免疫SOP：PRL作業(yè)指導(dǎo)書

1、55XXXXXX 醫(yī)院檢驗(yàn)科免疫室分析項(xiàng)目作業(yè)指導(dǎo)書 文件編號(hào)：LABOPMY020第 頁，共 頁 版本：A/0生效日期：2008-02-01Elecsys E 170/E 411催乳素(PRL )1. 分析原理采用雙抗夾心法原理，整個(gè)過程18分鐘完成。 第1步：10l標(biāo)本和一份生物素抗泌乳素特異性單克隆抗體一起孵育，反應(yīng)形成復(fù)合體。 第2步：添加釕復(fù)合體a標(biāo)記泌乳素特異單克隆抗體和鏈酶親和素包被的微粒后，反應(yīng)生成一“三明治”樣抗原抗體復(fù)合體，并在生物素和鏈酶親和素的相互作用下形成固相。 第3步：將反應(yīng)液吸入檢測(cè)池中，檢測(cè)池中的微粒通過電磁作用吸附在電極表面。未結(jié)合的物質(zhì)通過ProCell除去

2、。在電極上加以一定的電壓，使復(fù)合體化學(xué)發(fā)光，用光電倍增器檢測(cè)發(fā)光的強(qiáng)度。通過檢測(cè)儀的定標(biāo)曲線得到最后的檢測(cè)結(jié)果，定標(biāo)曲線是通過2點(diǎn)定標(biāo)點(diǎn)和試劑條形碼上獲得的主曲線生成的。2. 標(biāo)本要求 只有按如下方法收集的標(biāo)本才適合用本試劑盒檢測(cè)。 血清必須用標(biāo)準(zhǔn)試管或內(nèi)有分離膠的試管收集。肝素鋰和K3-EDTA血漿。 （原則：回收率90110；斜率0.91.1；相關(guān)系數(shù)0.95；0.95）. 穩(wěn)定性： 28C可保存14小時(shí)；在-20C可保存6月，只可凍溶一次14。內(nèi)有分離膠的試管收集的血清標(biāo)本穩(wěn)定性：2-8C 24小時(shí)（注意此數(shù)據(jù)由試管廠商提供）。 選擇檢測(cè)時(shí)市場(chǎng)上能獲得的標(biāo)本收集試管收集標(biāo)本和檢測(cè)，不是所

3、有能獲得的廠商的試管均可用于檢測(cè)。不同廠商標(biāo)本收集系統(tǒng)可能含有不同材料，某些情況下會(huì)影響檢測(cè)結(jié)果。 在使用原始試管處理標(biāo)本時(shí)，應(yīng)遵循試管生產(chǎn)商所提供的指導(dǎo)。 如標(biāo)本中有沉淀出現(xiàn)，必須先作離心處理再進(jìn)行分析。已經(jīng)加熱失活的標(biāo)本無法分析。使用疊氮化物作為穩(wěn)定劑的標(biāo)本或質(zhì)控液無法分析。 檢測(cè)前，請(qǐng)確?；颊邩?biāo)本、定標(biāo)液及質(zhì)控液放置在2025C的環(huán)境中。 由于蒸發(fā)因素的影響，標(biāo)本、定標(biāo)液及質(zhì)控液在放入分析儀后請(qǐng)?jiān)?小時(shí)內(nèi)完成測(cè)定。3. 試劑、校準(zhǔn)品、質(zhì)控品和其他所需材料采用羅氏原裝配套試劑。試劑：M 鏈酶親和素包被的微粒（透明瓶蓋）每瓶6.5ml 。鏈酶親和素包被的微粒，0.72mg/ml；結(jié)合力：47

4、0ng 生物素/mg 微粒；微粒經(jīng)過防腐處理。R1 生物素化泌乳素特異性抗體（灰色瓶蓋）每瓶10ml。生物素化單克隆抗泌乳素抗體（鼠）：0.7mg/L；磷酸鹽緩沖液：50mmol/L，PH 值7.0；經(jīng)過防腐處理。R2 釕復(fù)合物標(biāo)記的泌乳素特異性抗體（黑色瓶蓋）每瓶10ml。釕復(fù)合物標(biāo)記抗泌乳素單克隆抗體（鼠）：0.35mg/L；磷酸鹽緩沖液：50 mmol/L，PH 值7.0；經(jīng)過防腐處理。其他所需材料：常規(guī)實(shí)驗(yàn)設(shè)備Elecsys E 170/E 411Elecsys 系統(tǒng)清洗液（SysClean）,貨號(hào)11298500 Elecsys E 170分析儀所需材料:Elecsys 系統(tǒng)緩沖液

5、（ProCell M）,貨號(hào)12135019Elecsys 檢測(cè)池洗液（CleanCell M）,貨號(hào)12135027Elecsys PC/CC杯,貨號(hào)03023141Elecsys 清洗液（ProbeWash M），貨號(hào)03005712Elecsys 反應(yīng)杯/加針頭/廢物袋（CUP/TIP），貨號(hào)12102137Elecsys 系統(tǒng)清洗適配器（SysClean Adapter M），貨號(hào)03027651 Elecsys E 411分析儀所需材料:Elecsys 系統(tǒng)緩沖液（ProCell），貨號(hào)11662988 Elecsys 測(cè)量池清洗液（CleanCell），貨號(hào)11662970 Ele

6、csys 系統(tǒng)清洗液（SysWash），貨號(hào)11930346 Elecsys 適配器 （Adapter for SysClean），貨號(hào)11933159, Elecsys 反應(yīng)杯（CUP），貨號(hào)11706829 Elecsys 加樣頭（TIP），貨號(hào)117068024. 儀器和校準(zhǔn)使用儀器：瑞士羅氏診斷公司生產(chǎn)Elecsys 2010/E 170/E 411全自動(dòng)電化學(xué)發(fā)光免疫自動(dòng)分析儀 儀器校準(zhǔn)：每批Elecsys Prolactin試劑盒上都有條形碼記錄各批號(hào)試劑特定的定標(biāo)信息。預(yù)先確定的主曲線適用于用Elecsys Prolactin CalSet試劑盒進(jìn)行測(cè)定的分析儀。定標(biāo)頻率：每批試

7、劑必須用新鮮試劑（試劑經(jīng)儀器注冊(cè)24小時(shí)以內(nèi)）標(biāo)定一次，如再次標(biāo)定即根據(jù)下列要求： 一個(gè)月（同一批號(hào)試劑） 7天（放置儀器上的同一試劑盒） 根據(jù)要求進(jìn)行標(biāo)定：如質(zhì)控結(jié)果超出范圍時(shí)。5. 操作步驟（以E 170為例）5.1 校準(zhǔn)操作步驟： 在編緝各項(xiàng)目的參數(shù)時(shí)，已經(jīng)在ApplicationCalib菜單中定義好了定標(biāo)類型和幾點(diǎn)定標(biāo)。因此在對(duì)各項(xiàng)目進(jìn)行定標(biāo)時(shí)，只需在定標(biāo)菜單Calibration中進(jìn)行即可。進(jìn)入CalibrationStatus菜單，用鼠標(biāo)選擇需定標(biāo)的項(xiàng)目，再根據(jù)需要點(diǎn)單點(diǎn)定標(biāo)（BLANK鍵）或兩點(diǎn)定標(biāo)（TWO POINT鍵）、跨距定標(biāo)（SPAN鍵）、多點(diǎn)定標(biāo)（FULL鍵），再選擇

8、其它項(xiàng)目進(jìn)行相應(yīng)選擇，最后點(diǎn)SAVE，將定標(biāo)物放入在CalibrationCalibrator中定義好的位置，點(diǎn)Start，再點(diǎn)Start，儀器開始定標(biāo)。 在CalibrationStatus菜單中看定標(biāo)結(jié)果，點(diǎn)Calibration Result鍵看定標(biāo)結(jié)果，點(diǎn)Reaction Monitor鍵看每個(gè)定標(biāo)物的反應(yīng)曲線。5.2 樣本檢測(cè)程序： 單個(gè)樣本輸入，在主菜單下選擇Workplace- Testslection，在Sequence No欄輸入標(biāo)本號(hào)，然后選擇該標(biāo)本所需做的單個(gè)項(xiàng)目或組合項(xiàng)目，點(diǎn)SAVE鍵，樣本號(hào)自動(dòng)累加。批量常規(guī)標(biāo)本的輸入，在主菜單下選擇Workplace- Testsl

9、ection，在Sequence No欄輸入起始標(biāo)本號(hào)，然后選擇該標(biāo)本所需做的單個(gè)項(xiàng)目或組合項(xiàng)目，點(diǎn)REPEAT，輸入該批標(biāo)本的最后一個(gè)標(biāo)本號(hào)，點(diǎn)OK即可。進(jìn)樣分析，將標(biāo)本按在Workplace菜單中輸入的標(biāo)本號(hào)順序在樣本架上排好，放入進(jìn)樣盤內(nèi),按START鍵，輸入該批上機(jī)標(biāo)本的起始標(biāo)本號(hào)，再點(diǎn)START鍵，儀器自動(dòng)開始推架檢測(cè)標(biāo)本。6. 質(zhì)量控制Elecsys通用質(zhì)控品（PreciControl ）1和2或其它合適的質(zhì)控品。各濃度區(qū)域的質(zhì)控至少每24小時(shí)或每一次定標(biāo)后測(cè)定一次。質(zhì)控間隔期應(yīng)適用于各實(shí)驗(yàn)室的具體要求。檢測(cè)值應(yīng)落在確定的范圍內(nèi)，如出現(xiàn)質(zhì)控值落在范圍以外，應(yīng)采取校正措施。7. 計(jì)算

10、方法 對(duì)每一個(gè)標(biāo)本，儀器會(huì)自動(dòng)計(jì)算泌乳素含量，單位為uIU/ml，ng/ml 或mIU/L 。 換算方法是 IU/ml 0.047=ng/ml ng/ml 21.2=IU/ml（mIU/l）8. 參考范圍一項(xiàng)研究對(duì)泌乳素進(jìn)行了評(píng)估，共檢測(cè)了300份健康人群的樣品，結(jié)果如下：百分位數(shù)502.597.5502.597.5nIU/mlng/ml男性102155863247.304.0415.2女性(非孕婦)19822510249610.64.7923.3每個(gè)實(shí)驗(yàn)室必須調(diào)查各自患者群體的參考范圍變異性，必要時(shí)根據(jù)具體情況制訂自己的參考范圍。9. 分析性能精密度10. 干擾因素 測(cè)定結(jié)果不受黃疸（膽紅素

11、513mol/L或30mg/dl）, 溶血（血紅蛋白0.932 mmol/L或1.5g/dl）, 高脂血（癥）(脂肪乳劑 1500mg/dl）和生物素（ 164 nmol/L或 5mg/天），必須在末次生物素治療8小時(shí)后采集標(biāo)本。 濃度達(dá)1100U/ml的風(fēng)濕因子對(duì)測(cè)定無影響。 高達(dá)270,000 IU/mL (12,690 ng/mL)大劑量不產(chǎn)生鉤狀效應(yīng)。 體外對(duì)16種常用藥物進(jìn)行試驗(yàn)未發(fā)現(xiàn)有藥物影響檢測(cè)結(jié)果。 由于檢測(cè)試劑中含有單克隆抗體，因此某些接受單克隆鼠抗體治療或診斷的患者標(biāo)本檢測(cè)結(jié)果可能有誤。 試劑盒附帶有試劑添加劑以減少以上不良影響。 少數(shù)病例中極高濃度的鏈霉抗生物素蛋白和釕抗

12、體會(huì)影響測(cè)定結(jié)果。 測(cè)定泌乳素時(shí)，需注意測(cè)定濃度和血樣采集時(shí)間有關(guān)，這是因?yàn)槊谌樗亟?jīng)垂體分泌，受生物鐘影響。哺乳和壓力會(huì)促進(jìn)生理性泌乳素分泌。另外，血清泌乳素濃度升高與多種藥物（如dibenzodiazepine抗精神病藥、吩噻嗪）、TRH和雌激素有關(guān)5,6,7。多巴胺、左旋多巴和麥角胺抑制泌乳素的分泌。 許多研究報(bào)道女性內(nèi)分泌疾病患者或女性懷孕期間其血清中存在巨泌乳素1,8,9。同時(shí)也描述了使用不同免疫分析法測(cè)定的與單體泌乳素（22-23kD）對(duì)應(yīng)的血清巨泌乳素不同測(cè)定濃度。這樣可判定與所用免疫分析法有關(guān)的高泌乳素的測(cè)定8,13,17。 若懷疑測(cè)定的高泌乳素值，則推薦使用聚乙二醇（PEG）進(jìn)

13、行沉淀預(yù)處理以判定有生物活性的單體泌乳素濃度10,11,12,13, 14,15,16,17,18,19。詳細(xì)信息參見“使用聚乙二醇（PEG）沉淀作用對(duì)標(biāo)本進(jìn)行預(yù)處理”部分。 必須結(jié)合患者病史，各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)室檢查及其它臨床資料來綜合評(píng)估測(cè)定結(jié)果。11. 臨床意義 泌乳素由垂體前葉合成和分泌。此激素共有198 個(gè)氨基酸，分子量約為22-23kD。血清中有三種形式的泌乳素，其中具生物和免疫活性的單體（“小的”）形式泌乳素最多（約80%），5-20%為無生物學(xué)活性的二聚體（大的）形式，另0.5-5為較低生物學(xué)活性的四聚體（“大-大”）形式1。泌乳素的靶器官是乳腺，能促進(jìn)乳腺組織生長(zhǎng)發(fā)育和分化。高濃度的泌

14、乳素會(huì)抑制卵巢類固醇激素合成和垂體促性腺激素合成和分泌。 在懷孕期間，受雌激素和黃體酮合成增加的影響泌乳素濃度升高。泌乳素刺激乳汁分泌，使產(chǎn)后期轉(zhuǎn)至泌乳期。高泌乳素血癥（男性和女性）主要原因是生育疾患。泌乳素測(cè)定可用于診斷經(jīng)期不排卵、高泌乳素性閉經(jīng)和乳漏、男子乳腺過度發(fā)育以及精子缺乏。若懷疑乳腺癌和垂體腫瘤，也需測(cè)定泌乳素2,3。 Elecsys Prolactin II 試劑采用兩種人泌乳素特異單克隆抗體。這兩種抗體和多數(shù)巨泌乳素的反應(yīng)較弱。12參考文獻(xiàn)1. Johnson MR, Carter G, Grint C, Lightman SL. Relationship between ov

15、arian steroids, gonadotrophins and relaxin during the menstrual cycle. Acta Endocrinol 1993;129:121-125. 2. Runnebaum B, Rabe T. Gynkologische Endokrinologie und Fortpflanzungsmedizin Springer Verlag 1994; Band 1:36-38,70,116 Band 2:137,360,398-399,408-409,422-423. ISBN 3-540-57345-3, ISBN 3-540-573

16、47-x.3. Juhl UM, Rippegather G, Weller J, Zawta B. Important Facts on Reproduction Medicine/Fertility Diagnosis, Questions and Answers, 1994. Boehringer Mannheim, Cat. No. 1322958.4. Guillaume J, Benjamin F, Sicuranza B, Wang CF, Garcia A, Friberg J. Maternal serum levels of estradiol, progesterone and h-Choriongonadotropin in ectopic pregnancy and their correlation with endometrial histologic findings. Surg Gynecol Obstet 1987;165:9-12.5. Thienpont LM, Verhseghe PG, Van Brussel KA, De