，網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽，若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 人人文庫網(wǎng)僅提供信息存儲空間，僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理，對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯，并不能對任何下載內(nèi)容負責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容，請與我們聯(lián)系，我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

評論

0/150

提交評論