細(xì)胞治療原理及應(yīng)用剖析

1、細(xì)胞治療原理及應(yīng)用基本定義：CIK（ cytokine-inducedkiller，中文名： 自體細(xì)胞免疫療法 多種細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞），是將人外周血單個核細(xì)胞在體外用多種細(xì)胞因子（如抗CD3單克隆抗體、 IL-2 和 IFN- 等）共同培養(yǎng)一段時間后獲得的一群異質(zhì)細(xì)胞。由于該種細(xì)胞同時表達(dá) CD3+和 CD56+兩種膜蛋白分子 , 故又被稱為 NK細(xì)胞樣 T 淋巴細(xì)胞 , 兼具有 T 淋巴細(xì)胞強(qiáng)大的抗瘤活性和 NK細(xì)胞的非 MHC限制性殺瘤優(yōu)點(diǎn)。因此 , 應(yīng)用 CIK 細(xì)胞被認(rèn)為是新一代抗腫瘤過繼細(xì)胞免疫治療的首選方案。CIK細(xì)胞中的效應(yīng)細(xì)胞CD3+和 CD56+細(xì)胞在正常人外周血中極其

2、罕見， 僅 1% 5%。2 特點(diǎn)CIK 細(xì)胞中的效應(yīng)細(xì)胞CD3+CD56+細(xì)胞在正常人外周血中極其罕見，僅1%5%，在體外經(jīng)多因子培養(yǎng)2830 天， CD3+CD56+細(xì)胞迅速增多，較培養(yǎng)前升幅可達(dá)1000 倍以上。實(shí)驗(yàn)證明，擴(kuò)增出的CD3+CD56+細(xì)胞來源于 CD3+CD56-T細(xì)胞，而非 CD3-CD56+NK細(xì)胞。同時發(fā)現(xiàn)在 CD3+CD56的- T 細(xì)胞中，除 CD4+CD8-T細(xì)胞外，其余三種 T 細(xì)胞亞群（ CD4-CD8+、CD4-CD8-、CD4+CD8+）均可通過體外多因子培養(yǎng)而獲得 CD56分子的表達(dá)，而由于 CD4+CD8+細(xì)胞和 CD4-CD8-細(xì)胞在正常人外周血中含

3、量極低而間接提示此 CD3+CD56+細(xì)胞絕大多數(shù)來源于外周血中CD4-CD8+T細(xì)胞。而由于 CD4-CD8-T細(xì)胞在培養(yǎng) 1 個月后有近 56%的 T 細(xì)胞同時表達(dá) CD56和 CD3，表明其也是 CIK 細(xì)胞的重要來源。比較 CD3+CD56+CIK細(xì)胞中表達(dá) CD8+和 CD8-,的兩群細(xì)胞其殺瘤活性沒有顯著性差異， 提示 CIK 細(xì)胞的細(xì)胞毒性與 CD3CD56表達(dá)成相關(guān)趨勢，而與 CD8的表達(dá)未表現(xiàn)出相關(guān)性。1.CIK 細(xì)胞增殖速度快，抗腫瘤活性細(xì)胞可大量增殖，且細(xì)胞活性也大大增強(qiáng)。2.CIK 細(xì)胞具有識別腫瘤的機(jī)制，對正常的細(xì)胞無毒性作用。3. 殺瘤譜廣，可用于白血病、淋巴瘤、肺

4、癌、胃癌、腸癌等多種腫瘤的治療，對多重耐藥腫瘤細(xì)胞同樣敏感。4. 是典型的個性化生物治療模式。 將這類細(xì)胞回輸后，還能使機(jī)體免疫能力提高，產(chǎn)生特異的抗病毒作用，從而對腫瘤治療施以雙重的作用。5. 由于 CIK 細(xì)胞是活化的自體細(xì)胞，用起來非常安全。3 殺傷原理CIK 細(xì)胞能夠通過三種途徑殺滅腫瘤細(xì)胞和病毒感染細(xì)胞：CIK 細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞和病毒感染細(xì)胞的直接殺傷： CIK 細(xì)胞可以通過不同的機(jī)制識別腫瘤細(xì)胞，釋放顆粒酶 / 穿孔素等毒性顆粒，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞裂解。CIK 細(xì)胞釋放的大量炎性細(xì)胞因子具有抑瘤殺瘤活性： 體外培養(yǎng)的 CIK 細(xì)胞可以分泌多種細(xì)胞因子，如 IFN- 、TNF-、 IL-2

5、等，不僅對腫瘤細(xì)胞有直接抑制作用，還可通過調(diào)節(jié)機(jī)體免疫系統(tǒng)反應(yīng)性間接殺傷腫瘤細(xì)胞。CIK 細(xì)胞能夠誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞的凋亡： CIK 細(xì)胞在培養(yǎng)過程中表達(dá) FasL（型跨膜糖蛋白）通過與腫瘤細(xì)胞膜表達(dá)的 Fas（型跨膜糖蛋白）結(jié)合，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡。CIK 細(xì)胞發(fā)揮作用的三種途徑4 殺瘤特點(diǎn)編輯應(yīng)用 LAK細(xì)胞是目前較為普及的腫瘤過繼免疫治療方案，廣泛使用于黑色素瘤、腎細(xì)胞癌、非霍奇金淋巴瘤、肺癌和結(jié)腸癌。因LAK細(xì)胞擴(kuò)增數(shù)量有限，殺瘤活性也較 TIL 等 T 淋巴細(xì)胞為低，故雖然殺瘤譜廣，但效果局限。相比較而言，TIL 細(xì)胞本身較 LAK細(xì)胞具有更強(qiáng)大的抗瘤效力，但由于殺瘤譜窄，制備困難，及在收集

6、過程中可能導(dǎo)致的功能改變而限制了其臨床應(yīng)用價值。與上述兩種效應(yīng)細(xì)胞過繼免疫治療相比，CIK 細(xì)胞具有獨(dú)特的優(yōu)勢，列舉如下。1. 增殖速度快CIK 細(xì)胞在培養(yǎng)過程中加入IFN- 、IL-1 、抗 CD3、McAb、IL-2 等多因子后，細(xì)胞增殖速度迅速加快，遠(yuǎn)超過LAK細(xì)胞。在培養(yǎng)第22 天增殖曲線達(dá)頂峰，約增加 100 倍，其中 CD3+CD56+細(xì)胞不僅絕對數(shù)量增加1000 倍以上，且所占百分比也大幅上升，培養(yǎng)至2830 天時達(dá)平臺期，細(xì)胞毒活性亦達(dá)峰值，而LAK細(xì)胞培養(yǎng)前后數(shù)量沒有明顯增加。2.殺瘤活性高CIK 細(xì)胞是以CD3+CD56+T細(xì)胞為主的異質(zhì)細(xì)胞群，大量體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)證實(shí)CIK 細(xì)

7、胞較以 NK細(xì)胞為主的 LAK細(xì)胞具備更強(qiáng)大的殺瘤活性，而且其體內(nèi)殺瘤細(xì)胞毒性的維持不必依賴大劑量外源性 IL-2 的持續(xù)給予。體外實(shí)驗(yàn)中，任歡和 Lu 等均發(fā)現(xiàn)在體外等數(shù)量的 CIK 細(xì)胞比 LAK細(xì)胞對腫瘤細(xì)胞系的殺傷能力稍高或相近，但因 CIK 細(xì)胞在培養(yǎng)過程中 CD3+CD56+效應(yīng)細(xì)胞增長迅速， 故 CIK 細(xì)胞的總殺傷單位（ TLU）為 LAK 細(xì)胞的 73 倍甚至更高，其殺傷效率顯著高于 LAK細(xì)胞。腫瘤克隆抑制實(shí)驗(yàn)顯示， CIK 細(xì)胞的瘤細(xì)胞抑制 Log 指數(shù)為 2.5 3.5 ，較 LAK細(xì)胞的瘤細(xì)胞抑制指數(shù)高 2 個 Log。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，對于在嚴(yán)重聯(lián)合免疫缺陷小鼠身上構(gòu)建

8、的人類 B 細(xì)胞淋巴瘤 SU-DHL4模型，CIK 細(xì)胞在清除荷瘤鼠體內(nèi)腫瘤病灶，抑制轉(zhuǎn)移，延長生存期等方面的作用均明顯優(yōu)于 LAK細(xì)胞。3. 殺瘤譜廣CIK 細(xì)胞雖然以 CD3+CD56+T 細(xì)胞為主要效應(yīng)細(xì)胞， 但卻沒有 T 淋巴細(xì)胞殺傷時的 MHC限制性，故對于多種腫瘤細(xì)胞系（包括 NK敏感的 K562和 NK不敏感的 Hela 、HL60、人 T 細(xì)胞急淋白血病細(xì)胞系 OCRF-CEM，人淋巴瘤細(xì)胞系 OCI-LY8、LAM53，人結(jié)腸癌細(xì)胞系 HT-29、CR75，人腎癌細(xì)胞系 A704）和新鮮腫瘤組織均表現(xiàn)出強(qiáng)大的殺傷活性。4. 對多重耐藥腫瘤細(xì)胞同樣敏感Wolf 用阿霉素和長春新

9、堿誘導(dǎo)出多重耐藥細(xì)胞系K562/DOX和 CCRF-CEM-VBL，發(fā)現(xiàn) CIK 細(xì)胞對化療藥物敏感的親本細(xì)胞和不敏感的轉(zhuǎn)化細(xì)胞均具有強(qiáng)大的殺傷活性，兩者比較無差別。5. 殺瘤活性不受 CsA、 FK506等免疫抑制劑的影響Mehta 觀察到免疫抑制劑 CsA和 FK506雖然可以抑制抗 CD3單抗介導(dǎo)的 CIK 細(xì)胞脫顆粒過程，卻不影響靶細(xì)胞誘導(dǎo)的 CIK 細(xì)胞脫顆粒，并且 CIK 細(xì)胞對靶細(xì)胞的殺傷活性不會因此降低。6. 對正常骨髓造血前體細(xì)胞毒性很小Seheffold通過 CFU-GM形成實(shí)驗(yàn)檢測 CIK 細(xì)胞對骨髓造血前體細(xì)胞的影響，發(fā)現(xiàn) CIK 細(xì)胞對 K562細(xì)胞的殺傷強(qiáng)度高達(dá) 3

10、 級，但對 GM-CFU僅有不足 1 級的抑制。 Holye 也證實(shí) CIK 細(xì)胞對正常髓系克隆生成幾乎沒有影響， 只是對紅系的生成顯示出輕度抑制，這可能與 CIK 細(xì)胞自身分泌較高水平的 IFN- 有關(guān)。7. 能抵抗腫瘤細(xì)胞引發(fā)的效應(yīng)細(xì)胞 Fas-FasL 凋亡已證明過繼免疫治療失敗的一個重要原因是過繼效應(yīng)細(xì)胞被腫瘤細(xì)胞表面表達(dá)的某些蛋白（主要是 FasL）誘導(dǎo)凋亡，而 CIK 細(xì)胞雖然在 Fas 被占據(jù)后會引起少量細(xì)胞凋亡，但對其殺瘤細(xì)胞毒性沒有明顯影響。 Verneris 的實(shí)驗(yàn)提示 CIK細(xì)胞內(nèi)有抗凋亡基因表達(dá)，并檢出多種保護(hù)基因，如cFLIP、Bcl-2 、Bcl-X1 、DAD1和

11、 survivin的轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)。同時發(fā)現(xiàn)CIK 細(xì)胞具備合成 FasL 的能力，CIK 細(xì)胞培養(yǎng)上清中可以檢測到具生物學(xué)活性的水溶性FasL，表明 CIK 細(xì)胞可以對抗體內(nèi) FasL 陽性腫瘤所引發(fā)的效應(yīng)細(xì)胞活性下降甚至消失。5 影響因素編輯1. 外源性細(xì)胞因子的補(bǔ)充CIK 細(xì)胞的體外擴(kuò)增需要外源性細(xì)胞因子，如IL-2 、IL-7 、IL-12 等的輔助，這些因子控制著人免疫系統(tǒng)內(nèi)各種抗原特異性細(xì)胞的擴(kuò)增及其生物學(xué)活性。外源性IL-2、IL-7、IL-12可以顯著促進(jìn)淋巴細(xì)胞的生長，尤其存在有IL-2和 IL-7條件下CIK 細(xì)胞的增殖率為高，而外源性, IL-2、 IL-7、 IL-12對

12、 CIK 細(xì)胞的細(xì)胞毒活性沒有影響。外源性 IL-2 和 IL-7 的刺激會降低 CIK 細(xì)胞表面相應(yīng)受體的表達(dá)量，而 CD28分子在 IL-7 存在條件下較 IL-2 時表達(dá)更高。 IL-12 會降低 CIK 細(xì)胞表面 ICAM-1 的表達(dá)， IL-7 則會提高 CD56的表達(dá)。與 IL-2 相比， IL-7 可明顯增加 CD4+細(xì)胞的比例。雖然外源性 IL-2 、IL-7 和 IL-12 培養(yǎng)過程中均可出現(xiàn)少量凋亡細(xì)胞，但有研究顯示外源性IL-12 的添加會增加 CIK 細(xì)胞中壞死細(xì)胞的比例?？?CD3McAb不僅在 CIK 細(xì)胞培養(yǎng)過程中起著重要作用， 在提高 CIK 細(xì)胞對白血病及淋巴

13、瘤的殺傷敏感性上同樣具有促進(jìn)作用。 Lefterov 將抗 CD3McAb與靶細(xì)胞預(yù)先共同孵育可增加 CIK 細(xì)胞對其的殺傷敏感性，而且這種增強(qiáng)作用可以被抗FcR的抗體（如抗 CD36、抗 CD32）所部分阻斷，間接證明抗CD3McAb引發(fā)的殺傷活性增高與 FcR 介導(dǎo)的抗體結(jié)合有關(guān)。2. 多種細(xì)胞因子基因的轉(zhuǎn)染由于 CIK 細(xì)胞擴(kuò)增對外源性細(xì)胞因子有依賴， 因此通過基因轉(zhuǎn)移方法將相關(guān)基因轉(zhuǎn)入 CIK 細(xì)胞，不僅可減少外源性細(xì)胞因子的使用量， 還可提高 CIK 細(xì)胞自身的抗瘤活性。IL-7 ：Fitke利用改進(jìn)的腺病毒轉(zhuǎn)基因系統(tǒng)將人IL-7 基因轉(zhuǎn)染 CIK 細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染后細(xì)胞可以生成較高濃

14、度IL-7 ，最多者可達(dá) 1 100pg/106cell/24h。合成的IL-7 具有明顯的生物學(xué)活性，可以促進(jìn)轉(zhuǎn)染CIK 細(xì)胞的增殖，顯著高于未轉(zhuǎn)染細(xì)胞。外源 IL-7 基因的表達(dá)同時改變了CIK 細(xì)胞對其他細(xì)胞因子的分泌，其中尤以 TNF- 分泌顯著升高，這一現(xiàn)象在未轉(zhuǎn)染CIK 體外添加 IL-7 時并未觀測到。雖然轉(zhuǎn)染后 CIK 細(xì)胞表面各種與細(xì)胞殺傷活性相關(guān)的表面抗原，如 ICAM-1 等與未轉(zhuǎn)染 CIK 細(xì)胞相比無明顯變化，但轉(zhuǎn)染后 CIK 細(xì)胞在對多種腫瘤細(xì)胞系如腎癌、惡性黑色素瘤以及結(jié)腸癌的殺傷能力較未轉(zhuǎn)染 CIK 細(xì)胞有明顯增強(qiáng)。 IL-2 ：Lu 等發(fā)現(xiàn) CIK 細(xì)胞培養(yǎng)過程

15、中 CD56分子的表達(dá)是 IL-2 依賴性的，但單獨(dú) IL-2 的存在卻會降低培養(yǎng)后 CIK 細(xì)胞的表型變化幅度。盡管有實(shí)驗(yàn)指出 CIK 細(xì)胞的體內(nèi)治療并不需要 IL-2 體外持續(xù)供給， 但 Zoll 等的研究結(jié)果表明， 體外培養(yǎng)中 IL-2 對 CIK 細(xì)胞的增殖和殺傷功能有促進(jìn)作用。 Schmidt-Wolf 將包含人 IL-2 基因片段的重組質(zhì)粒用電穿孔法導(dǎo)入 CIK 細(xì)胞治療轉(zhuǎn)移性實(shí)體瘤，發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染后細(xì)胞可分泌較高水平的 IL-2（ 330-1 800pg/106 cell/24h ，平均達(dá) 836pg/106cell/24h）。雖然轉(zhuǎn)染前后CIK 細(xì)胞表面各種膜蛋白表達(dá)并無顯著變化，但

16、體外檢測轉(zhuǎn)染后 CIK 細(xì)胞在增殖率和細(xì)胞殺傷活性上均高于未轉(zhuǎn)染細(xì)胞。6 制備流程CIK 細(xì)胞制備流程抽取患者的外周血，在37， 5%的二氧化碳培養(yǎng)箱中孵育2h，使用高速離心機(jī)分離，收集懸浮細(xì)胞，在體外（模擬人體內(nèi)環(huán)境），加入多種細(xì)胞因子如CD3單抗， IFN-R， IL-2 等培養(yǎng)，每隔 2-3 天換一次培養(yǎng)液，第 7、11、13、15 天收集 CIK 細(xì)胞， CD3+和 CD56+細(xì)胞迅速增多，較培養(yǎng)前升幅可達(dá) 1000 倍以上。7 發(fā)展歷程1985 年美國外科醫(yī)生首次發(fā)現(xiàn)大劑量的 IL-2 在體外可以將淋巴細(xì)胞培養(yǎng)成具有很強(qiáng)腫瘤殺傷作用的細(xì)胞， 稱為 LAK細(xì)胞。以后發(fā)現(xiàn)在培養(yǎng)液中加入

17、CD3單克隆抗體可以將這些細(xì)胞的腫瘤殺傷活性提高十幾倍， 擴(kuò)增的數(shù)量也大幅提高， 這種細(xì)胞稱為 CD3AK。在這個基礎(chǔ)上再在培養(yǎng)液中加入 INF-r 、 IL-1 等細(xì)胞因子 , 得到表達(dá) CD3CD8CD56陽性的異質(zhì)細(xì)胞群，這些細(xì)胞稱為 CIK，相比 LAK細(xì)胞增殖倍數(shù)更多，殺毒活力更強(qiáng)。1991 年美國斯坦福大學(xué)Schmidt Wolf等人首次報(bào)道了CIK 細(xì)胞。8 臨床應(yīng)用早在 1996 年國內(nèi)已有 CIK 細(xì)胞治療技術(shù)臨床應(yīng)用的研究論文發(fā)表，目前國內(nèi)已有超過百家的醫(yī)療單位開展了該項(xiàng)治療技術(shù)的相關(guān)臨床應(yīng)用與研究。根據(jù)國際國內(nèi)細(xì)胞治療臨床應(yīng)用的進(jìn)展?fàn)顩r， 2009 年 5 月 1 日衛(wèi)生

18、部頒發(fā)執(zhí)行的醫(yī)療技術(shù)臨床管理應(yīng)用辦法 將“自體免疫細(xì)胞治療技術(shù)”列為三類醫(yī)療技術(shù)。 2肝癌患者接受手術(shù)聯(lián)合CIK 治療后 1 年、3 年、5 年的無病生存期比較 , 具體如圖：9 適應(yīng)癥CIK 細(xì)胞治療屬于過繼細(xì)胞免疫療法， 由于 CIK 細(xì)胞溶瘤作用是非 MHC限制性的，即不受腫瘤組織類型的限制， 因此對任何一種腫瘤均有殺傷作用， 但對高抗原表達(dá)的癌癥療效最好，如：髓性白血病、黑色素瘤、腎細(xì)胞癌、轉(zhuǎn)移性腎癌、非何杰金氏淋巴瘤等。其它癌癥如肺癌、結(jié)腸癌、乳腺癌、肝癌、胃癌、大腸癌等， CIK 細(xì)胞治療亦有較好的療效。 CIK 細(xì)胞治療適用于任何一期的癌癥患者，但對早期腫瘤患者或經(jīng)過手術(shù)及放化療

19、后腫瘤負(fù)荷較小的患者效果好。它對于手術(shù)、放化療或造血干細(xì)胞移植后患者體內(nèi)微小殘留病灶的清除， 防止癌細(xì)胞擴(kuò)散和復(fù)發(fā)，提高患者自身免疫力， 減少毒性反應(yīng)等方面具有重要作用。 某些不適合手術(shù)、不能耐受放化療的中晚期腫瘤患者， CIK 細(xì)胞治療可以提高其生活質(zhì)量，延長帶瘤生存時間。CIK 細(xì)胞通過直接殺傷、 分泌多種細(xì)胞因子等直接抑制腫瘤細(xì)胞生長，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡起到治療作用。大多數(shù)執(zhí)行殺傷功能的細(xì)胞在回輸后立即執(zhí)行其功能，半衰期約 2 周至一個月?；剌?shù)募?xì)胞中包括一部分記憶細(xì)胞，可存活幾年至幾十年，當(dāng)遇到相應(yīng)刺激后，迅速在體內(nèi)活化，殺傷靶細(xì)胞。所以CIK 細(xì)胞治療的療程間隔原則上為一個月， 建議首

20、先間隔一個月連續(xù)做三個療程，以后每半年做一個療程。DC-CIK定義DC-CIK生物免疫療法 ( 或 DC+CIK)是指與 DC細(xì)胞共培養(yǎng)的 CIK 細(xì)胞。細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞（ cytokine-inducedkillers,CIK）是一類抗腫瘤抗病毒效應(yīng)細(xì)胞，能在體外被誘導(dǎo)并大量增殖。樹突狀細(xì)胞（dendritic cell,DC）是有效的專職抗原提呈細(xì)胞，成熟的DC可以通過型組織相容性抗原（MHC-）等途徑提呈腫瘤抗原，有效抵制腫瘤細(xì)胞的免疫逃逸機(jī)制。CIK 細(xì)胞和 DC細(xì)胞是細(xì)胞免疫治療的 2 個重要組成部分，兩者聯(lián)合可確保高效的免疫反應(yīng)。作用隨著細(xì)胞制備技術(shù)的日趨完善， DC-CIK

21、 細(xì)胞過繼免疫治療在臨床逐漸開展，相關(guān)報(bào)道可見。實(shí)驗(yàn)研究方面， Marten 實(shí)驗(yàn)研究表明： DC和 CIK 功培養(yǎng)可以同時促進(jìn) CIK 細(xì)胞和 DC細(xì)胞的增殖和免疫功能。張嵩等的動物實(shí)驗(yàn)研究表明：化療后應(yīng)用 DC-CIK細(xì)胞可有效抑制腫瘤細(xì)胞生長， 甚至使腫瘤完全消失；而且 DC-CIK 細(xì)胞的抗腫瘤效應(yīng)對集體免疫系統(tǒng)功能不產(chǎn)生危害， 在當(dāng)前對腫瘤特異性抗原了解相對較少的情況下，應(yīng)用 DC-CIK 細(xì)胞作為腫瘤放化療和手術(shù)后的輔助治療有重要的臨床意義。白血病中趙春華等研究表明：與 DC共培養(yǎng)可使 CIK 細(xì)胞獲得更高的增殖速率和更強(qiáng)的體內(nèi)外抗腫瘤活性， DC-CIK細(xì)胞可以作為一種臨床有效的

22、抗白血病免疫治療策略。童春容等臨床研究顯示： DC-CIK 細(xì)胞治療具有明顯清除微小殘留白血病細(xì)胞防止復(fù)發(fā)的作用，并且靜脈輸注安全。腫瘤中將 CIK 細(xì)胞和同源 DC細(xì)胞共培養(yǎng)后即可獲得DC-CIK 細(xì)胞。它既可促進(jìn)DC細(xì)胞的成熟，更能促進(jìn) ClK 的增殖，并加強(qiáng)其抗腫瘤活性。 DC細(xì)胞是機(jī)體免疫應(yīng)答的始動者，能夠誘導(dǎo)持久有力的特異性抗腫瘤免疫反應(yīng)； CIK 細(xì)胞可通過非特異性免疫殺傷作用清除腫瘤患者體內(nèi)微小殘余病灶， 所以負(fù)載腫瘤抗原的 DC與 CIK 的有機(jī)結(jié)合（即 DC-CIK細(xì)胞）能產(chǎn)生特異性和非特異性的雙重抗腫瘤效應(yīng)。一、 DC治療對腫瘤治療的原理DC可以高表達(dá) MHC-類和 MHC

23、-類分子， MHC分子與其捕獲加工的腫瘤抗原結(jié)合，形成肽 -MHC分子復(fù)合物， 并遞呈給 T 細(xì)胞，從而啟動 MHC-I類限制性 CTL 反應(yīng)和 MHC-類限制性的 CD4+Thl 反應(yīng)。同時， DC還通過其高表達(dá)的共刺激分子 (CD80/B7-1、 CD86/B7-2、 CD40等) 提供 T 細(xì)胞活化所必須的第二信號，啟動了免疫應(yīng)答。DC與 T 細(xì)胞結(jié)合可大量分泌 IL-12 、 IL-18 激活 T 細(xì)胞增殖，誘導(dǎo) CTL生成，主導(dǎo) Th1 型免疫應(yīng)答，利于腫瘤清除；激活穿孔素P 顆粒酶 B 和 FasL/Fas 介導(dǎo)的途徑增強(qiáng) NK細(xì)胞毒作用；DC分泌趨化因子 (Chemotactic

24、 Cytokines ， CCK)專一趨化初始型 T 細(xì)胞促進(jìn) T 細(xì)胞聚集，增強(qiáng)了 T 細(xì)胞的激發(fā)。保持效應(yīng) T 細(xì)胞在腫瘤部位長期存在，可能通過釋放某些抗血管生成物質(zhì) ( 如 IL-12 、IFN- ) 及前血管生成因子而影響腫瘤血管的形成。上述 CCK進(jìn)一步以正反饋旁分泌的方式活化 DC，上調(diào) IL-12 及 CD80、CD86的表達(dá)；同時 DC 也直接向 CD8+T細(xì)胞呈遞抗原肽，在活化的 CD4+ T細(xì)胞輔助下使 CD8+T 細(xì)胞活化， CD4+ 和 CD8+T細(xì)胞還可以進(jìn)一步通過分泌細(xì)胞因子或直接殺傷，增強(qiáng)機(jī)體抗腫瘤免疫應(yīng)答。二、 CIK 治療對腫瘤治療的原理 . CIK 細(xì)胞能以

25、不同的機(jī)制識別腫瘤細(xì)胞通過直接的細(xì)胞質(zhì)顆粒穿透封閉的腫瘤細(xì)胞膜進(jìn)行胞吐。實(shí)現(xiàn)對腫瘤細(xì)胞的裂解 ;.通過誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡殺傷腫瘤細(xì)胞; . CIK 細(xì)胞分泌 IL-2 、 IL-6 、 IFN- 等多種抗腫瘤的細(xì)胞因子；. CIK 細(xì)胞回輸后可以激活機(jī)體免疫系統(tǒng)，提高機(jī)體的免疫功能。三、基本流程確定患者的入選標(biāo)準(zhǔn)相關(guān)檢查細(xì)胞動員細(xì)胞采集分離外周血單個細(xì)胞分別培養(yǎng)樹突細(xì)胞和淋巴細(xì)胞樹突細(xì)胞和淋巴細(xì)胞共同培養(yǎng)獲得DC-CIK細(xì)胞細(xì)胞回輸療效評估隨訪四、 DC-CIK生物免疫療法的適用人群關(guān)于 DC-CIK 細(xì)胞治療的適用人群，首先，就入選方面適用于各類惡性腫瘤疾病患者。其次，排除標(biāo)準(zhǔn)有嚴(yán)重心臟病，包

26、括近期內(nèi)患心肌梗塞、失代償性心力衰竭、嚴(yán)重心律失常、頑固性不穩(wěn)定型心絞痛等；近期內(nèi)患有急性腦出血者；嚴(yán)重哮喘或其他嚴(yán)重呼吸功能不全者；如進(jìn)行介入治療，對造影劑過敏者。肝炎中臨床動態(tài)觀察慢性乙肝患者 DCCIK 細(xì)胞的增殖及殺傷活性發(fā)現(xiàn)， 患者 DC CIK 細(xì)胞的增殖和殺傷活性均低于正常人。推測 DC CIK 細(xì)胞可能通過以下機(jī)制發(fā)揮抗肝炎病毒作用：體外培養(yǎng) DC CIK 細(xì)胞過程中采用的 CD。單抗 (MabCD3)及 II -2 等細(xì)胞因子直接激活擴(kuò)增 DCCIK，回輸后直接殺傷病毒感染的細(xì)胞；研究顯示 MabCD3+、1L-2 培養(yǎng)激活的 T 細(xì)胞分泌多種細(xì)胞因子如 INF-7 、IL一

27、 2 等。這些細(xì)胞因子可直接滲透細(xì)胞內(nèi)抑制或殺傷病毒或通過改善體內(nèi)的細(xì)胞因子環(huán)境，上調(diào)病毒感染細(xì)胞的 MHC分子及共刺激分子，激活擴(kuò)增病毒特異性DCCIK、巨噬細(xì)胞、自然殺傷細(xì)胞等，從而清除病毒。生物免疫療法治療流程手術(shù)前 1-2 天采集患者外周血50-100ml ，送達(dá)實(shí)驗(yàn)室；DC-CIK治療流程于實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行分離、培養(yǎng)DC/CIK 細(xì)胞；手術(shù)當(dāng)天無菌切取患者腫瘤組織，送往實(shí)驗(yàn)室制備腫瘤抗原并封存；DC細(xì)胞負(fù)載抗原培養(yǎng)至第9 天，收獲 3 份，取 1 份患者靜脈回輸，其余兩份每隔 5-7 天患者靜脈回輸；CIK 細(xì)胞培養(yǎng)至第 12-15 天收獲，連續(xù)3 天患者經(jīng)脈回輸。腫瘤分型綜合治療體系北京

28、四六六醫(yī)院腫瘤醫(yī)學(xué)中心臨床中： 對“腫瘤”首先采用“腫瘤分型綜合治療體系”，腫瘤綜合治療的目的有根治性治療和姑息性治療兩類。 一旦確診為腫瘤后，需要進(jìn)行系統(tǒng)而全面的輔助檢查， 并初步評估出病人所患腫瘤的經(jīng)驗(yàn)療效和治療目的，如果腫瘤有治愈的可能， 就應(yīng)以根治為目的， 采用各種有效治療方法予以積極治療， 千方百計(jì)地爭取達(dá)到治愈。 但由于現(xiàn)階段許多晚期腫瘤的治療屬于姑息性治療，以延長病人的生存時間、提高生活質(zhì)量為基本目標(biāo)，因此，在制定綜合治療方案時不僅要重視病人的近期療效， 更要重視病人的遠(yuǎn)期療效和生活質(zhì)量。并不是所有的腫瘤都需要綜合治療， 有些沒有播散的早期腫瘤和轉(zhuǎn)移率很低的局限期腫瘤， 單一治療

29、方法就能取得很好的治療效果， 一般就不需要進(jìn)行綜合治療。如皮膚基底細(xì)胞癌的轉(zhuǎn)移率很低， 單一手術(shù)治療就常能治愈。 胃粘膜內(nèi)癌單純手術(shù)切除的 5 年生存率非常高。這也極大程度上降低了患者的治療費(fèi)用。表型特點(diǎn)1. 增值速度快： CIK 細(xì)胞在培養(yǎng)過程中加入抗CD3McAb,IL-2 等多因子后，細(xì)胞增值速度迅速，遠(yuǎn)超過 LAK細(xì)胞。在培養(yǎng)第 22 天增值曲線達(dá)頂峰，約增加 100 倍，其中 CD3+CD56+細(xì)胞不近絕對數(shù)量增加 1000 倍以上，且所占百分比也大幅上升，至培養(yǎng) 28-30 天時達(dá)平臺期，細(xì)胞毒活性亦大頂峰值。實(shí)驗(yàn)證明，擴(kuò)增出的 CD3+CD56+細(xì)胞來源于 CD3+CD56-T細(xì)胞，而非 CD3-CD56+NK細(xì)胞。同時發(fā)現(xiàn)在CD3+CD56-的, T 細(xì)胞中，除（ CD4-CD8-T細(xì)胞外，其余三種T 細(xì)胞亞群（ CD4-CD8