基因工程和克隆技術(shù)

1、注意點】限制酶所識別的序列，無論是6個堿基還是4個堿基，都可以找到一條中心軸線（如圖），中軸線兩側(cè)的雙鏈DNA上的堿基是反向?qū)ΨQ重復(fù)排列的,1.限制性核酸內(nèi)切酶（限制酶,2.DNA連接酶,EcoliDNA連接酶、T4DNA連接酶,對位訓(xùn)練】限制酶在DNA的任何部位都能將DNA切開嗎？以下是四種不同限制酶切割形成的DNA片段,思考】（2）（7）和（3）（6）可以交換連接嗎,可以接，但失去識別位 點，接后不能再切開,糾錯,某土壤農(nóng)桿菌中的Ti質(zhì)粒結(jié)構(gòu)示意圖（內(nèi)含T-DNA片段,3.載體（分子運(yùn)輸車,此外，還有噬菌體的衍生物、動植物病毒等,4.基因工程的基本操作程序,直接分離,較小,DNA合成儀,R

2、NA,逆轉(zhuǎn)錄酶,PCR,基因組文庫；部分基因文庫（如cDNA文庫） PCR技術(shù)擴(kuò)增,前提是：要有已知目的基因的核苷酸序列（以便根據(jù)這一序列合成引物,2）基因表達(dá)載體的構(gòu)建基因工程的核心,目的,使目的基因在受體細(xì)胞中穩(wěn)定存在，并且可以遺傳給下一代，同時，使目的基因能夠表達(dá)和發(fā)揮作用,基因表達(dá)載體的模式圖,農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法、基因 槍法、花粉管通道法,顯微注射 技術(shù),感受態(tài)細(xì)胞法 (用Ca2處理,受精卵、體細(xì)胞,受精卵,原核細(xì)胞,思考】若想將一個抗病基因利用“農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)化法”導(dǎo)入單子葉植物，從理論上說應(yīng)該怎樣做,轉(zhuǎn)化,目的基因進(jìn)入受體細(xì)胞內(nèi)，并且在受體細(xì)胞內(nèi)維持穩(wěn)定和表達(dá)的過程,提示】要選擇合適的農(nóng)桿菌菌

3、株，因為不是所有的農(nóng)桿菌菌株都可以侵染單子葉植物；要加趨化（酚類化合物）和誘導(dǎo)的物質(zhì),歸納總結(jié),基因工程中受體細(xì)胞的選擇問題解讀,DNA分子,核酸)分子,抗原抗體,目的基因表達(dá)出的性狀,5.基因工程的應(yīng)用,預(yù)期蛋白質(zhì)功能設(shè)計蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)推測氨基酸序列推測脫氧核苷酸序列合成DNA表達(dá)出蛋白質(zhì),6.蛋白質(zhì)工程,1）流程圖,2）基因修飾或基因合成第二代基因工程,7.植物細(xì)胞工程,植物細(xì)胞融合,植物組織培養(yǎng),脫分化,再分化,避光，有光過早刺激分化,優(yōu)點：克服遠(yuǎn)緣雜交不親和的障礙,1）流程圖,原理：細(xì)胞膜的流動性和細(xì)胞的全能性,2）應(yīng)用 微型繁殖：保優(yōu)，高效快速，大量繁殖種苗。 作物脫毒：利用分生組織(如

4、莖尖、根尖)進(jìn)行培養(yǎng)。 人工種子,注：人工種皮中可以加入適量 的養(yǎng)分、無機(jī)鹽、有機(jī)碳源以 及農(nóng)藥,抗生素,有益菌等,以 利于胚狀體生長發(fā)育成幼苗,作物新品種的培育,單倍體育種 突變體的利用 細(xì)胞產(chǎn)物的工廠化生產(chǎn),8.動物細(xì)胞工程,1）動物細(xì)胞培養(yǎng)流程圖,培養(yǎng)條件解讀】 無菌、無毒的環(huán)境無菌處理、加抗生素殺菌、定期更換培養(yǎng)液。 營養(yǎng)葡萄糖、氨基酸、促生長因子、無機(jī)鹽和微量元素血清或血漿等天然成分,原理：細(xì)胞增殖,溫度和pH(36.50.5)和(7.27.4)。 氣體環(huán)境95%空氣5%CO2。 【提示】CO2作用調(diào)節(jié)培養(yǎng)基pH； 空氣中O2作用細(xì)胞有氧呼吸； 所用裝置CO2培養(yǎng)箱,2）動物體細(xì)胞核移植技術(shù)和克隆動物,流程圖,原理：動物細(xì)胞核的全能性,流程圖解讀,卵母細(xì)胞選擇時期及原因,減中期的卵母細(xì)胞，此時具備受精能力，細(xì)胞質(zhì)中合成與分裂、分化有關(guān)的物質(zhì)能刺激融合后重組細(xì)胞進(jìn)行分裂分化，形成重組胚胎,選卵細(xì)胞作為受體細(xì)胞的原因,大，易于操作； 卵黃多，營養(yǎng)豐富，為發(fā)育提供充足的營養(yǎng)； 能激發(fā)重組細(xì)胞分裂分化,該過程