醫(yī)學(xué)微生物學(xué)：第32,33章 逆轉(zhuǎn)錄病毒 狂犬病毒 HPV

1、逆轉(zhuǎn)錄病毒,逆轉(zhuǎn)錄病毒,一組含有逆轉(zhuǎn)錄酶（reverse transcriptase）的RNA病毒,對(duì)人致病的逆轉(zhuǎn)錄病毒主要有： 1.人類嗜T細(xì)胞病毒（HTLV），為成人 T淋巴細(xì)胞白血病的病原體。 2.人類免疫缺陷病毒（HIV），是人類 艾滋?。ˋIDS)的病原體,逆轉(zhuǎn)錄病毒,球形，有包膜，表面有刺突，直徑80-120 nm。 基因組有兩條相同的單正鏈RNA，病毒體含 逆轉(zhuǎn)錄酶和整合酶。 復(fù)制有獨(dú)特的逆轉(zhuǎn)錄過(guò)程，病毒DNA整合到 細(xì)胞DNA中，構(gòu)成前病毒。 具有g(shù)ag、pol和env 3個(gè)結(jié)構(gòu)基因和多個(gè)調(diào) 節(jié)基因。 宿主細(xì)胞受體決定病毒的組織嗜性，成熟病 毒以芽生方式釋放,共同特性,第一節(jié),

2、人類免疫缺陷病毒（human immunodeficiency virus,HIV,HIV-1：大多數(shù)AIDS由HIV-1引起。 HIV-2：主要在西非和西歐流行,型別,逆轉(zhuǎn)錄病毒科（Retroviridae） 慢病毒屬（Lentivirus,分類,首次分離：HIV-1于1983年從一例淋巴腺綜合癥患 者的淋巴結(jié)中分離出,自1983年美國(guó)發(fā)現(xiàn)首例艾滋病病例之后，艾滋病在全球范圍內(nèi)迅速蔓延。 據(jù)聯(lián)合國(guó)艾滋病規(guī)劃署統(tǒng)計(jì)，全球已有3900萬(wàn)艾滋病感染者。 截至2014年底，在總感染人數(shù)中，撒哈拉以南非洲地區(qū)所占比例最高，約為71%；其次是亞洲和太平洋地區(qū)，約為14%。 艾滋病防治形勢(shì)依然嚴(yán)峻,AID

3、S全球重要的公共衛(wèi)生問(wèn)題,聯(lián)合國(guó)艾滋病規(guī)劃署2015年發(fā)布的2015年世界艾滋病日?qǐng)?bào)告顯示，隨著各國(guó)防治艾滋病的努力不斷增強(qiáng)，2015年全球新增艾滋病病毒感染者人數(shù)及艾滋病相關(guān)疾病致死人數(shù)繼續(xù)下降。 其中2014年全球新增艾滋病病毒感染人數(shù)約為200萬(wàn)，約120萬(wàn)人死于與艾滋病有關(guān)的疾病，較2004年分別下降35%和42,AIDS全球重要的公共衛(wèi)生問(wèn)題,對(duì)全球188個(gè)國(guó)家的疫情進(jìn)行分析，把188個(gè)國(guó)家按照每10萬(wàn)人口艾滋病感染總數(shù)、新發(fā)感染數(shù)和死亡數(shù)這個(gè)相對(duì)數(shù)來(lái)分，從高到低分成十個(gè)等級(jí)，中國(guó)排在第八等級(jí)，所以是較低流行的。 從絕對(duì)數(shù)來(lái)看，全球3900萬(wàn)感染者，75%集中在15個(gè)國(guó)家，中國(guó)是15

4、個(gè)國(guó)家之一。也就是說(shuō)，從絕對(duì)數(shù)來(lái)說(shuō)，中國(guó)是艾滋病感染人數(shù)比較嚴(yán)重的國(guó)家之一,AIDS中國(guó)的感染現(xiàn)狀,在地域上：中國(guó)呈現(xiàn)西南重點(diǎn)省份感染比較多，云南、廣西、廣東，四川占全國(guó)的50%左右。 從人群來(lái)說(shuō)：我們對(duì)全國(guó)八類人群每年監(jiān)測(cè)80萬(wàn)人，包括吸毒、同性戀、暗娼、性病就診者、孕產(chǎn)婦等八個(gè)人群，吸毒人群感染率呈下降趨勢(shì)，從2005年的7.5%下降到今年平均3.3%，男男同性戀呈上升趨勢(shì)，雖然我們采取了措施，但是疫情還是在上升，從2005年的1.4%上升到2014年的7.7,AIDS中國(guó)的感染現(xiàn)狀,據(jù)最新評(píng)估結(jié)果，中國(guó)現(xiàn)有HIV感染者約49萬(wàn),聯(lián)合國(guó)大會(huì)曾于2011年為防治艾滋病設(shè)立了明確可行的全球目標(biāo)

5、，包括2015年 向1500萬(wàn)人提供抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療 根除母嬰傳播 減少50%通過(guò)性傳播的新發(fā)感染等 截至2015年6月，估計(jì)1580萬(wàn)艾滋病病毒攜帶者接受了抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療。這一數(shù)字在2005年和2010年分別僅為220萬(wàn)和750萬(wàn),AIDS全球防控目標(biāo),AIDS全球防控目標(biāo),2014年11月下旬，聯(lián)合國(guó)艾滋病規(guī)劃署明確提出到2030年結(jié)束艾滋病流行的“快速通道”目標(biāo)，設(shè)定到2020年實(shí)現(xiàn) 90%的艾滋病病毒攜帶者自身知情 90%知情攜帶者獲得治療 90%接受治療的人體內(nèi)病毒受到抑制 到2030年，各項(xiàng)具體目標(biāo)的完成比例將提高至95,主題：行動(dòng)起來(lái)，向“零”艾滋邁進(jìn)(getting to z

6、ero) “零,世界艾滋病日：12月1日，2017年是第30個(gè),一、生物學(xué)性狀,1. HIV的形態(tài)學(xué)特征,圓柱形核衣殼，含兩條相同的正鏈RNA基因組和包裹在基因組外的核蛋白（p7）、衣殼蛋白（p24），并攜帶逆轉(zhuǎn)錄酶、整合酶和蛋白酶和RNA酶H，包膜和衣殼間有內(nèi)膜蛋白p17,形態(tài)結(jié)構(gòu)：球形、包膜表面有刺突 （含有g(shù)p120和gp41,gp120,gp41,為跨膜蛋白 介導(dǎo)病毒包膜與宿主細(xì)胞膜的融合,病毒的表面糖蛋白 與病毒吸附有關(guān) 有中和抗原表位 能刺激機(jī)體產(chǎn)生中和抗體 易發(fā)生變異 利于病毒逃避免疫清除,2.基因組：雙正鏈RNA，有3個(gè)結(jié)構(gòu)基因以 及6個(gè)調(diào)節(jié)基因；兩端有LTR,P11 蛋白酶

7、P15 RNA酶H,HIV基因及其編碼蛋白,3.病毒的復(fù)制,Gp120與CD4結(jié)合,HIV-1：M組11個(gè)亞型在全球流行，不同地區(qū)流行的亞型及重組亞型不同,HIV-2和HIV-1的O組和N組： 主要局限于西非等地,HIV-1：分M（main）、O（outlier）、 N（new）3個(gè)組，進(jìn)一步又分不同的亞型（根據(jù)env、gag等基因的不同分型和亞型,4.分 型,5.變 異 性,HIV的顯著特點(diǎn)之一是它的高度變異性 HIV的逆轉(zhuǎn)錄酶無(wú)校正功能、錯(cuò)配性高是導(dǎo)致HIV基因頻繁變異的重要因素。 env基因最易發(fā)生變異 gp120變異 逃避免疫,6.抵 抗 力,對(duì)理化因素的抵抗力較弱。 *一般化學(xué)消毒劑

8、處理10-30min，可滅活病毒。 *高壓滅菌121 15min，或者煮沸100 20 min均可滅活病毒。 *病毒在20-22液體環(huán)境下可存活15天；在37可存活10-15天；在冷凍血制品中須68加熱72h才能保證滅活病毒,二、致病性與免疫性,傳染源和傳播途徑,1.性傳播：是HIV的主要傳播方式，性活躍人群（包含同性戀和異性戀者）是高危人群。 2.血液傳播：輸血、血制品、器官移植、注射等方式傳播，靜脈毒品成癮者是高危人群。 3.垂直傳播：通過(guò)胎盤(pán)、產(chǎn)道或哺乳等方式傳播，其中胎兒經(jīng)胎盤(pán)感染最多見(jiàn),傳染源：HIV感染者和AIDS患者,傳播途徑,我國(guó)的傳播特點(diǎn),吸毒、性傳播和采供血途徑傳播并存 *

9、 經(jīng)性傳播途徑呈上升趨勢(shì) * 自高危人群向普通人群擴(kuò)散,易感細(xì)胞受體： CD4分子（主要） 輔助受體 CXCR4與CCR5,致病機(jī)制,主要感染細(xì)胞： CD4 T淋巴細(xì)胞和單核-巨噬細(xì)胞。 （前者含輔助受體CXCR4，后者含CCR5,致病機(jī)制,CD4T細(xì)胞：表達(dá)大量CD4分子和CXCR4 (感染HIV后細(xì)胞溶解） CD4單核-巨噬細(xì)胞：表達(dá)少量CD4分子和CCR5 （感染HIV后細(xì)胞不溶解） *作為HIV的體內(nèi)儲(chǔ)存庫(kù),引起機(jī)體免疫系統(tǒng)的進(jìn)行性損傷,HIV借助于gp120與上述細(xì)胞受體結(jié)合，gp41融合肽暴露，介導(dǎo)膜融合，使病毒侵入細(xì)胞。 *受感染的CD4 T細(xì)胞被溶解破壞，T細(xì)胞數(shù)量的進(jìn)行性減少

10、和功能喪失，導(dǎo)致免疫功能缺陷,致病機(jī)制,1） CD4 T細(xì)胞破壞增加 導(dǎo)致CD4 T細(xì)胞融合，最終導(dǎo)致細(xì)胞的溶解； CTL對(duì)CD4 T細(xì)胞的直接殺傷作用，抗體介導(dǎo)的ADCC作用，NK細(xì)胞的殺傷作用； 誘導(dǎo)CD4 T細(xì)胞細(xì)胞凋亡。 （2） CD4 T細(xì)胞產(chǎn)生減少 （3） CD4 T細(xì)胞功能受損 記憶CD4+T細(xì)胞是HIV潛伏的主要儲(chǔ)存庫(kù),HIV損傷CD4 T細(xì)胞的機(jī)制,單核-巨噬細(xì)胞（表達(dá)少量CD4分子，其輔助受體為CCR5趨化因子） 單核細(xì)胞和巨噬細(xì)胞感染后不被溶解，長(zhǎng)期攜帶HIV，使病毒向其他組織播散并儲(chǔ)存病毒,臨床特點(diǎn),潛伏期長(zhǎng)，大約10年左右。 *臨床感染過(guò)程分為4個(gè)時(shí)期： 1.急性感染

11、期：約23周（P24+） 2.無(wú)癥狀潛伏期：10年左右（HIV-Ab+) 3.AIDS相關(guān)綜合征：開(kāi)始出現(xiàn)癥狀 4.免疫缺陷期：典型AIDS期合并機(jī)會(huì)致病菌感染和AIDS相關(guān)惡性腫瘤,AIDS患者常發(fā)生的惡性腫瘤： Kaposis sarcoma,惡性淋巴瘤 生殖道腫瘤 Burkitt 淋巴瘤,AIDS患者常見(jiàn)的機(jī)會(huì)致病菌感染,真菌 細(xì)菌 病毒 原蟲(chóng),細(xì)胞內(nèi)病毒的清除主要依靠細(xì)胞免疫反應(yīng) *細(xì)胞免疫可限制病毒感染，但不能完全清除病毒，并隨疾病進(jìn)展而下降 *病毒抗原頻繁變異逃避了免疫清除作用,免疫性,三、微生物學(xué)檢查法,檢測(cè)目的,AIDS的診斷； 指導(dǎo)抗病毒藥物的治療； 篩查和確認(rèn)HIV感染者，

12、阻斷 HIV的傳播途徑,檢測(cè)病毒抗體：ELISA篩查，Western blot確認(rèn) *檢測(cè)病毒抗原：檢測(cè)HIV p24抗原早期 輔助診斷 *檢測(cè)病毒核酸：定量RT-PCR（監(jiān)測(cè)） *病毒分離：特征性細(xì)胞病變?yōu)槿诤霞?xì)胞 培養(yǎng)液中逆轉(zhuǎn)錄酶或P24抗原,HIV感染抗體產(chǎn)生規(guī)律,HIV初次感染人體后，同其他病毒一樣，會(huì)出現(xiàn)短暫的病毒血癥(36周）。 幾周后病人血清抗體陽(yáng)性，最早出現(xiàn)的是對(duì)HIV衣殼蛋白p24的抗體，隨后包膜蛋白gp120、gp41的抗體，以及多聚酶蛋白組的p66和p32的抗體也陸續(xù)出現(xiàn)。 當(dāng)病情發(fā)展到艾滋病出現(xiàn)時(shí)，血清中病毒再次出現(xiàn)，而抗衣殼蛋白p24的抗體滴度明顯下降，最終消失，但其

13、他抗體仍存在,HIV抗體檢測(cè),目前臨床上廣泛應(yīng)用，也是衛(wèi)生部推薦使用的診斷HIV感染的方法是測(cè)定特異性HIV抗體，包括初篩（ELISA)和確認(rèn)實(shí)驗(yàn)(WB)。 需在BSL2實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行，遵循“普遍防護(hù)”原則,HIV抗體初篩檢測(cè)流程圖,常用的HIV抗體確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方法是免疫印跡法（WB）。 免疫印跡試劑有HIV-1/2混合型和單一型。一般先用HIV-1/2混合型試劑進(jìn)行檢測(cè),HIV確證試驗(yàn),HIV三個(gè)結(jié)構(gòu)基因及產(chǎn)物： gag基因產(chǎn)物：p24（衣殼蛋白之一，特異性高）、p17（內(nèi)膜蛋白） pol基因產(chǎn)物：p66/p51(逆轉(zhuǎn)錄酶）、p32（整合酶） env基因產(chǎn)物：gp120（外膜蛋白）、gp41(跨膜蛋

14、白,WB結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn),不確定”()：出現(xiàn)HIV-1特異性條帶，但帶型不足以 確認(rèn)陽(yáng)性，每三個(gè)月隨訪一次，共兩次， 仍屬不確定，判為陰性,四、防治原則,1.治療HIV感染的藥物,核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑（NRTIs）、非核苷類逆轉(zhuǎn)錄酶抑制劑（NNRTIs）、蛋白酶抑制劑（PIs），融合抑制劑（FI）。 *高效抗逆轉(zhuǎn)錄病毒治療（highly active anti-retrovial therapy, HAART），即“雞尾酒”療法,聯(lián)合用藥,2.預(yù)防,研制安全、有效的HIV疫苗，但目前尚無(wú)有效疫苗上市。 普遍開(kāi)展預(yù)防AIDS的宣傳教育； 建立全球和地區(qū)性HIV感染的監(jiān)測(cè)網(wǎng)，及時(shí)掌握疫情； 對(duì)獻(xiàn)血、獻(xiàn)

15、器官、獻(xiàn)精液者必須做HIV抗體檢測(cè)； 禁止共用注射器、注射針、牙刷和剃須刀等。 提倡安全性生活； HIV抗體陽(yáng)性婦女，應(yīng)避免懷孕或用母乳喂養(yǎng)嬰兒等,思考題,1.HIV的結(jié)構(gòu)基因及其編碼蛋白主要有哪些 ？ 2.HIV的復(fù)制周期有哪些特點(diǎn)？ 3.HIV的傳染源、傳播途徑及致病機(jī)制？ 4.HIV的實(shí)驗(yàn)室檢查主要包括哪些？其抗體檢測(cè)主要檢測(cè)哪些抗體？遵循什么原則？ 5.預(yù)防HIV感染的措施主要有哪些,狂犬病病毒（rabies virus,生物學(xué)性狀,外觀子彈狀，屬?gòu)棤畈《究瓶袢〔《緦俸怂釣?ssRNA。衣殼呈螺旋對(duì)型 有包膜。包膜有大量糖蛋白（G)突起，與病毒感染性、毒力、血凝性有關(guān) 糖蛋白G和核蛋

16、白N是狂犬病毒重要抗原 中和Ab和血凝抑制Ab、CMI CMI、補(bǔ)體結(jié)合Ab和沉淀Ab 病毒可在中樞神經(jīng)細(xì)胞漿中增殖，形成嗜酸性的包涵體，稱為內(nèi)基小體，有診斷意義,內(nèi)基小體,抵抗力不強(qiáng)，60C 30min或100C 2min可滅活。 可被強(qiáng)酸、強(qiáng)堿、乙醇、乙醚、肥皂水、去垢劑等滅活,抵抗力,蝙蝠,犬、貓、牛、羊、豬等家畜 和狼、狐 貍、猴、野鼠、 蝙蝠等野生動(dòng)物,主要是病犬，人被患病動(dòng)物 咬傷致病。其次是狼、貓、豬等,傳染源,易感動(dòng)物,儲(chǔ)存宿主,人被咬傷發(fā)病率為30%60%。 一旦發(fā)病，死亡率高達(dá)100,致病性,動(dòng)物或人被咬傷后 病毒隨犬唾液經(jīng)傷口進(jìn)入 在局部肌肉細(xì)胞中增殖 侵入周圍神經(jīng) 上行

17、至神經(jīng)節(jié)和CNS中迅速增殖 沿傳出神經(jīng)下行至唾液腺、舌等處,致病性,犬狂犬病分狂暴型和麻痹型: 狂暴型：有前驅(qū)期、興奮期和麻痹期。 麻痹型：以麻痹癥狀為主，興奮期不明顯。 病程短，不超過(guò)56天,致病性,潛伏期:短的10天，長(zhǎng)的可達(dá)數(shù)年，通常38周 前驅(qū)期: 表現(xiàn)不安、發(fā)熱、頭痛、乏力、傷口周 圍感覺(jué)異常，流淚等。 興奮期: 興奮、狂燥、吞咽或飲水時(shí)喉部肌肉痙攣，對(duì)水聲和其他刺激異常敏感，即恐水癥。 麻痹期: 35天后轉(zhuǎn)入麻痹昏迷、最后呼吸困難、循環(huán)衰竭而死亡,致病性,臨床表現(xiàn),免疫性,病毒感染可誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生抗體，抗體可中和游離病毒。 疫苗接種對(duì)預(yù)防該病有效,微生物學(xué)診斷,臨床表現(xiàn)加病史比較容易

18、做出診斷。微生物學(xué)診斷實(shí)際意義不大，但檢查動(dòng)物是否患病對(duì)防治極重要 觀察咬人的動(dòng)物710天，如動(dòng)物不發(fā)病，可認(rèn)為該動(dòng)物未患病，或唾液中無(wú)病毒。被該犬咬傷的人無(wú)需做預(yù)防接種 如觀察期間動(dòng)物發(fā)病，應(yīng)取動(dòng)物腦部海馬回查病毒抗原（免疫熒光法）或內(nèi)基小體,捕捉野犬，加強(qiáng)家犬管理，普及家犬疫苗接種 高危人群（獸醫(yī)、飼養(yǎng)員）注意個(gè)人防護(hù) 人被咬傷后： 處理傷口：5%肥皂水、清水充分沖洗數(shù)分鐘，5%碘酒燒灼傷口，深傷口應(yīng)做清創(chuàng)術(shù) 特異性防治：傷口周圍浸潤(rùn)注射40 IU/kg抗狂犬病病毒免疫球蛋白,防治原則,接種狂犬病病毒疫苗：由于狂犬病潛伏期長(zhǎng)，故咬傷后仍應(yīng)接種疫苗，即預(yù)防性治療，傷后0、3、7、14、28天

19、各肌肉注射狂犬病毒滅活疫苗,防治原則,人乳頭瘤病毒（Human Papillomavirus,HPV,人乳頭瘤病毒 （human papillomavirus, HPV） 乳頭瘤病毒科（Papovaviridae） 乳頭瘤病毒屬（Papillomavirus,生物學(xué)性狀,核衣殼呈直徑為52-55nm的球形，無(wú)包膜,核酸：超螺旋環(huán)狀dsDNA ， 早期區(qū)（early region,ER）編碼與病毒復(fù)制、轉(zhuǎn)錄調(diào)控、 翻譯和與細(xì)胞轉(zhuǎn)化有關(guān)的蛋白； 晚期區(qū)（Late region, LR）編碼病毒衣殼蛋白(L1和L2） 非編碼區(qū)（NCR),也稱長(zhǎng)控制區(qū)（LCR)或上游調(diào)節(jié)區(qū)（URR）。 衣殼：20面體立體對(duì)稱，由72個(gè)殼微粒組成。 無(wú)包膜,生物學(xué)性狀,HPV尚不能在培養(yǎng)細(xì)胞中增殖 病毒復(fù)制周期受表皮中上皮細(xì)胞分化狀態(tài)限制（在表皮中增殖） 在基底層細(xì)胞內(nèi)HPV DNA呈靜息狀態(tài)，隨著基底層細(xì)胞向表層分化，早期基因開(kāi)始在棘細(xì)胞層內(nèi)表達(dá)，而增殖的病毒只能在皮膚頂層的細(xì)胞核中查到,HPV僅感染人的皮膚和粘膜上皮細(xì)胞 病毒復(fù)制誘導(dǎo)上皮細(xì)胞增殖，使表皮增厚和角化，由此形成乳頭狀瘤，也稱為疣。某些型別HPV的一段游離基因可插入宿主染色體的任意位置，導(dǎo)致細(xì)胞轉(zhuǎn)化（永生化,生物學(xué)性狀,人類是HP